разработка оптимальных экспериментальных терапевтических

ìÑä 615.37.035.038:578.245
РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СХЕМ
ВВЕДЕНИЯ ИММОБИЛИЗИРОВАННОГО ИНТЕРФЕРОНА α-2b
Шитикова О.Г.1, Шерстобоев Е.Ю.1, Масная Н.В.1, Данилец М.Г.1, Трофимова Е.С.1,
Лигачева А.А.1, Мадонов П.Г.2, Киншт Д.Н.2, Ершов К.И.2, Шилова М.А.2
1
2
ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà, ã. Òîìñê
ÇÀÎ «Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè», ã. Íîâîñèáèðñê
РЕЗЮМЕ
 ðàìêàõ îáùåé ïðîãðàììû äîêëèíè÷åñêîãî èçó÷åíèÿ ïðîâåäåíà ðàçðàáîòêà îïòèìàëüíûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ òåðàïåâòè÷åñêèõ ñõåì ââåäåíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b (ÇÀÎ «Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèé», Íîâîñèáèðñê). Èññëåäóåìûé ïðåïàðàò ïðèìåíÿëñÿ âíóòðèæåëóäî÷íî êóðñîì â òå÷åíèå 3, 5 è 7 ñóò â òåðàïåâòè÷åñêîé äîçå (1,8 ⋅ 105 ÌÅ/êã). Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ îöåíêà èììóíîòðîïíûõ ñâîéñòâ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b ïðîâîäèëàñü â îïûòàõ in
vivo íà àóòáðåäíûõ ìûøàõ-ñàìöàõ CD1 ñ èñïîëüçîâàíèåì ñëåäóþùèõ òåñòîâ: èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ
ïðåïàðàòà íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ (îöåíèâàëè îòíîñèòåëüíîå ÷èñëî ôàãîöèòîâ è êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííûõ áàêòåðèé îäíèì ôàãîöèòîì); èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà
ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò (îïðåäåëÿëè îáùåå êîëè÷åñòâî ñïëåíîöèòîâ, îòíîñèòåëüíîå è àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê è èõ ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü); îöåíêà âëèÿíèÿ èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà íà êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò ñ èñïîëüçîâàíèåì ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà, èíäóöèðîâàííîé ýðèòðîöèòàìè áàðàíà. Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ
ñäåëàí âûâîä, ÷òî íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ôàãîöèòîç íåéòðîôèëîâ è ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò óñèëèâàåò êóðñîâîå ââåäåíèå òåðàïåâòè÷åñêîé äîçû èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b â òå÷åíèå
5 ñóò. Êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò (âëèÿíèå íà Ò-ýôôåêòîðû) çíà÷èìî ïîâûøàåòñÿ ïîñëå ñåìèêðàòíîãî ïðèìåíåíèÿ èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ïåãèëèðîâàíèå, èììîáèëèçèðîâàííûé èíòåðôåðîí α-2b, àóòáðåäíûå ìûøè,
ñõåìà ââåäåíèÿ.
Введение
 íàñòîÿùåå âðåìÿ ïðåïàðàòû èíòåðôåðîíà α-2b
øèðîêî èñïîëüçóþòñÿ â ïðàêòèêå çäðàâîîõðàíåíèÿ
äëÿ ëå÷åíèÿ ìíîãèõ âèðóñíûõ çàáîëåâàíèé, áîëüøîãî
êðóãà îíêîëîãè÷åñêèõ áîëåçíåé è äëÿ ïðîôèëàêòèêè
ãðèïïà è ÎÐÇ [1]. Êëèíè÷åñêàÿ çíà÷èìîñòü èíòåðôåðîíîâ (ÈÔÍ) îïðåäåëÿåòñÿ àíòèâèðóñíîé, èììóíîìîäóëèðóþùåé àêòèâíîñòüþ, à òàêæå ïðîòèâîîïóõîëåâûì
ýôôåêòîì [2–4]. Íî, ê ñîæàëåíèþ, ïðè èíòåðôåðîíîòåðàïèè íàáëþäàåòñÿ ðÿä íåæåëàòåëüíûõ ýôôåêòîâ.
Íàèáîëåå ÷àñòûìè ÿâëÿþòñÿ ãðèïïîïîäîáíûé ñèíäðîì, àðòðàëãèÿ, äèàðåÿ, äåïðåññèâíûå ñîñòîÿíèÿ,
ãàëëþöèíàöèè, êîæíûå âûñûïàíèÿ, àëëåðãèÿ, çàáîëåâàíèÿ êðîâåòâîðíîé ñèñòåìû, âûïàäåíèå âîëîñ, íàáëþäàåìûå ó áîëüíûõ ïðè ïðèìåíåíèè âûñîêèõ äîç ÈÔÍ.
Øèòèêîâà Îëüãà Ãåííàäüåâíà, òåë. 8-913-800-23-10;
e-mail: [email protected]
114
Ó 30% áîëüíûõ ïðè äëèòåëüíîì ïðèìåíåíèè áîëüøèõ
äîç ÈÔÍ îáðàçîâûâàëèñü íåéòðàëèçóþùèå àíòèâèðóñíóþ àêòèâíîñòü ïðåïàðàòà àíòèòåëà, ÷òî ñîïðîâîæäàëîñü ðàçâèòèåì ðåçèñòåíòíîñòè ê èíòåðôåðîíîòåðàïèè
[5, 6]. ßâëÿÿñü áåëêàìè, ÈÔÍ ëåãêî ðàçðóøàþòñÿ ôåðìåíòàìè â æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå è ïðîòåàçàìè
êðîâè, ÷òî ñíèæàåò èõ áèîäîñòóïíîñòü. Âñå ýòî îãðàíè÷èâàåò ïðèìåíåíèå ïðåïàðàòîâ ÈÔÍ, à ïðè îïàñíûõ
ïîáî÷íûõ ÿâëåíèÿõ òðåáóåò îòìåíû, ÷òî ïðèâîäèò ê
ñíèæåíèþ ýôôåêòèâíîñòè ïðîâîäèìîé òåðàïèè, è
ñëóæèò ñòèìóëîì ê ðàçðàáîòêå íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ
ñðåäñòâ [7]. Îñíîâíàÿ öåëü ïðè ñîçäàíèè ïðåïàðàòîâ
íà îñíîâå ÈÔÍ ñîñòîèò â ïîëó÷åíèè áîëåå áåçîïàñíîãî è êà÷åñòâåííîãî ëåêàðñòâà ñ óëó÷øåííûìè ôèçèêîõèìè÷åñêèìè è áèîëîãè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè.
Ñîâðåìåííàÿ òåõíîëîãèÿ èììîáèëèçàöèè àêòèâíîãî áåëêà ñ ïîëèýòèëåíãëèêîëåì ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ñèíòåçà ìîäèôèöèðóåò ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè ñîåäèíåíèÿ, ïîçâîëÿÿ ñîçäàâàòü
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
Оригинальные статьи
ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû ñ âûñîêîé òåðàïåâòè÷åñêîé
àêòèâíîñòüþ è íèçêîé òîêñè÷íîñòüþ [8]. Ðåçóëüòàòîì
òàêîé ìîäèôèêàöèè ÿâëÿåòñÿ âîçðàñòàíèå áèîäîñòóïíîñòè ÈÔÍ, ñíèæåíèå êîëåáàíèé óðîâíÿ àêòèâíîãî
âåùåñòâà â êðîâè, áîëåå äëèòåëüíîå ñîõðàíåíèå ýôôåêòèâíîé êîíöåíòðàöèè â îðãàíàõ-ìèøåíÿõ, ÷òî è
ïîâûøàåò ýôôåêòèâíîñòü èíòåðôåðîíîòåðàïèè [9].
Îäíàêî ïðîÿâëåíèå òîãî èëè èíîãî èììóíîòðîïíîãî
ýôôåêòà â ñóùåñòâåííîé ìåðå çàâèñèò îò äîçîâûõ è
âðåìåííûõ ïàðàìåòðîâ ïðèìåíåíèÿ ïðåïàðàòà. Ïîýòîìó çàäà÷åé äàííîãî èññëåäîâàíèÿ â ðàìêàõ îáùåé ïðîãðàììû äîêëèíè÷åñêîãî èçó÷åíèÿ ÿâëÿåòñÿ ðàçðàáîòêà
îïòèìàëüíûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ òåðàïåâòè÷åñêèå ñõåì
ââåäåíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b.
Материал и методы
Èññëåäîâàíèå áûëî ïðîâåäåíî íà 210 àóòáðåäíûõ
ìûøàõ-ñàìöàõ CD1 6–8-íåäåëüíîãî âîçðàñòà ñ ìàññîé
òåëà 19–23 ã, ïîëó÷åííûõ èç îòäåëà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ áèîëîãè÷åñêèõ ìîäåëåé ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè
èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê) (ñåðòèôèêàò èìååòñÿ).
Æèâîòíûå ñîäåðæàëèñü â íåïîëíîé áàðüåðíîé ñèñòåìå
â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðàâèëàìè, ïðèíÿòûìè Åâðîïåéñêîé
êîíâåíöèåé ïî çàùèòå ïîçâîíî÷íûõ æèâîòíûõ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ è èíûõ íàó÷íûõ
öåëåé (Ñòðàñáóðã, 1986). Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ âûïîëíåíû â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðàâèëàìè ëàáîðàòîðíîé ïðàêòèêè (GLP), ïðèêàçîì ÌÇ ÐÔ ¹ 708í îò
23.08.2010 ã. «Îá óòâåðæäåíèè ïðàâèë ëàáîðàòîðíîé
ïðàêòèêè».
 ðàáîòå èñïîëüçîâàëè èììîáèëèçèðîâàííûé ñ ïîìîùüþ èîíèçèðóþùåãî èçëó÷åíèÿ íà ïîëèýòèëåíãëèêîëå
ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 1,5 êÄà èíòåðôåðîí α-2b –
êîíúþãàò èíòåðôåðîíà α-2b ñ íèçêîìîëåêóëÿðíûì
ïîëèýòèëåíãëèêîëåì (ÇÀÎ «Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè», Íîâîñèáèðñê). Äëÿ êîíúþãàöèè ñ ïîëèìåðîì èñïîëüçîâàí èíòåðôåðîí α-2b, ïîëó÷àåìûé ñ ïðåìèíåíèåì Escherichia coli â êà÷åñòâå
ïðîäóöåíòà. Ýòî êèñëûé ãëèêîïðîòåèä ìîëåêóëÿðíîé
ìàññîé 19 265 Äà, ñîñòîÿùèé èç 165 àìèíîêèñëîòíûõ
îñòàòêîâ. Ïåðâè÷íàÿ ïîñëåäîâàòåëüíîñòü åãî èäåíòè÷íà íàòèâíîìó èíòåðôåðîíó α-2b, íî áåëîê íå ñîäåðæèò ñàéòà ãëèêîçèëèðîâàíèÿ. Ïðèìåíåíèå ïîëèýòèëåíãëèêîëÿ (ÏÝÃ) â êà÷åñòâå îñíîâû ïîçâîëÿåò çàùèòèòü áåëêîâóþ ìîëåêóëó ÈÔÍ îò äåéñòâèÿ
ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ è òåì ñàìûì îáåñïå÷èâàåò âîçìîæíîñòü åãî ïåðîðàëüíîãî ïðèìåíåíèÿ. Âûõîä
ãîòîâîãî ïðîäóêòà ñîñòàâëÿåò 98%, àêòèâíîñòü ïðåïàðàòà íå ìåíåå 1 ⋅ 106 ÌÅ/ìë, ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà íå
ìåíåå (19,5 ± 0,5) êÄà.
Èññëåäóåìîå âåùåñòâî ââîäèëè æèâîòíûì âíóòðèæåëóäî÷íî êóðñîì â òå÷åíèå 3, 5 è 7 ñóò â òåðàïåâòè-
÷åñêîé äîçå 1,8 ⋅ 105 ÌÅ/êã, êîòîðàÿ áûëà ïåðåñ÷èòàíà, èñõîäÿ èç ñðåäíåé òåðàïåâòè÷åñêîé äîçû èíòåðôåðîíà àëüôà 2 äëÿ ÷åëîâåêà (1 000 000 ÌÅ), â îáúåìå
10 ìë/êã ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà (MP Biomedicals,
ÑØÀ), êîíòðîëüíûå æèâîòíûå ïîëó÷àëè â ýêâèâàëåíòíîì îáúåìå ðàñòâîðèòåëü (ôîñôàòíî-ñîëåâîé áóôåð). Ïðè èçó÷åíèè âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ â êà÷åñòâå ôîíà èñïîëüçîâàëè èíòàêòíûõ æèâîòíûõ
ñîîòâåòñòâóþùåãî ïîëà è âîçðàñòà. Ïðè èññëåäîâàíèè
âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò è
èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà (ÃÇÒ) â êà÷åñòâå ôîíà èñïîëüçîâàëè ìûøåé, ïîëó÷èâøèõ àíòèãåí, íî áåç êóðñîâîãî ââåäåíèÿ
ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà.
Ôàãîöèòàðíàÿ àêòèâíîñòü ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ îöåíèâàëàñü ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå îêîí÷àíèÿ 3-, 5- è
7-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b (èìÈÔÍ-α-2b) ïî ñïîñîáíîñòè ýòèõ êëåòîê ïîãëîùàòü ñóòî÷íóþ êóëüòóðó Staph. aureus, øòàìì
209 (ïîëó÷åíà ñ êàôåäðû ìèêðîáèîëîãèè ÑèáÃÌÓ), êîíöåíòðàöèÿ âçâåñè ìèêðîáîâ 20 ìëí/ìë. Äëÿ ýòîãî æèâîòíûì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî 3%-é ðàñòâîð ïåïòîíà
(Sigma, ÑØÀ) è ÷åðåç 2 ÷ èõ óìåðùâëÿëè ñ ïîìîùüþ
õëîðîôîðìà. Êëåòêè ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà âûäåëÿëè ïî îáùåïðèíÿòûì ìåòîäèêàì è äîâîäèëè äî êîíöåíòðàöèè 1–2 ìëí/ìë ïî íåéòðîôèëàì. Çàòåì â êóëüòóðó âíîñèëè áàêòåðèè Staph. aureus, îïñîíèçèðîâàííûõ
ïóëîâîé ìûøèíîé ñûâîðîòêîé. Î ôàãîöèòàðíîé ôóíêöèè íåéòðîôèëîâ ñóäèëè ïî ïðîöåíòó íåéòðîôèëîâ,
ïîãëîòèâøèõ ìèêðîáû (ôàãîöèòàðíûé èíäåêñ – ÔÈ), è
ñðåäíåìó ÷èñëó ñòàôèëîêîêêîâ, ïîãëîùåííûõ îäíîé
êëåòêîé (ôàãîöèòàðíîå ÷èñëî – Ô×) [10].
Âëèÿíèå èìÈÔÍ-α-2b íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé
îòâåò îöåíèâàëè ïî ñëåäóþùèì ïîêàçàòåëÿì: îáùåå
êîëè÷åñòâî ñïëåíîöèòîâ, îòíîñèòåëüíîå (%) è àáñîëþòíîå (106/îðãàí) ÷èñëî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê
(ÀÎÊ) â ñåëåçåíêå è òèòð àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè
íà 5-å ñóò ïîñëå èììóíèçàöèè ýðèòðîöèòàìè áàðàíà
(ÇÀÎ «ÝÊÎëàá», Ðîññèÿ). Èììóíèçàöèþ æèâîòíûõ
îñóùåñòâëÿëè âíóòðèáðþøèííî ïîñëå îêîí÷àíèÿ 3-, 5è 7-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ èìÈÔÍ-α-2b ìèíèìàëüíîé äîçîé ýðèòðîöèòîâ áàðàíà (ÝÁ) – 5 ⋅ 106 íà ìûøü.
Îïðåäåëåíèå ÀÎÊ îñóùåñòâëÿëè ìåòîäîì ëîêàëüíîãî
ãåìîëèçà [11], îñíîâàííûì íà ñïîñîáíîñòè àíòèýðèòðîöèòàðíûõ àíòèòåë, ñåêðåòèðóåìûõ àíòèòåëîîáðàçóþùèìè êëåòêàìè èììóíèçèðîâàííûõ æèâîòíûõ, ëèçèðîâàòü â ïðèñóòñòâèè êîìïëåìåíòà ÝÁ (àíòèãåí).
Óðîâåíü ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë, ñîäåðæàùèõñÿ â ñûâîðîòêå êðîâè èììóíèçèðîâàííûõ æèâîòíûõ, îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè [12]. Òèòð
àíòèòåë âûðàæàëè âåëè÷èíîé log2Ò.
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
115
Шитикова О.Г., Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В. и др.
Разработка оптимальных экспериментальных терапевтических схем введения…
Äëÿ îöåíêè âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò èñïîëüçîâàëè ðåàêöèþ ÃÇÒ. Äëÿ ýòîãî
ìûøåé ïîäâåðãàëè ñåíñèáèëèçàöèè ïóòåì ïîäêîæíîãî
ââåäåíèÿ 1 ⋅ 107 ÝÁ â îáúåìå 100 ìêë ïîñëå îêîí÷àíèÿ
3-, 5- è 7-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ èìÈÔÍ-α-2b. Íà 5é äåíü ïîñëå ñåíñèáèëèçàöèè ïîä àïîíåâðîòè÷åñêóþ
ïëàñòèíêó îäíîé èç çàäíèõ êîíå÷íîñòåé ââîäèëè ðàçðåøàþùóþ äîçó àíòèãåíà (1 ⋅ 108 â îáúåìå 20 ìêë). Â
êîíòðàëàòåðàëüíóþ ëàïó â êà÷åñòâå êîíòðîëÿ ââîäèëè
ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð â òàêîì æå îáúåìå. Èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè îöåíèâàëè ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå ââåäåíèÿ
ðàçðåøàþùåé äîçû àíòèãåíà. Îïðåäåëÿëè èíäåêñ âîñïàëåíèÿ (ÈÂ) ïî ðàçíèöå ìàññû îïûòíîé (Î) è êîíòðîëüíîé (Ê) ëàï èíäèâèäóàëüíî äëÿ êàæäîãî æèâîòíîãî ïî ôîðìóëå:
ÈÂ = (Î – Ê) / Ê ⋅ 100%.
Ïðè ââåäåíèè ïî ýòîé ñõåìå ïðåïàðàò â îñíîâíîì
îêàçûâàåò âëèÿíèå íà ôîðìèðîâàíèå êëîíà àíòèãåíñïåöèôè÷åñêèõ Ò-ëèìôîöèòîâ [10].
Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ îñóùåñòâëÿëàñü ñ ïðèìåíåíèåì ïàêåòà ñòàòèñòè÷åñêèõ ïðîãðàìì
Statistica 5.0 for Windows ñ ïðåäâàðèòåëüíîé îöåíêîé
íîðìàëüíîñòè ðàñïðåäåëåíèÿ è èñïîëüçîâàíèåì t-êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà. Äëÿ âûáîðêè ïîä÷èíÿþùåéñÿ íîðìàëüíîìó ðàñïðåäåëåíèþ âû÷èñëÿëè ñðåäíåå çíà÷åíèå
âåëè÷èíû ïðèçíàêà X è îøèáêó ñðåäíåé m [13].
Результаты
Êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3, 5 è
7 ñóò ïðèâîäèëî ê äîñòîâåðíîìó ïîâûøåíèþ îòíîñèòåëüíîãî êîëè÷åñòâà ôàãîöèòèðóþùèõ íåéòðîôèëîâ
(ÔÈ) â ïåðèòîíåàëüíîé ïîëîñòè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
æèâîòíûõ ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè çíà÷åíèÿìè
(òàáë. 1). Íàèáîëåå çíà÷èìîå óâåëè÷åíèå äîëè àêòèâíûõ ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ íàáëþäàëîñü ïðè
ïðèìåíåíèè 7-äíåâíîãî êóðñà, ïðè ýòîì ÔÈ áûë äîñòîâåðíî âûøå íå òîëüêî îòíîñèòåëüíî ïîêàçàòåëÿ â
ñîîòâåòñòâóþùåé ãðóïïå êîíòðîëÿ, íî è ïî ñðàâíåíèþ
ñ ãðóïïîé ìûøåé, ïîëó÷èâøèõ èññëåäóåìûé ïðåïàðàò
òðåõêðàòíî, à òàêæå ñ ôîíîâîé ãðóïïîé. Ñðåäíåå êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííûõ îäíîé êëåòêîé áàêòåðèé (Ô×)
óâåëè÷èâàëîñü ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè ãðóïïàìè ó ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3 è
5 ñóò (òàáë. 1).  ýêñïåðèìåíòàëüíîé ãðóïïå ñ 5-äíåâíûì êóðñîâûì ââåäåíèåì èìÈÔÍ-α-2b ÷èñëî ïîãëîùåííûõ îäíîé êëåòêîé áàêòåðèé áûëî ñòàòèñòè÷åñêè
çíà÷èìî âûøå, ÷åì â ãðóïïå æèâîòíûõ ñ ïðèìåíåíèåì
èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà òðåõêðàòíî. Ó æèâîòíûõ ñ
ïðèìåíåíèåì èìÈÔÍ-α-2b áîëåå äëèòåëüíûì êóðñîì
îòìå÷àëîñü ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîå ñíèæåíèå ôàãîöèòàðíîé àêòèâíîñòè (Ô×) ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ
116
ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èçó÷àåìûé ïðåïàðàò â òå÷åíèå 5 ñóò, à òàêæå ñ ôîíîâîé
ãðóïïîé, õîòÿ îòíîñèòåëüíî ïîêàçàòåëÿ â ñîîòâåòñòâóþùåé êîíòðîëüíîé ãðóïïå äîñòîâåðíûõ îòëè÷èé íå
íàáëþäàëîñü.
Òàáëèöà 1
éˆÂÌ͇ ‚ÎËflÌËfl 3-, 5- Ë 7-‰Ì‚ÌÓ„Ó ÍÛÒÓ‚Ó„Ó ‚‚‰ÂÌËfl
ÎÂ͇ÒÚ‚ÂÌÌÓ„Ó Ò‰ÒÚ‚‡ ̇ ÓÒÌÓ‚Â ËÏÏÓ·ËÎËÁËÓ‚‡ÌÌÓ„Ó
ËÌÚÂÙÂÓ̇ α-2b ‚ ÚÂ‡Ô‚Ú˘ÂÒÍÓÈ ‰ÓÁ (1,8 ⋅ 105 åÖ/Í„) ̇
Ù‡„ÓˆËÚ‡ÌÛ˛ ‡ÍÚË‚ÌÓÒÚ¸ ÔÂËÚÓ̇θÌ˚ı ÌÂÈÚÓÙËÎÓ‚ ‡ÛÚ·‰Ì˚ı
Ï˚¯ÂÈ (X ± m, ð)
Ãðóïïà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
æèâîòíûõ
Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü
ÔÈ, %
Ô×
Ãðóïïà 1
Ôîí (n = 10)
20,80 ± 1,06
2,38 ± 0,10
Ãðóïïà 2
Êîíòðîëü 3 ñóò (n = 10)
17,50 ± 0,95
p1–2 < 0,05
1,49 ± 0,08
p1–2 < 0,05
Ãðóïïà 3
èìÈÔÍ-α-2b 3 óò (n = 10)
22,60 ± 1,29
p2–3 < 0,01
2,19 ± 0,12
p2–3 < 0,001
Ãðóïïà 4
Êîíòðîëü 5 ñóò (n = 10)
20,10 ± 0,85
2,22 ± 0,08
Ãðóïïà 5
èìÈÔÍ-α-2b 5 ñóò (n = 10)
24,10 ± 1,50
p4–5 < 0,05
2,60 ± 0,07
p3–5 < 0,01
p4–5 < 0,01
Ãðóïïà 6
Êîíòðîëü 7 ñóò (n = 10)
18,10 ± 1,12
2,02 ± 0,08
p1–6 < 0,05
Ãðóïïà 7
èìÈÔÍ-α-2b 7 ñóò (n = 10)
27,50 ± 1,11
p1–7 < 0,05
p3–7 < 0,05
p6–7 < 0,001
1,91 ± 0,07
p1–7 < 0,05
p5–7 < 0,001
Ï ð è ì å ÷ à í è å. Çäåñü è â òàáë. 2, 3: p2–4 < 0,05 – ðàçëè÷èÿ
ìåæäó ñîîòâåòñòâóþùèìè ãðóïïàìè äîñòîâåðíû; n – êîëè÷åñòâî
æèâîòíûõ â ãðóïïå.
 äàííîì èññëåäîâàíèè áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî
êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå èññëåäóåìûõ ñðîêîâ íå ïðèâîäèëî ê èçìåíåíèþ êëåòî÷íîñòè
ñåëåçåíêè ìûøåé (òàáë. 2). Îäíàêî ó ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 5 è 7 ñóò, îòìå÷àëîñü
ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîå ïîâûøåíèå îòíîñèòåëüíîãî è
àáñîëþòíîãî êîëè÷åñòâà àíòèòåëîïðîäóöåíòîâ â ñåëåçåíêå ïî ñðàâíåíèþ ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè ôîíîâûìè è
êîíòðîëüíûìè çíà÷åíèÿìè (òàáë. 2). Òèòð ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ M, G è ñóììàðíûé òèòð ãåìàããëþòèíèíîâ áûë âûøå ïîñëå 5-äíåâíîãî êóðñîâîãî
ïðèìåíåíèÿ èìÈÔÍ-α-2b êàê ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé ñ ïðèìåíåíèåì ðàñòâîðèòåëÿ ïÿòèêðàòíî, òàê è ñ äàííûìè ôîíîâîé ãðóïïû (òàáë. 2).
Ïðèìåíåíèå èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà 3-äíåâíûì
êóðñîì ïîâûøàëî èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè ÃÇÒ ëèøü ïî
ñðàâíåíèþ ñ ôîíîâîé ãðóïïîé ìûøåé (òàáë. 3). Êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò íå âëèÿëî
íà êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò. Ïðè ýòîì È â äàííîé
ýêñïåðèìåíòàëüíîé ãðóïïå ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìî
ñíèæàëñÿ îòíîñèòåëüíî ïîêàçàòåëÿ â ãðóïïå ìûøåé,
ïîëó÷àâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3 ñóò.
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
Оригинальные статьи
Òàáëèöà 2
éˆÂÌ͇ ‚ÎËflÌËfl 3-, 5- Ë 7-‰Ì‚ÌÓ„Ó ÍÛÒÓ‚Ó„Ó ‚‚‰ÂÌËfl ËÏÏÓ·ËÎËÁËÓ‚‡ÌÌÓ„Ó ËÌÚÂÙÂÓ̇ α-2b ‚ ÚÂ‡Ô‚Ú˘ÂÒÍÓÈ ‰ÓÁ (1,8 ⋅ 105 åÖ/Í„)
̇ „ÛÏÓ‡Î¸Ì˚È ËÏÏÛÌÌ˚È ÓÚ‚ÂÚ ‡ÛÚ·‰Ì˚ı Ï˚¯ÂÈ Ì‡ 5- ÒÛÚ ÔÓÒΠËÏÏÛÌËÁ‡ˆËË (X ± m, ð)
Ãðóïïà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
æèâîòíûõ
Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü
ÎÊÑ, ⋅ 106
ÀÎÊ, %
ÀÎÊ, ⋅ 106
IgM, log2T
IgG, log2T
IgM + IgG, log2T
Ãðóïïà 1
Ôîí (n = 10)
219,10 ± 13,46
9,94 ± 0,35
22,45 ± 1,97
1,0 ± 0,21
4,80 ± 0,25
5,80 ± 0,36
Ãðóïïà 2
Êîíòðîëü 3 ñóò (n = 10)
215,50 ± 10,75
11,22 ± 0,36
p1–2 < 0,05
24,32 ± 1,65
1,10 ± 0,23
4,90 ± 0,18
6,00 ± 0,37
Ãðóïïà 3
èìÈÔÍ-α-2b 3 ñóò (n = 10)
221,30 ± 11,71
12,04 ± 0,44
p1–3 < 0,05
26,86 ± 1,96
1,20 ± 0,20
5,30 ± 0,30
6,50 ± 0,45
Ãðóïïà 4
Êîíòðîëü 5 ñóò (n = 10)
211,50 ± 10,37
11,38 ± 0,35
p1–4 < 0,05
24,33 ± 1,84
0,90 ± 0,23
4,80 ± 0,20
5,70 ± 0,30
Ãðóïïà 5
èìÈÔÍ-α-2b 5 ñóò (n = 10)
237,50 ± 11,46
12,56 ± 0,32
p1–5 < 0,05
p4–5 < 0,05
30,03 ± 1,92
p1–5 < 0,05
p4–5 < 0,05
2,10 ± 0,23
p1–5 < 0,05
p3–5 < 0,01
p4–5 < 0,01
5,80 ± 0,20
p1–5 < 0,05
p4–5 < 0,01
7,90 ± 0,38
p1–5 < 0,05
p3–5 < 0,05
p4–5 < 0,001
Ãðóïïà 6
Êîíòðîëü 7 ñóò (n = 10)
221,80 ± 10,44
11,68 ± 0,22
p1–6 < 0,05
25,98 ± 1,54
1,10 ± 0,18
5,0 ± 0,21
6,10 ± 0,35
Ãðóïïà 7
èìÈÔÍ-α-2b 7 ñóò (n = 10)
235,40 ± 12,89
13,28 ± 0,28
p1–6 < 0,05
p3–7 < 0,05
p6–7 < 0,001
31,39 ± 2,02
p1–6 < 0,05
p6–7 < 0,05
1,20 ± 0,20
p5–7 < 0,01
4,80 ± 0,25
p5–7 < 0,01
6,0 ± 0,42
p5–7 < 0,01
Ó ìûøåé, ïîëó÷èâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå
7 ñóò, íàáëþäàëîñü ìàêñèìàëüíîå ïîâûøåíèå èíäåêñà
ðåàêöèè ÃÇÒ. Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü â äàííîé ýêñïåðèìåíòàëüíîé ãðóïïå áûë ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìî
âûøå çíà÷åíèé â ñîîòâåòñòâóþùåé êîíòðîëüíîé ãðóïïå, à òàêæå ôîíîâîé è ãðóïïå æèâîòíûõ ñ ââåäåíèåì
èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò (òàáë. 3).
Òàáëèöà 3
éˆÂÌ͇ ‚ÎËflÌËfl 3-, 5- Ë 7-‰Ì‚ÌÓ„Ó ÍÛÒÓ‚Ó„Ó ‚‚‰ÂÌËfl
ËÏÏÓ·ËÎËÁËÓ‚‡ÌÌÓ„Ó ËÌÚÂÙÂÓ̇ α-2b ‚ ÚÂ‡Ô‚Ú˘ÂÒÍÓÈ ‰ÓÁÂ
(1,8 ⋅ 105 åÖ/Í„) ̇ ËÌÚÂÌÒË‚ÌÓÒÚ¸ ‡͈ËË Éáí ‡ÛÚ·‰Ì˚ı Ï˚¯ÂÈ
(X ± m, ð)
Ãðóïïà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
æèâîòíûõ
Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü
(ÈÂ)
Ãðóïïà 1
Ôîí (n = 10)
10,13 ± 1,06
Ãðóïïà 2
Êîíòðîëü 3 ñóò (n = 10)
13,66 ± 1,40
Ãðóïïà 3
èìÈÔÍ-α-2b 3 ñóò (n = 10)
16,70 ± 1,90
p1–3 < 0,05
Ãðóïïà 4
Êîíòðîëü 5 ñóò (n = 10)
11,67 ± 0,92
Ãðóïïà 5
èìÈÔÍ-α-2b 5 ñóò (n = 10)
9,30 ± 1,15
p3–5 < 0,01
Ãðóïïà 6
Êîíòðîëü 7 ñóò (n = 10)
11,80 ± 1,0
Ãðóïïà 7
èìÈÔÍ-α-2b 7 ñóò (n = 10)
18,93 ± 1,75
p1–7 < 0,05
p5–7 < 0,001
p6–7 < 0,01
Обсуждение
 ðåçóëüòàòå ïðîâåäåííîãî èññëåäîâàíèÿ áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ìîäèôèöèðîâàííàÿ ôîðìà èìÈÔÍ-α-2b
ñ ÏÝÃ îáëàäàåò èììóíîòðîïíûìè ñâîéñòâàìè. Ïåãèëèðîâàííàÿ ìîëåêóëà èíòåðôåðîíà êîìïëåêñíî âëèÿëà
íà êëåòêè èììóííîé ñèñòåìû, ñòèìóëèðóÿ êëåòî÷íûé,
ãóìîðàëüíûé
èììóííûé
îòâåò
ìûøåé
ëèíèè
CBA/CaLac, à òàêæå ôàãîöèòàðíîå çâåíî èììóíèòåòà.
Âàæíî îòìåòèòü, ÷òî èììóíîòðîïíàÿ àêòèâíîñòü
èìÈÔÍ-α-2b íàáëþäàëàñü ïðè ïåðîðàëüíîì ïðèåìå.
Íàèáîëåå âåðîÿòíîé ïðè÷èíîé ýôôåêòèâíîñòè èññëåäóåìîãî èìÈÔÍ-α-2b ÿâëÿåòñÿ èçìåíåíèå åãî ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïðè ïðèñîåäèíåíèè ìîëåêóëû
ÏÝÃ. Ïðåäïîëîæèòåëüíî, ïåãèëèðîâàííàÿ ìîëåêóëà
ÈÔÍ ñîõðàíÿåò áèîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòü â æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå è âñàñûâàåòñÿ â êðîâü, ðàñïðåäåëÿÿñü ïî îðãàíàì è òêàíÿì â îòëè÷èå îò íåñâÿçàííîãî
ÈÔÍ, êîòîðûé ëåãêî ðàçðóøàåòñÿ ïðîòåàçàìè. Íåñìîòðÿ íà òî ÷òî ìåõàíèçì âñàñûâàíèÿ èìÈÔÍ-α-2b â
æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå äî êîíöà íå ÿñåí, èçâåñòíî, ÷òî ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè ïåãèëèðîâàííûõ
ïðåïàðàòîâ, ïîëó÷åííûõ ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîííîëó÷åâîãî ñèíòåçà, áèîäîñòóïíîñòü ñîñòàâëÿåò 4,3%,
÷òî çíà÷èòåëüíî ïðåâûøàåò áèîäîñòóïíîñòü íàòèâíûõ
áåëêîâ, êîòîðàÿ ñîñòàâëÿåò íå áîëåå 1% [8]. Ïåãèëèðîâàííûå ïðåïàðàòû àêòèâíî àäñîðáèðóþòñÿ ïî âñåé
ïîâåðõíîñòè êèøå÷íîé âîðñèíû, â îòëè÷èå îò íàòèâíûõ áåëêîâ, êîòîðûå ïðîíèêàþò ëèøü íà àïèêàëüíóþ
ïîâåðõíîñòü êèøå÷íûõ âîðñèí. Ýòî óêàçûâàåò íà áîëåå âûðàæåííóþ áèîäîñòóïíîñòü áåëêà êîíúþãàòà ñ
íèçêîìîëåêóëÿðíûì ÏÝÃ [8, 9].
Òåõíîëîãèÿ ïåãèëèðîâàíèÿ çíà÷èòåëüíî óëó÷øàåò
êèíåòèêó íàòèâíûõ áåëêîâûõ ñîåäèíåíèé. Ïðèñîåäèíåíèå ÏÝÃ ê ðåêîìáèíàíòíîìó ÈÔÍ ïðèâîäèò ê óâå-
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
117
Шитикова О.Г., Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В. и др.
Разработка оптимальных экспериментальных терапевтических схем введения…
ëè÷åíèþ ðàçìåðà ìîëåêóëû, â òîì ÷èñëå ðàäèóñà Ñòîêñà. Óâåëè÷åííûé ðàçìåð áåëêîâîé ìîëåêóëû ñïîñîáñòâóåò óäëèíåíèþ àäñîðáöèè è ïåðèîäà ïîëóâûâåäåíèÿ
áåëêà èç îðãàíèçìà, òåì ñàìûì óâåëè÷èâàÿ ïåðèîä
«ýôôåêòèâíîé» ïîëóæèçíè àêòèâíîãî ÈÔÍ [7, 14].
Äðóãèì âàæíûì ôàêòîðîì óäëèíåíèÿ âðåìåíè àêòèâíîé öèðêóëÿöèè ÏÝÃ-ìîäèôèöèðîâàííûõ ïåïòèäîâ
ÿâëÿåòñÿ ñòðóêòóðà ÏÝÃ-öåïî÷åê. Èçâåñòíî, ÷òî ðàçâåòâëåííàÿ ìîëåêóëà ÏÝà çàìåäëÿåò ìåòàáîëèçì ïðåïàðàòà. Ñ ðàçâåòâëåííîé ñòðóêòóðîé öåïî÷åê ÏÝà ñâÿçàíà è çíà÷èòåëüíî ìåíüøàÿ èììóíîãåííîñòü ìîäèôèöèðîâàííûõ ïðåïàðàòîâ ïðè ñîõðàíåíèè èõ îñíîâíûõ
ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ [14, 15].
Åùå îäíà èç âàæíåéøèõ îñîáåííîñòåé ìîäèôèöèðîâàííûõ ÏÝÃ-ìîëåêóë – âûñîêàÿ ãèäðîôèëüíîñòü,
ôîðìèðóþùàÿñÿ çà ñ÷åò ñïîñîáíîñòè ìîëåêóëû ÏÝÃ
ñâÿçûâàòü ìîëåêóëû âîäû [5, 14, 16]. Âåðîÿòíî, ýòî
ñâîåîáðàçíîå «âîäíîå îáëàêî» çíà÷èòåëüíî ïîâûøàåò
ðàñòâîðèìîñòü è áèîäîñòóïíîñòü èìÈÔÍ-α-2b, à òàêæå çàùèùàåò ìîëåêóëó îò íåéòðàëèçóþùèõ àíòèòåë è
êîìïëåìåíòà [5]. Òàêèì îáðàçîì, èìÈÔÍ-α-2b ëó÷øå
çàùèùåí îò îïñîíèçàöèè è àêòèâíîãî ôàãîöèòîçà
êëåòêàìè ìàêðîîðãàíèçìà, ÷òî íåïîñðåäñòâåííî äàåò
åìó ïðåèìóùåñòâî ïåðåä ïðåïàðàòàìè ñòàíäàðòíîãî
ÈÔÍ. Êðîìå òîãî, ïîëàãàþò, ÷òî ïåãèëèðîâàíèå âûçûâàåò óìåíüøåíèå èììóíîãåííûõ è àíòèãåííûõ
ñâîéñòâ ðåêîìáèíàíòíîãî ÈÔÍ è ìîæåò ñíèçèòü ðèñê
àëëåðãè÷åñêèõ ðåàêöèé [14].
Èììóíîìîäóëèðóþùàÿ ñïîñîáíîñòü ÈÔÍ çàêëþ÷àåòñÿ â êîíòðîëå âçàèìîäåéñòâèÿ êëåòîê, ó÷àñòâóþùèõ â èììóííîì îòâåòå, ðåãóëèðóÿ ýêñïðåññèþ íà
ìåìáðàíàõ êëåòîê ìîëåêóë ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè 1-ãî òèïà èëè â íåïîñðåäñòâåííîé àêòèâàöèè èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòîê. ÈÔÍ 1-ãî òèïà
ñòèìóëèðóþò ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ìàêðîôàãîâ, åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ, öèòîòîêñè÷åñêèõ Òëèìôîöèòîâ, ñïîñîáñòâóþò äèôôåðåíöèàöèè è ïðîëèôåðàöèè Â-ëèìôîöèòîâ. ÈÔÍ ïðèíèìàþò àêòèâíîå
ó÷àñòèå â ïîäãîòîâêå è ðåãóëÿöèè ìåõàíèçìîâ ñïåöèôè÷åñêîãî èììóííîãî îòâåòà, ðåãóëèðóþò áàëàíñ Th1
è Th2 [3, 4, 17]. Èñõîäÿ èç ïîëó÷åííûõ ðåçóëüòàòîâ,
èììóíîòðîïíàÿ àêòèâíîñòü ÈÔÍ, êîíúþãèðîâàííîãî ñ
ÏÝà è ïðèìåíÿåìîãî ïåðîðàëüíî, íå óñòóïàåò ñâîáîäíîìó ÈÔÍ, ââîäèìîìó âíóòðèìûøå÷íî èëè ïîäêîæíî
[3]. Òàê, êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3, 5
è 7 ñóò â òåðàïåâòè÷åñêîé äîçå ïðèâîäèëî ê ïîñòåïåííîìó ïîâûøåíèþ ôàãîöèòàðíîé àêòèâíîñòè íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîé ïîëîñòè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ. Èññëåäóåìûé ïðåïàðàò, ïðèìåíÿåìûé êóðñîì
â òå÷åíèå 5 ñóò, ñïîñîáñòâîâàë ñèìóëÿöèè ãóìîðàëüíîãî èììóííîãî îòâåòà ìûøåé çà ñ÷åò ïîâûøåíèÿ êîëè÷åñòâà ÀÎÊ â ñåëåçåíêå, òèòðà ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë
118
â ñûâîðîòêå êðîâè. Êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò (âëèÿíèå íà Ò-ýôôåêòîðû) çíà÷èìî ïîâûøàëñÿ ïîñëå 7-êðàòíîãî ïðèìåíåíèÿ ïåãèëèðîâàííîãî ïðåïàðàòà. Ýòî
ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î ñîõðàíåííîé ñòðóêòóðå
íàòèâíîãî ÈÔÍ â ïðîöåññå ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ïåãèëèðîâàíèÿ. ÏÝà ìîæåò áûòü ñâÿçàí ñ ïðîòåèíîì â
íåñêîëüêèõ ïîçèöèÿõ, îäíàêî èçâåñòíî, ÷òî ñîåäèíåíèå ñ áåëêîì â ìåñòå àòîìà àçîòà E-àìèíîãðóïïû ëèçèíà èëè â ìåñòå èìèäàçîëüíîé ãðóïïû ãèñòèäèíà
óëó÷øàåò ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü èíòåðôåðîíà
α-2b [14]. Òàêæå èçâåñòíî, ÷òî ðåöåïòîðñâÿçûâàþùàÿ
è ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòè èíòåðôåðîíà α-2b ëîêàëèçîâàíû â N-êîíöåâîé ÷àñòè ìîëåêóëû, à àíòèïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü â Ñ-êîíöåâîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòüþ ïîëèïåïòèäíîé öåïè [3]. Âåðîÿòíî, òåõíîëîãèÿ
ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ñèíòåçà ìîäèôèöèðóåò ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè èíòåðôåðîíà α-2b, íå
èçìåíÿÿ êîíôîðìàöèîííóþ ñòðóêòóðó áåëêà, à èììîáèëèçîâàííûå ó÷àñòêè ÏÝà íå âëèÿþò íà ñâÿçûâàíèÿ
ÈÔÍ ñ åãî ðåöåïòîðàìè.
Òàêèì îáðàçîì, ñîâðåìåííàÿ òåõíîëîãèÿ ïåãèëèðîâàíèÿ ñ ïîìîùüþ ôèçè÷åñêîãî ñïîñîáà ñâÿçûâàíèÿ
ïîçâîëÿåò óëó÷øèòü ðÿä ôàðìàêîäèíàìè÷åñêèõ è ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ðåêîìáèíàíòíîãî èíòåðôåðîíà α-2b, ÷òî äàåò âîçìîæíîñòü çíà÷èòåëüíî ðàñøèðèòü îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ ïðåïàðàòà â ïðàêòè÷åñêîé
ìåäèöèíå.
Заключение
Ýêñïåðèìåíòàëüíîå èññëåäîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî
íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ôàãîöèòîç íåéòðîôèëîâ (îòíîñèòåëüíîå ÷èñëî ôàãîöèòîâ è êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííûõ
áàêòåðèé îäíèì ôàãîöèòîì) è ãóìîðàëüíûé èììóííûé
îòâåò (êîëè÷åñòâî àíòèòåëîïðîäóöåíòîâ è èõ ôóíêöèîíàëüíàÿ àêòèâíîñòü) óñèëèâàåò êóðñîâîå ââåäåíèå
òåðàïåâòè÷åñêîé äîçû èììîáèëèçèðîâàííîãî íà ïîëèýòèëåíãëèêîëå ñ ïîìîùüþ ôèçè÷åñêîãî ñïîñîáà ñâÿçûâàíèÿ èíòåðôåðîíà α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò. Êëåòî÷íûé
èììóííûé îòâåò (âëèÿíèå íà Ò-ýôôåêòîðû) çíà÷èìî
ïîâûøàåòñÿ ïîñëå 7-êðàòíîãî ïðèìåíåíèÿ èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î
ïåðñïåêòèâíîñòè ýíòåðàëüíîãî ñïîñîáà íàçíà÷åíèÿ
èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b ñ ïîìîùüþ
ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ñèíòåçà, àëüòåðíàòèâíîãî ïàðåíòåðàëüíîìó ïðèìåíåíèþ.
Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ôèíàíñîâîé ïîääåðæêå Ìèíèñòåðñòâà îáðàçîâàíèÿ è íàóêè ÐÔ â ðàìêàõ Ôåäåðàëüíîé
öåëåâîé ïðîãðàììû «Ðàçâèòèå ôàðìàöåâòè÷åñêîé è ìåäèöèíñêîé ïðîìûøëåííîñòè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè íà
ïåðèîä äî 2020 ã. è äàëüíåéøóþ ïåðñïåêòèâó» (ãîñóäàðñòâåííûé êîíòðàêò ¹ 16.N08.12.1017 îò 14.05.12).
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
Оригинальные статьи
Литература
1. Íàðîâëÿíñêèé À.Í., Åðøîâ Ô.È., Ãèíöáóðã À.Ë. Èíòåðôåðîíû: ïåðñïåêòèâíûå íàïðàâëåíèÿ èññëåäîâàíèé //
Èììóíîëîãèÿ. 2013. ¹ 3. Ñ. 168–172
2. Caraglia M., Marra M., Pelaia G., Maselli R., Caputi M.,
Marsico S.A., Abbruzzese A. Alpha-interferon and its effects on signal transduction pathways // Journal of Cellular
Physiology. 2005. V. 202. P. 323–335.
3. Åðøîâ Ô.È., Êèñåëåâ Î.È. Èíòåðôåðîíû è èõ èíäóêòîðû
(îò ìîëåêóë äî ëåêàðñòâ). Ì.: ÃÝÎÒÀÐ-ÌÅÄ, 2005. 368 ñ.
4. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: cell
signalling, immune modulation, antiviral response and virus
countermeasures // Journal of General Virology. 2000.
V. 81, ¹ 10. P. 2341–2364.
5. Êàðàáåëüñêèé À.Â., Ïàäêèíà Ì.Â. Ðåêîìáèíàíòíûå èíòåðôåðîíû-àëüôà ÷åëîâåêà ïðîëîíãèðîâàííîãî äåéñòâèÿ
// Âåñòíèê ÑÏáÃÓ. 2007. Ñåð. 3. Âûï. 4. Ñ. 45–53.
6. Fried M.W. Side effects of therapy of hepatitis C and their
management // Hepatology. 2002. V. 36. P. 237–244.
7. Grace M., Cutler D. Pegylating IFNs at His-34 improves the
in vitro antiviral activity through the JAK/STAT pathway
// Antiviral Chemistry & Chemotherapy. 2004. V. 15, ¹ 6.
P. 287–297.
8. Ìàäîíîâ Ï.Ã., Åðøîâ Ê.È., Äóáðîâèí À.Â., Ìèðîøíèêîâ
Ï.Í., Øèëîâà Ì.À., Êèíøò Ä.Í. Ýëåêòðîííî-ëó÷åâàÿ
ìîäèôèêàöèÿ ïðåïàðàòîâ áåëêîâîé ïðèðîäû äëÿ óëó÷øåíèÿ èõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ // Ìåäèöèíà è îáðàçîâàíèå. 2013. ¹ 4. URL: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1115
9. Íàíîòåõíîëîãèè â ôàðìàêîëîãèè / À.Ì. Äûãàé, À.Â. Àðòàìîíîâ, À.À. Áåêàðåâ, Â.Â. Æäàíîâ, Ã.Í. Çþçüêîâ, Ï.Ã. Ìàäîíîâ, Â.Â. Óäóò. Ì.: Èçä-âî ÐÀÌÍ, 2011. 136 ñ.
10. Õàáðèåâ Ð.Ó. Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ. Ì.: Ìåäèöèíà, 2005. 832 ñ.
11. Cunningham A.I. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells // Nature. 1965.
V. 207, ¹ 5001. P. 1106–1107.
12. Ãåìàããëþòèíàöèÿ è ðåàêöèè àíòèòåëîçàâèñèìîãî ãåìîëèçà. Àíòèòåëà. Ìåòîäû / ïîä ðåä. Ä. Êýòòè. Ì.: Ìèð,
1991. 328 ñ.
13. Òðóõà÷åâà Í.Â. Ìàòåìàòè÷åñêàÿ ñòàòèñòèêà â ìåäèêîáèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ ñ ïðèìåíåíèåì ïàêåòà
Statistica. Ì.: ÃÝÎÒÀÐ-Ìåäèà, 2012. 384 ñ.
14. Grace M., Cutler D., Bordens R. Ïåãèëèðîâàííûå èíòåðôåðîíû ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå C. // Ðåöåïò: íàó÷íîïðàêòè÷åñêèé æóðíàë äëÿ ôàðìàöåâòîâ è âðà÷åé. 2006.
¹ 6. Ñ. 118–128.
15. Foster G.R. Pegylated interferons for the treatment of
chronic hepatitis C: pharmacological and clinical differences
between peginterferon-α-2a and peginterferon-α-2b //
Drugs. 2010. V. 70, ¹ 2. P. 147–165.
16. Thomas T., Foster G. Nanomedicines in The Treatment of
Chronic Hepatitis C–Focus on Pegylated Interferon alpha2a // Int. J. Nanomedicine. 2007. V. 2, ¹ 1. P. 19–24.
17. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: Cell
signalling, immune modulation, antiviral responses and virus countermeasures // J. Gen. Virol. 2000. V. 81. P. 2341–
2364.
Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ 02.06.2014 ã.
Óòâåðæäåíà ê ïå÷àòè 09.10.2014 ã.
òËÚËÍÓ‚‡ é.É. () – àñïèðàíò, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê).
òÂÒÚÓ·Ó‚ Ö.û. – ä-ð ìåä. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê).
å‡Ò̇fl ç.Ç. – ä-ð ìåä. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê).
чÌËΈ å.É. – ä-ð áèîë. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê).
íÓÙËÏÓ‚‡ Ö.ë. – êàíä. ìåä. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê).
ãË„‡˜Â‚‡ Ä.Ä. – êàíä. áèîë. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê).
凉ÓÌÓ‚ è.É. – ä-ð ìåä. íàóê, Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê).
äËÌ¯Ú Ñ.ç. – êàíä. ìåä. íàóê, Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê).
Ö¯Ó‚ ä.à. – êàíä. áèîë. íàóê, Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê).
òËÎÓ‚‡ å.Ä., Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê).
òËÚËÍÓ‚‡ é脇 ÉÂÌ̇‰¸Â‚̇, òåë. 8-913-800-23-10; e-mail: [email protected]
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
119
Шитикова О.Г., Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В. и др.
Разработка оптимальных экспериментальных терапевтических схем введения…
AZVANIE DEVELOPMENT OF OPTIMAL EXPERIMENTAL THERAPEUTIC REGIMENS
ADMINISTRATION OF IMMOBILIZED INTERFERON α-2b
Shitikova O.G.1, Sherstoboev E.Yu.1, Masnaya N.V.1, Danilets M.G.1, Trofimova E.S.1,
Ligacheva A.A.1, Madonov P.G.2, Kinsht D.N.2, Ershov K.I.2, Shilova M.A.2
1
2
Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation
Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation
ABSTRACT
The development of optimal experimental therapeutic schemes of immobilized interferon α-2b (production of JSC «Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology», Novosibirsk) administration
was conducted in the frame of the common program of pre-clinical study. The drug being studied
was administered intragastrically for 3, 5 and 7 days in the therapeutic dose (1.8 ⋅ 105 IU/kg).
Experimental evaluation of immunotropic properties of immobilized interferon α-2b was carried out
at in vivo experiments in outbred CD1 male mice with using of following tests: the study of drug
effect on the phagocytic activity of peritoneal leukocytes (the relative number of phagocytes and
the number of bacteria which were assimilated by phagocytes were assessed); the study of drug effect on the humoral immune response (the total number of splenocytes, the relative and absolute
number of antibody-forming cells and their functional activity were determined); estimation of drug
effect on the cellular immune response with the using of delayed-type hypersensitivity test induced
by sheep red blood cells. Based on these data we concluded that course administration of immobilized interferon α-2b in the therapeutic dose for 5 days increased phagocytosis of neutrophils and
humoral immune response most effectively. Cell-mediated immune response was significantly increased after 7-fold administration of studied drug.
KEY WORDS: pegylation, immobilized interferon α-2b, outbred mice, scheme of administration.
Bulletin of Siberian Medicine, 2014, vol. 13, no. 5, pp. 114–121
References
1. Narovlyanskiy A.N., Ershov F.I., Gintsburg A.L. Interferons: perspective directions of research. Immunologiya – Immunology, 2013, vol 3, pp. 168–172 (in
Russian).
2. Caraglia M., Marra M., Pelaia G., Maselli R., Caputi M.,
Marsico S. A., Abbruzzese A. Alpha-interferon and its effects on signal transduction pathways. Journal of Cellular
Physiology, 2005, vol. 202, pp. 323–335.
3. Yershov F.I., Kiselev O.I. Interferons and their inducers
(from molecules to medicines). Moscow, GEOTAR-MED
Publ., 2005. (in Russian).
4. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: cell
signalling, immune modulation, anti-viral response and virus
countermeasures. Journal of General Virology, 2000, vol.
81, no. 10, pp. 2341–2364.
5. Karabelsky A.V., Padkina M.V. The recombinant interferon –
a long-acting. Vestnik SPbGU, 2007, vol. 3, no. 4, pp. 45–
53 (in Russian).
6. Fried M.W. Side effects of therapy of hepatitis C and their
management. Hepatology, 2002, vol. 36, pp. 237–244.
7. Grace M., Cutler D. Pegylating IFNs at His-34 improves the
in vitro antiviral activity through the JAK/STAT pathway.
Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 2004, vol. 15, no. 6,
pp. 287–297.
120
8. Madonov P.G., Yershov K.I., Dubrovin A.V., Miroshnikov
P.N., Shilova M.A., Kinsht D.N. Electron beam modification
of the protein drugs to improve their pharmacological
properties. Medicine and education, 2013, no. 4. URL:
http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1115 (in
Russian).
9. Dygay A.M., Artamonov A.V., Bekarev A.A., Zhdanov
V.V., Zyuzkov G.N., Madonov P.G., Udut V.V. Nanotechnology in pharmacology. Moscow, RAMN Publ., 2011. 136
p. (in Russian).
10. Habriev R.U. Manual on experimental (preclinical) study of
new pharmacological agents. Moscow, Medicine Publ.,
2005. 832 p. (in Russian).
11. Cunningham A.I. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells. Nature, 1965, vol. 207,
no. 5001, pp. 1106–1107.
12. Hemagglutination reaction and antibody-dependent hemolysis. Antibodies. Methods. Ed. D. Ketti. Moscow, World
Publ., 1991. 328 p. (in Russian).
13. Trukhacheva N.V Mathematical statistics in biomedical research using the package Statistica. Moscow, GEOTAR Media Publ., 2012. 384 p. (in Russian).
14. Grace M., Cutler D., Bordens R. Pegylated interferons in
chronic hepatitis C. Recipe: scientific journal for pharmacists and physicians, 2006, no. 6, pp. 118–128 (in Russian).
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
Оригинальные статьи
15. Foster G.R. Pegylated interferons for the treatment of
chronic hepatitis C: pharmacological and clinical differences
between peginterferon-α-2a and peginterferon-α-2b. Drugs,
2010, vol. 70, no. 2, pp. 147–165.
16. Thomas T., Foster G. Nanomedicines in The Treatment of
Chronic Hepatitis C–Focus on Pegylated Interferon alpha-2a.
Int. J. Nanomedicine, 2007, vol. 2, no. 1, pp. 19–24.
17. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: Cell signalling, immune modulation, antiviral responses and virus
countermeasures. J. Gen. Virol., 2000, vol. 81, pp. 2341–2364.
Shitikova O.G. (), Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation.
Sherstoboev Ye.Yu., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation.
Masnaya N.V., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation.
Danilets M.G., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation.
Trofimova Ye.S., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation.
Ligacheva A.A., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation.
Madonov P.G., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation.
Kinsht D.N., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation.
Yershov K.I., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation.
Shilova M.A., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation.
Shitikova Olga G., Ph. +7-913-800-23-10; e-mail: [email protected]
Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121
121