Glucose Hexokinase Reagent Set Каталожный № HTI

Glucose Hexokinase
Reagent Set
Каталожный № HTI-G7518
Каталожные номера:
HTI-G7518-50
HTI-G7518-250
Гексокиназа (дрожжи) 1000 МЕ/л, глюкозо-6-фосфат
дегидрогеназа 1000 МЕ/л, АТФ 1,0 ммоль, NAD 1,0
ммоль, буфер, рН 7,5+0,1, стабилизаторы, наполнители.
Предназначен для количественного определения
концентрации глюкозы в сыворотке/плазме крови.
Развести реагент дистиллированной водой в объеме,
указанном на этикетке. Осторожно перемешать.
Для определения концентрации глюкозы в
биологических жидкостях существует много методов.
В ранних методах использовалась реакция окисления
тяжелых металлов альдегидными группами глюкозы.
На результаты этих тестов влияли другие углеводы,
нежели глюкоза. В орто-толуидиновом методе,
представленном в 1959 году и впоследствии
модифицированном,
использовалась
реакция,
специфичная для альдоз (моносахариды, в
молекулах которых присутствует альдегидная
группа), но при этом использовались ядовитые,
раздражающие реагенты и требовалась инкубация
при высокой температуре.
Ферментный метод определения впервые был описан
в 1940 году и впоследствии модифицирован.
В настоящем гексокиназном методе использована
модификация Slein, в которой гексокиназа и глюкозо6-фосфат дегидрогеназа катализируют реакцию.
Неоткрытый набор можно хранить в холодильнике при 280С. Реагент стабилен в течение всего срока годности при
условии хранения в холодильнике при 2-80С. Рабочий
реагент стабилен в течение 5 дней при условии хранения
в холодильнике при 2-80С.
Подготовка реагентов
Назначение
История метода
Принцип метода
Гексокиназа
Глюкоза + АТФ -------------------¾ Глюкозо-6-фосфат + АДФ
Глюкозо-6фосфат дегидрогеназа
Глюкозо-6фосфат + NAD ---------------¾ 6-Фосфоглюконат + NADH + H+
Гексокиназа
катализирует
реакцию
фосфорилирования глюкозы посредством АТФ.
Продукт реакции глюкозо-6-фосфат впоследствии
окисляется, при этом NAD превращается в NADH.
Реакция
катализируется
глюкозо-6-фосфат
дегидрогеназой. Образование NADH приводит к
повышению абсорбции при 340 нм. Абсорбция прямо
пропорциональна
концентрации
глюкозы
в
исследуемом образце.
Реагенты
Реагент глюкозы
реагентах):
(концентраия
в
разведенных
Хранение реагентов
Непригодные для анализа реагенты
Не использовать реагенты при/если:
1. Начальная абсорбция рабочего реагента против воды
при 340 нм больше 0,200.
2. Концентрация глюкозы в контрольных материалах не
соответствует таковой, указанной на этикетке.
3. Наличии признаков микробной контаминации,
мутности.
Предостережения
Только для in vitro диагностики.
Сбор и хранение образцов
1. Использовать свежие негемолизированные образцы
сыворотки крови.
2. Использование плазмы с ЭДТА, оксалатом, цитратом,
флюоридом или гепарином приемлемо.
3. Для
предотвращения
гликолиза
отделение
сыворотки/плазмы крови необходимо проводить как
можно в более короткие сроки. В присутствии
эритроцитов концентрация глюкозы снижается
примерно на 7% в час. Добавление флюорида натрия
предупреждает гликолиз.
4. Концентрация глюкозы в сыворотке/плазме крови
стабильна в течение 8 часов при комнатной
температуре (18-250С) и 24 часа в холодильнике при 280С.
Материалы, входящие в состав набора
1. Реагент глюкозы (гексокиназный метод).
2. Стандарт глюкозы
3. Дистиллированная/деионизированная вода
Glucose Hexokinase
Reagent Set
Каталожный № HTI-G7518
Материалы необходимые, но не
поставляемые
1.
2.
3.
4.
Автоматические пипетки
Таймер
Пробирки
Автоматический биохимический ридер, для
измерения абсорбции при длине волны 340 нм с
подходящей для анализа кюветой.
5. Термостатируемый блок, водяная баня (370С).
Автоматический метод определения
См. соответствующие инструкции
Ручной метод определения
1. Приготовить
реагент
в
соответствии
с
инструкцией.
2. Пометить соответствующие пробирки: «Бланк»,
«Стандарт», «Контроль», «Пациент».
3. Внести по 1,0 мл реагента во все пробирки.
4. Внести в соответствующие пробирки по 5 мкл
калибраторов и исследуемых образцов сыворотки
крови. Перемешать. Инкубировать в течение 3
минут при комнатной температуре (18-250С).
5. Настроить спектрофотометр на «0» по воде при
340 нм.
6. После инкубации измерить абсорбцию.
7. Вычислить
концентрацию
в
исследуемых
образцах. См. раздел «Подсчет результатов».
Замечания по проведению процедуры
1. В сильно липемичных образцах результаты
определения концентрации глюкозы могут быть
завышенными. Поэтому необходим сывороточный
бланк: 5 мкл образца + 1,0 мл изотонического
солевого
раствора.
Хорошо
перемешать,
сосчитать абсорбцию против воды. Вычисть
абсорбцию в бланке из абсорбции в тестируемом
образце, провести определение концентрации
глюкозы.
2. Окрашивание стабильно в течение 15 минут.
3. Для биохимических анализаторов, в которых
общий объем реакционной смеси должен быть
больше 1 мл, можно использовать следующие
пропорции: 3,0 мл реагента + 20 мкл образца. См.
соответствующие инструкции.
Ограничение
1. Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация глюкозы выше, чем 600 мг/дл, то
необходимо провести разведение: 1 объем
исследуемой сыворотки/плазмы на 1 объем
изотонического солевого раствора. Полученные
результаты необходимо умножить на 2.
2. Не использовать сильно гемолизированные образцы.
3. Сильно липемичные образцы требуют наличия
бланка. См. раздел «Замечания по проведению
процедуры»
Калибровка
Для построения калибровочной кривой можно
использовать коммерческие стандарты (например, 100
мг/дл) или калибраторы. Процедура калибровки должна
проводиться в соответствии с инструкцией для
оператора. Если концентрация в контрольных
материалах не соответствует таковой, указанной на
этикетке, то необходимо заново провести калибровку.
Подсчет результатов
Abs = абсорбция
(Abs неизв. обр. – Abs. бланк) / (Abs станд. – Abs бланк) Х
конц. станд. (мг/дл) = конц. глюкозы (мг/дл)
Пример подсчета:
Abs бланк = 0,08, Abs неизв. = 0,150, Abs станд. = 0,200,
конц. станд. = 100 мг/дл.
тогда, (0,50 - 0,08) / (0,200 – 0,08) Х 100 = 58 мг/дл
Контроль качества
Рекомендовано при каждом проведении серии анализов
включать
коммерческие
контрольные
сыворотки
(патологические
и
нормальные)
с
известной
концентрацией глюкозы. Рекомендовано в каждой
лаборатории устанавливать свою частоту проведения
контроля качества.
Концентрация у практически здоровых лиц
Глюкоза: 65 – 110 мг/дл.
В каждой лаборатории рекомендовано устанавливать
свои границы нормальных значений.
Характеристики теста
Линейность: 0-600 мг/дл.
Сравнение
Проведен
корреляционный
анализ
результатов,
полученных на данных тест-наборах и другого
коммерческого тест-набора. Коэффициент корреляции
Glucose Hexokinase
Reagent Set
Каталожный № HTI-G7518
составил 0,999, регрессионный анализ: у=0,99Х+0,68
(диапазон концентраций: 51-506 мг/дл).
Точность
В один день
S.D.
Среднее
104
1.3
299
3.8
C.V.%
1.3
1.3
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: [email protected]
Rev. 5/03 P803-G7518-01
День ото дня
Среднее S.D.
104
1.9
312
6.3
C.V.%
1.8
2.0