Glucose Oxidase Reagent Set Каталожный № HTI

Glucose Oxidase
Reagent Set
Каталожный № HTI-G7519
Каталожные номера:
Подготовка реагентов
HTI-G7519-100
HTI-G7519-200
Развести реагент дистиллированной водой в объеме,
указанном на этикетке. Осторожно перемешать. Рабочий
реагент можно хранить в холодильнике при 2-80С.
Предназначен для количественного определения
концентрации глюкозы в сыворотке/плазме крови.
Хранение реагентов
Назначение
История метода
Ранее для определения концентрации глюкозы
использовали реакцию окисления глюкозы до
перекиси водорода и глюконовой кислоты (C6H12O7),
катализируемую глюкозо оксидазой. Образовавшиеся
молекулы перекиси водорода могут быть определены
по окислению хромогена. Для этих целей
предлагалось использовать много соединений, но
большинство из них не может быть использовано в
рутинной практике, так как либо обладают
канцерогенными/токсическими свойствами, либо
нестабильны. Для определения концентрации
глюкозы Trinder и соавт первыми представили, а
Emerson и соавт. модифицировали метод, в котором
использовалась
система
пероксидаза-феноламинофеназон.
В
результате
реакции
образовывается хинониминовое окрашивание. На
результаты анализа не влияют другие соединения,
метод не обладает недостатками, характерными для
ранних методов. В настоящем тесте используется
описанная выше реакция, но вместо фенола
применяют
его
аналог,
не
обладающий
раздражающими свойствами.
Принцип метода
Глюкозо оксидаза
D-Глюкоза + H2O + O2 -------------------------------¾ H2O2 + D-Глюконат
Пероксидаза
H2O2 + 4-Аминоантипирин + Гидроксибензоат------------¾Хинониминовое
окрашивание + H2O
Реагенты
Реагент глюкозы (концентраия в разведенных
реагентах):
Глюкозо оксидаза > 15 МЕ/мл, Пероксидаза (хрена)
1,2 МЕ/мл, 4-аминоантипирин 0,38 ммоль,
фосфатный буфер 7,5+0,1, р-гидроксибензоат натрия
10 ммоль, стабилизаторы, наполнители, азид натрия
в качестве консерванта (0.1%).
Неоткрытый набор можно хранить в холодильнике при 280С. Реагент стабилен в течение всего срока годности при
условии хранения в холодильнике при 2-80С. Рабочий
реагент хранить в холодильнике при 2-80С.
Непригодные для анализа реагенты
Не использовать реагенты при/если:
1. Попадании влаги в реагент и спекании реагента.
2. Концентрация глюкозы в контрольных материалах не
соответствует таковой, указанной на этикетке,
отсутствует линейность при проведении калибровки.
Предостережения
1. Только для in vitro диагностики.
2. Реагент содержит в качестве консерванта раствор
азида натрия 0.1%. Азид натрия при контакте с
металлом может образовывать взрывоопасные
соединения. Поэтому при удалении реагентов в
сточные трубы (свинец) необходимо смывать их
большим количеством проточной воды.
Сбор и хранение образцов
1. Использовать свежие негемолизированные образцы
сыворотки/плазмы крови.
2. Для
предотвращения
гликолиза
отделение
сыворотки/плазмы крови необходимо проводить как
можно в более короткие сроки. В присутствии
эритроцитов концентрация глюкозы снижается
примерно на 7% в час.
3. Концентрация глюкозы в сыворотке/плазме крови
стабильна в течение 24 часов в холодильнике при 280С.
Влияние других соединений
1. В сильно липемичных и иктеричных образцах
концентрация глюкозы может быть ложно завышена.
Для
корректировки
результатов
необходимо
подготовить бланк: 10 мл исследуемого образца + 1,0
мл дистиллированной воды. Вычисть абсорбцию в
бланке из абсорбции в исследуемом образце.
2. Подробная информация о влиянии аналитических
особенностей,
физиологических
изменений,
Glucose Oxidase
Reagent Set
Каталожный № HTI-G7519
лекарственных препаратов на результаты
определения концентрации глюкозы изложена в
работе Yong и соавт.
Материалы, входящие в состав набора
1. Реагент глюкозы.
2. Стандарт глюкозы
3. Дистиллированная/деионизированная вода
Материалы необходимые, но не
поставляемые
1.
2.
3.
4.
Автоматические пипетки
Пробирки
Таймер
Автоматический биохимический ридер, для
измерения абсорбции при длине волны 550 нм с
подходящей для анализа кюветой.
5. Градуированный цилиндр.
6. Термостатируемый блок, водяная баня (370С).
Автоматический метод определения
См. соответствующие инструкции
Ручной метод определения
1. Приготовить рабочий реагент в соответствии с
инструкцией.
2. Пометить соответствующие пробирки: «Бланк»,
«Стандарт», «Контроль», «Пациент».
3. Внести по 1,0 мл рабочего реагента во все
пробирки.
4. Внести в соответствующие пробирки по 10 мкл
калибраторов и исследуемых образцов сыворотки
крови. Перемешать. Инкубировать в течение 5
минут при 370С.
5. Настроить спектрофотометр на «0» по воде при
500 нм. После инкубации измерить абсорбцию при
500 нм (500-520 нм).
6. Вычислить
концентрацию
в
исследуемых
образцах. См. раздел «Подсчет результатов».
Замечания по проведению процедуры
1. Окрашивание стабильно в течение 15 минут.
2. Для биохимических анализаторов, в которых
общий объем реакционной смеси должен быть
больше 1 мл, можно использовать следующие
пропорции: 3,0 мл реагента + 20 мкл образца. См.
соответствующие инструкции.
Ограничение
1. Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация глюкозы выше, чем 500 мг/дл, то
необходимо провести разведение: 1 объем
исследуемой сыворотки/плазмы на 1 объем
изотонического солевого раствора. Полученные
результаты необходимо умножить на 2.
Калибровка
Для построения калибровочной кривой можно
использовать коммерческие стандарты (например, 100
мг/дл) или калибраторы.
Подсчет результатов
Abs = абсорбция
(Abs неизв. обр.) / (Abs станд.) Х конц. станд. (мг/дл) =
конц. глюкозы (мг/дл)
Международные единицы
Для перевода концентрации из мг/дл в ммоль/л
необходимо полученный результат умножить на 10
(перевод из дл в л) и разделить на 180 (молекулярный
вес глюкозы)
Мг/дл Х 10/180 = ммоль/л
мг/дл Х 0,0556 = ммоль/л
Например: 150 мг/дл Х 0,0556 = 8,34 ммоль/л.
Ограничения
Если в исследуемом образце предполагаемая
концентрация глюкозы выше, чем 500 мг/дл, то
необходимо провести разведение: 1 объем исследуемой
сыворотки/плазмы на 1 объем изотонического солевого
раствора. Полученные результаты необходимо умножить
на 2.
Контроль качества
Рекомендовано при каждом проведении серии анализов
включать
коммерческие
контрольные
сыворотки
(патологические
и
нормальные)
с
известной
концентрацией глюкозы. Рекомендовано в каждой
лаборатории устанавливать свою частоту проведения
контроля качества.
Концентрация у практически здоровых лиц
Глюкоза: 70 – 105 мг/дл.
В каждой лаборатории рекомендовано устанавливать
свои границы нормальных значений.
Характеристики теста
Линейность: 0-500 мг/дл.
Сравнение
Glucose Oxidase
Reagent Set
Каталожный № HTI-G7519
Проведен корреляционный анализ результатов,
полученных на данных тест-наборах и другого
коммерческого
тест-набора.
Коэффициент
корреляции составил 0,998, регрессионный анализ:
у=0,98Х+2,0. Точность
В один день
Среднее
S.D.
97
0.6
221
1.3
C.V.%
0.6
0.6
Произведено High Technology Inc.
109 Production Rd
Walpole, MA 02081 USA
Fax: 1 508 660-22-24
e-mail: [email protected]
Rev. 5/03 P803-G7519-01
День ото дня
Среднее S.D.
96
1.8
217
3.1
C.V.%
1.9
1.4