LIQUID 100 (LD L 100) .

БИО-ЛА-ТЕСТ
Контроль качества
ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА LIQUID 100
(LD L 100)
Кат. №. 10003307
0
Хранить при (+2 – +8) С.
Для проведения контроля качества
использовать контрольные сыворотки:
Лионорм ГУМ Н, Кат. № 10003204
Лионорм ГУМ П, Кат. № 10003206
рекомендуется
Анализ
Метод
Жидкий
реагент
для
определения
активности
лактатдегидрогеназы в сыворотке или плазме.
Принцип реакции
Лактатдегидрогеназа
катализирует
превращение
пирувата в лактат с одновременным окислением НАДН в
НАД.
Уменьшение
поглощения
НАДН
прямо
пропорционально активности ЛДГ в пробе.
+
Пируват + НАДH + H
ЛДГ
Лактат + НАД
Длина волны:
Оптический путь:
Температура:
Hg 365 нм, 340 нм или Hg 334 нм
1 см
0
37 С
Объемное соотношение
образец/реакционная
1/72,4
смесь
Объемы образца и реагентов могут быть изменены при
сохранении соотношения реагент/образец.
+
Монореагентный метод – старт образцом
Реагент
бланк
1,000 мл
Реагенты
R1 Реагент 1, буфер
ТРИС буфер (рН 7,2)
Хлорид натрия 323
Пируват натрия
4 х 20 мл
127 ммоль/л
ммоль/л
2,5 ммоль/л
R2 Реагент 2, субстрат
НАДH
1 х 20 мл
6,6 ммоль/л
Состав реакционной смеси
Трис буфер, рН 7,2
Пируват натрия
Хлорид натрия
НАДН
100 ммоль/л
2,0 ммоль/л
255 ммоль/л
1,3 ммоль/л
Приготовление и стабильность рабочих реагентов
Монореагентный метод - старт образцом
Смешать 4 части раствора реагента 1(R1) с 1 частью
раствора реагента 2 (R2), тщательно перемешать.
Готовый рабочий раствор стабилен:
0
1 неделю при (+2 – +8) С при хранении в защищенном от
света месте.
0
2 дня при (+20 – +25) С при хранении в защищенном от
света месте.
Двухреагентный метод - старт субстратом
Реагенты R1 и R2 жидкие, готовые к использованию.
Реагенты стабильны даже в открытом виде до
достижения указанного срока годности, если хранятся в
0
защищенном от света месте при (+2 – +8) С. Избегать
контаминации.
Калибратор
Рабочий
1,000 мл
1,000 мл
раствор
Образец
–
–
0,014 мл
Калибратор
–
0,014 мл
–
Дист. вода
0,014 мл
–
–
Смешать и инкубировать 1 мин, измерить поглощение
против дистиллированной воды точно через 1, 2 и 3 мин.
Рассчитать изменение поглощения в минуту образца
(∆Aобр), калибратора (∆Aкал) и реагента бланка (∆Aбланк).
Двухреагентный метод – старт субстратом
Реагент
Калибратор
Образец
бланк
Реагент R1
0,800 мл
0,800 мл
0,800 мл
Образец
–
–
0,014 мл
Калибратор
–
0,014 мл
–
Дист. вода
0,014 мл
–
–
Смешать, инкубировать 1 мин
Реагент R2
0,200 мл
0,200 мл
0,200 мл
Смешать и инкубировать 1 мин, измерить поглощение
против дистиллированной воды точно через 1, 2 и 3 мин.
Рассчитать изменение поглощения в минуту образца
(∆Aобр), калибратора (∆Aкал) и реагента бланка (∆Aбланк).
Протоколы для использования на автоматических
анализаторах могут быть получены по запросу.
Расчеты
Рассчитайте активность ЛДГ в образце, используя
1. Фактор
ЛДГ (E/л) = ∆Aобр x 11496 при 340 нм
Образцы
Сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА обработанная
плазма.
Избегать гемолиза!
0
Стабильность ЛДГ в образце: 4 дня при при (+2 – +8) С.
Калибровка
Для калибровки рекомендуемтся использовать
Лионорм Калибратор (Кат. No. 10003200).
Образец
∆Aобр - среднее изменение поглощения в 1 мин.
2. Калибратор
ЛДГ (мккат/л) =
(∆Аобр − ∆Абланк )
х Скал
( ∆Акал − ∆Абланк )
Скал – значение активности ЛДГ в калибраторе
Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503
Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: [email protected], www.lachema.ru
Коэффициент пересчета
Примечание
1 мккат/л = 60 Е/л
1 кат/л = 1 моль/л. сек
1. Если изменение поглощения в минуту (А/мин)
превышает 0,150 при 340 нм, разбавить образец
физиологическим раствором NaCl (150 ммоль/л) и
повторить анализ, используя данное разведение.
Полученный результат умножить на фактор разведения.
2. Когда анализируемая сыворотка имеет слишком
большие
значения
активности
ЛДГ,
начальное
поглощение может быть очень низким, так как большая
часть НАДH будет израсходована до первого измерения
величины поглощения. В этих случаях измерения должны
быть переделаны с разведением, как указано выше.
3. Активность ЛДГ снижается при сильной физической
нагрузке, тромбоцитозе, беременности и при сжатии руки
во время забора крови.
Нормальные величины
0
ЛДГ, сыворотка, плазма 37 С, (E/ л)210 – 462 E/л
Приведенные диапазоны величин следует рассматривать
как ориентировочные. Каждой лаборатории необходимо
определять свои диапазоны.
Рабочие характеристики
Линейность:
до 1500 E/л
Чувствительность:
18 E/л
Нижний предел определения:
48 E/л
Диапазон измерений:
48 – 1500 E/л
Меры предосторожности
Первая помощь
0
Воспроизводимость (при 37 C)
Внутрисерийная
(число измерений
n = 20)
Образец 1
Образец 2
Образец 3
Межсерийная
(число измерений
n = 20)
Образец 1
Образец 2
Образец 3
Среднеарифметическое значение
(E/л)
293
483
894
Среднеарифметическое значение
(E/л)
293
483
894
Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики
профессионально обученным лаборантом.
SD (E/ л)
CV (%)
3,6
4,2
7,8
SD (E/ л)
1,21
0,83
0,84
CV (%)
9
11,4
10,8
3,11
2,32
1,24
Сравнение методов
Сравнение было проведено на 60 образцах с
использованием
реагентов
Pliva-Lachema
Лактатдегидрогеназа Liquid (у) и имеющихся в продаже
реагентов с коммерчески доступной методикой (х).
Результаты: У = 0,996х - 1,14 E/ л; r = 1,000, Sxу = 0,154
Специфичность/Влияющие вещества:
На результаты анализа не влияют:
Билирубин до 300 мкмоль/л, триглицериды до 6,9 ммоль/л.
Значительный гемолиз может изменять значения
активности ЛДГ, т.к. в эритроцитах высокий уровень ЛДГ.
При приеме внутрь следует прополоскать рот водой,
выпить 0,5 л воды и вызвать рвоту. При попадании в
глаза быстро промыть их проточной водой. При
попадании на кожу необходимо промыть теплой водой с
мылом. Во всех серьезных случаях обратиться к врачу.
Утилизация использованных материалов
Все образцы теста должны рассматриваться, как
потенциально инфицированные и вместе с остальными
реагентами должны быть уничтожены в соответствии с
существующими в каждой стране правилами для данного
вида материалов.
Бумажная упаковка и другое (бумага, стекло, пластик)
должны быть рассортированы для выброса с мусором
или отправления на переработку.
Литература
1.
2.
3.
Henderson, A. R., Moss, D. W., Enzymes. Tietz
Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th Ed., Burtis, C.
A. & Ashwood, E. R. (W. B. Saunders eds. Philadelphia
USA), (2001), 352.
Ward, M. K., Cockayne, S., Enzymology, Clinical
Chemistry: Concepts and Application, Anderson, S. C.,
Cockayne, S. (W. B. Saunders eds. Philadelphia USA),
(1993), 238
Tietz, N. W., Clinical guide to laboratory tests, 3rd Ed.,
(W. B. Saunders eds. Philadelphia USA), (1995), 76
Москва, ул Нижегородская, 32, корп. 15, офис 503
Тел./факс: (495) 755-78-51, 755-55-80, 755-78-81, 755-78-92, е-mail: [email protected], www.lachema.ru