КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК

Қазақстан Республикасының Бірінші Президенті күніне арналған «Сейфуллин оқулары – 9: жоғарғы
білім және ғылым дамуындағы жаңа бағыт» атты Республикалық ғылыми-теориялық конференция
материалдары = Материалы Республиканской научно- теоретической конференции «Сейфуллинские
чтения – 9: новый вектор развития высшего образования и науки» посвященная дню Первого
Президента Республики Казахстан. – 2013. – Т.1, ч.2 – С. 221-222
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК,
АНТИИДИОТИПИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА
Оспанова С.Г, Садауова М.
Для накопления препаративного количества антиидиотипических антител
проводили разморозку и культивирование гибридных штаммов – продуцентов
моноклональных антиидиотипических антител 2G9. 2D9.
Клетки после разморозки промывали неполной питательной средой от
консерванта и высевали на «питающий» слой макрофагов. Также апробировали
начальное культивирование клеток на среде без макрофагов. На среде без
макрофагов в первые сутки культивирования наблюдалась незначительная
гибель клеток. После смыва погибших клеток дальнейший рост гибридом
восстанавливался.
По традиционной технологии,
разморозка и
культивирование клеток осуществляется только на среде с «питающим слоем»
макрофагов. Наши результаты показали, что в случае необходимости, можно
разморозить и некоторое время культивировать клетки на среде без макрофагов.
Клетки показали хороший рост при культивировании в условиях «in vitro».
Микроскопирование клеток в динамике роста показало, что в процессе
заморозки гибридные клетки не претерпели морфоло-гических изменений и
представляли собой хорошо прикрепляющиеся к подложке округлые клетки
размером с исходную миеломную клетку, с цитоплазмой в виде тонкого ободка
вокруг ядра.
В начале клетки культивировали на питательной среде RPMI-1640 с
содержанием
фетальной сыворотки плода коровы,
затем постепенно
переводили на бессывороточную среду EX-CELL. Адаптацию проводили
постепенно, уменьшая количество сыворотки плода коровы на 5%, 2,5% , 0%.
Клетки обоих штаммов хорошо росли и на среде RPMI-1640 и на среде EXCELL. Среда EX-CELL используется для исключения посторонних белков в
культуральной жидкости.
В результате многократного пассажа клеток была накоплена
культуральная жидкость, содержащая антиидиотипические антитела против
полисахаридного
антигена
бактерий
рода
Brucella.
Концентрация
антиидиотипических антител в культуральной жидкости составила 15-30 мкг/мл.
В целом, было накоплено около 40 мл культуральной жидкости. После
осаждения сульфатом аммония и концентрирования было получено около 2 мл
препарата антиидиотипических антител с концентрацией белка 500 мкг/мл.