Гинекология СОСТОЯНИЕ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В

Гин е к о л о г и я
УДК 618.146-006.5:615.37
СОСТОЯНИЕ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ЗАВИСИМОСТИ
ОТ ТЯЖЕСТИ ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНОГО
ПОРАЖЕНИЯ ШЕЙКИ МАТКИ
Л.Д. Андосова,
ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»
Андосова Лариса Дмитриевна – е-mail: [email protected]
При заболеваниях шейки матки, обусловленных папилломавирусной инфекцией, отмечены повышение значений интерферонов альфа и гамма на репродуктивной стадии папилломавирусной
инфекции «Е7-» и снижение значений на стадии интегративной формы инфекции «Е7+». При прогрессии неопластического процесса наблюдается снижение концентрации ИЛ 18. На конечных
этапах опухолевой прогрессии – «HSIL Е7+» и рак шейки матки «Е7+» – имеет место повышение
цитокинов ИЛ 10, TGF1, что сопровождается формированием локальной иммуносупрессивной
среды.
Ключевые слова: папилломавирусная инфекция, иммунитет, шейка матки.
In diseases of the cervix caused by HPV infection, have increased values and gamma interferon alpha and
gamma at reproductive stage of human papillomavirus infection «E7-» and the decrease in the values at
the stage of integrative forms of infection «E7+». With the progression of the neoplastic process, the
decrease of the concentration of IL 18. In the final stages of tumor progression – «HSIL E7+» and cervical
cancer «E7+» increase of cytokines IL 10, TGF1 that is accompanied by the formation of local
immunosuppressive environment.
Key words: human papilloma virus infection, immunity, cervix uteri.
В
ысокая распространенность урогенитальной папилломавирусной инфекции (ПВИ), доброкачественных и
злокачественных новообразований половых органов представляют на сегодняшний день серьезную медикосоциальную проблему [1, 2].
В настоящее время имеется достаточно данных, подтверждающих причинную связь между папилломавирусной
инфекцией и предраковыми заболеваниями шейки матки
[3, 4]. Практически все дисплазии содержат вирус папилло-
66
мы человека (ВПЧ) либо в виде инфекционных вирионов,
либо в виде эписомальной или интегративной ДНК [5].
Хроническая папилломавирусная инфекция, обусловленная
типами высокого канцерогенного риска, интегративная стадия, при которой ДНК вируса встраивается в геном инфицированных клеток, является необходимой частью для создания предопухолевого и злокачественного фонотипа [6].
Однако, считая вирус папилломы человека главным фактором риска предрака и рака шейки матки, нельзя не учиты-
№ 6 (30) ноябрь 2013 МЕДИЦИНСКИЙ А ЛЬМАНАХ
Гинеколо г и я
вать другие возможные влияния. Развитие заболеваний на
фоне вирусной инфекции во многом определяется состоянием иммунной реактивности организма, в первую очередь,
локальной защиты репродуктивного тракта женщины [7, 8].
Цель исследования: определить уровень цитокинов,
интерферонов в цервикальной слизи для оценки роли факторов местного иммунитета в манифестации патологических
процессов шейки матки, ассоциированных с вирусами
папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ
ВКР).
Материалы и методы
Для реализации поставленной цели изучали иммунологические показатели цервикальной слизи у 280 женщин (средний возраст 32±2,56 года), у которых предварительно методом полимеразной цепной реакции в режиме реального
времени (ПЦР-РВ) выявили ВПЧ ВКР. Пациентки были разделены на группы по апостериорным критериям: 1-я группа – 20
практически здоровых женщин, с отрицательным результатом ВПЧ-теста, n=20; 2-я группа – латентная форма ПВИ,
онкобелок Е7 отрицательный результат «ВПЧ+ Е7-», n=40;
3-я группа – латентная форма ПВИ, онкобелок Е7 положительный результат «ВПЧ+ Е7+», n=40; 4-я группа – низкая
степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения
(LSIL), онкобелок Е7 отрицательный результат «LSIL Е7-»,
n=40; 5-я группа – низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (LSIL), онкобелок Е7 положительный результат «LSIL Е7+», n=40; 6-я группа – высокая степень
плоскоклеточного интраэпителиального поражения (HSIL),
онкобелок Е7 отрицательный результат «HSIL Е7-», n=20; 7-я
группа – высокая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения (HSIL), онкобелок Е7 положительный
результат «HSIL Е7+», n=40; 8-я группа – рак шейки матки
«РШМ Е7+», n=40. Изучение профиля экспрессии цитокинов
было направлено на выявление иммунологических особенностей репродуктивной «Е7-» и интегративной «Е7+» стадий
папилломавирусной инфекции.
Материалом для исследования методом ПЦР-РВ служили
образцы эпителия шейки матки, забранные с использованием одноразовых универсальных зондов в транспортную
среду торговой марки «Ампли Сенс» для материала из урогенитального тракта женщин. Материал исследовали с
использованием анализатора «iQ5» Cycler («Bio-RAD», США)
комплекта тест-ситем ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии»
Роспотребнадзора. ВПЧ-скрининг осуществлялся с применением набора реагентов для выявления ДНК ВПЧ ВКР 16, 18,
31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 60, 70 типов «Ампли Сенс
ВПЧ ВКР скрин-EPh». Определение онкобелка Е7 ВПЧ 16 и 18
типов проводилось с применением набора реагентов для
иммуноферментного выявления – «Е7-ВПЧ-16/18-Диагност»
производства ОАО «Биомед» им. И.И. Мечникова, Россия,
регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07581 от 24
мая 2010 года. Количественное исследование цитокинов ИЛ
18, ИЛ 10 проводилось иммуноферментным методом, с
использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Россия),
определение трансформирующего фактора роста бета-1
(TGF1) c использованием набора компании DRG (DRGELISATGF1, Германия). Количественное определение интерферонов проводилось иммуноферментными наборами Bender
Med Systems (США). В наборах для измерения уровня цитокинов и интерферонов применялся твердофазный иммуноферментный метод с использованием прибора «Expert+»
(Австрия). Полученные результаты были обработаны обще-
ТАБЛИЦА 1.
Содержание цитокинов у ВПЧ-позитивных женщин в зависимости от стадии папилломавирусной инфекции
Показатели
ИФН
Контрольная
М±
1-я группа
1,85±1,24
ВПЧ+ Е7М±
2-я группа
ВПЧ+ Е7+
М±
3-я группа
LSIL E7М±
4-я группа
LSIL E7+
М±
5-я группа
HSIL E7М±
6-я группа
HSIL E7+
М±
7-я группа
Рак шейки матки
М±
8-я группа
31,24±15,94
р2,1=0,000026
37,98±17,80
р3,1=0,000032
р3,2=0,014
29,26±12,20
р4,1=0,000020
р4,3=0,004
16,00±6,47
р5,1=0,000019
р5,2=0,000022
р5,3=0,000008
р5,4=0,000010
10,35±6,17
р6,1=0,00996
р6,2=0,000008
р6,3=0,000017
р6,4=0,000022
р6,5=0,03844
4,58±6,10
р7,2=0,000017
р7,3=0,00020
р7,4=0,00008
р7,5=0,00010
р7,6=0,03434
3,24±3,57
р8,2=0,000020
р8,3=0,000026
р8,4=0,000017
р8,5=0,000024
р8,6=0,02485
107,25±117,54
р6,1=0,0360
р6,2=0,00037
р6,3=0,000020
р6,4=0,00012
39,80±61,99
р7,2=0,000008
р7,3=0,000020
р7,4=0,000017
р7,5=0,0011
25,75±48,67
р8,2=0,000017
р8,3=0,000026
р8,4=0,000020
р8,5=0,00050
р8,6=0,04839
ИФН
14,25±10,57
240,30±167,34
р2,1=0,000020
284,05±215,16
р3,1=0,000032
255,25±161,09
р4,1=0,000026
162,58±142,17
р5,1=0,00019
р5,2=0,02461
р5,3=0,00251
р5,4=0,00202
ИЛ 18
54,90±63,79
63,93±50,79
38,75±38,15
р3,2=0,0433
52,48±56,96
14,53±15,01
р5,1=0,0004
р5,2=0,00003
р5,4=0,0007
17,20±12,58
р6,1=0,0008
р6,2=0,000035
р6,4=0,0014
20,33±22,34
р7,1=0,0018
р7,2=0,00007
р7,4=0,0023
12,78±14,72
р8,1=0,00025
р8,2=0,00003
р8,4=0,0005
62,60±35,14
166,78±80,83
р5,1=0,000020
р5,2=0,000020
р5,3=0,000031
р5,4=0,000026
118,60±56,78
р6,1=0,0029
р6,2=0,0155
р6,3=0,0128
р6,4=0,0328
р6,5=0,031
255,20±146,70
р7,1=0,000026
р7,2=0,000020
р7,3=0,000008
р7,4=0,000017
р7,5=0,000084
р7,6=0,000022
280,50±147,44
р8,1=0,000032
р8,2=0,000026
р8,3=0,000017
р8,4=0,000020
р8,5=0,000023
р8,6=0,000008
223,38±145,23
508,50±316,90
р6,1=0,0056
р6,2=0,0049
р6,3=0,0032
р6,4=0,0075
р6,5=0,0149
1884,60±846,50
р7,1=0,000026
р7,2=0,000020
р7,3=0,000008
р7,4=0,00002
р7,5=0,00002
р7,6=0,000009
1899,38±835,29
р8,1=0,000032
р8,2=0,00003
р8,3=0,000020
р8,4=0,000020
р8,5=0,000008
р8,6=0,000022
ИЛ 10
TGF
38,10±25,84
95,15±119,91
52,08±39,43
102,93±67,07
62,93±35,70
214,53±156,99
133,38±105,64
67
№ 6 (30) ноябрь 2013 МЕДИЦИНСКИЙ А ЛЬМАНАХ
Гин е к о л о г и я
принятыми методами вариационной статистики, с использованием пакета статистических программ Statistica for
Windows 6.0. При сравнительном анализе рядов переменных для случаев множественного сравнения использовали
критерий Ньюмена–Кейлса, во всех случаях критическое
значение уровня достоверности принималось р<0,05.
При анализе иммунологических показателей выявлены
повышенные концентрации интерферонов в группах женщин с латентной формой ПВИ «ВПЧ+ Е7-», «ВПЧ+ Е7+», с
легкими дисплазиями «LSIL Е7-» по сравнению с группой
контроля. При сравнении групп с латентной формой ПВИ
между собой по показателям интерферонов отмечается
незначительное повышение в третьей группе ИФН-
(р=0,014). При сравнении группы с легкими дисплазиями
«LSIL Е7-» с группой «ВПЧ+ Е7-» различия не выявлены, с
группой «ВПЧ+ Е7+» отмечается снижение концентрации
ИФН- (р=0,004). В группе женщин с легкими дисплазиями
«LSIL Е7+» наблюдается повышение концентрации интерферонов по сравнению с группой контроля (ИФН- р=0,00002,
ИФН- р=0,00019), снижение значений во всех описанных
группах сравнения. Анализ в категориях тяжелых дисплазий
«HSIL Е7-», «HSIL Е7+» и РШМ показал достоверное снижение интерферонов по сравнению с группами с латентной
формой ПВИ и с легкими дисплазиями. В категории «HSIL
Е7-» значения различны с группой контроля в сторону повышения (ИФН- р=0,0100, ИФН- р=0,0360). Количество
интерферонов в группах «HSIL Е7+» и РШМ не отличается от
значений в группе контроля и не изменено при сравнении
данных групп между собой. При сопоставлении концентраций интерферонов в группах с латентными формами ПВИ
(2-я и 3-я группы), с легкими дисплазиями и с группой тяжелых дисплазий «HSIL Е7-» имеет место снижение значений.
Анализ содержания цитокинов показал, что концентрации
ИЛ 18 в группах женщин с латентной формой ПВИ «ВПЧ+
Е7-», «ВПЧ+ Е7+», с дисплазиями легкой степени «LSIL Е7-»
не отличаются от группы контроля (р>0,05). Имеет место
достоверное отличие содержания ИЛ 18 в группе «ВПЧ+
Е7+» в сторону уменьшения по сравнению с группой «ВПЧ+
Е7-» (р=0,0433). В группе легких дисплазий «LSIL Е7+» выявлено снижение концентраций цитокина ИЛ 18 по сравнению
с группами контроля (р=0,0004), латентной формы ПВИ
«ВПЧ+ Е7-» (р=0,000030) и легких дисплазий «LSIL Е7-»
(р=0,0007), с группой «ВПЧ+ Е7+» отличия недостоверны
(р>0,05). В группе тяжелых дисплазий «HSIL Е7+» ИЛ 18 снижен по сравнению с группой контроля (р=0,0018) и с группами с «ВПЧ+ Е7-» (р=0,00007) «LSIL Е7-» (р=0,0023), нет
отличий с группами «ВПЧ+ Е7+», «LSIL Е7+», «HSIL Е7-»
(р>0,05). У женщин с РШМ снижение концентрации ИЛ 18
также наблюдается по сравнению с группами контроля
(р=0,00025), «ВПЧ+ Е7-» (0,00003), «LSIL Е7-» (0,0005), в
группах «ВПЧ+ Е7+», «LSIL Е7+», тяжелых дисплазий «HSIL
Е7-», «HSIL Е7+» отличия не достоверны или их нет.
Супрессирующий цитокин ИЛ 10 обнаружил следующую тенденцию: в группах с латентной формой ПВИ «ВПЧ+ Е7-»,
«ВПЧ+ Е7+», легких дисплазий «LSIL Е7-» отличия не выявлены; в группе «LSIL Е7+» наблюдаются достоверные отличия с
группой контроля (р=0,000020) и группами сравнения в
сторону повышения, та же тенденция имеет быть в группе
тяжелых дисплазий «HSIL Е7-», «HSIL Е7+» и РШМ.
Трансформирующий фактор роста 1 не выявил различий в
содержании по категориям «ВПЧ+ Е7-», «ВПЧ+ Е7+», «LSIL
Е7-», «LSIL Е7+», повышение концентраций отмечено в группе «HSIL Е7-» по сравнению с группой контроля (р=0,0056) и
в группах сравнения, то же в группах «HSIL Е7+» и РШМ.
Обращает на себя внимание отсутствие отличий в группах
тяжелых дисплазий «HSIL Е7+» и РШМ по анализируемым
иммунологическим показателям (p>0,05).
Для оценки возможности диагностики нарушений в системе местного иммунитета было использовано отношение
уровня экспрессии интерферонов, цитокина ИЛ 18 к супрессирующим факторам – ИЛ 10, TGF 1. Установлено, что соотношение уровней выработки ИФН- /ИЛ 10, ИФН-/TGF 1,
ИФН-/ИЛ 10, ИФН-/TGF 1, ИЛ 18/ИЛ 10, ИЛ 18/TGF 1 в
слизи цервикального канала пациенток с легкими «LSIL Е7+»
и тяжелыми дисплазиями «HSIL Е7+», РШМ было снижено.
При этом наиболее заметное снижение было в группах
больных с тяжелыми дисплазиями «HSIL Е7+» и РШМ.
Полученные результаты свидетельствуют об особенностях цитокинового профиля у женщин с ВПЧассоциированными заболеваниями шейки матки в зависимости от стадии папилломавирусной инфекции. Отмечены
повышение значений интерферонов альфа и гамма на
репродуктивной стадии папилломавирусной инфекции
«Е7-» и снижение значений на стадии интегративной формы
инфекции «Е7+». При прогрессии неопластического процесса наблюдается снижение концентрации ИЛ 18. На конечных
этапах опухолевой прогрессии – «HSIL Е7+» и рак шейки
матки «Е7+» – имеет место повышение цитокинов ИЛ 10, TGF
1, что сопровождается формированием локальной иммуносупрессивной среды.
Выводы
Таким образом, продуктивная форма папилломавирусной инфекции характеризуется индукцией выработки интерферонов альфа и гамма на стадиях латентной формы папилломавирусной инфекции («ВПЧ+ Е7-») и эпителиальных
дисплазий низкой степени («LSIL Е7-»). Интегративная
форма папилломавирусной инфекции («LSIL Е7+», «HSIL
Е7+», «РШМ Е7+») обнаруживает снижение концентрации
интерферонов альфа и гамма, интерлейкина 18, а также
локальную иммуносупрессию – повышение значений интер-
ТАБЛИЦА 2.
Отношение экспрессии цитокинов к супрессирующим факторам
Исследуемые показатели
ИФН-/ИЛ 10
ИФН-/TGF 
ИФН-/ИЛ 10
ИФН-/TGF 
ИЛ 18/ИЛ 10
ИЛ 18/TGF 
Контрольная
1-я группа
0,0486
0,0194
0,374
0,1498
1,4409
0,577
ВПЧ+ Е72-я группа
0,5999
0,3035
4,6145
2,3347
1,2276
0,6211
ВПЧ+ Е7+
3-я группа
0,6035
0,177
4,5141
1,3241
0,6158
0,1806
68
LSIL E74-я группа
0,4675
0,2194
4,0775
1,9138
0,8383
0,3934
LSIL E7+
5-я группа
0,0959
0,0716
0,9748
0,7278
0,0871
0,065
HSIL E76-я группа
0,0873
0,0204
0,9043
0,2109
0,145
0,0338
HSIL E7+
7-я группа
0,0179
0,0024
0,156
0,0211
0,0796
0,0108
Рак шейки матки
8-я группа
0,0115
0,0017
0,0918
0,0136
0,0455
0,0067
№ 6 (30) ноябрь 2013 МЕДИЦИНСКИЙ А ЛЬМАНАХ
Гинеколо г и я
лейкина 10 и трансформирующего фактора роста бета.
Увеличение локальной экспрессии интерлейкина 10 и трансформирующего фактора роста бета на фоне снижения показателей цитокинов при тяжелой дисплазии и раке шейки
матки и в соответствии с формой папилломавирусной
инфекции может служить дополнительными диагностическими и прогностическими критериями тяжести плоскоклеточного интраэпителиального поражения шейки матки.
ЛИТЕРАТУРА
1.Прилепская В.Н., Роговская С.И. Новые технологии профилактики рака
шейки матки. В кн.: Патология шейки матки и генитальной инфекции. М.:
МЕДпресс-информ, 2008. С. 8-14.
69
2. Семенов Д.М., Занько С.Н., Дмитраченко Т.И. Папилломавирусная
инфекция. СПб.: Диалект, 2008. 84 с.
3. Бебнева Т.Н., Прилепская В.Н. Профилактика рака шейки матки: скрининг (обзор литературы). Научно-практический медицинский журнал
«Доктор.Ру». 2009. № 6 (50). С. 14-15.
4. Папилломавирусная инфекция / под ред. В.М. Говоруна. М.: НПФ Литех,
2009. С. 43-45.
5. Питер Л. Стерн, Китченера Генри С. Вакцины для профилактики рака
шейки матки: пер. с англ. / под общ. ред. акад. РАМН Г.Т. Сухих, проф.,
В.Н. Прилепской. М.: МЕДпресс-информ, 2009. С. 49-58.
6. Киселев В.И., Муйжнек Е.Л. Молекулярные механизмы развития дисплазии шейки матки: новые знания – новые возможности. М. 2011. 20 с.
7. Клиническая онкогинекология: пер. с англ. / под ред. Е.Г.Новиковой.
М.: Рид Элсивер, 2011. Т. 1. С. 22-73.
8. Сухих Г.Т., Прилепская В.Н. Профилактика рака шейки матки. М.:
МЕДпресс-информ, 2012. С. 116-139.
№ 6 (30) ноябрь 2013 МЕДИЦИНСКИЙ А ЛЬМАНАХ