фармакологическое обоснование применения кишечных

1
На правах рукописи
АМБУЛОВА НАТАЛЬЯ ГРИГОРЬЕВНА
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ
КИШЕЧНЫХ СТАБИЛИЗАТОРОВ ГИДРОГЕМОЛА И
РОДАФЕНА В ПТИЦЕВОДСТВЕ
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидат биологических наук
Краснодар - 2013
2
Работа выполнена на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии
факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ»
Научный руководитель:
доктор биологических наук, доцент кафедры
микробиологии, эпизоотологии и
вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ»
Пашник Татьяна Ивановна -
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор
кафедры биотехнологии, биохимии и
биофизики ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ»
Кощаев Андрей Георгеевич
кандидат ветеринарных наук, старший
научный сотрудник лаборатории
фармакологии ГНУ Краснодарский
научно-исследовательский ветеринарный
институт РАСХН
Тяпкина Евгения Викторовна
Ведущая организация:
ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская
государственная академия
ветеринарной медицины»
Защита состоится «22» ноября 2013 года в «10 00» часов на заседании
диссертационного совета Д - 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский
государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского
государственного аграрного университета.
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ»
http://www.kubsau.ru и официальном сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru.
Автореферат разослан «___»______________ 2013 года
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор ветеринарных наук
И.А. Родин
3
1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Развитие птицеводства основывается на максимальном
обеспечении населения страны пищевым яйцом и мясом птицы отечественного
производства, что необходимо для решения проблемы продовольственной
безопасности страны (Барановский А.Ю., 2000; Василюк А.В. и др., 2001;
Данилевская Н.В., 2007; Малик Н.И., 2002; Borriello S.P., 1986).
В условиях промышленного ведения птицеводства содержание, кормление и
другие факторы технологических приемов не соответствуют биологическим
потребностям птицы, что негативно отражается на их физиологическом состоянии.
Воздействие неблагоприятных факторов часто отрицательно влияет на иммунитет
птицы, что приводит, в первую очередь, к снижению продуктивности и ослаблению
устойчивости птицы к различным болезням. Одним из важных факторов снижения
устойчивости организма и продуктивности птицы является бессистемное применение
антибиотиков и химиотерапевтических средств, что приводит к нарушению
нормальной микрофлоры организма. В результате чего, участились случаи
заболевания органов пищеварения и накопление остаточных количеств лекарственных
веществ в мясе и продуктах птицеводства (Бабина М.П., 1998; Барановский А.Ю.,
2000; Каноев Б., 2003). Актуальной задачей ветеринарии является не только
разработка новых препаратов для профилактики заболеваний, но также и разработка
способов повышения их эффективности (Малик Н.И., 2002).
По классификации, предложенной кафедрой фармакологии и токсикологии
СПбГАВМ, кишечные стабилизаторы включают пробиотики и органические кислоты.
Эти препараты являются наиболее безвредными: нормализуют состав
микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте, повышают иммунитет, сохранность
поголовья, обладают ростостимулирующим эффектом. (Воробьев А.В. и др., 2001;
Зацепилова Т.А., 1999; Каблучеева Т.И., 2004; Красочко П.А. и др.,2008; Панин А.Н.,
1999; Тараканов Б.В., 1999; Хисамов Р.Р., 2001; Collins M.D., 1999). Но пробиотики и
добавки с пребиотическими эффектом не следует использовать бесконтрольно, так как
разный состав препарата, дозировка, длительность применения, возрастной период
птицы по-разному определяют фармакодинамику и соответствующее влияние
препарата на организм. В связи с этим, изучение фармакологических свойств новых
отечественных препаратов гидрогемола и родафена является актуальным.
Цель работы - разработка фармакологического обоснования
использования гидрогемола и родафена в птицеводстве.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
• дать физико-химическую и токсикологическую оценку гидрогемола и
родафена;
• изучить фармакодинамику гидрогемола и родафена, их влияние на
микробиоценоз пищеварительного тракта птицы, иммунитет, обмен
веществ, продуктивность; провести производственные испытания;
• изучить комплексное применение гидрогемола и родафена на птице;
• разработать схемы применения препаратов,
• разработать нормативную документацию на препараты.
4
Научная новизна. Научно обоснованы оптимальные схемы применения
гидрогемола и родафена на цыплятах-бройлерах и курах-несушках, обеспечивающие
получение максимального фармакологического эффекта, улучшения продуктивного
здоровья птицы, рентабельности производства.
Практическая
значимость.
Обосновано
применение
добавки
с
пребиотическим эффектом гидрогемол и пробиотика родафен на цыплятах-бройлерах
и курах-несушках для нормализации кишечной микрофлоры, увеличения активности
ферментов кишечника, повышения иммунитета, продуктивности, сохранности
поголовья. По результатам проведенных исследований была разработана и утверждена
инструкция по применению пробиотической кормовой добавки «Родафен» от
12.09.2012 года, утвержденная заместителем Руководителя Россельхознадзора Е.А.
Непоклоновым, технические условия ТУ 9291-006-39988364-2012 и выдано
свидетельство о государственной регистрации (учетная серия 56-2-25.12-5418,
регистрационный номер № ПВР-2-25.12/02863). На применение кормовой добавки
гидрогемол разработана инструкция по применению, утвержденная заместителем
руководителя управления Россельхознадзора по Краснодарскому краю и республике
Адыгея О.В. Сизоновым от 21 января 2012 года; подана заявка на патент «Способ
кормления птицы».
Положения, выносимые на защиту:
• результаты изучения состава и токсикологических свойств препаратов;
• фармакодинамика гидрогемола и родафена;
• применение на цыплятах-бройлерах и курах-несушках;
• обоснование совместной дачи гидрогемола и родафена;
• научно-обоснованные
предложения по внедрению в птицеводство
оптимальных профилактических доз, схем применения гидрогемола и
родафена.
Апробация результатов исследований. Материалы диссертации представлены,
опубликованы и одобрены на VI Международной научно-практической конференции
«Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения
продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных» (Ставрополь,
2009); на Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов,
аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского
хозяйства Российской Федерации по направлению «Ветеринарные науки» в трех
этапах с I местом в первых двух (Краснодар, Ростов-на-Дону, Ставрополь, 2010); на
Международной научно-практической конференции посвященной 65-летию
Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института «Актуальные
проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); на Международной
научно-практической конференции «Современные проблемы животноводства и
ветеринарии: состояние и пути решения» (Краснодар, 2013); на ежегодных научных
конференциях преподавателей факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе
6 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК, в которых отражены
основные результаты экспериментальных исследований.
Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 148
страницах компьютерного текста, включают введение, обзор литературы, собственные
исследования,
обсуждение,
выводы,
практические
предложения,
список
5
использованной литературы (276 источников, в т.ч. 101 зарубежных авторов). Работа
иллюстрирована 40 таблицами, 14 рисунками, имеет приложения.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнена в период с 2006 по 2013 год на кафедре микробиологии,
эпизоотологии и вирусологии факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ в
соответствии с плановыми тематиками НИР.
Научно-производственные опыты и апробацию результатов научных
исследований на птице проводили в лабораториях терапии, микробиологии и микологии,
фармакологии Краснодарского научно исследовательского ветеринарного института РАСХН; в
Межрайонной ветеринарной лаборатории г. Новороссийска; на птицефабрике «Родина»
Кореновского района, на ЗАО п/ф «Щербиновская»; на ЗАО ПТФ «Новороссийск», на ООО
«Птицефабрика Натухаевская», на ООО «Раевская птицефабрика» г. Новороссийска.
В экспериментах и научно-производственных опытах использовано 700
цыплят-бройлеров кросса «Росс-308», 500 кур-несушек породы «Ломанн Браун», 25
крыс-самцов, 115 белых мышей, 28 кроликов, 10 морских свинок. Для проведения
исследований подвергнуто изучению после декапитации в опытах 460 голов. Объем
лабораторных исследований составил 2985 проб.
При постановке экспериментов были использованы токсикологические,
микробиологические,
фармакологические,
биохимические,
морфологические,
иммунологические, клинические, патологоанатомические, зоотехнические методы
исследования и методы вариационной статистики. Объектами лабораторных
исследований были: кровь, содержимое подвздошной кишки, толстого кишечника, а
также корм и помет. Всего проведено 6 серий опытов.
Микробиологические исследования проводили согласно современных методов
диагностики дисбактериоза толстого отдела кишечника (Иванов В.П., 2002). Подсчет
общего количества микроорганизмов вели по Бриду (1957). Определяли численность
молочнокислых, амилолитических, лактатферментирующих, целлюлозолитических
микроорганизмов, бактерий группы кишечной палочки. Посевы для бактерий делали
из разведений и вносили на среды по 0,1 мл. Для количественного учета
молочнокислых бактерий и их выделения, была использована среда Квасникова Е.И.;
бифидобактерии культивировали на среде бифидум, лактобактерии - на
лактобакагаре, бактероиды гр. B. fragilis - на кровяном анаэробном бактоагаре с
канамицином и желчью; амилолитические микроорганизмы - на среде Хамлина;
лактатферментирующие микроорганизмы - на среде Кистнера; на среде Эндо бактерии группы кишечной палочки. Методом последовательных разведений от 10 -4 до
10-6 определяли титр целлюлозолитических микроорганизмов. Энтерококки - на среде
энтерококкагаре, стафилококки - на желточно-солевом агаре, гемолитические
микроорганизмы - на 5% кровяном агаре, дрожжеподобные грибы - на агаре Сабуро,
клостридии – на среде Вильсона-Блера. (Каблучеева Т.И., 2004) Статистическая
обработка микробиологических данных проводилась по В.С. Асатиани.
ЛЖК определяли на газовом хроматографе «Кристалл – 2000М», оборудованном
кварцевой капиллярной колонкой HPFFAP с внутренним диаметром 0,32 мм,
производство США. Для количественных расчетов содержания компонентов в пробе
6
применялся метод абсолютной калибровки. По методу Уголева А.М. (Уголев А.М.,
1965) на фотоэлектроколориметре при красном светофильтре изучали
амилолитическую активность ферментов в содержимом желудочно-кишечного тракта.
Целлюлозолитическую активность ферментов микроорганизмов определяли в слепых
отростках (Каблучеева Т.И., 2004). Протеолитическую активность - по Херриотту Р.,
Проскурякову М.Т. (1950, 1973).
Морфологические исследования крови включали в себя определение количества:
гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, цветного показателя, скорости оседания
эритроцитов, лимфоцитов, (относительный и абсолютный показатель, Т – и В - клетки),
базофилов, псевдоэозиноилов, сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов. Подсчет
эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов проводился по методикам Фриед и Лукачёвой в
модификации И.Ф. Болотникова с помощью камеры с сеткой Горяева; скорость
оседания эритроцитов - на аппарате Панченкова; выведение лейкоформулы - на
счетчике лабораторном С-5М-стимул плюс (Антипов В.А. и др., 2009; Кассирский
И.А., 1970). Подсчёт лимфоцитов проводился по методике Филипченко (Болотников
И.А., 1979; Леонович В.В., 1953). Биохимические показатели крови: Ca, неорганический Р,
К, Fe, Na, Mg, общий белок, глюкозу, общий билирубин, триглицериды, холестерин, ферменты
АЛТ и AST, мочевую кислоту, щелочную фосфотазу, α- амилазу, липазу, мочевину,
β-липопротеиды, белковые фракции -– определяли на биохимическом анализаторе
OLYMPUS для «invitro» диагностики с автоматической программой расчета (Бугуев
И.П., 2005; Гугушвили Н.Н., 2000). Общий белок и фракции белка –
калориметрическим фотометрическим тестом. Методом электрофореза определяли
белковых фракций сыворотки крови на бумаге по А.М. Горячковскому (1994). Изучали
фагоцитарную активность, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, фагоцитарную
емкость, завершенный фагоцитоз по О.Г. Алексеевой (1966), в качестве тест-культуры
для ОФР использовали золотистый стафилококк- St. aureus 209 р (Грошева Г.А., 1996;
Ковальская Л.А., 1996; Меркулов Г.А., 1969). Фотонефелометрическим методом
проводили определение бактерицидной активности сыворотки крови в модификации
О.В. Смирнова и Т.А. Кузмина. При постановке реакции использовали культуру St.
aureus штамм 209 р (Вершигора А.Е., 1980, Герберт У Дж., 1974, Жуковская Н.А. и др.,
1966). Тубидиметрическим методом в модификации Х.Я. Грант определяли
лизоцимную активность. В качестве тест-культуры использовали ацетоновый
порошок M. lysodeicticus (Гугушвили Н.Н., 2000) . Дифференцировку Т и В –
лимфоцитов проводили по методике Есакова Н.Р (Бернет Ф.М., 1971; Гурвич А.Е.,
1978).
Для гистологических исследований селезенку, поджелудочную железу и тонкий
отдел кишечника фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина.
Проводку материала осуществляли общепринятыми в патоморфологии методами (Г.А.
Меркулов, 1969). Заливку материала осуществляли парафином. При помощи санного
микротома МС-2 готовили серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм, которые
окрашивали гематоксилином и эозином (Меркулов Г.А., 1969).
Токсикологические исследования гидрогемола изучали на молодых белых крысах.
В опыте были проведены исследования: состава микрофлоры ЖКТ, гематологические,
биохимические исследования крови, иммунный статус лабораторных крыс,
поедаемость и переносимость препарата. Токсикологические исследования
пробиотика родафен проведены на лабораторных животных (белых мышах, крысах,
7
кроликах, морских свинках) на определение: токсичности, острой токсичности,
хронической токсичности, раздражающего действия, микрофлора кишечника. Данные
показатели определяли согласно методическим рекомендациям по изучению
общетоксического действия фармакологических средств, методическим указаниям по
токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных
болезней животных; ГОСТу Р 54063-2010 «Средства лекарственные для животных.
Методы определения безвредности»; Методическим указанием по изучению
общетоксического действия фармакологических средств.
Результаты
всех
экспериментальных
исследований
обрабатывались
биометрическими методами вариационной статистики (Ойвин И.А., 1960) и
использовалась программа компьютера по программе Excel-7,0 из пакета Microsoft
offise – 2000 c определением критерия достоверности. Схема опыта в таблице 1.
Токсико-фармакологическое влияние гидрогемола на организм молодых белых
крыс изучали в опыте 1 на базе лаборатории Краснодарского НИВИ. Был изучен:
состав микрофлоры ЖКТ, гематологический, биохимический состав крови, иммунный
статус лабораторных крыс, поедаемость и переносимость препарата. (Таблица 1)
Токсико-фармакологическое влияние пробиотика родафен на организм лабораторных
животных изучали в опыте 2 на базе Межрайонной ветеринарной лаборатории г.
Новороссийска. Испытание препарата на токсичность в опыте 2.1 проводили на
здоровых лабораторных белых мышах. Вели учет: клинического состояния и
выживаемости животных. Острую токсичность пробиотика определяли в опыте 2.2 на
крольчихах. Учитывали: клиническое состояние (термометрию), динамику массы тела
и выживаемость животных. Определение хронической токсичности в опыте 2.3
препарата родафен проводили в течение 3-х месяцев на белых мышах, морских
свинках, кроликах, беспородных крысах-самцах. В период наблюдения учитывали:
прирост
массы
тела,
гематологические
и
биохимические
показатели,
патологоанатомические изменения и массу внутренних органов. Кожно-резорбтивное
действие пробиотика изучали в опыте 2.4 на белых кроликах-самцах. Учитывали
реакцию по наличию: покраснения, появления кожной складки. Влияние пробиотика
родафен на микробиоциноз кишечника изучали на белых мышах в опыте 2.5.
Определяли популяционный уровень микроорганизмов до и через 5, 10 дней в течение
опыта, и через 3-и дня после окончания скармливания пробиотика.
Действие кормовой добавки гидрогемол изучали в опыте 3 на цыплятах-бройлерах
кросса «Росс-308» на птицефабрике «Родина» Кореновского района Краснодарского
края. Вели учет: сохранности поголовья, продуктивности, показателей естественной
резистентности птицы, состава микроорганизмов тонкого (подвздошная кишка) и
толстого кишечника (слепые отростки).
В опыте 4 на ЗАО ПТФ «Новороссийск» на цыплятах-бройлерах кросса
«Росс-308»
изучали
действие
пробиотика
родафен.
Вели
учет:
токсико-фармокологических исследований, морфологических, биохимических и
иммунологических показателей крови, сохранности поголовья, летучих жирных
кислот в содержимом слепых отростков; микроорганизмов слепых отростков;
целлюлозолитических, амилолитических, протеолитических ферментов содержимого
слепых отростков; массы внутренних органов; живой массы, гистологических.
8
Действие препаратов гидрогемол, родафен и их совместной дачи изучали на
курах-несушках породы «Ломанн Браун» на ЗАО ПТФ «Новороссийск» в опыте 5. (Таблица
1)
Таблица 1 - Схема опытов
Групп
а
Чис
ло
голо
в
Продолж
ительнос
ть
опыта,
дней
Условия кормления
Опыт 1 (белые крысы)
1-О
5
7
ОР + гидрогемол (4,0 мл/кг)
2-О
5
7
ОР + гидрогемол (8,0 мл/кг)
3-К
5
7
ОР (основной рацион)
Опыт № 2 (лабораторные животные)
Опыт № 2.1 (белые мыши)
с1 по
10-О
50
24
ОР + родафен (1-я группа - 0,1 г/10 мл физраствора, 2-я – 0,2 г/10 мл, 3-я – 0,3
г/10 мл, 4-я – 0,4 г/10 мл, 5-я – 0,5 г/ 10 мл, 6-я – 0,6 г/10 мл, 7-я – 0,7 г/10 мл,
8-я – 0,8 г/10 мл, 9-я – 0,9 г/10 мл, 10-я – 1,0 г/10 мл по 0,5 мл на голову в
течение 14-и дней)
11-К
5
24
ОР
Опыт № 2.2 (крольчихи)
1-О
5
10
ОР + родафен (500 мг на голову с водой в объеме 3 мл перед кормлением)
2-О
5
10
ОР + родафен (1000 мг на голову с водой в объеме 3 мл перед кормлением)
3-К
5
10
ОР + (водопроводная вода в объеме 3 мл перед кормлением)
Опыт № 2.3 (лабораторные животные)
1-О
10
62
ОР + родафен (50 мг/кг белым мышам)
2-О
10
62
ОР + родафен (200 мг/кг морским свинкам)
3-О
10
62
ОР + родафен (250 мг/кг кроликам)
4-О
10
62
ОР + родафен (200 мг/кг беспородным крысам-самцам)
5-К
10
62
ОР (белые мыши)
6-К
10
62
ОР (морские свинки)
7-К
10
62
ОР (кролики)
8-К
10
62
ОР (беспородные крысы-самцы)
Опыт № 2.4 (белые кролики самцы)
1-О
1
3
Кожная проба пробиотика родафена (0,01 г/мл)
9
2-О
1
3
Кожная проба пробиотика родафена (0,1 г/мл)
3-О
1
3
Кожная проба пробиотика родафена (1,0 г/мл)
Опыт № 2.5 (белые мыши)
1-О
50
13
ОР + родафен (0,1 г на 100 г корма с 1-го по 10-й день)
Опыт 3 (цыплята-бройлеры)
1-К
100
1-35
ОР
2-О
100
1-35
ОР + 80%-я молочная кислота (0,125 мл на голову с 1-го по 10-й день)
3-О
100
1-35
ОР + гидрогемол (4 мл на голову с 1-го по 10-й день)
Опыт № 4 (цыплята-бройлеры)
1-К
100
1-39
ОР
2-О
100
1-39
ОР + родафен (1 г на 2000 голов с 1-4-е сутки и 2 г с 21 по 24-е сутки)
Опыт № 5 (куры-несушки)
1-К
100
100-337
ОР
2-О
100
100-337
ОР + бифилакт (10 мл на голову)
3-О
100
100-337
ОР + гидрогемол (по 10 мл на голову с интервалом в 2 недели )
4-О
100
100-337
ОР + гидрогемол+родафен (10 мл гидрогемола + 2 г на 2000 голов с 1-4-е сутки
и 4 г с 21 по 24-е сутки)
5-О
100
100-337
ОР + родафен (4 г на 2000 голов со 100 дней в течение 3 недель)
Опыт № 6 (цыплята-бройлеры)
1-К
100
1-35
ОР
2-О
100
1-35
ОР + гидрогемол+родафен (4 мл гидрогемола в течение 10 дней + 1 г на 2000
голов с 1-4-е сутки и 2 г с 21 по 24-е сутки)
Вели учет: состава микрофлоры толстого кишечника, морфологических,
иммунологических и биохимических показателей крови, сохранности поголовья;
продуктивности (яйценоскости), периода продуктивности, качества яйца (количество
дефективных яиц; толщину скорлупы, массу, длину и ширину яйца; массу белка и
желтка).
В опыте 6 на птицефабрике «Родина» Кореновского района на
цыплятах-бройлерах кросса «Росс-308» изучали совместную дачу гидрогемола и
родафена. Учитывали: сохранность, продуктивность поголовья, массу внутренних
органов, морфологические, иммунологические и биохимические показатели крови,
бактериологические исследования содержимого тонкого кишечника и слепых
отростков.
2.2 Физико-химическая характеристика гидрогемола и родафена
10
Для коррекции микрофлоры в желудочно-кишечном тракте был взят препарат
гидрогемол. Гидрогемол является гидролизатом крови убойных животных, получен
путем кислотного гидролиза, и представляет собой прозрачную жидкость
темно-коричневого цвета, кисловато-вяжущего вкуса со специфическим запахом, рН
3,5-4,0. Содержит свободные заменимые и незаменимые аминокислоты,
микроэлементы, молочную, янтарную и бензойные кислоты. В состав входят
аминокислоты: аспарагиновая, глутаминовая, серин, глицин, гистидин, треонин,
аланин, пролин, аргинин, тирозин, метионин, валин, изолейцин, лейцин, фенилаланин,
лизин; минералы: кальций, магний, железо, цинк, медь.
Родафен - порошок белого цвета, без запаха, сладкого вкуса, растворим в воде, 7
Т, не содержит примесей. Препарат содержит штаммы Bacillus subtilis ВКПМ 2574 и
Bacillus licheniformis ВКПМ Б-020 ((КОЕ 1*109).
2.3 Токсикологическая оценка применения гидрогемола и родафена
В соответствии с 1-й задачей в опыте 1 установлено, что применение
гидрогемола способствует угнетению условно-патогенных бактерий (кишечной
палочки, стафило- и энтерококков), а также грибов рода кандида. (табл. 2).
Стимулирует рост лактококков и лактобактерий в 1-й группе на 23,8 % и 13,5 % по
отношению к 3-й группе.
Таблица 2 - Влияние гидрогемола на состав микрофлоры ЖКТ мышей
№ группы
Вид бактерий / количество Lg КОЕ в 1 г кала
Escherichi Staphyloc Enterococc Lactobacill
a coli
occus sp.
us sp.
us sp.
Lactococc
us sp.
Candida
1-я,
гидр.4,0
мл/кг
5,4*±0,6
5,0*±0,12
4,7*±0,38
10,6±0,4
9,8*±0,2
6,5*±0,1
2
2-я, гидр.
8,0 мл/кг
3,9*±0,21
4,4*±0,22
4,3*±0,09
10,5±0,3
9,4*±0,35
7,1*±0,1
3-я,
контроль
7,7±0,17
5,8±0,25
6,7±0,17
9,3±0,53
7,9±0,24
8,9±0,11
*-p≤0,05 по отношению к контролю здесь и далее
В опыте 2 у мышей не наблюдалось признаков токсикоза; пробиотик не обладает
острой и хронической токсичностью. У кроликов живая масса после применения
родафена на 20 г больше. В опыте 2.3 вес крыс опытной группы увеличивался на 5,24
г. Пробиотик вызывал увеличение массы тела животных без нарушения развития
внутренних органов (таблица 3).
Таблица 3 - Масса внутренних органов крыс-самцов при изучении хронической
токсичности
Группы
животн
Вес
Вес
Вес внутренних органов(г)
животных животных Сердце Легкие Печен Почк
Селезенка
11
ых
Контрол
ьная
Опытна
я
до опыта,
г
83,26±
2,91
88,44±
1,61
в конце
опыта, г
98,8±
1,17
109,22±
1,41*
0,68±
0,1
0,54±
0,07
0,9±
0,13
1,04±
0,19
ь
и
3,9±
0,35
3,94±
0,37
1,18±
0,24
1,0±
0,17
0,4±
0,08
0,36±
0,12
Пробиотик вызывал увеличение массы тела животных без нарушения развития
внутренних органов. На протяжении всего срока эксперимента гибель животных не
наблюдалась. Раздражающего действия на коже кроликов не отмечено
В опыте 2.5. в кишечнике мышей увеличивалось количество бифидобактерий,
энтерококков; снижалось - лактобактерий, с последующим их увеличением (таблица
4).
Таблица 4 - Влияние пробиотика родафен на микрофлору кишечника мышей
Наименование
микроорганизмов
Bifidobacterium sp.
Lactobacillus sp.
Enterococcus sp.
Escherichia coli
Популяционный уровень микроорганизмов, КОЕ/г
до
введения
на 5-й день
введения
на 10-й день
введения
на 3-й день после
окончания
введения
1,65×109
2,7×1011
4,1×109
5,3×1011
±0,35
±0,35*
±0,55**
±0,42***
4,4×108
4,1×109
3,7×107
5,3×109
±0,9
±0,5
±0,25
±0,6
3,9×108
3×109
4,1×108
5,9×109
±0,2
±0,3*
±1,2
±0,25***
1,7×107
2,7×107
4,1×105
5,1×107
±0,3
±0,5
±0,4**
±0,49***
2.4 Фармакодинамика гидрогемола и родафена
2.4.1 Состав микроорганизмов пищеварительной системы цыплят-бройлеров и
кур-несушек после применения гидрогемола и родафена
В опыте 3 у цыплят гидрогемол повышал общее количество микроорганизмов в
тонком отделе кишечника в 16 дней, что на 732,9 млрд/г больше, чем в контрольной
группе, на 305,7 млрд/г больше, чем в группе с молочной кислотой. С возрастом в
тонком отделе кишечника цыплят всех групп наблюдалась тенденция к уменьшению
общего количества микроорганизмов. Гидрогемол способствует увеличению
количества молочнокислых бактерий в 35 дней на 53437,2 и 53107,5 млн/г;
лактатферментирующих и бифидобактерий в 16 и 35 дней; уменьшению количества
бактерий группы кишечной палочки в возрастной динамике. (Таблица 5)
12
Таблица 5 - Микрофлора тонкого и толстого отдела кишечника цыплят в 7, 16 и 35
дней при даче гидрогемола и молочной кислоты
№
груп-п
ы
Общее
количество
микроорганизмов,
млрд/г
Молочно-кис
лые
бактерии,
млн/г
Лактатферме
н-тирующие
бактерии,
млн/г
Бифидобакте
рии, млн/г
Бактерии
группы E.coli,
млн/г
Микрофлора тонкого отдела кишечника
16 дней
1
200,2
31,0 ±
2,45
23,5 ±
2,06
282,5 ±
30,9
322500,0 ±
14900,0
627,4
40750,0 ±
2690,0 *
545,0 ±
20,6***
42750,0 ±
1030,0
220,0 ±
17,8
933,1
3475,0 ±
419,0
6825,0 ±
309,0
410000,0 ±
24500,0
27750,0 ±
3540,0
К
2
М к-та
3
Гидр.
35 дней
1
57,3
62,75 ±
2,25
22,5 ±
1,66
3000,0 ±
204,0
205000,0 ±
16600,0
127,4
392,5 ±
21,8
2400,0 ±
173,0
2825,0 ±
309,0**
115000,0 ±
21800,0*
277,1
53500,0 ±
1784,0
3225,0 ±
185,0
66000,0 ±
2120,0*
197500,0 ±
32800,0***
К
2
М к-та
3
Гидр.
Микрофлора толстого отдела кишечника
7 дней
1
1163,5
К
2
4672,0
М к-та
3
Гидр.
5136,9
1450,0 ±
1,28 ±
43500,0 ±
362500,0 ±
1690,0
0,0328
3230,0
14400,0
3820,0 ±
9750,0 ±
2825,0 ±
13750,0 ±
43750,0**
930,0
359,0*
96,0**
1580,0 ±
147500,0 ±
210000,0 ±
8750,0 ±
36000,0***
21800,0
7000,0*
96,0
16 дней
13
1
2410,8
20500,0 ±
2600,0 ±
860000,0 ±
2575000,0 ±
960,0
406,0
44900,0
213500,0
3025000,0 ±
2650000,0 ±
640000,0 ±
40250,0 ±
459000,0
222000,0
41200,0*
3615,0
4300000,0 ±
2900000,0 ±
22750000,0 ±
32750,0 ±
192000,0***
250000,0
12594000,0
3070,0
К
2
4808,9
М к-та
3
5000,0
Гидр.
35 дней
1
2207,0
К
2
3900,2
М к-та
3
4372,6
Гидр.
3250000,0 ±
166000,0
357500,0 ±
17000,0
31250,0 ±
1435,0
1775000,0 ±
2225000,0 ±
1180000,0
2875000,0 ±
48000,0**
337500,0 ±
23950,0*
982500,0 ±
2650000,0 ±
96000,0
3450000,0 ±
166000,0
10375000,0 ±
622500,0
292500,0 ±
9600,0
11800,0
77100,0
* - р≤0,05; ** - р≤0,01; *** - р≤0,001 здесь и далее
Гидрогемол в толстом отделе кишечника цыплят во всех группах способствовал
увеличению общего количества микроорганизмов; молочнокислых бактерии,
лактатферментирующих к 16-у дню и снижал их к 35-у. В 35 дней во всех опытных
группах цыплят молочнокислых бактерий было незначительно меньше, чем в
контрольной группе, в результате развития лактатферментирующих, бифидобактерий
и других микроорганизмов. На курах было установлено, что гидрогемол увеличивает в
тонком и толстом отделах кишечника общее количество микроорганизмов,
бифидобактерий, молочнокислых, лактатферментирующих бактерий. В 337 дней
количество бактерий группы кишечной палочки снижается, но по сравнению со 2-й и
4-й группами больше (табл. 6).
Таблица 6 - Микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника кур в 134 и 337 дней
при даче препаратов
№
группы
Общее
количество
микро-организ
мов, млрд/г
1
К
2
Биф.
1060,5
2038,2
Молочнок Лактатферме
ислые
нтирющие
бактерии,
бактерии,
млн/г
млн/г
134 дня (тонкий отдел)
0,0825±
0,00745
0,6175±
0,01705***
0,02±
0,00101
0,1725±
0,0124
Бифидобак
терии,
млн/г
Бактерии
группы
E.coli,
млн/г
22,75±
1,125
282,5±
12,45*
0,275±
0,145
0,185±0,0097
14
3
Гидр.
4
Гид.+род
3
Род.
1146,5
1187,9
1105,1
185,0±
7,45***
245,0±
12,0***
242500,0±
13600,0***
24,5±
1,015*
0,04025±
0,00023*
16,0±
0,905*
165,0±
12,0*
55,0±
1,505***
37,75±
17,5***
257,5±
26,55
0,3825±
0,01245***
177,5±12,4
182,5±
6,6
232,5±
11,55*
410,0±
11,0***
450,5±
0,25***
24000,0±
1390,0*
155,0±
10,15
0,235±
0,01175***
195000,0±
10250,0***
1,2±
0,105
36000,0±
910,0***
250000,0±
195000,0
66000000,0±
1500000,0***
3375000,0±
175500,0
972500,0±
34300,0***
8550000,0±
250000,0***
557500,0±
12000,0
302500,0±
7700,0***
325000,0±
95000,0***
2600,0±
90,5***
422500,0±
12400,0**
134 дня (толстый отдел)
1
К
2
Биф.
3
Гидр.
4
Гид.+род
3
Род.
1007,6
1
К
2
Биф.
3
Гидр.
4
Гид.+род
3
Род.
1742,0
1869,4
2888,5
3057,3
1742,0
2,9 ±
11,0
3,625 ±
0,486***
437500,0 ±
11550,0***
257,5 ±
9,5***
172500,0 ±
9500,0**
0,046 ±
0,0018
0,05575±
0,016*
192500,0±
12400,0***
0,04675±
0,00252*
1,45±
0,08***
337 дней (толстый отдел)
4149,7
3312,1
4544,6
3047,8
0,009 ±
0,00079
542500,0±
12400,0***
1725000,0±
133000,0**
37000,0±
1120,0***
0,125 ±
0,0115
0,009±
0,00066
2025,0±
91,0***
315000,0±
9100,0***
532,5±
13,2***
0,125±
0,01165
Применение родафена на курах в опыте 5 показало, что в тонком и толстом
отделах кишечника в 134 дня препарат стимулирует увеличение общего количества
микроорганизмов. С возрастом данная тенденция повторяется. Родафен в 134 дня
достоверно увеличивает рост молочнокислых бактерий, с последующим снижением в
337 дней (табл. 6). Такая же тенденция наблюдается и с лактатферментирующими
бактериями. Количество бифидобактерий в слепых отростках с возрастом
увеличивается с 24000,0 до 8550000,0 млн/г. Родафен в 337 дней снижал количество
бактерий группы кишечной палочки на 135000,0 млн/г. Пробиотик бифилакт в 337
дней
способствовал
увеличению
общего
количества
микроорганизмов,
молочнокислых, лактатферментирующих и бифидобактерий; снижал бактерии группы
кишечной палочки, по отношению к контролю.
2.4.2 Иммунитет птицы при применении гидрогемола и родафена
Гидрогемол в 134 дня на курах способствует увеличению абсолютного и
относительного количества Т-лимфоцитов, γ-глобулинов. После 10 дней дачи
препарата эти показатели нормализовались. В 134 дня увеличивал бактерицидную и
фагоцитарную активности. В 337 дней бактерицидная активность сыворотки крови
снизилась до 5,97 %, фагоцитарная продолжала увеличиваться до 42,0 %. (Таблица 7)
Проведенные исследования клеточного, гуморального иммунитета цыплят в
опыте 4 показали, что в группе с применением родафена в 39 дней наблюдается
15
увеличение относительного и абсолютного количества Т-лимфоцитов; незначительное
уменьшение относительного количества В-лимфоцитов, но не выходящее за пределы
физиологической нормы показателей крови. Фагоцитарная активность в 39 дней во 2-й
группе снижается на 8,4 %, бактерицидная – повышается на 0,6 %, по отношению к
контролю.
Дача родафена в опыте 5 вызывает сильный иммунный ответ организма кур, в
результате чего в 134 дня происходит увеличение абсолютного, относительного
количества Т-лимфоцитов, γ-глобулинов. После 10 дней дачи препарата эти показатели
нормализовались. В сыворотке крови птицы в 337 дней увеличивается лизоцимная,
бактерицидная, фагоцитарная активности на 11,8 мкг/%, 2,67 и 13 %. Пробиотик
бифилакт в 134 дня увеличивает абсолютное количество Т-лимфоцитов; снижает
ЛАСК, БАСК. С возрастом во 2-й группе наблюдается повышение БАСК на 35,3%.
2.4.3 Обмен веществ при использовании гидрогемола и родафена
В опыте 3, изучение морфологических показателей крови цыплят в группе с
гидрогемолом показало, что количество гемоглобина с возрастом имеет тенденцию к
увеличению. В 7 и 35 дней количество лейкоцитов в опытных группах больше, чем в
контрольной группе, но не выходят за пределы физиологической нормы; количество
псевдоэозинофилов увеличивается в 3-4 раза в 7 дней. Гидрогемол увеличивает общий
белок в 16 и 35 дней; незначительно повышает AЛT в 16 дней. (Таблица 8)
16
3
Гидр
20,70±
0,27
20,20±
0,00
28,70±
***
0,08
23,00±
1,14
55,00±
***
0,84
51,00±
1,22
5
Род.
21,40±
*
0,01
58,00±
***
0,84
1
К
2
Биф.
10,50±
0,23
7,10±
***
0,21
13,00±
***
0,18
15,30±
***
0,16
9,30±
***
60,00±
3,67
55,00±
0,71
4 Гидр.+
род
3
Гидр
4
Гидр.+
род
5
Род.
36,00±
***
1,52
44,00±
***
1,22
52,00±
*
10,15±
0,02
10,28±
***
0,01
15,78±
***
0,02
11,75±
***
0,01
12,44±
***
0,01
26,00±
0,84
31,00±
**
1,52
25,00±
1,38
6,32±
0,02
3,90±
***
0,11
4,68±
***
0,01
6,75±
***
0,01
4,86±
***
29,00±
*
0,84
17,00±
***
0,63
5,38±
0,01
6,25±
***
0,02
7,17±
***
0,01
6,68±
***
0,01
3,64±
***
0,01
23,20±
0,01
9,60±
***
0,09
9,60±
***
0,10
17,30±
***
0,12
9,90±
***
0,08
18,00±
1,87
21,00±
1,82
1,90±
0,19
1,49±
0,01
23,00±
1,69
2,99±
***
0,02
4,76±
***
0,02
2,90±
***
59,30±
0,28
55,40±
***
0,18
66,10±
***
0,19
57,80±
***
0,31
71,10±
***
31,00±
***
1,10
31,00±
***
30,00±
0,84
29,00±
0,84
32,00±
0,71
26,00±
***
0,84
32,00±
0,71
21,00±
2,00
12,00±
*
3,21
42,00±
***
1,45
34,00±
***
1,41
34,00±
***
1,30±
0,05
1,31±
0,01
1,44±
*
0,01
1,46±
**
0,01
1,50±
0,12
0,46±
***
0,01
0,38±
0,02
0,48±
***
0,01
5724,60±
0,05
2422,10±
***
0,01
3361,30±
***
0,01
2246,40±
***
0,01
3072,00±
***
0,08
1,33±
0,02
1,50±
0,13
0,28±
0,03
0,18±
***
0,02
0,66±
***
0,02
0,60±
***
0,01
0,66±
***
4212,60±
0,10
1135,70±
***
0,07
3857,30±
***
0,17
3270,80±
***
0,18
1131,50±
***
1,57±
***
0,01
1,76±
***
0,02
1,94±
***
0,39±
0,01
0,38±
0,02
Зав.
ФЕ абс.,
109/л
ФИ,Ед.
ФЧ, Ед.
ФА, %
БАСК, %
ЛАСК, мкг/
%
Вл абс.,
109/л
Вл, %
Тл абс.,
109/л
Тл, %
49,00±
1,52
51,00±
1,22
134 дня
8,30±
0,05
2,90±
***
0,08
10,10±
***
0,14
16,80±
***
0,10
0,70±
***
0,07
337 дней
8,30±
0,19
43,60±
***
0,21
5,97±
***
0,02
9,04±
***
0,02
10,97±
***
Фагоцитоз,Е
д.
1
К
2
Биф.
Л абс.,109/л
№ группы
Таблица 7 - Изменение иммунологических показателей крови кур-несушек после применения препаратов
1,22±
0,01
1,27±
0,74±
0,02
0,60±
***
0,01
1,18±
***
0,03
1,00±
0,28
**
0,01
1,10±
0,14
0,97±
***
0,01
1,07±
***
0,01
17
0,15
1,22
0,02
1,45
0,12
0,20
0,04
1,3
0,04
0,02
0,19
18
Таблица 8 - Биохимические показатели крови цыплят в 16 и 35 дней при даче
гидрогемола и молочной кислоты
Показатели
№ группы
1
2
3
Контрольная
Молочная кислота
Гидрогемол
16 дней
Общий Са, ммоль/л
2,9 ± 0,21
3,2 ± 0,23
3,0 ± 0,18
Неорганический Р, ммоль/л
3,5 ± 0,22
4,0 ± 0,12*
3,7 ± 0,25
Са/Р
0,83 ± 0,02
0,8 ± 0,02
0,81 ± 0,01
Глюкоза, ммоль/л
6,06 ± 0,1
10,3 ± 0,19**
9,53 ± 0,13
Триглицериды, ммоль/л
0,62 ± 0,06
0,54 ± 0,01
0,49 ± 0,02*
Общий белок, г/л
25,5 ± 0,13
28,5 ± 0,043
28,3 ± 0,043
Альбумины, %
49,7 ± 0,89
43,1 ± 0,41***
48,1 ± 0,34
α-глобулины, %
16,93 ± 0,32
24,9 ± 0,31***
13,8 ± 0,21**
7,94 ± 0,43
6,6 ± 0,3
13,1 ± 0,33**
γ-глобулины, %
24,77 ± 0,58
25,4 ± 0,28***
25,0 ± 0,2**
ALT, Ед/л
4,6 ± 0,4
11,0 ± 0,14***
19,1 ± 0,28**
AST, Ед/л
91,1 ± 0,001
90,6 ± 0,001
94,5 ± 0,001
Холестерин, ммоль/л
3,78 ± 0,19
4,5 ± 0,22*
3,09 ± 0,1**
Общий билирубин, мкмоль/л
4,7 ± 0,001
5,1 ± 0,001
2,3 ± 0,001
β-глобулины, %
35 дней
Общий Са, ммоль/л
3,0 ± 0,17
3,5 ± 0,2
3,1 ± 0,18
Неорганический Р,
ммоль/л
5,3 ± 0,14
6,2 ± 0,23
5,0 ± 0,25
**
Са/Р
0,57 ± 0,01
0,56 ± 0,06
0,62 ± 0,01
Глюкоза, ммоль/л
7,18 ± 0,07
9,7 ± 0,2***
11,9 ±
0,2**
Триглицериды,
ммоль/л
0,38 ± 0,01
0,42 ± 0,04
0,47 ±
0,02**
Общий белок, г/л
35,0 ± 0,23
38,9 ± 0,031***
37,4 ±
18
19
0,033**
Альбумины, %
53,9 ± 0,25
53,7 ± 0,47
45,5 ±
0,25**
α-глобулины, %
14,6 ± 0,25
15,1 ± 0,2
20,5 ±
0,23**
9,82 ± 0,01
8,0 ± 0,34
11,6 ±
0,3**
γ-глобулины, %
21,7 ± 0,16
23,1 ± 0,23***
22,4 ±
0,29*
ALT, Ед/л
10,4 ± 0,25
12,9 ± 0,33***
7,9 ±
0,25**
AST, Ед/л
91,1 ± 0,001
88,3 ± 0,001
75,4 ±
0,001
Холестерин, ммоль/л
2,42 ± 0,12
3,58 ± 0,2***
3,26 ±
0,21**
Общий билирубин,
мкмоль/л
6,2 ± 0,001
3,99 ± 0,001
8,19 ±
0,001
β-глобулины, %
В опыте 5, гидрогемол в 134 дня на курах увеличивает количество эритроцитов
на 0,40×1012/л. Наибольшее количество гемоглобина в 134 и 337 дней у кур в группе с
бифилактом. Количество тромбоцитов в 337 дней при даче препаратов имело
тенденцию к достоверному снижению, то есть наблюдалась тромбоцитопения (в
результате, гиперчувствительности к препаратам). Количество лейкоцитов во всех
группах в 134 и 337 дней имеет тенденцию к уменьшению (табл. 9).
19
20
ЦП, Ед.
Tr, 109/л
Er,
1012/л
L, 109/л
Hb, г/л
№
группы
Таблица 9 - Морфологические показатели крови кур-несушек после применения препаратов в 134 и 337 дней
Лейкоформула
Б,%
ПЭ,%
60,00±
0,15
76,00±
***
0,07
64,00±
0,21
40,60±
0,14
28,80±
***
0,42
40,40±
0,29
1,30±
0,16
1,30±
0,19
94,40±
0,20
96,00±
1,64
134 дня
1,40±
0,18
1,80±
0,19
1,00±
0,27
1,00±
0,18
1,00±
0,27
1,00±
0,15
1,70±
0,19
94,00±
0,32
1,10±
0,16
1,00±
0,12
1,00±
0,27
4
Гидр.+
род
5-Род.
64,00±
0,15
32,00±
***
1,30
32,00±
***
1,61
1,30±
0,23
98,00±
1,61
1,20±
0,21
1,00±
0,28
1,00±
0,20
1,60±
0,12
92,00±
*
1,14
1,40±
0,10
1,00±
0,25
1,00±
1,52
1
К
2
Биф.
3
Гидр.
72,00±
0,17
94,00±
***
0,12
74,00±
0,16
1,40±
0,10
2,00±
***
0,14
1,60±
0,10
1,40±
0,24
88,00±
***
0,12
96,00±
1,64
69,0±
***
1,30
82,0±
***
1,14
70,0±
***
1,38
1,00±
0,27
2,00±
**
0,14
1,00±
0,12
4
Гидр.+
род
34,00±
1,41
18,20±
***
0,11
22,40±
***
0,19
26,00±
***
2,21
1,70±
0,19
1,00±
0,28
6,00±
0,25
4,00±
***
0,25
1,00±
***
0,12
1,00±
***
0,25
1
К
2
Биф.
3
Гидр.
72,00±
***
0,17
1,60±
0,12
337 дней
1,50±
0,13
1,40±
0,18
С-Я,%
Л,%
М,%
46,00±
2,07
28,00±
***
2,12
26,00±
***
1,52
27,00±
***
1,14
30,00±
***
1,64
51,00±
2,00
69,00±
***
1,84
70,00±
***
1,30
70,00±
***
1,38
67,00±
***
1,67
1,00±
0,19
1,00±
0,12
59,00±
1,10
52,00±
***
1,22
41,00±
***
1,87
37,00±
***
2,12
31,00±
1,10
39,00±
***
1,92
56,00±
***
1,38
59,00±
***
1,10
3,00±
0,21
3,00±
0,15
2,00±
***
0,14
1,00±
0,15
1,00±
0,25
1,00±
***
0,27
2,00±
***
0,14
20
21
5
Род.
72,00±
0,19
12,80±
***
0,20
1,50±
0,11
69,2±
***
0,21
1,40±
0,25
1,00±
0,15
1,00±
***
0,19
26,00±
***
1,52
71,00±
***
2,45
1,00±
***
0,12
21
22
Гидрогемол увеличивает абсолютное и относительное количество лимфоцитов.
Цветной показатель, базофилы, псевдоэозинофилы, моноциты, сегментоядерные
нейтрофилы находятся в пределах физиологической нормы. Увеличивает содержание
общего белка, γ- и β-глобулинов в сыворотке крови в 134 дня. С возрастом у кур
наблюдается увеличение холестерина и триглицеридов. Дача гидрогемола
активизирует жировой обмен. При длительной даче гидрогемола наблюдается
достоверное увеличение общего билирубина. Уровень AЛT, AСT в сыворотке крови
находился в пределах физиологической нормы, так как не превышал ее более, чем в 5
раз
Целлюлозолитическая активность ферментов химуса толстого отдела кишечника
цыплят после применения родафена в 11 дней больше, чем в контрольной группе на
1,7 %; в 39 дней - на 8,3 % (рис. 1). Амилолитическая активность уменьшается;
протеолитическая активность повышается на 0,76 и 1,88 мкМ тирозина/час (рис. 2).
Рис. 1 – Целлюлозолитическая активность химуса толстого отдела кишечника цыплят
с применением родафена в возрастной динамике, % гидролиза целлюлозы
Рис. 2 – Протеолитическая активность химуса толстого отдела кишечника цыплят с
применением родафена в возрастной динамике, Мкм тирозина/час
В толстом кишечнике цыплят в 39 дней в группе с родафеном преобладали
лактобактерии,
энтерококки,
бифидобактерии,
бактероиды,
сапрофитные
стафилококки, энтеробактерии Л-, клостридии, кандиды, энтеробактерии Л+ и
соответственно им - уксусная, пропионовая, масляная, валериановая, изовалериановая,
изомасляная, капроновая кислоты.
По результатам проведенных исследований родафена на курах в опыте 5
количество эритроцитов и гемоглобина в 134 дня больше на 0,3×10 12/л и на 12,0 г/л,
чем в контрольной группе (табл. 9). С возрастом уменьшается количество
тромбоцитов, лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и повышаются лимфоциты
на 16,0 и 40 %, чем в контроле. Моноциты, псевдоэозинофилы, базофилы находятся в
пределах физиологической нормы. Пробиотик в 134 и 337 дней способствует
увеличению количества общего белка на 6,2 и на 4,8 г/л по отношению к контролю. С
возрастом увеличивается количество альбуминов, глюкозы, общего билирубина на 2,9
%; 1,1 ммоль/л соответственно. Родафен в 337 дней способствует увеличению
показателей AЛT и AСT до 12,5 и 74,5 Ед/л, на печень воздействия не было. Бифилакт
увеличивает количество эритроцитов на 0,5×1012/л, чем в группе с гидрогемолом.
2.4.4 Влияние гидрогемола и родафена на продуктивные показатели
В опыте 3 гидрогемол увеличивает массу сердца, поджелудочной железы в 35
дней; в 16 дней – массу кишечника. Сохранность поголовья по группам составила из
22
23
100 голов в 1-й группе 95%, во 2-й – 98%, в 3-й -100%. Гидрогемол увеличивает массу
цыплят на 42,2 г; снижает потребление корма на 22,2 г/голову в сутки.
В норме в опыте 5 куры породы «Ломанн Браун» начинают нести яйца со 120
дней, в группе с гидрогемолом - в 113 дней. Гидрогемол увеличивает яйценоскость на 1,3%, чем в группе с родафеном; количество дефективных яиц снижает на 11,35 %,
чем в контроле и на 2,27 %, чем в группе с родафеном. Родафен в 39 дней у цыплят
увеличивает массу сердца, печени, кишечника, остальные органы в пределах нормы.
Живая масса цыплят в 11 суток - 269,5 г, что на 28,8 г больше, чем в 1-й группе.
Родафен до 11суток влияет на увеличение живой массы цыплят наиболее эффективно;
способствует ускорению начала яйцекладки на 7 дней; яйценоскость увеличивает на
2,39 %; выход дефективных яиц снижает на 9,1 %. Бифилакт увеличивает
яйценоскость на 2,4 %; выход дефективных яиц снижает на 13,6 %.
2.5 Комплексное использование гидрогемола и родафена в птицеводстве
Гидрогемол способствует нормализации микрофлоры ЖКТ, за счет создания
благоприятных условий для развития бифидо- и лактобактерий. Родафен способствует
повышению иммунитета за счет выработки бактериями рода Bacillus интерферона,
цитокинов, антибиотикоподобных веществ. Поэтому мы рекомендуем для повышения
иммунитета, продуктивности применять совместную дачу гидрогемола и родафена.
Исследование микрофлоры тонкого и толстого отделов кишечника кур в опыте 5
показало, что при совместной дачи препаратов общее количество микроорганизмов в
134 дня больше, чем в группе с гидрогемолом на 41,4 и чем с родафеном – на 82,8
млрд/г, но меньше, чем с бифилактом. При начальной совместной даче гидрогемола и
родафена у кур наблюдается сильный иммунный ответ организма на введение белка
животного происхождения. Лизоцимная активность в сыворотке крови в 134 дня в 4-й
группе на 7,7 мкг/% больше, чем с бифилактом и гидрогемолом; на 7,4 мкг/% - чем
родафеном; увеличивается бактерицидная активность. (Таблица 6, 7) У кур в 337 дней
наибольшее количество эритроцитов с бифилактом и при совместной даче. В 4-й
группе увеличивается количество гемоглобина, кальция, фосфора, глюкозы, АСТ;
общего белка, γ-глобулинов, особенно в 134 дня; снижаются тромбоциты, то есть
наблюдается тромбоцитопения (в результате, гиперчувствительности к препаратам).
(Таблица 9) Комплексное применение ускоряет начало яйцекладки на 7 дней;
увеличивает яйценоскость в 134 дня на 13,8 %; в 337 дней – на 10,4 % , выход
дефективных яиц снижает на 15,85 %.
Совместное применение препаратов на цыплятах в опыте 6 в кишечнике
увеличивает
общее
количество
микроорганизмов,
молочнокислых,
лактатферментирующих, бифидобактерий; в 7 дней в слепых отростках снижает
бактерии группы кишечной палочки. Такая тенденция с возрастом сохраняется. В 16
дней способствует увеличению относительного и абсолютного количества
Т-лимфоцитов, абсолютного количества В-лимфоцитов, лизоцимной, бактерицидной,
фагоцитарной активности. В 7 и 35 дней увеличивает содержание гемоглобина;
тромбоцитов; относительное количество лимфоцитов в 16 и 35 дней; лейкоцитов в 7 и
35 дней; в 16 дней количество лейкоцитов уменьшается. В 7 дней увеличивается
количество глюкозы, триглицеридов, общего белка, γ-глобулинов (находящихся в
23
24
пределах физиологической нормы). Анализ АЛТ и АСТ, общего билирубина не
показал отрицательного воздействия на печень. В 16 дней увеличивает массу селезенки,
поджелудочной железы, железистого желудка, жира; в 35 дней - массу сердца, печени,
селезенки, мышечного желудка, жира.
2.6 Экономическая эффективность применения гидрогемола и
родафена в птицеводстве
Гидрогемол в опыте 3 на цыплятах не смотря на высокую стоимость препарата,
способствует снижению затрат на корма на 154 рубля на 100 голов, повышению
предотвращенного экономического ущерба при проведении профилактических
мероприятий на 117,5 рублей. Увеличивает денежную выручку от реализации мяса на
970 рублей.
Применение пробиотика родафен в опыте 4 на цыплятах способствовало
повышению затрат на корма на 100 голов на 100 рублей; увеличению денежной
выручки от реализации мяса на 1143 рубля и экономического эффекта на рубль затрат
на - 0,2 рубля.
Использование родафена на курах в опыте 5 снижает затраты на препарат на
5044 рубля, за счет малой дозировки и небольшой стоимости – 6 рублей за 1 грамм,
чем с бифилактом. Родафен способствовал увеличению денежной выручки от
реализации яиц на 80,4 тысячи рублей. Затраты на гидрогемол на 7644 рубля больше,
чем с родафеном, при увеличении денежной выручки на 123 тысячи рублей, чем в
контроле. При сочетанное применение гидрогемола и родафена затраты на
препараты на 7647 рублей больше, чем с родафеном и на 4 рубля больше, чем с
гидрогемолом. При этом денежная выручка от реализации яиц увеличилась на 67
тысяч рублей, чем с родафеном и на 49 тысяч больше, чем с гидрогемолом.
Совместная дача цыплятам способствовала снижению затрат на корма на 63 рубля, по
сравнению с гидрогемолом и на 2251 рубль, по сравнению с родафеном; увеличивая
денежную выручку на 583 и 6047 рубля, чем с гидрогемолом и родафеном
соответственно; экономический эффект на рубль затрат – 4,3 рубля.
ВЫВОДЫ
1. Гидрогемол является гидролизатом крови убойных животных, не оказывает
токсического действия (IV класс опасности); при длительном применении не
установлено отрицательного влияния препарата в испытуемых дозах на обмен веществ
лабораторных животных; способствует угнетению развития условно-патогенных
бактерий (кишечной палочки, стафило- и энтерококков), а также грибов рода кандида;
стимулирует рост молочнокислых бактерий.
2. Применение гидрогемола на цыплятах увеличивает общее количество
микроорганизмов на 732,9 млрд/г, бифидобактерий – на 21890,0 млн/г,
лактатферментирующих бактерий – на 3092,5 млн/г; уменьшает рост бактерий группы
кишечной палочки на 7500,0 млн/г; увеличивает количество Т- и В-лимфоцитов;
бактерицидную активность - на 9,5 %; лизоцимную активность – на 64 %; общий
белок - на 11 %; увеличивает вес сердца, селезенки, железистого и мышечного
желудка, кишечника, поджелудочной железы; массу тела - на 42,2 г/голову в сутки;
24
25
сохранность поголовья – на 5 %; снижает затраты на корма, увеличивает денежную
выручку от реализации мяса.
3. Гидрогемол у кур способствует увеличению общего количества
микроорганизмов на 85,9 млрд/г, бифидобактерий – на 3125,0 млн/г,
лактатферментирующих – на 315,0 млн/г; уменьшению роста бактерий группы
кишечной палочки - на 232,5 млн/г; повышению количества эритроцитов;
фагоцитарной активности на 21 %; общего белка - на 6,6 %; γ- и β-глобулинов;
яйценоскости на 2,1 %; денежной выручки на 123 тысячи рублей, чем в контроле;
снижению выхода дефективных яиц на 11,4 %.
4. Пробиотик родафен, в состав которого входят штаммы Bacillus subtilis ВКПМ
2574 и Bacillus licheniformis ВКПМ Б-020, не оказывает токсического и
раздражающего действия. В опытах при определении острой и хронической
токсичности гибели животных не наблюдалось. Не оказывает негативного влияния на
обменные процессы, морфологические и биохимические показатели крови.
Внутренние органы лабораторных животных без признаков патологии. В кишечнике
мышей увеличивается количество бифидобактерий, энтерококков.
5. Родафен у цыплят способствует увеличению в толстом отделе кишечника
бифидобактерии до 1×105 КОЕ/г, лактозонегативных энтеробактерии – до 3×10 3 КОЕ/г,
лактобактерии – до 1×106 КОЕ/г; преобладали ЛЖК пропионовая, уксусная, масляная.
Способствует увеличению целлюлозолитической и протеолитичекой активности
ферментов химуса слепых отростков; количества общего белка в сыворотке крови,
железа, гемоглобина, лимфоцитов, бактерицидной активности; нормализует
содержание альбуминов, α-, β-, γ-глобулинов, фосфора. Увеличивает массу сердца,
мышечного желудка, печени; повышает живую массу; сохранность поголовья на 12 %;
денежную выручку от реализации мяса - на 1143 рубля и экономический эффект на
рубль затрат.
6. Родафен у кур в кишечнике способствует увеличению общего количества
микроорганизмов,
бифидобактерий,
лактатферментирующих,
молочнокислых
бактерий; уменьшает содержание бактерий группы кишечной палочки; повышает
фагоцитарную активность – на 13 %, общий белок – на 13 %; снижает количество
тромбоцитов на 28 %, псевдоэозинофилов – на 5,0 %, сегментоядерных нейтрофилов–
на 33,0 %, моноцитов – на 2 %. Ускоряет начало яйцекладки на 7 дней; увеличивает
яйценоскость на 0,8 %, вес яйца и толщину скорлупы на 0,9 г и 0,06 мм; снижает
количество дефективных яиц на 9,1 %, затраты на препарат; увеличивает денежную
выручку от реализации яиц на 80,4 тысячи рубля.
7. Сочетанное применение гидрогемола и родафена на цыплятах увеличивает
абсолютное количество Т-лимфоцитов на 169 %; В-лимфоцитов – на 145 %;
лизоцимную, бактерицидную активность сыворотки крови – на 73 и 49,3 %;
фагоцитарную активность - на 8,2 %; тромбоцитов – на 21 %, общий белок – на 27,4
%. Увеличивает массу сердца, селезенки, железистого желудка, печени;
поджелудочной железы; массу тела на 64,6 г; денежную выручку от реализации мяса;
потребление корма; сохранность поголовья. Экономическая эффективность на 1 рубль
затрат – 4,3 рубля.
25
26
8. Комплексное применение гидрогемола и родафена на курах способствует
увеличению в кишечнике общего количества микроорганизмов, бифидобактерий,
лактатферментирующих, молочнокислых бактерий; уменьшает содержания бактерий
группы кишечной палочки; повышает гемоглобин на 22,8 %, абсолютное количество
Т-лимфоцитов – на 22,2 %, бактирицидную активность – на 8,5 %; снижает
сегментоядерные нейтрофилы на 22 %, лизоцимную активность – на 5,9 %.
Увеличивает яйценоскость на 4,7 %, денежную выручку от реализации яиц; снижает
выход дефективных яиц на 15,9 %.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Гидрогемол цыплятам применять с суточного до 10-и дневного возраста в дозе 4
мл на голову в сутки с небольшим количеством воды или вместо нее для нормализации
кишечной микрофлоры, повышения иммунитета, живой массы, сохранности поголовья.
Курам применять в дозе 10 мл на голов со 100 до 337 дней с интервалом в 2 недели
для нормализации микрофлоры, повышения иммунитета, яйценоскости, снижения
выхода дефективных яиц.
2. Рекомендуем применять пробиотик родафен цыплятам-бройлерам с кормом или
водой на 1-4-е сутки 1 г на 2000 голов и с 21 по 24-е сутки 2 г для нормализации
кишечной микрофлоры; увеличения целлюлозолитическую и протеолитическую
активности ферментов кишечника, бактерицидной активности сыворотки крови,
гемоглобина, лимфоцитов, глюкозы, альбуминов; увеличения живой массы и
сохранности поголовья.
Курам-несушкам применять со 100 дней в дозе 4 г на 2000 голов в течение 3-х
недель для нормализации микрофлоры, повышения иммунитета, яйценоскости,
снижения выхода дефективных яиц.
3. Рекомендуем совместную дачу гидрогемола и родафена цыплятам с водой или
вместо нее с 1 по 10-й день жизни в дозе 4 мл гидрогемола и 1 г на 2000 голов с 1-4-е
сутки и 2 г с 21 по 24-е сутки родафена для нормализации микроорганизмов
желудочно-кишечного тракта, улучшения иммунитета; увеличения живой массы,
сохранности поголовья.
Курам родафен с гидрогемолом применять со 100 дней в дозе 10 мл гидрогемола и
4 г на 2000 голов в сутки родафена в течение 3 недель для нормализации
микроорганизмов желудочно-кишечного тракта; улучшения иммунитета; яйценоскости,
снижения выхода дефективных яиц, увеличения живой массы, сохранности поголовья.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
1.
Каблучеева, Т.И. Влияние препаратов «Гидрогемол», «Бифилакт», «Мидивет»,
«Гидрогемол+» на микробный биоценоз тонкого кишечника кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г.
Подлесная // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики: материалы
международной научно-практической конференции / «Агрус». - Ставрополь, 2009. - С. 56-60.
2.
Каблучеева, Т.И. Влияние препаратов «Гидрогемол», «Бифилакт», «Мидивет»,
«Гидрогемол+» на микробный биоценоз толстого кишечника кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г.
Подлесная // там же, 2009. - С. 61-63.
26
27
3.
Каблучеева, Т.И. Влияние различных дозировок препарата «Родафен» на
морфологические показатели крови цыплят-бройлеров в возрастной динамике / Т.И.
Каблучеева, Н.Г. Подлесная // Актуальные проблемы современной ветеринарии: материалы
международной научно-практической конференции, посв. 65-летию ветеринарии Кубани /
Краснодар, 2011. – Часть 1. - С. 47-49.
4.
Каблучеева, Т.И., Подлесная, Н.Г. Влияние препаратов «Бифилакт»
«Гидрогемол+», на неспецифическую резистентность организма кур / Т.И. Каблучеева,
Н.Г. Подлесная // Тр. / КубГАУ. – 2011. – Вып. № 3 (30). – С. 195-199.
5.
Каблучеева, Т.И., Подлесная, Н.Г. Влияние препаратов «Гидрогемол», «Мидивет»,
на неспецифическую резистентность организма кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г.
Подлесная // Тр. / КубГАУ. – 2011. – Вып. № 3 (30). – С. 217-221.
6.
Каблучеева, Т.И. Коррекция иммунного статуса цыплят-бройлеров препаратом
родафен / Т.И. Каблучеева, Н.Г. Амбулова // Ветеринария Кубани. - 2012. - № 5. - С. 8-10.
7.
Каблучеева, Т.И. Эффективность использования пребиотического препарата
Гидрогемол для повышения иммунитета и профилактики колибактериоза у
цыплят-бройлеров / Т.И. Каблучеева, Е.Д. Федосеева, Н.Г. Амбулова // 90 лет со дня
Рождения доктора ветеринарных наук, профессора, участника ВОВ ГАРКАВИ БОРИСА
ЛЬВОВИЧА: материал научной студенческой конференции факультета ветвринарной
медицины по итогам работы за 2011/12 г. Краснодар, 2013. – с. 168-172.
8.
Антипов, В.А. Воздействие пробиотического препарата бифилакт на биоценоз
пищеварительного тракта птиц / В.А. Антипов, Т.И, Каблучеева-Пашник, Т.В. Кушнир,
Н.Г. Амбулова // Тр. / КубГАУ. – 2013. – Вып. № 6. – С. 176-178.
9. Каблучеева-Пашник, Т.И. Воздействие пробиотических препаратов бифилакт, ве
том, биокорм пионер на состов микрофлоры пищеварительного тракта птицы // Т.И.
Каблучеева-Пашник, Н.Г. Амбулова, И.Г. Позднякова / Тр. / КубГАУ. – 2013. – Вып. № 6.
– С. 179-180.
10. Каблучеева-Пашник, Т.И. Эффективность использования пребиотического
препарата гидрогемол для повышения иммунитета и профилактики колибактериоза у
цыплят-бройлеров // Т.И. Каблучеева-Пашник, Н.Г. Амбулова, Е.Д. Федосеева/ Тр. /
КубГАУ. – 2013. – Вып. № 6. – С. 181-182.
Список сокращений:
АЛТ - аланинаминотрансфераза
АСТ - аспартатаминотрансфераза
БАСК – бактерицидная активность сыворотки крови
27
28
ЛАСК – лизоцимная активность сыворотки крови
ЛЖК – летучие жирные кислоты
МПА – мясопептонный агар
МПА – мясопептонный бульон
КОЕ – колониеобразующие единицы
ФА – фагоцитарная активность нейтрофилов
ПП – процент переваривания нейтрофилов
ФЧ– фагоцитарное число
ФЕ – фагоцитарная емкость
ФИ – фагоцитарный индекс
СОЭ – скорость оседания эритроцитов
Тл – Т лимфоциты
Вл - В лимфоциты
Лабс. – абсолютное количество лимфоцитов
С-Я – сегментоядерные лимфоциты
Л – лимфоциты
М – моноциты
ЦП – цветной показатель
ПЭ – псевдоэозинофилы
Б – базофилы
Нв – гемоглобин
Тr- тромбоциты
Еr- эритроциты
L – лейкоциты
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
КОЕ - колониеобразующие единицы
28