методические рекомендации по оценке гуморального
advertisement
ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂÎ ÇÄÐÀÂÎÎÕÐÀÍÅÍÈß ÐÅÑÏÓÁËÈÊÈ ÁÅËÀÐÓÑÜ ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÐÅÊÎÌÅÍÄÀÖÈÈ ÓÒÂÅÐÆÄÀÞ Ïåðâûé çàìåñòèòåëü ìèíèñòðà äðàâîîõðàíåíèÿ Â.Ì.Îðåõîâñêèé ÑÎÃËÀÑÎÂÀÍÎ Çàìåñòèòåëü íà÷àëüíèêà Ãëàâíîãî óïðàâëåíèÿ êàäðîâîé ïîëèòèêè, ó÷åáíûõ çàâåäåíèé è íàóêè Í.È. Äîñòà 4 äåêàáðÿ 2000 ã. 4 äåêàáðÿ 2000 ã. Ðåãèñòðàöèîííûé ¹ 140-0011 ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÐÅÊÎÌÅÍÄÀÖÈÈ ÏÎ ÎÖÅÍÊÅ ÃÓÌÎÐÀËÜÍÎÃÎ ÈÌÌÓÍÈÒÅÒÀ ÏÐÈ ÎÑÒÐÛÕ ËÅÉÊÎÇÀÕ Ó ÄÅÒÅÉ Ìèíñê 2001 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Îñíîâíîå ó÷ðåæäåíèå-ðàçðàáîò÷èê: Ðåñïóáëèêàíñêèé íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêèé öåíòð äåòñêîé îíêîëîãèè è ãåìàòîëîãèè Ó÷ðåæäåíèå-ñîèñïîëíèòåëü: Èíñòèòóò áèîîðãàíè÷åñêîé õèìèè ÍÀÍ ÐÁ Àâòîðû: ä-ð ìåä. íàóê Ì.Ï. Ïîòàïíåâ, êàíä. ìåä. íàóê Ñ.Å. Áóãëîâà, êàíä. ìåä. íàóê Ì.À. ×åðíîâåöêèé, êàíä. õèì. íàóê Ñ.Ï. Ìàðöåâ, êàíä. õèì. íàóê Ç.È. Êðàâ÷óê, êàíä. õèì. íàóê Í.Â. Ïåòåâêà, Â.Â. Ãðèíåâ, Ì.Â. Áåëåâöåâ, Í.Â. Ìèãàëü Ðåöåíçåíò: ä-ð ìåä. íàóê, ïðîô. À.È. Ñâèðíîâñêèé  ìåòîäè÷åñêèõ ðåêîìåíäàöèÿõ ðàññìîòðåíû ìåòîäû îöåíêè ñîñòîÿíèÿ ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé. Íàðÿäó ñ îáùåïðèçíàííûìè ñïîñîáàìè îïðåäåëåíèÿ êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâ, àíòèòåë ê áàêòåðèàëüíûì òîêñèíàì, êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà è öèòîêèíîâ, à òàêæå áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè ñûâîðîòêè êðîâè, ïðåäëàãàþòñÿ íîâûå ìåòîäû: âûÿâëåíèå ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë ìåòîäîì êëåòî÷íîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà, âûÿâëåíèå ãîìîãåííîñòè ìîëåêóë èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G. Ïðåäñòàâëåíû äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå î öåëåñîîáðàçíîñòè îïðåäåëåíèÿ ïåðå÷èñëåííûõ âûøå ïîêàçàòåëåé ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ â êà÷åñòâå ôàêòîðîâ, âëèÿþùèõ íà ïàòîãåíåç çàáîëåâàíèÿ. Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïðåäíàçíà÷åíû äëÿ îíêîãåìàòîëîãîâ, èììóíîëîãîâ, íàó÷íûõ ðàáîòíèêîâ, âðà÷åé-ëàáîðàíòîâ êëèíèê è íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêèõ ó÷ðåæäåíèé îíêîãåìàòîëîãè÷åñêîãî ïðîôèëÿ. Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè óòâåðæäåíû Ìèíèñòåðñòâîì çäðàâîîõðàíåíèÿ Ðåñïóáëèêè Áåëàðóñü â êà÷åñòâå îôèöèàëüíîãî äîêóìåíòà. 2 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Îãëàâëåíèå ÂÂÅÄÅÍÈÅ .......................................................................................................................................................... 4 1. ÌÅÒÎÄÛ ÎÖÅÍÊÈ ÃÓÌÎÐÀËÜÍÎÃÎ ÈÌÌÓÍÈÒÅÒÀ ................................................................... 6 1.1. Çàáîð è îáðàáîòêà êðîâè äëÿ èññëåäîâàíèÿ ..................................................................................................... 6 1.2. Îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâêëàññîâ Ì, G, A â ñûâîðîòêå êðîâè ............................ 6 1.3. Îïðåäåëåíèå ñîäåðæàíèÿ ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè ............................................. 7 1.4. Îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèè àíòèòåë ê ñòîëáíÿ÷íîìó è äèôòåðèéíîìó àíàòîêñèíó â ñûâîðîòêå êðîâè ....................................................................................................................................................... 8 1.5. Îïðåäåëåíèå áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè ñûâîðîòêè êðîâè ........................................................................ 9 1.6. Èììóíîôåðìåíòíûé ìåòîä îïðåäåëåíèÿ ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà ........................................... 10 1.7. Îöåíêà êîíôîðìàöèîííûõ íàðóøåíèé èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G â ñûâîðîòêå êðîâè .................. 12 1.8. Îïðåäåëåíèå êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà C3c è Ñ4 â ñûâîðîòêå êðîâè .................................................... 14 2. ÈÍÒÅÐÏÐÅÒÀÖÈß ÏÎËÓ×ÅÍÍÛÕ ÄÀÍÍÛÕ È ÈÕ ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÎÅ ÇÍÀ×ÅÍÈÅ ............... 16 2.1. Ñâÿçü êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G c ÷àñòîòîé èíôåêöèîííûõ îñëîæíåíèé ó äåòåé ñ ÎËË ....................................................................................... 16 2.2. Ñîäåðæàíèå êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà, ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà è óðîâåíü áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè ñûâîðîòêè êðîâè ó äåòåé ñ ÎËË ........................................................... 19 2.3. Ñîäåðæàíèå àíòèòîêñè÷åñêèõ è ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíûõ ñ ÎËË ........................................................................................................................................................... 21 2.4. Ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíûå íàðóøåíèÿ ìîëåêóë IgG â ñûâîðîòêå êðîâè ó äåòåé ñ ÎËË ............... 24 ÇÀÊËÞ×ÅÍÈÅ ................................................................................................................................................ 25 3 Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé ÂÂÅÄÅÍÈÅ Ñîãëàñíî ñîâðåìåííûì íàó÷íûì ïðåäñòàâëåíèÿì, ñïåöèôè÷åñêèé ïðîòèâîîïóõîëåâûé èììóíèòåò ÿâëÿåòñÿ Ò-êëåòî÷íûì, òî åñòü îïðåäåëÿåòñÿ íàëè÷èåì è àêòèâíîñòüþ Òëèìôîöèòîâ.  òî æå âðåìÿ ó áîëüíûõ ñ îíêîëîãè÷åñêîé è îíêîãåìàòîëîãè÷åñêîé ïàòîëîãèåé ÷àñòî âûÿâëÿþòñÿ èçìåíåíèÿ ñî ñòîðîíû äðóãèõ çâåíüåâ èììóíèòåòà. Ðåàêöèè ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðîÿâëÿþòñÿ ïðåæäå âñåãî îòêëîíåíèÿìè îò íîðìû ñîäåðæàíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ èëè àíòèòåë ê ìèêðîáíûì è îïóõîëåâûì àíòèãåíàì â ñûâîðîòêå êðîâè. Ïðîòèâîîïóõîëåâûå àíòèòåëà ðàñïîçíàþò ìíîæåñòâî àíòèãåíîâ îïóõîëåâîé êëåòêè, âêëþ÷àÿ òå, êîòîðûå ðàñïîçíàþòñÿ è ñïåöèôè÷åñêèìè Ò-êëåòêàìè-êèëëåðàìè. Áèîëîãè÷åñêàÿ ôóíêöèÿ âûÿâëÿåìûõ ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë îêîí÷àòåëüíî íå óñòàíîâëåíà. Èçìåíåíèÿ êîíöåíòðàöèè íåñïåöèôè÷åñêèõ èììóíîãëîáóëèíîâ, ïðîòèâîìèêðîáíûõ àíòèòåë è äðóãèõ ôàêòîðîâ ïðîòèâîèíôåêöèîííîãî èììóíèòåòà íà ðàííèõ ýòàïàõ çàáîëåâàíèÿ, à òàêæå ðàçâèòèå íåéòðîïåíèè, èíäóöèðîâàííîé ëåéêîçíûì ïðîöåññîì è/èëè èíòåíñèâíîé ïîëèõèìèîòåðàïèåé, îïðåäåëÿþò âûñîêóþ (äî 83%) ÷àñòîòó èíôåêöèîííûõ îñëîæíåíèé ó áîëüíûõ ñ îíêîãåìàòîëîãè÷åñêîé ïàòîëîãèåé. Íèçêàÿ êîíöåíòðàöèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ è âûñîêàÿ êîíöåíòðàöèÿ ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà (ÔÍÎ-a) âëèÿþò íà èñõîä çàáîëåâàíèÿ è â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè îòðàæàþò êëèíè÷åñêîå ñîñòîÿíèå áîëüíûõ. Âàæíîñòü îöåíêè ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ó áîëüíûõ ñ îñòðûì ëåéêîçîì îïðåäåëÿåòñÿ òàêæå òåì, ÷òî èñïîëüçîâàíèå âûñîêîäîçíîé õèìèîòåðàïèè ïðèâîäèò ê ôîðìèðîâàíèþ èììóíîñóïðåññèâíîãî ñîñòîÿíèÿ, îáóñëîâëåííîãî îòñóòñòâèåì ëåéêîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè.  ñâÿçè ñ ýòèì ðîëü ôàêòîðîâ ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ðåçêî âîçðàñòàåò íà ïðîòÿæåíèè ïåðâûõ 23 ìåñÿöåâ èíòåíñèâíîé õèìèîòåðàïèè. 4 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Òàêèì îáðàçîì, èçó÷åíèå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà áîëüíûõ îñòðûì ëåéêîçîì èìååò çíà÷åíèå äëÿ îöåíêè òÿæåñòè çàáîëåâàíèÿ, à òàêæå äëÿ âûÿâëåíèÿ ðåçåðâíûõ âîçìîæíîñòåé îðãàíèçìà, ñïîñîáñòâóþùèõ ïðåäóïðåæäåíèþ ïðîãðåññèðîâàíèÿ çàáîëåâàíèÿ è ðàçâèòèÿ îñëîæíåíèé, ïðåæäå âñåãî â ïåðèîä ïðîâåäåíèÿ õèìèîòåðàïèè.  äàííûõ ìåòîäè÷åñêèõ ðåêîìåíäàöèÿõ íàìè ïðåäëàãàåòñÿ êîìïëåêñ ìåòîäîâ îöåíêè ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà, ïðåäñòàâëÿþùèõ èíòåðåñ ïðè õàðàêòåðèñòèêå ñîñòîÿíèÿ áîëüíûõ ñ îíêîãåìàòîëîãè÷åñêèìè çàáîëåâàíèÿìè. 5 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 1. ÌÅÒÎÄÛ ÎÖÅÍÊÈ ÃÓÌÎÐÀËÜÍÎÃÎ ÈÌÌÓÍÈÒÅÒÀ 1.1. Çàáîð è îáðàáîòêà êðîâè äëÿ èññëåäîâàíèÿ Âåíîçíóþ êðîâü ó áîëüíûõ áåðóò ñòåðèëüíî óòðîì íàòîùàê äî íà÷àëà õèìèîòåðàïèè. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ ñûâîðîòêè êðîâü çàáèðàþò â ïðîáèðêó áåç êîíñåðâàíòà, äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïëàçìû â ïðîáèðêó ñ ÝÄÒÀ. Îáñëåäîâàíèå äåòåé ïðîâîäèòñÿ â êîìïëåêñå ñî ñòàíäàðòíûì íàáîðîì ãåìàòîëîãè÷åñêèõ, èììóíîëîãè÷åñêèõ è äðóãèõ âèäîâ ëàáîðàòîðíûõ èññëåäîâàíèé, ïðåäóñìîòðåííûõ âûáðàííûì ïðîòîêîëîì ëå÷åíèÿ ïàöèåíòîâ.  íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ îáðàçöû ñûâîðîòêè êðîâè ïðåäâàðèòåëüíî òåðìîèíàêòèâèðóþò ïðè 56î Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. 1.2. Îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññîâ Ì, G, A â ñûâîðîòêå êðîâè Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäÿò òóðáèäèìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì ñ èñïîëüçîâàíèåì òåñò-ñèñòåìû « Turbiquant» (Behring, Ãåðìàíèÿ). Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ âûïîëíÿþò íà àíàëèçàòîðå « Turbitimer» (Behring) ïðè äëèíå âîëíû 340 íì. Êîíöåíòðàöèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ ðàññ÷èòûâàåòñÿ â àâòîìàòè÷åñêîì ðåæèìå ñ ó÷åòîì ïàðàìåòðîâ êàëèáðîâêè ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà, âêëþ÷àåìîãî â êîìïëåêò òåñò-ñèñòåì. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèé ñûâîðîòêó êðîâè ïðåäâàðèòåëüíî ðàçâîäÿò èçîòîíè÷åñêèì ðàñòâîðîì õëîðèñòîãî íàòðèÿ â ñîîòíîøåíèè 1:21. Çàòåì íåîáõîäèìûé îáúåì ðàçâåäåííîãî îáðàçöà (äëÿ IgG 20 ìêë, IgM 200 ìêë, IgA 50 ìêë) âíîñÿò â êþâåòó àíàëèçàòîðà ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïîñëå ó÷åòà ôîíîâîãî óðîâíÿ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ê îáðàçöàì äîáàâëÿþò ïî 500 ìêë ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèñûâîðîòîê ê IgM, IgG, IgA. ×åðåç 30 ñ ïðîâîäÿò ïîâòîðíîå îïðåäåëåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè. Íà îñíîâàíèè ãðàäèåíòà âåëè÷èíû îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè àâòîìàòè÷åñêè ðàññ÷èòûâàåòñÿ ïîêàçàòåëü êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâ â èññëåäóåìîì îáðàçöå (â ã/ë). 6 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Êðîìå òóðáèäèìåòðè÷åñêîãî, ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí ìåòîä èììóíîäèôôóçèè â àãàðîâîì ãåëå ñî ñïåöèôè÷åñêèìè àíòèñûâîðîòêàìè (ïî Ìàí÷èíè). 1.3. Îïðåäåëåíèå ñîäåðæàíèÿ ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäÿò ìåòîäîì êëåòî÷íîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (CELISA) ïî ìîäèôèöèðîâàííîìó ìåòîäó B. Arunachalam et al. (1990). Äëÿ ýòîãî êóëüòèâèðóåìûå in vitro Â-ëèìôîáëàñòîèäíûå êëåòêè ëèíèé Raji èëè IM-9 îòìûâàþò 0,1 ìîëü çàáóôåðåííûì ôèçðàñòâîðîì ( ÇÔÐ) (ðÍ 7,4), âíîñÿò â ëóíêè ïëîñêîäîííûõ 96-ëóíî÷íûõ ìèêðîïëàíøåò, ïðåäâàðèòåëüíî ïîêðûòûõ 1% ðàñòâîðîì áû÷üåãî ñûâîðîòî÷íîãî àëüáóìèíà (ÁÑÀ, Serva). Äëÿ îñàæäåíèÿ êëåòîê ïëàíøåòó öåíòðèôóãèðóþò ïðè 1500 îá./ìèí â òå÷åíèå 5 ìèí, ñóïåðíàòàíò çàìåùàþò ðàçâåäåííûìè (1:100) îáðàçöàìè èññëåäóåìûõ ñûâîðîòîê. Ìèêðîïëàíøåòó èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 1 ÷ ïðè 37î Ñ âî âëàæíîé àòìîñôåðå. Ñóïåðíàòàíò óäàëÿþò ìíîãîêàíàëüíîé àâòîìàòè÷åñêîé ïèïåòêîé, íåñâÿçàâøèåñÿ è íåñïåöèôè÷åñêè ñâÿçàâøèåñÿ àíòèòåëà/èììóíîãëîáóëèíû îòìûâàþò òðåõêðàòíî 0,1ìîëü ÇÔÐ ñ 0,05% Tween20 (Serva). Çàòåì â ëóíêè âíîñÿò ïî 100 ìêë ðàáî÷åãî ðàçâåäåíèÿ êîíúþãàòà (ìå÷åííûå ïåðîêñèäàçîé õðåíà êîçüè àíòèòåëà ïðîòèâ èììóíîãëîáóëèíîâ M + G + A ÷åëîâåêà), ìèêðîïëàíøåòó âíîâü èíêóáèðóþò 1 ÷ ïðè 37î Ñ. Ïîñëå îêîí÷àíèÿ èíêóáàöèè êëåòêè íà äíå ëóíîê îòìûâàþò 45 ðàç 0,1 ìîëü ÇÔÐ ñ 0,05% Tween-20, çàòåì âíîñÿò 100 ìêë ñóáñòðàòíîé ñìåñè, ñîäåðæàùåé îðòîôåíèëåíäèàìèí (ÎÔÄ), öèòðàòíûé áóôåð è Í2Î2, è èíêóáèðóþò äî 30 ìèí â òåìíîòå. Ôåðìåíòàòèâíóþ ðåàêöèþ îñòàíàâëèâàþò ïóòåì äîáàâëåíèÿ 100 ìêë 10% Í2SO4. Ó÷åò ðåàêöèè ïðîâîäÿò íà ñïåêòðîôîòîìåòðå ïðè äëèíå âîëíû 492 íì. Ðåçóëüòàòû ðåàêöèè âûðàæàþò â åäèíèöàõ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè OD492. Èññëåäîâàíèÿ êàæäîãî îáðàçöà ñûâîðîòêè êðîâè ïðîâîäÿò â äâóõ ïîâòîðàõ. 7 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 1.4. Îïðåäåëåíèå êîíöåíòðàöèè àíòèòåë ê ñòîëáíÿ÷íîìó è äèôòåðèéíîìó àíàòîêñèíó â ñûâîðîòêå êðîâè Îïðåäåëåíèå ïðîâîäÿò â ðåàêöèè ïàññèâíîé ãåìàããëþòèíàöèè (ÐÏÃÀ) ñ èñïîëüçîâàíèåì äèàãíîñòè÷åñêèõ òåñò-ñèñòåì ÍÏÊ «Ìèêðîàíàëèç» (ã. Ìîñêâà, Ðîñññèÿ) â ñîîòâåòñòâèè ñ «Èíñòðóêöèåé ïî ïðèìåíåíèþ äèàãíîñòèêóìîâ ýðèòðîöèòàðíûõ äèôòåðèéíîãî è ñòîëáíÿ÷íîãî àíòèãåííûõ (àíàòîêñèííûõ) êîíöåíòðèðîâàííûõ êîíñåðâèðîâàííûõ æèäêèõ» (Óòâåðæäåíà Äåïàðòàìåíòîì Ãîñóäàðñòâåííîãî ñàíýïèäíàäçîðà Ìèíçäðàâà ÐÔ 22 àïðåëÿ 1997 ã.). Äëÿ ýòîãî â ëóíêè êðóãëîäîííûõ ïîëèñòèðîëüíûõ 96-ëóíî÷íûõ ïëàíøåò ñ ïîìîùüþ ìèêðîòèòðàòîðà Òàêà÷è âíîñÿò ïî 25 ìêë ðàçâåäåííîé òåðìîèíàêòèâèðîâàíííîé ñûâîðîòêè, ïîëó÷àÿ ðÿä äâóêðàòíûõ åå ðàçâåäåíèé îò 1:100 äî 1:51200 ïðè îïðåäåëåíèè àíòèòåë ê äèôòåðèéíîìó àíàòîêñèíó è îò 1:40 äî 1:20480 ïðè îïðåäåëåíèè àíòèòåë ê ñòîëáíÿ÷íîìó àíàòîêñèíó. Çàòåì â ëóíêè äîáàâëÿþò ïî 25 ìêë èíäèêàòîðíûõ êîíñåðâèðîâàííûõ ýðèòðîöèòîâ, ïîêðûòûõ ñîîòâåòñòâåííî äèôòåðèéíûì èëè ñòîëáíÿ÷íûì àíàòîêñèíîì. Ìèêðîïëàíøåòû ïîêà÷èâàþò äëÿ ïåðåìåøèâàíèÿ èíãðåäèåíòîâ, èíêóáèðóþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 2 ÷. Ðåàêöèþ îöåíèâàþò êàê ïîëîæèòåëüíóþ ïðè ôîðìèðîâàíèè «êîëüöà» àããëþòèíèðîâàííûõ ýðèòðîöèòîâ íà äíå ëóíîê ìèêðîïëàíøåò, ñîîòâåòñòâóþùåãî íå ìåíåå + + ïî øêàëå + + + + ó÷åòà ðåçóëüòàòîâ ÐÏÃÀ ñîãëàñíî èíñòðóêöèè. Äàííûå, ïîëó÷åííûå â ÐÏÃÀ, ïðåäñòàâëÿþò êàê log2 ´ 10 -1 ñîäåðæàíèÿ àíòèòåë ê àíàòîêñèíàì â ñûâîðîòêàõ êðîâè îáñëåäóåìûõ äåòåé. 8 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 1.5. Îïðåäåëåíèå áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè ñûâîðîòêè êðîâè Âûÿâëåíèå àíòèáàêòåðèàëüíîé àêòèâíîñòè ñûâîðîòêè êðîâè áîëüíûõ îñòðûì ëèìôîáëàñòíûì ëåéêîçîì (ÎËË) è çäîðîâûõ äåòåé ïðîâîäèëè ïóòåì îïðåäåëåíèÿ ïðÿìîé áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè íàòèâíûõ îáðàçöîâ (áàêòåðèöèäíàÿ àêòèâíîñòü êîòîðûõ îáóñëîâëåíà èììóíîãëîáóëèíàìè è ôåðìåíòàìè, âûçûâàþùèìè ëèçèñ áàêòåðèé) è òåðìîèíàêòèâèðîâàííûõ (áàêòåðèöèäíàÿ àêòèâíîñòü îáóñëîâëåíà ïðåèìóùåñòâåííî èììóíîãëîáóëèíàìè). Èññëåäîâàíèå âûïîëíÿþò â ñòåðèëüíûõ óñëîâèÿõ ïî îïèñàííîé ðàíåå ìåòîäèêå. Äëÿ ýòîãî ïðåäâàðèòåëüíî âûðàùåííóþ è îòìûòóþ ôèçðàñòâîðîì ñóñïåíçèîííóþ êóëüòóðó St. aureus øòàìì ÀÒÑÑ 25923 (èëè äðóãîé ëàáîðàòîðíûé øòàìì) ðàçâîäÿò ïî ñòàíäàðòó ìóòíîñòè äî êîíöåíòðàöèè 1 ìëí áàêòåðèàëüíûõ òåë â 1 ìë. Çàòåì â ëóíêå ìèêðîïëàíøåòû ñìåøèâàþò ðàâíûå îáúåìû (ïî 20 ìêë) èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè êðîâè è áàêòåðèàëüíîé âçâåñè. Ñîäåðæèìîå ëóíîê ïåðåìåøèâàþò è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè 37î Ñ. Çàòåì ñîäåðæèìîå ëóíîê âíîâü ïåðåìåøèâàþò è 5 ìêë ñìåñè ïåðåíîñÿò ñòàíäàðòíîé áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé íà ÷àøêè Ïåòðè ñ ìÿñîïåïòîííûì àãàðîì, ðàñïðåäåëÿÿ ðàâíîìåðíî ïî âñåé ïîâåðõíîñòè ñåêòîðà ÷àøêè. Ïîñåâû âûæèâøèõ áàêòåðèé ïðîâîäÿò â äâóõ ïîâòîðàõ. ×àøêè Ïåòðè èíêóáèðóþò â òå÷åíèå íî÷è, çàòåì ïîäñ÷èòûâàþò êîëè÷åñòâî êîëîíèé äëÿ êàæäîãî âàðèàíòà, âêëþ÷àÿ êîíòðîëè áåç ñûâîðîòîê. Áàêòåðèöèäíîñòü ñûâîðîòêè â ïðîöåíòàõ ðàññ÷èòûâàþò ïî ôîðìóëå: (ÁÎÅêÁÎÅî) : ÁÎÅê ´ 100%, ãäå ÁÎÅê êîëè÷åñòâî âûðîñøèõ êîëîíèé (áëÿøêîîáðàçóþùèõ åäèíèö) â êîíòðîëå, ÁÎÅî êîëè÷åñòâî âûðîñøèõ êîëîíèé â ïðèñóòñòâèè èññëåäóåìûõ îáðàçöîâ ñûâîðîòêè êðîâè. 9 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 1.6. Èììóíîôåðìåíòíûé ìåòîä îïðåäåëåíèÿ ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà ÔÍÎ-a îïðåäåëÿþò ìåòîäîì èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà â ïîëèñòèðîëüíûõ ìèêðîïëàíøåòàõ (Sarstedt). Ìîíîêëîíàëüíûå àíòèòåëà (ÌÊÀ), ñïåöèôè÷íûå äëÿ ÔÍÎ-a, áûëè ëþáåçíî ïðåäîñòàâëåíû ñîòðóäíèêàìè ëàáîðàòîðèè êëåòî÷íîé è ìîëåêóëÿðíîé èììóíîëîãèè ÍÈÈ ãåìàòîëîãèè è ïåðåëèâàíèÿ êðîâè. Äëÿ ïîñòàíîâêè òåñòà ÌÊÀ ïðîòèâ ÔÍÎ-a ðàçâîäÿò 1:200 â 0,01 ìîëü ôîñôàòíîì áóôåðå c 0,15 ìîëü NaCl (0,01 ìîëü ÇÔÐ, ðÍ 7,4), âíîñÿò ïî 100 ìêë â ëóíêè ïëàíøåòû, îñòàâëÿþò ïðè + 4o C íà íî÷ü (1618 ÷). Çàòåì ëóíêè îòìûâàþò 3 ðàçà ñ ïîìîùüþ ÇÔÐ. Âñå ïîñëåäóþùèå ðàçâåäåíèÿ ñòàíäàðòà è êîíúþãàòîâ äåëàþò â òîì æå áóôåðå ñ äîáàâëåíèåì 1% ÁÑÀ (ÇÔÐ-ÁÑÀ). Äîáàâëÿþò âî âñå ëóíêè ïî 100 ìêë ÇÔÐ-ÁÑÀ äëÿ áëîêèðîâàíèÿ ìåñò íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâÿçûâàíèÿ è èíêóáèðóþò ïðè âñòðÿõèâàíèè â òå÷åíèå 30 ìèí. Ñòàíäàðò ðÔÍÎ-a (ðåêîìáèíàíòíûé, ëèîôèëèçèðîâàííûé) ðàñòâîðÿþò íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä ïðîâåäåíèåì àíàëèçà â 50 ìêë äèñòèëëèðîâàííîé âîäû (äî êîíöåíòðàöèè 80 íã/ìë), ðàçâîäÿò äî êîíöåíòðàöèè 1 íã/ìë â ÇÔÐ-ÁÑÀ è òèòðóþò îòäåëüíî äâóêðàòíûì øàãîì äî 15 ïã/ìë (7 øàãîâ).  òðè ëóíêè âìåñòî ñòàíäàðòà äîáàâëÿþò ïî 100 ìêë ÇÔÐ-ÁÑÀ (ôîíîâûé óðîâåíü). Ê îáðàçöàì èññëåäóåìîé ïëàçìû îò ïàöèåíòîâ äîáàâëÿþò îäíó äâàäöàòóþ ÷àñòü îáúåìà áóôåðà îáðàçöà (ÁÎ = 0,2 ìîëü ôîñôàòíûé áóôåð ðÍ 7,27,4, ñîäåðæàùèé 3 ìîëü NaCl), íàïðèìåð, 100 ìêë ïëàçìû + 5 ìêë ÁÎ, ïîñëå ÷åãî èõ âíîñÿò â ëóíêè. Çàòåì â ëóíêè ìèêðîïëàíøåòû âíîñÿò ãîòîâûå ðàçâåäåíèÿ ñòàíäàðòà ÔÍÎ-a è èññëåäóåìûõ îáðàçöîâ ïëàçìû (îáû÷íî 1:2) ïî 100 ìêë è èíêóáèðóþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 40 ìèí ïðè âñòðÿõèâàíèè. Ëóíêè îòìûâàþò ñ ïîìîùüþ ÇÔÐ, êàê îïèñàíî âûøå. Áèîòèíèëèðîâàííûå âòîðè÷íûå àíòèòåëà ðàçâîäÿò âÇÔÐ-ÁÑÀ äî ðàáî÷åãî ðàçâåäåíèÿ 1:3000, âíîñÿò â ëóíêè, èíêóáèðóþò, êàê îïèñàíî âûøå, çàòåì âíîâü îòìûâàþò. 10 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Êîíúþãàò ñòðåïòàâèäèí-ïîëèïåðîêñèäàçà ðàçâîäÿò 1:2000 ñ ïîìîùüþ ÇÔÐ-ÁÑÀ, èíêóáèðóþò àíàëîãè÷íûì îáðàçîì, ïîñëå ÷åãî îòìûâàþò ñ ïîìîùüþ ÇÔÐ. Ñóáñòðàòíûé áóôåð (ñîñòàâ: 0,4 ìã/ìë ÎÔÄ â 0,1 ìîëü öèòðàòíîì áóôåðå (ðÍ = 4,7), 0,01% Í2Î2) äîáàâëÿþò íà 810 ìèí ïðè 20° Ñ (100 ìêë). Íå âñòðÿõèâàÿ, îñòàíàâëèâàþò ðåàêöèþ äîáàâëåíèåì 100 ìêë 10% H2SÎ4 è ó÷èòûâàþò íà ñïåêòðîôîòîìåòðå ïðè äëèíå âîëíû 492 íì. Êîíöåíòðàöèþ ÔÍÎ-a â èññëåäóåìûõ îáðàçöàõ ïëàçìû êðîâè îïðåäåëÿþò ñ ïîìîùüþ êîìïüþòåðíîé ïðîãðàììû Microcal Origin, Ver. 3.5. ×óâñòâèòåëüíîñòü îïðåäåëåíèÿ 15 ïêã/ìë. 1.7. Îöåíêà êîíôîðìàöèîííûõ íàðóøåíèé èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G â ñûâîðîòêå êðîâè Êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G âûÿâëÿþò ïóòåì ñðàâíåíèÿ ðåçóëüòàòîâ îïðåäåëåíèÿ èõ óðîâíåé â èññëåäóåìûõ îáðàçöàõ ñûâîðîòêè êðîâè òðåìÿ ìåòîäàìè: òóðáèäèìåòðè÷åñêèì (ñì. ï.1.2), äâóöåíòðîâûì è êîíêóðåíòíûì. Êàæäûé èç ýòèõ ìåòîäîâ îñíîâàí íà âçàèìîäåéñòâèè ìîëåêóë IgG ÷åðåç ñïåöèôè÷åñêèå ìåñòà ñâÿçûâàíèÿ â îáëàñòè Fc-ôðàãìåíòîâ ñ îïðåäåëåííûìè ìîëåêóëàìè (g-ñïåöèôè÷åñêèìè àíòèòåëàìè; ïðîòåèíîì À ñòàôèëîêîêêà = ÑÏÀ). Ñîïîñòàâëåíèå ðåçóëüòàòîâ, ïîëó÷åííûõ ïðè îöåíêå ñâÿçûâàíèÿ òðåìÿ ìåòîäàìè (äâóöåíòðîâûì, êîíêóðåíòíûì è òóðáèäèìåòðè÷åñêèì), ïîçâîëÿåò âûÿâèòü êîíôîðìàöèîííûå íàðóøåíèÿ ìîëåêóë IgG ïðåæäå âñåãî â îáëàñòè Fcôðàãìåíòîâ. 11 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 1.7.1. Äâóöåíòðîâîå ñâÿçûâàíèå áåëêà À ñòàôèëîêîêêà ìîëåêóëàìè IgG ÷åëîâåêà Ìåòîä îñíîâàí íà íàëè÷èè â ìîëåêóëå IgG äâóõ ïîòåíöèàëüíûõ ó÷àñòêîâ ñâÿçûâàíèÿ ÑÏÀ â îáëàñòè êîíòàêòà ìåæäó CH2 è CH3 äîìåíàìè Fc-ôðàãìåíòà. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèÿ â ïîëèïðîïèëåíîâûå ïðîáèðêè ïîìåùàþò 0,25 ìë ðàñòâîðà ÑÏÀ (4 ìêã/ìë) â 0,05 ìîëü áîðàòíîì áóôåðå, ðÍ 8,5, è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå íî÷è ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïîñëå îêîí÷àíèÿ èíêóáàöèè ïðîáèðêè äâàæäû ïðîìûâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé, â êàæäóþ ïðîáèðêó âíîñÿò ïî 0,25 ìë 0,1 ìîëü ÇÔÐ, ñîäåðæàùåãî 1% ÁÑÀ (ÇÔÐ-ÁÑÀ). ×åðåç 1 ÷ ïðîáèðêè âíîâü äâàæäû ïðîìûâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âíîñÿò ïî 0,25 ìë (0,058 ìêã/ìë) IgG1 ÷åëîâåêà èëè èññëåäóåìûå ñûâîðîòêè êðîâè, ðàçâåäåííûå 1:4000 ÇÔÐ-ÁÑÀ, è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 1,5 ÷ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Çàòåì ðàñòâîð óäàëÿþò, ïðîáèðêè äâàæäû ïðîìûâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé, âíîñÿò ïî 200 íã êîíúþãàòà ÑÏÀ-ïåðîêñèäàçà õðåíà è âíîâü èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 1,5 ÷. Ïåðîêñèäàçíóþ àêòèâíîñòü âûÿâëÿþò ïóòåì âíåñåíèÿ ñóáñòðàòíîé ñìåñè, ñîäåðæàùåé ÎÔÄ è Í2Î2. Ó÷åò ðåàêöèè ïðîâîäÿò ñ ïîìîùüþ ñïåêòðîôîòîìåòðà ïðè äëèíå âîëíû 492 íì. Ñîäåðæàíèå IgG â èññëåäóåìûõ îáðàçöàõ îïðåäåëÿþò ïî êàëèáðîâî÷íîé êðèâîé. 12 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 1.7.2. Êîíêóðåíòíîå ñâÿçûâàíèå áåëêà À ñòàôèëîêîêêà ìîëåêóëàìè IgG ÷åëîâåêà Ìåòîä îñíîâàí íà êîíêóðåíöèè ìåæäó ìå÷åíûì IgG è ñòàíäàðòíûì îáðàçöîì IgG èëè IgG èññëåäóåìîãî îáðàçöà ñûâîðîòêè êðîâè çà ñâÿçûâàíèå ñ ÑÏÀ. Äëÿ ýòîãî â ïîëèïðîïèëåíîâûå ïðîáèðêè ñ èììîáèëèçîâàííûì ÑÏÀ, ïðèãîòîâëåííûå, êàê îïèñàíî â ï. 1.6.1, âíîñÿò ïî 0,2 ìë (0,3200 ìêã/ìë) ñòàíäàðòíîãî îáðàçöà IgG èëè îáðàçåö èññëåäóåìîé ñûâîðîòêè, ðàçâåäåííîé 1:400, è 0,05 ìë (25 íã) áèîòèíèëèðîâàííîãî IgG1 è èíêóáèðóþò â òå÷åíèå 1,5 ÷ ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïîñëå îêîí÷àíèÿ èíêóáàöèè ïðîáèðêè äâàæäû îòìûâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âíîñÿò ïî 0,25 ìë (250 íã) êîíúþãàòà ñòðåïòàâèäèíïåðîêñèäàçû, èíêóáèðóþò 1 ÷, ïðîìûâàþò è èçìåðÿþò ïåðîêñèäàçíóþ àêòèâíîñòü îáðàçöîâ, êàê îïèñàíî â ï. 2.6.1. 1.8. Îïðåäåëåíèå êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà C3c è Ñ4 â ñûâîðîòêå êðîâè Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäÿò òóðáèäèìåòðè÷åñêèì ìåòîäîì ñ èñïîëüçîâàíèåì òåñò-ñèñòåìû « Turbiquant» (Behring, Ãåðìàíèÿ). Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ ïðîâîäÿò íà àíàëèçàòîðå « Turbitimer» (Behring) ïðè äëèíå âîëíû 340 íì. Êîíöåíòðàöèÿ êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà ðàññ÷èòûâàåòñÿ â àâòîìàòè÷åñêîì ðåæèìå â ñðàâíåíèè ñî ñòàíäàðòíûì îáðàçöîì, âêëþ÷àåìûì â êîìïëåêò òåñò-ñèñòåì. 13 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Äëÿ ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèé ñûâîðîòêó êðîâè ïðåäâàðèòåëüíî ðàçâîäÿò èçîòîíè÷åñêèì ðàñòâîðîì õëîðèñòîãî íàòðèÿ â ñîîòíîøåíèè 1:21. Çàòåì íåîáõîäèìûé îáúåì ðàçâåäåííîãî îáðàçöà (äëÿ Ñ3ñ50 ìêë, Ñ4200 ìêë) âíîñÿò â êþâåòó àíàëèçàòîðà ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Ïîñëå ó÷åòà ôîíîâîãî óðîâíÿ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ê îáðàçöàì äîáàâëÿþò ïî 500 ìêë ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèñûâîðîòîê ê Ñ3ñ è Ñ4. ×åðåç 30 ñ ïðîâîäÿò ïîâòîðíîå îïðåäåëåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè. Íà îñíîâàíèè ãðàäèåíòà âåëè÷èíû îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè àâòîìàòè÷åñêè ðàññ÷èòûâàåòñÿ ïîêàçàòåëü êîíöåíòðàöèè êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà â èññëåäóåìîì îáðàçöå (â ã/ë). Äàííûå ïðåäñòàâëåíû êàê êîíöåíòðàöèÿ êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà Ñ3ñ è Ñ4 â ã/ë. Ñóììàðíóþ àêòèâíîñòü êîìïëåìåíòà ìîæíî îöåíèâàòü ñ ïîìîùüþ êëàññè÷åñêîãî ìåòîäà ïî 50% ãåìîëèçó (CH50). 14 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 2. ÈÍÒÅÐÏÐÅÒÀÖÈß ÏÎËÓ×ÅÍÍÛÕ ÄÀÍÍÛÕ È ÈÕ ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÎÅ ÇÍÀ×ÅÍÈÅ 2.1. Ñâÿçü êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâ êëàññà G c ÷àñòîòîé èíôåêöèîííûõ îñëîæíåíèé ó äåòåé ñ ÎËË Îïðåäåëåííûå íàìè ïîêàçàòåëè íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé êîíöåíòðàöèè èììóíîãëîáóëèíîâ (Ig) êëàññîâ Ì, G è À ó 46 çäîðîâûõ äåòåé â âîçðàñòå 315 ëåò ñîñòàâëÿëè 1,054±0,096 ã/ë; 9,9±0,305 ã/ë è 1,036±0,068 ã/ë ñîîòâåòñòâåííî. Ó äåòåé â âîçðàñòå îò 3 äî 17 ëåò (n = 58) ñ Âëèíåéíûì ÎËË, âêëþ÷àþùèì ïðî-Â, îáùèé (ñommon) è ïðå- èììóíîôåíîòèïè÷åñêèå âàðèàíòû ÎËË, òîëüêî êîíöåíòðàöèÿ IgG áûëà äîñòîâåðíî ïîâûøåíà (11,28±0,55 ã/ë, P = 0,03) ïî ñðàâíåíèþ ñ íîðìîé. Îáðàùàåò íà ñåáÿ âíèìàíèå òîò ôàêò, ÷òî áîëåå ÷åì ó ïîëîâèíû áîëüíûõ äåòåé óðîâåíü IgG çíà÷èòåëüíî îòëè÷àëñÿ îò ñðåäíèõ çíà÷åíèé (ðèñ. 1). Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî êîíöåíòðàöèÿ IgG ñ âûñîêîé ñòåïåíüþ äîñòîâåðíîñòè êîððåëèðîâàëà ñ êîíöåíòðàöèåé èììóíîãëîáóëèíîâ äðóãèõ êëàññîâ: IgM (R = + 0,542; Ð = 0,000005) è IgA (R = + 0,685; Ð < 0,000001). 15 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Äëÿ ïðîâåäåíèÿ êëèíèêî-ëàáîðàòîðíîãî àíàëèçà áûëî âûäåëåíî òðè ïîäãðóïïû äåòåé ñ ÎËË, ðàçëè÷àþùèõñÿ èñõîäíîé êîíöåíòðàöèåé IgG â ñûâîðîòêå êðîâè. Ó 28 áîëüíûõ êîíöåíòðàöèÿ IgG îïðåäåëÿëàñü â íîðìàëüíîì äèàïàçîíå (8,22513,35 ã/ë, ïîäãðóïïà IgGII), ó 15 áûëà ñíèæåííîé ( < 8,225 ã/ë, IgG-I) è ó 15 ïîâûøåííîé ( > 13,35 ã/ë, IgG-III). Íà ìîìåíò äèàãíîñòèêè ëåéêîçà ó àáñîëþòíîãî áîëüøèíñòâà äåòåé âñåõ âûäåëåííûõ ïîäãðóïï âûÿâëÿëèñü ïðèçíàêè èíôåêöèîííîãî ïðîöåññà ðàçíîé ñòåïåíè òÿæåñòè, êîòîðûå â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ ïðåäñòàâëÿëè ñîáîé «ìàñêè» îñòðîãî ëåéêîçà (îñòðûå âèðóñíûå çàáîëåâàíèÿ âåðõíèõ äûõàòåëüíûõ ïóòåé, ãðèïï, î÷àãîâàÿ ïíåâìîíèÿ, îñòåîìèåëèò, ëèìôàäåíèòû, áðîíõèò). Íà ôîíå èíäóêöèîííîé òåðàïèè ñ ïðèìåíåíèåì ïðåäíèçîëîíà (ïî ïðîòîêîëó ALL-BFM-90M) ó áîëüøèíñòâà áîëüíûõ ñèìïòîìû, îáóñëîâëåííûå «ìàñêàìè» ëåéêîçíîãî ïðîöåññà, èñ÷åçàëè. Ê 7-ìó äíþ ñèìïòîìû, ñâÿçàííûå ñ äåéñòâèòåëüíî èìåþùèì ìåñòî èíôåêöèîííûì ïðîöåññîì, îñòàâàëèñü òîëüêî ó 19,5% áîëüíûõ. Ïðè ýòîì â ïîäãðóïïå ñ íîðìàëüíîé èñõîäíîé êîíöåíòðàöèåé IgG (IgG-II) èíôåêöèîííàÿ ñèìïòîìàòèêà âûÿâëÿëàñü òîëüêî ó îäíîãî áîëüíîãî èç 19 (5,6%), òîãäà êàê â ïîäãðóïïàõ ñ èñõîäíî íèçêîé èëè âûñîêîé êîíöåíòðàöèåé IgG ýòè ïîêàçàòåëè çíà÷èòåëüíî âûøå: ó 4 áîëüíûõ èç 11 (36,4%, Ð = 0,03) è ó 3 èç 11 (27,3%, Ð > 0,05) ñîîòâåòñòâåííî. Íà ôîíå ïîñëåäóþùåãî ïðîâåäåíèÿ èíòåíñèâíîé ïîëèõèìèîòåðàïèè ó äåòåé âñåõ âûäåëåííûõ ïîäãðóïï ïðèìåðíî ñ îäèíàêîâîé ÷àñòîòîé ïîÿâëÿëèñü èíôåêöèîííûå îñëîæíåíèÿ, îáóñëîâëåííûå ðàçâèòèåì âòîðè÷íîãî èììóíîñóïðåññèâíîãî ñîñòîÿíèÿ. 16 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 25 Áîëüíûå 20 ×èñëî ñëó÷àåâ Êîíòðîëü 15 10 5 0 0 <4,9 5-6,9 7-8,9 IgG. ã/ë 9-10,9 11-12,9 13-14,9 15-16,9 17-18,9 Ðèñ. 1. Ðàñïðåäåëåíèå óðîâíÿ IgG ó äåòåé ñ Â-ëèíåéíûì ÎËË (n = 58) è äåòåé êîíòðîëüíîé ãðóïïû (n = 46) 17 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ >18,9 Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 2.2. Ñîäåðæàíèå êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà, ôàêòîðà íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà è óðîâåíü áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè ñûâîðîòêè êðîâè ó äåòåé ñ ÎËË Êëàññè÷åñêèå ïðåäñòàâëåíèÿ îá àêòèâàöèè êîìïëåìåíòà ïðè ëþáîì ïàòîëîãè÷åñêîì ïðîöåññå â îðãàíèçìå ÷åëîâåêà ïîäòâåðæäàþòñÿ ïðè îñòðîì ëåéêîçå. Êîíöåíòðàöèÿ Ñ3ñ è Ñ4 êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà ñîñòàâèëà ó äåòåé ñ Â-ëèíåéíûì ÎËË 1,166±0,036 ã/ë è 0,259±0,009 ã/ë ñîîòâåòñòâåííî, ÷òî çíà÷èòåëüíî âûøå, ÷åì ó çäîðîâûõ äåòåé (0,879±0,013 ã/ë è 0,178±0,006 ã/ë ñîîòâåòñòâåííî, Ð < 0,001 äëÿ îáîèõ ïîêàçàòåëåé). Ïðè ýòîì íàèáîëåå çíà÷èòåëüíàÿ àêòèâàöèÿ êîìïëåìåíòà íàáëþäàëàñü ó áîëüíûõ äåòåé ñ èñõîäíî íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèåé IgG â ñûâîðîòêå êðîâè. Íàìè ýòî ðàññìàòðèâàåòñÿ êàê ïðèçíàê àäåêâàòíîé ðåàêöèè ñèñòåìû êîìïëåìåíòà ïîä äåéñòâèåì ïðåæäå âñåãî èíôåêöèîííûõ ôàêòîðîâ. Ó äåòåé, èìåþùèõ ñíèæåííûé èëè ïîâûøåííûé óðîâåíü IgG â ñûâîðîòêå êðîâè, àêòèâàöèÿ ñèñòåìû êîìïëåìåíòà áûëà âûðàæåíà â ìåíüøåé ñòåïåíè. Áàêòåðèöèäíàÿ àêòèâíîñòü ñûâîðîòêè (ÁÀÑ) êðîâè ÿâëÿåòñÿ ðåçóëüòèðóþùèì ïàðàìåòðîì ãóìîðàëüíîãî çâåíà àíòèáàêòåðèàëüíîé çàùèòû. Îíà îïðåäåëÿåòñÿ ó÷àñòèåì ðàçëè÷íûõ áåëêîâ êðîâè èììóíîãëîáóëèíîâîé è íåèììóíîãëîáóëèíîâîé (ôåðìåíòàòèâíîé) ïðèðîäû. Íîðìàëüíûå ïîêàçàòåëè ÁÀÑ â íàøèõ óñëîâèÿõ îïðåäåëåíèÿ ñîñòàâèëè 46,0±2,5% äëÿ íàòèâíîé ñûâîðîòêè êðîâè è 43,25±3,1% äëÿ òåðìîèíàêòèâèðîâàííîé ïðè 56î Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. Íà ôîíå äîñòîâåðíîãî ïîâûøåíèÿ áàêòåðèöèäíîé àêòèâíîñòè íàòèâíûõ è òåðìîèíàêòèâèðîâàííûõ ñûâîðîòîê êðîâè áîëüíûõ ñ ÎËË ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì íàèáîëåå çíà÷èòåëüíîå óñèëåíèå áàêòåðèöèäíûõ ñâîéñòâ êðîâè (77100%) íàáëþäàëîñü â ïîäãðóïïå äåòåé ñ ÎËË, èìåþùèõ ñíèæåííóþ êîíöåíòðàöèþ IgG (ìåíåå 8,225 ã/ë).  òî æå âðåìÿ ó áîëüíûõ äåòåé ñ ïîâûøåííîé êîíöåíòðàöèåé IgG (áîëåå 13,35 ã/ë) óðîâåíü ÁÀÑ áûë íàèìåíüøèì (< 49,7%). 18 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Òàêàÿ íàïðàâëåííîñòü èçìåíåíèÿ ÁÀÑ ñûâîðîòêè êðîâè ó áîëüíûõ ñ ÎËË ñâèäåòåëüñòâóåò, âî-ïåðâûõ, î ñóùåñòâîâàíèè îáðàòíîé çàâèñèìîñòè ýòîãî ïîêàçàòåëÿ îò êîíöåíòðàöèè IgG è, âî-âòîðûõ, î êîìïåíñàòîðíîì ïîâûøåíèè ÁÀÑ ó ïàöèåíòîâ ñî ñíèæåííûì óðîâíåì IgG. Ïî-âèäèìîìó, ýòè äâà êîìïîíåíòà âçàèìíî äîïîëíÿþò äðóã äðóãà â îñóùåñòâëåíèè ïðîòèâîèíôåêöèîííîãî ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà.  òî æå âðåìÿ äîñòîâåðíîé çàâèñèìîñòè ÷àñòîòû èíôåêöèîííûõ îñëîæíåíèé îò ïîêàçàòåëåé ÁÀÑ íàìè íå âûÿâëåíî.  ïëàçìå êðîâè áîëüíûõ ñ ÎËË îáû÷íî îïðåäåëÿåòñÿ ïîâûøåííîå ñîäåðæàíèå öèòîêèíà ÔÍÎ-a, êîòîðûé ÿâëÿåòñÿ ïîêàçàòåëåì àêòèâíîãî ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà â îðãàíèçìå. Ñîäåðæàíèå ÔÍÎ-a â ïëàçìå îáñëåäîâàííûõ íàìè çäîðîâûõ äåòåé ñîñòàâëÿëî ïðèìåðíî 30 ïêã/ìë (÷òî áëèçêî ê ïðåäåëó ÷óâñòâèòåëüíîñòè ìåòîäà), òîãäà êàê ó áîëüíûõ ñ ÎËË ýòîò ïîêàçàòåëü îêàçàëñÿ ïîâûøåííûì (â ñðåäíåì â 1,5 ðàçà), îñîáåííî â ïîäãðóïïå áîëüíûõ äåòåé, èìåþùèõ âûñîêèé óðîâåíü IgG â êðîâè. Òàêîå óâåëè÷åíèå ñîäåðæàíèÿ ÔÍÎ-a îïðåäåëÿåòñÿ ðàçâèòèåì íåñïåöèôè÷åñêîé öèòîêèíîâîé ðåàêöèè, õàðàêòåðèçóþùåé àêòèâàöèþ èììóíèòåòà ïðè ëåéêîçíîì ïðîöåññå. Çàâèñèìîñòü ñîäåðæàíèÿ ÔÍÎ-a îò ñîïóòñòâóþùèõ èíôåêöèîííûõ ïðîöåññîâ íà ýòàïå ïåðâè÷íîãî âûÿâëåíèÿ ÎËË ìû ñ÷èòàåì íåçíà÷èòåëüíîé, ÷òî ïîäòâåðæäàåòñÿ äðóãèìè àâòîðàìè (Abrahamsson J. et al., 1993). 19 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé 2.3. Ñîäåðæàíèå àíòèòîêñè÷åñêèõ è ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè áîëüíûõ ñ ÎËË Èììóíèçàöèÿ äåòåé â ðàííåì âîçðàñòå îïðåäåëÿåò ðàçâèòèå ñòîéêîãî ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ê ðÿäó èíôåêöèîííûõ àãåíòîâ è èõ òîêñèíîâ. Î ñîñòîÿíèè ïîñòâàêöèíàëüíîãî èììóíèòåòà ïîçâîëÿåò ñóäèòü óðîâåíü àíòèòîêñè÷åñêèõ àíòèòåë ê äèôòåðèéíîìó è ñòîëáíÿ÷íîìó àíàòîêñèíàì. Ó äåòåé ñ ÎËË óðîâåíü ýòèõ àíòèòåë áûë çíà÷èòåëüíî ñíèæåí (3,15±0,39 è 2,07±0,27 log21 ñîîòâåòñòâåííî), ïî ñðàâíåíèþ ñ äåòüìè êîíòðîëüíîé ãðóïïû (4,72±0,34, P = 0,003 è 4,34±0,33 log21, Ð = 0,000002 ñîîòâåòñòâåííî). Òàêèå íèçêèå òèòðû ïîñòâàêöèíàëüíûõ àíòèòåë îòðàæàþò ñîñòîÿíèå èììóíîñóïðåññèè, ðàçâèâàþùåéñÿ êàê ðåçóëüòàò ïðîãðåññèðîâàíèÿ îñíîâíîãî çàáîëåâàíèÿ ó äåòåé ñ ÎËË. Íàëè÷èå ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë ê áëèçêîðîäñòâåííûì Â-êëåòî÷íûì îïóõîëåâûì ëèíèÿì Raji è IM-9 îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ ìåòîäà êëåòî÷íîãî èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (CELISA). Ïîëîæèòåëüíûìè ðåçóëüòàòàìè ñ÷èòàëè çíà÷åíèÿ, ïðåâûøàþùèå ñðåäíèé óðîâåíü ñâÿçûâàíèÿ ñ îïóõîëåâûìè êëåòêàìè ëèíèé IM-9 è Raji èììóíîãëîáóëèíîâ ñûâîðîòêè êðîâè çäîðîâûõ äåòåé êîíòðîëüíîé ãðóïïû. Ñðåäè áîëüíûõ ñ Â-ëèíåéíûìè ÎËË ïðîòèâîîïóõîëåâûå àíòèòåëà, ðåàãèðóþùèå ñ êëåòêàìè ëèíèé IM-9 è/èëè Raji, áûëè îáíàðóæåíû ó 70% äåòåé ñ íèçêèì ñîäåðæàíèåì IgG, è ó 72,7% äåòåé ñ âûñîêèì ñîäåðæàíèåì IgG, òîãäà êàê â ïîäãðóïïå äåòåé ñ íîðìàëüíûì ñîäåðæàíèåì IgG ÷àñòîòà âûÿâëåíèÿ ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë ñîñòàâëÿëà 28,6%. 20 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Âûÿâëåííûå ðàçëè÷èÿ ïðåäñòàâëÿþò èíòåðåñ ïðåæäå âñåãî â ñâÿçè ñ ðàçëè÷íûì ñîäåðæàíèåì ëåéêîçíûõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ó äåòåé ñîïîñòàâëÿåìûõ ïîäãðóïï. Êàê ñëåäóåò èç ïðåäñòàâëåííûõ â òàáë. 1 äàííûõ, íèçêàÿ êîíöåíòðàöèÿ IgG ó áîëüíûõ ÎËË àññîöèèðóåòñÿ ñ áîëåå âûñîêèì ñîäåðæàíèåì îïóõîëåâûõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè. Èìåííî â ýòîé ïîäãðóïïå áîëüíûõ ïðîòèâîîïóõîëåâûå àíòèòåëà âûÿâëÿþòñÿ íàèáîëåå ÷àñòî. Íîðìàëüíàÿ êîíöåíòðàöèÿ IgG àññîöèèðóåòñÿ ñ íàèáîëåå íèçêèì ñîäåðæàíèåì îïóõîëåâûõ êëåòîê. Êàê îòìå÷àëîñü âûøå, â ýòîé ïîäãðóïïå áîëüíûõ ÷àñòîòà îáíàðóæåíèÿ ïðîòèâîîïóõîëåâûõ àíòèòåë ñàìàÿ íèçêàÿ. Íàäî îòìåòèòü, ÷òî âî âñåõ ïîäãðóïïàõ, ñôîðìèðîâàííûõ â çàâèñèìîñòè îò êîíöåíòðàöèè IgG â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, çíà÷åíèÿ ïðîöåíòíîãî ñîäåðæàíèÿ áëàñòíûõ êëåòîê â êîñòíîì ìîçãå ïðàêòè÷åñêè íå ðàçëè÷àþòñÿ è îáû÷íî îïðåäåëÿþòñÿ íà óðîâíå âûøå 80%. 2.4. Ñòðóêòóðíî-ôóíêöèîíàëüíûå íàðóøåíèÿ ìîëåêóë IgG â ñûâîðîòêå êðîâè ó äåòåé ñ ÎËË Îäíèì èç ñîâðåìåííûõ ïîäõîäîâ ê îöåíêå íàðóøåíèé ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ ÿâëÿåòñÿ èçó÷åíèå êîíôîðìàöèîííûõ íàðóøåíèé ìîëåêóë ñûâîðîòêè êðîâè. Ïîýòîìó ìû ïðåäëàãàåì èñïîëüçîâàòü îöåíêó ñòðóêòóðû ìîëåêóë IgG c ïîìîùüþ ðàçëè÷íûõ çîíäîâ, ñâÿçûâàþùèõñÿ ñ Fc-ó÷àñòêîì ìîëåêóëû IgG. Ïðè ýòîì î íàëè÷èè àáåððàíòíûõ ìîëåêóë ñâèäåòåëüñòâóåò âûÿâëåíèå áîëåå ÷åì äâóêðàòíîé ðàçíèöû ìåæäó çíà÷åíèÿìè, ïîëó÷åííûìè ïðè îïðåäåëåíèè êîíöåíòðàöèè IgG ðàçíûìè ìåòîäàìè, à î íàëè÷èè ãîìîãåííûõ ìîëåêóë îòñóòñòâèå ðàçíèöû íà 50% è áîëåå. Èñïîëüçóÿ ýòîò ïîäõîä, íàì íå óäàëîñü íàéòè äîñòîâåðíûõ ðàçëè÷èé ìåæäó ñîäåðæàíèåì àáåððàíòíûõ ìîëåêóë IgG ó äåòåé ñ ÎËË è ñîäåðæàíèåì àáåððàíòíûõ ìîëåêóë IgG ó çäîðîâûõ äåòåé êîíòðîëüíîé ãðóïïû. Ïðè ýòîì â ïîäãðóïïå áîëüíûõ ñ âûñîêîé èñõîäíîé êîíöåíòðàöèåé IgG â ñûâîðîòêå êðîâè (> 13,35 ã/ë) àáåððàíòíûå ìîëåêóëû IgG íå áûëè îáíàðóæåíû. 21 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Ãîìîãåííûå ôîðìû IgG ïðè ÎËË âñòðå÷àëèñü â 3 ðàçà ÷àùå (Ð = 0,025), ÷åì ó çäîðîâûõ äåòåé. Íàèáîëåå ÷àñòî îíè âûÿâëÿëèñü ó äåòåé ñ ÎËË, èìåþùèõ íèçêóþ êîíöåíòðàöèþ IgG. Ãîìîãåííûå ôîðìû IgG áûëè âûÿâëåíû áîëåå ÷åì ó 50% áîëüíûõ äåòåé ýòîé ïîäãðóïïû, â òî âðåìÿ êàê ó çäîðîâûõ äåòåé ñ íèçêèì óðîâíåì IgG îíè íå âñòðå÷àëèñü. Ïðèðîäà àáåððàíòíûõ è ãîìîãåííûõ ôîðì IgG îêîí÷àòåëüíî íå ÿñíà. Âûÿâëÿåìûå èçìåíåíèÿ èõ ñîäåðæàíèÿ ïðè ÎËË ìîãóò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î ðàçëè÷íûõ òèïàõ íàðóøåíèÿ ñòðóêòóðû ìîëåêóë IgG íà ïîñòòðàíñëÿöèîííîì óðîâíå. Ñëåäîâàòåëüíî, ñíèæåíèå ÷àñòîòû àáåððàíòíûõ ìîëåêóë ó äåòåé ñ âûñîêèì óðîâíåì IgG è âîçðàñòàíèå ÷àñòîòû ãîìîãåííûõ ìîëåêóë ó äåòåé ñ íèçêèì óðîâíåì IgG îòðàæàåò ñòåïåíü íàðóøåíèÿ ìåòàáîëèçìà èììóíîãëîáóëèíîâ ïðè ÎËË ó äåòåé. 22 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Òàáëèöà 1 Êîëè÷åñòâî ëåéêîçíûõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè äåòåé ñ Â-ëèíåéíûì ÎËË, èìåþùèõ ðàçëè÷íûé óðîâåíü IgG â êðîâè Ïîêàçàòåëü Êîëè÷åñòâî ëåéêîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (´ 1000/ìì3) Ñîäåðæàíèå áëàñòíûõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (%) Àáñîëþòíîå ñîäåðæàíèå áëàñòíûõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (´ 1000/ìì3) Çíà÷åíèÿ ïîêàçàòåëÿ â çàâèñèìîñòè îò óðîâíÿ IgG â ñûâîðîòêè êðîâè * IgG-I (n = 15) IgG-II (n = 28) IgG-III (n = 15) 17,1 (2,181,1) 4,95 (1,676,2) 9,7 (1,585) 63 (091) 11,5 (090) 37 (095) 10,2 (073,8) 0,51 (067,8) 3,6 (073,9) *äàííûå ïðåäñòàâëåíû êàê ìåäèàíà è äèàïàçîí ìèíèìàëüíûõ è ìàêñèìàëüíûõ çíà÷åíèé 23 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé ÇÀÊËÞ×ÅÍÈÅ Êàê èçâåñòíî, îöåíêà ñîñòîÿíèÿ áîëüíîãî ñ îñòðûì ëåéêîçîì íà÷èíàåòñÿ ñ ìîðôîëîãè÷åñêîé, öèòîõèìè÷åñêîé è ôåíîòèïè÷åñêîé õàðàêòåðèñòèêè ëåéêîçíûõ êëåòîê, ðåçóëüòàòû êîòîðîé ÿâëÿþòñÿ îïðåäåëÿþùèìè äëÿ óñòàíîâëåíèÿ äèàãíîçà è íàçíà÷åíèÿ àäåêâàòíîãî ïðîòîêîëà òåðàïèè. Ïðè âûáîðå èíäèâèäóàëüíîé òàêòèêè ëå÷åíèÿ áîëüíîãî ó÷èòûâàåòñÿ è ðÿä ïðîãíîñòè÷åñêèõ ôàêòîðîâ, êîòîðûå ïîçâîëÿþò îòíåñòè äàííîãî áîëüíîãî ê òîé èëè èíîé ãðóïïå ðèñêà (ñòàíäàðòíîãî, ïðîìåæóòî÷íîãî, âûñîêîãî). Ïåðå÷åíü ïðîãíîñòè÷åñêèõ ôàêòîðîâ, îñíîâàííûõ íà èçó÷åíèè áèîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ ëåéêîçíûõ êëåòîê è îòâåòà îðãàíèçìà áîëüíîãî íà ëåéêîçíûé ïðîöåññ, â íàñòîÿùåå âðåìÿ ðàñøèðÿåòñÿ. Ýòè ôàêòîðû âëèÿþò íà òÿæåñòü òå÷åíèÿ çàáîëåâàíèÿ, ÷àñòîòó ðàçâèòèÿ îñëîæíåíèé â ïåðèîä åãî ëå÷åíèÿ, ýôôåêòèâíîñòü õèìèîòåðàïèè, äëèòåëüíîñòü íåéòðîïåíèè, âåðîÿòíîñòü ðåöèäèâîâ è âûæèâàåìîñòü. 24 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé Èììóííûé íàäçîð ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ îñóùåñòâëÿåòñÿ êàê êëåòî÷íûìè, òàê è ãóìîðàëüíûìè ìåõàíèçìàìè.  óñëîâèÿõ ïîäàâëåíèÿ êëåòî÷íîãî èììóíèòåòà, âûçâàííîãî ëåéêîçíûì ïðîöåññîì è ïîñëåäóþùåé öèòîðåäóêòèâíîé õèìèîòåðàïèåé, çíà÷åíèå ôàêòîðîâ ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ðåçêî âîçðàñòàåò. Èìåííî ïîýòîìó ìû îáðàùàåì âíèìàíèå íà õàðàêòåðèñòèêó ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà (ïðåæäå âñåãî íåñïåöèôè÷åñêîãî) ó áîëüíûõ îñòðûì ëåéêîçîì. Ðîëü ðàçëè÷íûõ åãî êîìïîíåíòîâ ïðåäñòàâëÿåòñÿ âàæíîé íà ðàçëè÷íûõ ýòàïàõ ðàçâèòèÿ ëåéêîçíîãî ïðîöåññà. Îäíà èõ ÷àñòü (àêòèâíîñòü êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà, áàêòåðèöèäíàÿ àêòèâíîñòü ñûâîðîòêè êðîâè, àíòèòîêñè÷åñêèå àíòèòåëà) èìååò îòíîøåíèå ê èíôåêöèîííûì îñëîæíåíèÿì, êîòîðûå ÷àñòî ðàçâèâàþòñÿ íà ôîíå èíòåíñèâíîé õèìèîòåðàïèè è ÿâëÿþòñÿ âåäóùåé ïðè÷èíîé ëåòàëüíûõ èñõîäîâ íà íà÷àëüíûõ ýòàïàõ ëå÷åíèÿ. Äðóãàÿ ÷àñòü êîìïîíåíòîâ ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà (ïðîòèâîîïóõîëåâûå àíòèòåëà, íîðìàëüíûå èììóíîãëîáóëèíû) ó÷àñòâóåò â ïðîòèâîîïóõîëåâîé çàùèòå. Äåéñòâèå ìíîãèõ ôàêòîðîâ ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà íåñïåöèôè÷íî. Òàêèå ôàêòîðû, êàê öèòîêèíû (âêëþ÷àÿ ÔÍÎa), èììóíîãëîáóëèíû, êîìïëåìåíò, èìåþò îòíîøåíèå ê èììóííîé ðåàêòèâíîñòè ïðè ïàòîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ êàê èíôåêöèîííîãî, òàê è íåèíôåêöèîííîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. Îòðàæåíèåì íàðóøåíèÿ ìåòàáîëèçìà èììóíîãëîáóëèíîâ ïðè òÿæåëîì ïàòîëîãè÷åñêîì ïðîöåññå ÿâëÿþòñÿ îáíàðóæèâàåìûå êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ ìîëåêóë IgG. 25 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïî îöåíêå ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ ó äåòåé  êà÷åñòâå îäíîãî èç âåäóùèõ ïîêàçàòåëåé ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà ïðè îñòðîì ëåéêîçå ó äåòåé íàìè ïðåäëàãàåòñÿ óðîâåíü ñûâîðîòî÷íîãî èììóíîãëîáóëèíà êëàññà G. Êàê îêàçàëîñü, äåòè ñ èçìåíåííîé ïî ñðàâíåíèþ ñ íîðìîé êîíöåíòðàöèåé IgG â ñûâîðîòêå êðîâè (ïîâûøåííîé èëè ñíèæåííîé) îòëè÷àþòñÿ îò äåòåé ñ íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèåé IgG áîëåå âûñîêèì ñîäåðæàíèåì ëåéêîçíûõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè íà ìîìåíò äèàãíîñòèêè çàáîëåâàíèÿ, à òàêæå áîëåå âûñîêîé ÷àñòîòîé ñîïóòñòâóþùèõ èíôåêöèîííî-âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ, âûÿâëÿåìûõ äî íà÷àëà èíòåíñèâíîé ïîëèõèìèîòåðàïèè.  ýòèõ æå ïîäãðóïïàõ äåòåé (ñ ïîâûøåíèåì èëè ñíèæåíèåì êîíöåíòðàöèè IgG) âûÿâëÿþòñÿ çíà÷èòåëüíûå îòêëîíåíèÿ îò íîðìû è äðóãèõ ïîêàçàòåëåé ãóìîðàëüíîãî èììóíèòåòà (IgM, IgA, áàêòåðèöèäíàÿ àêòèâíîñòü ñûâîðîòêè êðîâè, àíòèòîêñè÷åñêèå è ïðîòèâîîïóõîëåâûå àíòèòåëà, ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëåé àëüôà, êîíôîðìàöèîííûå èçìåíåíèÿ ìîëåêóë IgG). Ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î öåëåñîîáðàçíîñòè ó÷åòà êîíöåíòðàöèè IgG â ñûâîðîòêå êðîâè êàê îäíîãî èç ôàêòîðîâ ðèñêà ïðè îïðåäåëåíèè ïðîãíîçà îñòðîãî ëåéêîçà ó äåòåé. Îáû÷íî ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî èììóíîëîãè÷åñêèå ôàêòîðû çàùèòû ïðè îñòðûõ ëåéêîçàõ îïðåäåëÿþò òÿæåñòü è ðàñïðîñòðàíåííîñòü çàáîëåâàíèÿ, à èñõîä çàáîëåâàíèÿ è âîçìîæíîñòü ðåöèäèâîâ ñâÿçàíû ñ áèîëîãè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè âûæèâøèõ ëåéêîçíûõ êëåòîê. Ïðîñëåæåííûå íàìè è äðóãèìè àâòîðàìè (Welch J.C., Lilleyman L.S., 1995) îòäàëåííûå ðåçóëüòàòû ëå÷åíèÿ äåòåé ñ ÎËË ïîêàçûâàþò, ÷òî èñõîä çàáîëåâàíèÿ ìîæåò â îïðåäåëåííîé ñòåïåíè çàâèñåòü è îò èñõîäíîé êîíöåíòðàöèè IgG. Âûæèâàåìîñòü äåòåé, èìåþùèõ íèçêóþ èëè âûñîêóþ êîíöåíòðàöèþ IgG, õóæå, ÷åì âûæèâàåìîñòü äåòåé ñ åãî íîðìàëüíîé êîíöåíòðàöèåé. Ýòè äàííûå çàñòàâëÿþò îáðàòèòü áîëåå ïðèñòàëüíîå âíèìàíèå íà ðîëü ãóìîðàëüíûõ ôàêòîðîâ â ïðîòèâîîïóõîëåâîì èììóíèòåòå è êîíòðîëå èíôåêöèîííûõ îñëîæíåíèé, êîòîðàÿ îïðåäåëÿåò èõ çíà÷åíèå äëÿ áëèæàéøèõ è îòäàëåííûõ ðåçóëüòàòîâ ëå÷åíèÿ îñòðûõ ëåéêîçîâ. 26 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
