МИКРОБИОЦЕНОЗ ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗАХ И ГЕПАТОЗАХ У ПАСЮКОВ Сушкова М

МИКРОБИОЦЕНОЗ ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗАХ И ГЕПАТОЗАХ У ПАСЮКОВ
Сушкова М.А., Юшковская Ю.М.,
Научные руководители: доцент, к.б.н. Макаров А.В., ст.преподаватель Счисленко С.А.
ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»,
г. Красноярск, Россия
Крыса - один из древнейших соседей человека. Эти животные распространены по всему
миру.
К крысам в разных странах относились по-разному, например, в Европе крысы считались
дьявольскими созданиями, а в Китае, наоборот, всегда пользовались уважением. В последнее
время крысы приобретают всё большую популярность, все больше людей выбирают этих
интересных зверьков в качестве домашних любимцев.
Очень популярны пасюки и, крысы вообще, в качестве лабораторных животных, на которых
проводятся всевозможные научных экспериментов в биологии, медицине, психологии и как
модельные животные, поскольку они быстро плодятся в неволе и быстро достигают половой
зрелости. К тому же, имеются данные, свидетельствующие о схожести некоторых
физиологических процессах, происходящих в организме человека и крысы, поэтому эти
животные используются в качестве биологической модели для изучения изменений,
происходящих в организме человека под влиянием различных условий.
Организм животных является не только сложнейшим комплексом органов и систем,
функционирующих в строгом взаимодействии, но и одновременно служит вместилищем
огромного количества микроорганизмов различных видов. При этом возникшее в процессе
эволюции совместное существование макро- и микроорганизмов в физиологических
условиях не причиняет организму хозяина каких-либо неудобств. Эти постоянно
обнаруживаемые у здоровых животных микроорганизмы поддерживают биохимическое,
метаболическое и иммунное равновесие макроорганизма, необходимое для сохранения его
здоровья.
В поддержании нормального физического состояния организма, а также в процессах
пищеварения значительную роль играет микрофлора кишечника. В современном
представлении, кишечная микрофлора является важной составляющей организма хозяина,
которая осуществляет в нем многие физиологические процессы и непременно реагирует на
какие-либо внутрисистемные изменения. В связи этим встает вопрос об изучении
изменений микрофлоры желудочно-кишечного тракта под влиянием различных
патологических процессов. Поэтому цель наших исследований - изучение микробиоценоза
прямой кишки помесных пасюков при некоторых заболеваниях (дизбактериозах и
гепатозах).
Объектами исследований служили помесные пасюки:
− без видимых клинических нарушений;
− с признаками дисбактериоза;
− с клиническими и ультрасонографическими признаками гепатоза.
Микробиологическому анализу подвергали кал животных. Исследования проводились на 3
группах помесных пасюков. В первую опытную группу входили животные с симптомами
синдрома избыточного бактериального роста (n=7), во вторую – с признаками гепатоза (n=3).
Контролем служили клинически здоровые крысы (n=15)
Работа проводилась на базе кафедры микробиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы с
основами стандартизации продуктов животноводства и НИИЦ КрасГАУ.
Кал отбирали в стерильную емкость из прямой кишки.
После забора материал доставлялся в лабораторию, в течение двух часов. После доставки из
него готовилось разведение 10-1. Из первого разведения проводили дальнейшие разведения
до 10-10 и посев на хлор-магниевую среду в количестве 1 мл для накопления патогенной
микрофлоры.
Из разведений 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 и 10-6 проводился посев на среды Плоскирева, Эндо, на 5%й кровяной агар, азидную среду для определения энтерококков, среду Кандида и
сывороточный БФ агар для определения грибов, в количестве 0,05 мл с последующим
растиранием шпателем. Из разведений 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 производился посев в
количестве 1 мл на Лактоагар глубинным методом. Из этих же разведений для определения
бифидобактерий проводили посев на гидрализатно-молочную среду в количестве 1 мл на
дно пробирки, покрытой 2 см3 стерильным вазелиновым маслом.
Все питательные седы, подвергали инкубации: среды Плоскирева, Эндо, хлор-магниевую 24
ч при температуре 37оС, среды Кандидо и сывороточный БФ агар при температуре 24оС 5
дней, гидрализатно-молочную среду при температуре 37оС 5 дней, лактоагар – при 37оС 4
дня, 5%-й кровяной агар, азидную среду при температуре 37оС 48 ч.
С хлор-магниевой среды проводили посев петлей на висмут-сульфитный агар, который
подвергали инкубации при температуре 37оС 48 часов. При наличии роста на среде колоний
типичных или атипичных для рода Salmonella проводили типизацию.
С культур, выросших на гидрализатно-молочной среде и лактоагаре делались мазки со всех
колоний и окрашивались по Граму. Микроорганизмы, выросшие на гидрализатно-молочной
среде, имели вид тонких грамположительных прямых или слегка изогнутых палочек,
вследствие чего они были отнесены к роду Bifidobacterium. Микроорганизмы, выросшие на
лактоагаре,
представляли
собой
неспорообразующие
грамположительные
каталазоотрицательные палочки и были отнесены к роду Lactobacillus.
С остальных сред отбирались колонии, схожие по культуральным свойствам, после чего
каждой колонии присваивался номер и производился пересев на скошенный мясо-пептонный
агар, который подвергался инкубации при температуре 37оС 24 часа.
Затем
был произведен пересев со скошенного мясо-пептонного агара на среды
Олькеницкого, Гисса, Кларка, Козера, 2-%-ю пептонную воду, фенилаланинагар,
лизиндекарбоксилазную и орнитиндекарбоксилазную среды
для определения
биохимической активности микроорганизмов. Все среды подвергались инкубации, после
которой проводился учет биохимических реакций.
После проведенных исследований выяснилось, что количество Escherichia coli при
дисбактериозе возрастает в 16,2 раза, тогда как ее количество при гепатозе возрастает в 5,26
раза. Общее количество бактерий рода Klebsiella при дисбактериозе увеличилось в 54,34 раза
(Klebsiella aranae – в 76,99; Klebsiella pneumonia – в 15,23; Klebsiella rhinoschleromatis – в 71,
65). При гепатозе общее количество микроорганизмов данного рода так же увеличивается (в
410,86 раз), но количество Klebsiella pneumonia уменьшается в 1,46 раз. При дисбактериозах
и гепатозах происходит увеличение общего числа микроорганизмов рода Proteus в 10,88 и
10,41 раз соответственно (Proteus mirabilis - в 4,4*102 и 0,7*102 раз, Proteus rettgeri - в 19,6 и
1,84 раз, количество Proteus vulgaris при дисбактериозах возрастает в 1,45 раз, при гепатозах
не обнаружен). Бактерии рода Citrobacter увеличивают свое общее количество в 1,6*104 раза
при дисбактериозах и в 0,007*102 при гепатозах. Следует обратить внимание на резкое
увеличение количества микроорганизмов рода Enterococcus – в 5,3*105 раз. При гепатозах
число микроорганизмов этого рода возрастает в 1,05 раз, причем количество Enterococcus
faecalis наоборот, уменьшается в 2,36 раза. Staphylococcus epidermidis увеличиват свое
содержание в 41,86 раз при дисбактериозах и в 1,6 раз при гепатозах. Количество
Enterobacter aerogenes возрастает в 6,8 и в 1,04 раза.
Одновременно происходит уменьшение количества лакто- и бифидофлоры. Содержание
лактофлоры при дисбактериозах снижается в 705, 12 раз, при гепатозах – 2,84 раза,
бифидобактерий – в 4,7*103 и 0,76*103 раз соответственно.
Анализ полученных данных, свидетельствует о том, что при дисбактериозах и гепатозах
происходит резкое снижение количества анаэробной нормофлоры и увеличение числа
условно-патогенных микроорганизмов.
Список литературы:
1. Богданова Е.А., Несвижский Ю.В. Состав пристеночного микробиоценоза при
дисбактериозах// Науки о человеке: материалы VIII конгресса молодых ученых и
специалистов, Томск, 17 – 18 мая, 2007 г, С. 172 – 173.
2. Бабин В.Н, Минушкин О.Н., Дубинин А.В и др. Молекулярные аспекты симбиоза в
системе хозяин-микрофлора. Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1998; 6: 7682.
3. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Богданова Е.А., Корнеев М.Л. Исследование
пристеночной микрофлоры кишечника крыс// Журнал микробиологии, 2005, №3, С. 61 – 65.
4. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Богданова Е.А., Корнеев М.Л. Особенности
микробиоценоза пристеночного муцина желудочно-кишечного тракта крыс// Журнал
микробиологии, 2005, №6, С.3 – 7.
5. Дубинин А.В., Бабин В.Н., Раевский П.М. Трофические и регуляторные связи
макроорганизма и микрофлоры. Клин. мед. 1991; 7: 24-8.