117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6 Тел./факс +7 (495) 980-45-55 Е-mail: [email protected] www.dna-technology.ru Комплект реагентов для проведения ПЦР-амплификации ДНК возбудителя туляремии (Francisella tularensis) Формат «Flash» Состав набора (на 50 определений): Реактив Смесь для амплификации, запечатанная парафином Раствор Taq-полимеразы ПЦР-буфер Минеральное масло Положительный контрольный образец «К+» Количество 50 пробирок 1 пробирка 1 пробирка 1 пробирка 1 пробирка 20 мкл 500 мкл 200 мкл 1,0 мл 75 мкл Инструкция по применению 1. Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции 1.1. Промаркируйте пробирки с запечатанной парафином смесью для амплификации (с учётом пробирок для отрицательного контрольного образца – «K–», положительного контрольного образца – «K+»). Также необходимо промаркировать дополнительно две пробирки («ФОН») для контроля фона флуоресценции. 1.2. Добавьте в каждую пробирку (кроме пробирок «ФОН»), не повреждая слой парафина, по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы. В пробирки, маркированные «ФОН», добавьте по 10 мкл ПЦР-буфера. 1.3. Добавьте в каждую пробирку по 1 капле минерального масла. 1.4. Добавьте в каждую пробирку, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл препарата ДНК (кроме пробирок «K–», «K+», «ФОН»). В пробирки, маркированные «K–» и «ФОН», внесите 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего пробоподготовку, в пробирку, маркированную «K+», внесите 5,0 мкл положительного контрольного образца. 1.5. Центрифугируйте пробирки при 1000 об/мин в течение 3–5 сек. 1.6. Установите все пробирки в амплификатор и проведите ПЦР в режиме, приведенном в таблицах 1 и 2, с учётом объёма реакционной смеси 35 мкл. При использовании амплификатора «Терцик» необходимо выбрать алгоритм регулирования «Точный». Таблица 1 Режим амплификации № п.п. 1 Для амплификаторов с активным регулированием Время Температура, °С мин сек 94,0 1 00 Количество циклов 1 2 94,0 67,0 0 0 5 15 5 3 94,0 67,0 0 0 1 15 40 4 10,0 … … Хранение Таблица 2 Режим амплификации № п.п. 1 Для амплификаторов без активного регулирования Время Температура, °С мин сек 94,0 1 00 Количество циклов 1 2 94,0 67,0 0 0 50 50 45 3 10,0 … … Хранение 2. Регистрация и учёт результатов ПЦР Детекция и учёт результатов осуществляются с помощью ПЦР-детектора «Джин» согласно инструкции к прибору. Пороговые значения для специфического продукта составляют 1,75-2,10; для внутреннего контроля2,50. Условия хранения и эксплуатации Комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК следует хранить в темном месте при температуре 2-8 С в течение всего срока годности. Срок годности комплекта – 9 месяцев с даты изготовления. По вопросам, касающимся качества комплекта реагентов для проведения ПЦР-амплификации ДНК возбудителя туляремии (Francisella tularensis), следует обращаться к официальному представителю производителя по адресу: ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, Тел./факс +7 (495) 980-45-55, Е-mail: [email protected], www.dna-technology.ru Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»: http://www.dna-technology.ru/support/ Номер: 217 13.08.12 117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6 Тел./факс +7 (495) 980-45-55 Е-mail: [email protected] www.dna-technology.ru Комплект реагентов для проведения ПЦР-амплификации ДНК возбудителя туляремии (Francisella tularensis) Формат «Flash» Состав набора (на 50 определений): Реактив Смесь для амплификации, запечатанная парафином Раствор Taq-полимеразы ПЦР-буфер Минеральное масло Положительный контрольный образец «К+» Количество 50 пробирок 1 пробирка 1 пробирка 1 пробирка 1 пробирка 20 мкл 500 мкл 200 мкл 1,0 мл 75 мкл Инструкция по применению 1. Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции 1.1. Промаркируйте пробирки с запечатанной парафином смесью для амплификации (с учётом пробирок для отрицательного контрольного образца – «K–», положительного контрольного образца – «K+»). Также необходимо промаркировать дополнительно две пробирки («ФОН») для контроля фона флуоресценции. 1.2. Добавьте в каждую пробирку (кроме пробирок «ФОН»), не повреждая слой парафина, по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы. В пробирки, маркированные «ФОН», добавьте по 10 мкл ПЦР-буфера. 1.3. Добавьте в каждую пробирку по 1 капле минерального масла. 1.4. Добавьте в каждую пробирку, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл препарата ДНК (кроме пробирок «K–», «K+», «ФОН»). В пробирки, маркированные «K–» и «ФОН», внесите 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего пробоподготовку, в пробирку, маркированную «K+», внесите 5,0 мкл положительного контрольного образца. 1.5. Центрифугируйте пробирки при 1000 об/мин в течение 3–5 сек. 1.6. Установите все пробирки в амплификатор и проведите ПЦР в режиме, приведенном в таблицах 1 и 2, с учётом объёма реакционной смеси 35 мкл. При использовании амплификатора «Терцик» необходимо выбрать алгоритм регулирования «Точный». Таблица 1 Режим амплификации № п.п. 1 Для амплификаторов с активным регулированием Время Температура, °С мин сек 94,0 1 00 Количество циклов 1 2 94,0 67,0 0 0 5 15 5 3 94,0 67,0 0 0 1 15 40 4 10,0 … … Хранение Таблица 2 Режим амплификации № п.п. 1 Для амплификаторов без активного регулирования Время Температура, °С мин сек 94,0 1 00 Количество циклов 1 2 94,0 67,0 0 0 50 50 45 3 10,0 … … Хранение 2. Регистрация и учёт результатов ПЦР Детекция и учёт результатов осуществляются с помощью ПЦР-детектора «Джин» согласно инструкции к прибору. Пороговые значения для специфического продукта составляют 1,75-2,10; для внутреннего контроля2,50. Условия хранения и эксплуатации Комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК следует хранить в темном месте при температуре 2-8 С в течение всего срока годности. Срок годности комплекта – 9 месяцев с даты изготовления. По вопросам, касающимся качества комплекта реагентов для проведения ПЦР-амплификации ДНК возбудителя туляремии (Francisella tularensis), следует обращаться к официальному представителю производителя по адресу: ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, Тел./факс +7 (495) 980-45-55, Е-mail: [email protected], www.dna-technology.ru Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»: http://www.dna-technology.ru/support/ Номер: 217 13.08.12