полная инструкция - ДНК

Изучите полную инструкцию перед началом работы
117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6
Тел./факс +7 (495) 980-45-55
Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15
(звонок по России бесплатный)
E-mail: hotline@dna-technology.ru,
www.dna-technology.ru
Только для научноисследовательских целей
Набор реагентов для выявления
условно-патогенных микроорганизмов полости рта
методом ПЦР в режиме реального времени
(ПародонтоСкрин)
Информация о наборе
Назначение:
Набор реагентов «ПародонтоСкрин» предназначен для выявления условно-патогенных микроорганизмов полости
рта методом ПЦР в режиме реального времени.
Метод:
Полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени.
Материал для исследования:
зубные отложения, десневая жидкость.
Выделение ДНК:
Рекомендуются комплекты реагентов для выделения нуклеиновых кислот ПРОБА-ГС-ПЛЮС, ПРОБА-НК-ПЛЮС
(ООО «НПО ДНК-Технология»).
Особенности набора:
Внутренний контрольный образец (ВК)– необходим для контроля прохождения полимеразной цепной реакции.
КВМ – требуется для анализа качества выделения и позволяет определить, достаточно ли полученного
количества ДНК для проведения анализа.
Приборное обеспечение:
Амплификаторы детектирующие (ООО «НПО ДНК-Технология») ДТлайт1, ДTпрайм2 и ДТ-96; версия программного
обеспечения не ниже 7.6.5.12
Время проведения анализа (с учётом пробоподготовки):
от 4 ч.
Количество определений:
24
Состав набора:




1
2
Реактив
Смесь для амплификации, запечатанная парафином
Раствор Taq–полимеразы
Минеральное масло
Положительный контрольный образец («К+»)
– только модели 4S1; 4S2; 5S1; 5S2; 6S1; 6S2
– только модели 4M1; 4M3; 4M6; 5M1; 5M3; 5M6; 6M1; 6M3; 6M6
20 мкл
480 мкл
960 мкл
150 мкл
Количество
24 стрипа по 8 пробирок
4 пробирки
4 пробирки
1 пробирка
Изучите полную инструкцию перед началом работы
Состав стрипов ПародонтоСкрин, цветовая маркировка и каналы детекции продуктов амплификации
Hex
Rox
Цветовая
маркировка
буфера
ВК
-
Голубой
ВК
-
ВК
ВК
ВК
-
6
Общая бактериальная масса
Actinobacillus
actinomycetemcomitans
Porphyromonas gingivalis
Prevotella intermedia
Tannerella forsythensis (Bacteroides
forsythus)
Treponema denticola
ВК
-
7
Candida albicans
ВК
-
8
КВМ
ВК
-
Канал детекции
№
пробирки
1
2
3
4
5
Fam
Маркер
Бесцветный
Проведение анализа
1.
Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции
1.1.
Промаркируйте по одному стрипу со смесями для амплификации для каждого исследуемого образца,
отрицательного контрольного образца («K–») и положительного контрольного образца («К+»).
Примечание. Один стрип рассчитан на исследование одного образца.
Например, необходимо проанализировать два образца. Нужно промаркировать 2 стрипа для
исследуемых образцов, один для «K–» и один для «K+». Общее количество стрипов – 4 (таблица 1).
Таблица 1
Маркировка пробирок для проведения ПЦР
Образец 1
Образец 2
«K–»
«K+»
Пробирки
Пробирки
Пробирки
Пробирки
1-8
1-8
1-8
1-8
1.2.
Встряхните пробирку с с раствором Taq-полимеразы в течение 3–5 сек на микроцентрифуге/вортексе и
центрифугируйте при 1000 об/мин в течение 3–5 сек.
1.3.
Добавьте в каждую пробирку стрипов, не повреждая слой парафина, по 10 мкл раствора Taqполимеразы.
1.4.
Добавьте в каждую пробирку стрипов по 1 капле (около 20 мкл) минерального масла. Закройте крышки
пробирок.
1.5.
Для предотвращения контаминации следует перед внесением образцов открывать
крышку только того стрипа, в который будет вноситься данный образец, и закрывать ее перед
внесением следующего. Препараты ДНК рекомендуется вносить наконечниками с фильтром.
1.6.
Внесите в каждую пробирку стрипов для исследуемых образцов, не повреждая слой парафина, по
5,0 мкл выделенного из образцов препарата ДНК (один стрип для каждого образца).
1.7.
Внесите в каждую пробирку стрипов, маркированных «K–», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл
отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения НК. Внесите в каждую пробирку
стрипов, маркированных «K+», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл положительного контрольного
образца.
1.8.
Центрифугируйте стрипы на микроцентрифуге/вортексе в течение 1-3 сек.
1.9.
Установите все стрипы в блок амплификатора детектирующего.
1.10.
Запустите программное обеспечение RealTime_PCR в режиме «Работа с прибором». При первом
проведении ПЦР создайте или загрузите файл «Parodont». При последующих постановках добавьте в
протокол тест «Parodont», укажите количество и идентификаторы образцов, в том числе положительного
и отрицательного контрольных образцов, отметьте расположение пробирок на матрице термоблока в
соответствии с их установкой (см. п. 1.9) и проведите ПЦР.
2.
Регистрация и учёт результатов ПЦР проводится автоматически программным обеспечением для
амплификаторов детектирующих.
Интерпретация результатов проводится в соответствии с таблицей 2.
Внимание! Значение КВМ меньше 2,5 следует интерпретировать как недостаточное количество
материала.
Изучите полную инструкцию перед началом работы
Таблица 2
Количество микроорганизмов в зубных отложениях и десневой жидкости при различных состояниях
(Lg ГЭ/образец)
Степень пародонтита
№
Название микроорганизма
Норма
Легкая/ Средняя
Тяжелая
1
Общая бактериальная масса
<6,5
≥6,5
>7,5
2
Actinobacillus
<4,0
≥4,0
>5,0
<5,0
<4,5
≥5,0
≥4,5
>6,0
>6,0
<5,0
≥5,0
>5,5
6
Porphyromonas gingivalis
Prevotella intermedia
Tannerella forsythensis (Bacteroides
forsythus)
Treponema denticola
<3,5
≥3,5
>5,0
7
Candida albicans
<4,5
≥4,5
>6,0
actinomycetemcomitans
3
4
5
Условия хранения и эксплуатации
Набор следует хранить в тёмном месте при 2–8 °С в течение всего срока годности.
Срок годности набора – 9 месяцев с даты изготовления.
По вопросам, касающимся качества набора реагентов для выявления условно-патогенных микроорганизмов
полости рта методом ПЦР в режиме реального времени (ПародонтоСкрин), следует обращаться к официальному
представителю производителя по адресу:
ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, тел./факс +7 (495) 980-45-55,
www.dna-technology.ru
Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный),
E-mail: hotline@dna-technology.ru
Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»:
http://www.dna-technology.ru/support/
Номер: 346
16.01.15
Изучите полную инструкцию перед началом работы
ДНК-Технология
117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, корп.6
Тел./факс +7 (495) 980-45-55
Служба клиентской поддержки:
8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный)
Е-mail: hotline@dna-technology.ru