Ôåíîòðîïèë (N-êàðáàìîèëìåòèë-4-ôåíèëïèððîëè- Ýêñòðàãèðîâàíèå ôåíîòðîïèëà èç áèîæèäêîñòåé äîí-2) ÿâëÿåòñÿ ïðîèçâîäíûì ïèðàöåòàìà è çíà÷èòåëü-

© Êîëëåêòèâ àâòîðîâ, 2003
Ì. È. Àíòîíîâà, À. À. Ïðîêîïîâ, Â. È. Àõàïêèíà, À. Ñ. Áåðëÿíä
ÊÎËÈ×ÅÑÒÂÅÍÍÛÉ ÀÍÀËÈÇ ÔÅÍÎÒÐÎÏÈËÀ  ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÕ
ÎÁÚÅÊÒÀÕ ÌÅÒÎÄÎÌ ÃÀÇÎÆÈÄÊÎÑÒÍÎÉ ÕÐÎÌÀÒÎÃÐÀÔÈÈ
Ìîñêîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèêî-ñòîìàòîëîãè÷åñêèé óíèâåðñèòåò
Ôåíîòðîïèë (N-êàðáàìîèëìåòèë-4-ôåíèëïèððîëèäîí-2) ÿâëÿåòñÿ ïðîèçâîäíûì ïèðàöåòàìà è çíà÷èòåëüíî ïðåâîñõîäèò åãî ïî íîîòðîïíîé àêòèâíîñòè [1].
Ñ öåëüþ èçó÷åíèÿ äîêëèíè÷åñêîé ôàðìàêîêèíåòèêè ôåíîòðîïèëà íàìè áûëà ðàçðàáîòàíà ìåòîäèêà åãî
êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ â áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ.
Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ ÷àñòü
Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëè íà õðîìàòîãðàôå ËÕÌ-8
ÌÄ (ìîäåëü 5) ñ ïëàìåííî-èîíèçàöèîííûì äåòåêòîðîì. Â ðàáîòå ïðèìåíÿëè ñòàëüíóþ êîëîíêó äëèíîé
1 ì è âíóòðåííèì äèàìåòðîì 3 ìì, çàïîëíåííóþ 15 %
Àïèåçîíîì L íà õðîìàòîíå N-AW-DMCS 0,160 –
0,200 ìì. Àíàëèç âûïîëíÿëè â èçîòåðìè÷åñêîì ðåæèìå ïðè òåìïåðàòóðå êîëîíêè 240 °C, òåìïåðàòóðà èñïàðèòåëÿ 350 °C. Ñêîðîñòü ãàçà-íîñèòåëÿ (àçîò) —
35 ìë/ìèí, âñïîìîãàòåëüíûõ ãàçîâ: âîçäóõà —
300 ìë/ìèí, âîäîðîäà — 35 ìë/ìèí. Âíóòðåííèì
ñòàíäàðòîì ñëóæèë ïðåäñòàâèòåëü êîíäåíñèðîâàííûõ
áèñìî÷åâèí — 2,4,5,7,8,10-ãåêñàìåòèë-2,4,8,10-òåòðààçàáèöèêëî[4.4.0]äåêàíäèîí-3,9 (À). Ïàðàìåòðîì ðàñ÷åòà õðîìàòîãðàìì áûëà âûáðàíà ïëîùàäü ïèêîâ. Ïðè
îöåíêå êîëè÷åñòâåííîãî ñîäåðæàíèÿ ôåíîòðîïèëà â
ïëàçìå êðîâè è ìî÷å ïîëüçîâàëèñü ïðåäâàðèòåëüíî èçìåðåííûì êîýôôèöèåíòîì îïðåäåëÿåìîãî âåùåñòâà
ïî âíóòðåííåìó ñòàíäàðòó Ki/s, êîòîðûé â èíòåðâàëå
ìàññîâûõ ñîîòíîøåíèé ôåíîòðîïèë — A îò 1:3 äî 3:1
ñîñòàâèë 1,02 ± 0,01.  ýêñïåðèìåíòå èñïîëüçîâàëè íàòèâíóþ êðîâü è ìî÷ó êðûñ-ñàìöîâ, à òàêæå ïðåäïîëàãàåìûå íàìè ê èñïîëüçîâàíèþ ïðè èçó÷åíèè ýêñïåðèìåíòàëüíîé ôàðìàêîêèíåòèêè ôåíîòðîïèëà êðîâü è
ìî÷ó êðûñ, ïîëó÷åííûå ïîñëå ââåäåíèÿ èì ïðåïàðàòà
â äîçå 100 ìã/êã.
Ýêñòðàãèðîâàíèå ôåíîòðîïèëà èç áèîæèäêîñòåé
ïðîâîäèëîñü õëîðîôîðìîì.  ïðåäâàðèòåëüíûõ îïûòàõ áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè îäíîêðàòíîé ýêñòðàêöèè ôåíîòðîïèëà èç ïëàçìû êðîâè è ìî÷è 40-êðàòíûì
îáú¸ìîì õëîðîôîðìà â òå÷åíèå 20 ìèí ñòåïåíü èçâëå÷åíèÿ âåùåñòâà ñîñòàâëÿåò ñîîòâåòñòâåííî 84,1 ±
4,3 % è 91,8 ± 1,9 %.
Äëÿ îöåíêè ñïåöèôè÷íîñòè è ñåëåêòèâíîñòè ìåòîäèêè êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â
áèîæèäêîñòÿõ êðûñàì ââîäèëè ôåíîòðîïèë â äîçå
100 ìã/êã. ×åðåç îïðåäåë¸ííûå èíòåðâàëû âðåìåíè îòáèðàëè ïðîáû êðîâè è ìî÷è æèâîòíûõ. Êðîâü öåíòðèôóãèðîâàëè 10 ìèí ïðè 3000 îá/ìèí. Ê 1 ìë ïëàçìû
êðîâè èëè ìî÷è ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà, à òàêæå
ê 1 ìë èíòàêòíûõ ïëàçìû êðîâè è ìî÷è äîáàâëÿëè
40 ìë õëîðîôîðìà è âñòðÿõèâàëè íà øåéêåðå â òå÷åíèå 20 ìèí. Õëîðîôîðìíûé ñëîé îòäåëÿëè ïîñëå âûìîðàæèâàíèÿ âîäíîé ôàçû ïðè òåìïåðàòóðå –15 °C è
óïàðèâàëè íà ðîòîðíîì èñïàðèòåëå äî îáú¸ìà
2 – 3 ìë. Îñòàòîê êîëè÷åñòâåííî ïåðåíîñèëè â ìèêðîïðîáèðêó ñ äíîì, îòòÿíóòûì â êàïèëëÿð, è óïàðèâàëè
äîñóõà â òîêå àçîòà. Ê ïîëó÷åííîìó ñóõîìó îñòàòêó
äîáàâëÿëè âíóòðåííèé ñòàíäàðò — 0,1 % õëîðîôîðìíûé ðàñòâîð À — â êîëè÷åñòâå, ñîîòâåòñòâóþùåì ñîîòíîøåíèþ êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèë — âíóòðåííèé
ñòàíäàðò À îò 3:1 äî 1:3. Â èñïàðèòåëü õðîìàòîãðàôà
ââîäèëè 1 – 3 ìêë ïðîáû è õðîìàòîãðàôèðîâàëè â óêàçàííûõ âûøå óñëîâèÿõ.
Íà ðèñ. 1 è 2 ïðåäñòàâëåíû òèïè÷íûå õðîìàòîãðàììû õëîðîôîðìíûõ ýêñòðàêòîâ èç ïëàçìû êðîâè è ìî÷è
êðûñ äî è ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà. Êàê âèäíî èç
ïðåäñòàâëåííûõ äàííûõ, ïèê ôåíîòðîïèëà ïðè äàí-
J
I
II
Äîñòîâåðíîñòü ðåçóëüòàòîâ êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ
Áèîæèäêîñòü
Ïëàçìà êðîâè
Ìî÷à
46
Âçÿòî íà
àíàëèç,
ìêã/ìë
Íàéäåíî,
ìêã/ìë
10,00
10,00
10,00
10,00
9,75
10,35
9,84
9,67
10,00
10,00
10,00
10,00
9,87
9,79
10,23
9,71
Ìåòðîëîãè÷åñêèå
õàðàêòåðèñòèêè
(n = 5, p = 0,95)
X = 9,96;
S = 0,30;
DX = 0,37;
X ± DX = 9,96 ±
0,37; e = 3,7 %
X = 9,95;
S = 0,23;
DX = 0,29;
X ± DX = 9,95 ±
0,29; e = 2,9 %
B
A
0
5
10
15
T, ìèí
Ðèñ. 1. Òèïè÷íûå õðîìàòîãðàììû õëîðîôîðìíûõ ýêñòðàêòîâ
èç ïëàçìû êðîâè êðûñ è èíòàêòíîé ïëàçìû êðîâè êðûñ: A — ýêñòðàêò èíòàêòíîé ïëàçìû êðîâè êðûñ; B — ýêñòðàêò èç ïëàçìû
êðîâè êðûñ ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà â äîçå 100 ìã/êã; I —
ïèê âíóòðåííåãî ñòàíäàðòà, II — ïèê ôåíîòðîïèëà.
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 37, ¹ 10, 2003
íûõ óñëîâèÿõ àíàëèçà óäîâëåòâîðèòåëüíî ðàçäåëÿåòñÿ
ñ ïèêàìè ýíäîãåííûõ ñîåäèíåíèé è âíóòðåííåãî ñòàíäàðòà, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î äîñòàòî÷íîé ñåëåêòèâíîñòè è ñïåöèôè÷íîñòè óñëîâèé àíàëèçà ôåíîòðîïèëà â
áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ äëÿ èññëåäîâàíèÿ åãî ýêñïåðèìåíòàëüíîé ôàðìàêîêèíåòèêè íà æèâîòíûõ.
Îöåíêó äîñòîâåðíîñòè ìåòîäèêè êîëè÷åñòâåííîãî
îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ ïðîâîäèëè
äëÿ ìîäåëüíûõ ñìåñåé — îïðåäåë¸ííîé êîíöåíòðàöèè
ïðåïàðàòà â ïëàçìå êðîâè è ìî÷å. Àíàëèç ïðîâîäèëè â
îïèñàííûõ âûøå óñëîâèÿõ. Âíóòðåííèé ñòàíäàðò äîáàâëÿëè â êîëè÷åñòâå, ñîîòâåòñòâóþùåì îáëàñòè ñîîòíîøåíèé êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèë — âíóòðåííèé
ñòàíäàðò À, â êîòîðîé ñèãíàë äåòåêòîðà ëèíååí. Êîíöåíòðàöèþ ôåíîòðîïèëà îïðåäåëÿëè, èñïîëüçóÿ êàëèáðîâî÷íûé êîýôôèöèåíò Ki/s = 1,02 è íàéäåííûå ýêñïåðèìåíòàëüíî çíà÷åíèÿ ïðîöåíòà ýêñòðàêöèè ïðåïàðàòà èç áèîæèäêîñòåé.
 òàáëèöå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû îïðåäåëåíèÿ
êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ. Êàê âèäíî èç äàííûõ, ïðåäñòàâëåííûõ â òàáëèöå, îòíîñèòåëüíàÿ îøèáêà îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â ïëàçìå êðîâè
ñîñòàâëÿåò 3,7 %, à â ìî÷å — 2,7 %. Èñòèííûå çíà÷åíèÿ êîíöåíòðàöèé ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ
(10 ìêã/ìë) ëåæàò âíóòðè äîâåðèòåëüíîãî èíòåðâàëà
ñðåäíåãî, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò îá îòñóòñòâèè ñèñòåìàòè÷åñêîé îøèáêè è ïðàâèëüíîñòè ðåçóëüòàòîâ.
Ìèíèìàëüíàÿ êîíöåíòðàöèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ, êîòîðàÿ ìîæåò áûòü îïðåäåëåíà ïî ýòîé
ìåòîäèêå, ñîñòàâëÿåò 0,5 ìêã/ìë.
Òàêèì îáðàçîì, ðàçðàáîòàíà ñïåöèôè÷åñêàÿ, âûñîêî÷óâñòâèòåëüíàÿ è õîðîøî âîñïðîèçâîäèìàÿ ìåòîäè-
Õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêèé æóðíàë. Òîì 37, ¹ 10, 2003
J
I
II
B
A
0
5
10
15
20
25 T, ìèí
Ðèñ. 2. Òèïè÷íûå õðîìàòîãðàììû õëîðîôîðìíûõ ýêñòðàêòîâ
èç ìî÷è êðûñ è èíòàêòíîé ìî÷è êðûñ: A — ýêñòðàêò èíòàêòíîé
ìî÷è êðûñ; B — ýêñòðàêò èç ìî÷è êðûñ ïîñëå ââåäåíèÿ ôåíîòðîïèëà â äîçå 100 ìã/êã; I — ïèê âíóòðåííåãî ñòàíäàðòà, II —
ïèê ôåíîòðîïèëà.
êà êîëè÷åñòâåííîãî îïðåäåëåíèÿ ôåíîòðîïèëà â áèîæèäêîñòÿõ, êîòîðàÿ ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíà äëÿ èçó÷åíèÿ åãî ýêñïåðèìåíòàëüíîé ôàðìàêîêèíåòèêè ó
æèâîòíûõ.
Ë È Ò Å ÐÀ Ò Ó ÐÀ
1. Ïàòåíò ÐÔ ¹ 2050851, Áþë. Èçîáðåò., ¹ 36 (1995).
Ïîñòóïèëà 20.05.03
47