АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ МУТАЦИЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ К ИНГИБИТОРАМ ИНТЕГРАЗЫ ВИЧ-1 СРЕДИ ПАЦИЕНТОВ ГОРОДА МОСКВЫ Лаповок И.А., Лага В.Ю., Васильев А.В., Саламов Г.Г., Казеннова Е.В., Бобкова М.Р. НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва, Россия Введение. За десятилетия, минувшие с момента открытия вируса иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1), одним из наиболее важных достижений в борьбе с ВИЧинфекцией стал прогресс в области антиретровирусной терапии (АРТ). Однако антиретровирусная терапия, в то же время, является мощным фактором отбора, действующим на непрерывно меняющуюся вирусную популяцию и благоприятствующим отбору вариантов вируса, которые смогли приспособиться к размножению в присутствии противовирусных препаратов. Этот факт диктует необходимость в постоянном совершенствовании существующих подходов АРТ и в поиске новых ингибиторов ВИЧ-1. Новым перспективным классом АРТ–препаратов являются ингибиторы вирусной интегразы (ИИН). Они отлично зарекомендовали себя в клинических испытаниях, в том числе - против вирусов со множественной лекарственной устойчивостью. Это позволяет использовать препараты данной группы для «спасательной терапии» ВИЧинфицированных, когда в организме пациента присутствуют устойчивые варианты вируса, не чувствительные к другим классам препаратов. Из химических соединений, способных ингибировать активности интегразы ВИЧ-1 лучше всего себя зарекомендовали два соединения: ралтегравир (RAL, MK-0518) и элвитегравир (ELV, GS-9137). Оба этих препарата действуют преимущественно на реакцию переноса донорской (провирусной) ДНК цепи на акцепторную (клеточную) ДНК. Под действием этих препаратов, вырабатываются устойчивые к ним вирусы. В случае ралтегравира было описано три основных пути достижения устойчивости: 1. Первичная мутация N155H с возможным существованием дополнительных мутаций L74M, E92Q, V151I, T97A, G163R. 2. Первичная мутация Q148K/R/H с возможными дополнительными мутациями E138K, G140A/S. 3. Первичная мутация Y143H/R/C с возможным существованием дополнительных мутаций L74A/I, E92Q, I203M, S230R. Для элвитегравира существуют два основных пути достижения устойчивости 1. Мутация E92Q с возможным существованием мутаций H51Y, S147G и E157Q. 2. Мутация T66I с возможными дополнительными мутациями F121Y и S153Y. Проведение анализа на наличие и распространение описанных мутаций является важной частью эпидемиологического мониторинга ВИЧ-инфекции и необходимой работой для прогнозирования эффективности применения препаратов в терапии. Цели и задачи. В связи со всем вышесказанным целью настоящего исследования было изучение полиморфизма области гена pol, кодирующей интегразу ВИЧ-1, у пациентов г. Москвы и определение частоты распространения в пределах исследованной группы мутаций лекарственной устойчивости ВИЧ-1 к препаратам ралтегравир и элвитегравир. Материалы и методы. Была подобрана панель из образцов мононуклеарных клеток периферической крови и сыворотки крови, полученных от 36 пациентов из г. Москвы. Предварительный анализ гена env показал, что по области этого гена 19 образцов (52,78%) принадлежали к вирусу подтипа А1, а 17 (47,22%) – к подтипу B. Для амплификации области провирусной ДНК, кодирующей белок интегразу с 1 по 254 аминокислоту проводили реакцию гнездовой ПЦР, после чего осуществляли автоматическое секвенирование. Последовательности сравнили с последовательностями и консенсусами ВИЧ-1 группы М из базы GeneBank. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью метода "ближайших соседей" с использованием пакета программ MEGA3.1. Работу по определению подтипа вируса по исследуемой области генома проводили в on-line программах COMET v0.1 (http://comet.retrovirology.lu/) и REGA v2.0 (http://dbpartners.stanford.edu/RegaSubtyping/). Основные результаты. В 92 построениях из 100 все анализированные образцы, предварительно отнесенные к подтипу А1, кластеризовались на одной ветви филогенетического древа с изолятами ВИЧ-1 варианта IDU-A подтипа A1, выделенными на территории России и стран СНГ. Все исследованные образцы подтипа B в 79 построениях из 100 кластеризовались совместно с изолятами подтипа B, выделенными в других странах. Полученные последовательности были проанализированы в on-line программах для генотипирования REGA v0.1 и COMET v2.0. Данные филогенетического анализа полностью подтверждались анализом в COMET. При использовании программы REGA не удалось получить результат генотипирования для 7 (19,4%) образцов. Все 7 образцов по результатам предварительного анализа гена env, филогенетического анализа и исследования в программе COMET относились к подтипу B. Таким образом, частота неопределенного результата при генотипировании в программе REGA исследованных российских образцов подтипа B составила 41,2%. При анализе полученных нуклеотидных последовательностей основных замен, связанных с лекарственной устойчивостью вируса к ИИН (в положениях 155, 148, 143, 92 и 66) обнаружено не было. Замена L74I, часто сочетающаяся с мутациями Y143H/R/C, присутствовала во всех образцах подтипа A1. Все полученные и исследованные в ходе работы последовательности депонированы в GeneBank (номера HM466977 – HM467012) Выводы. Результаты филогенетического и генотипического анализа области гена pol, кодирующей интегразу ВИЧ-1 в исследуемых образцах подтипа A1 подтверждают принадлежность исследуемых образцов подтипа А1 к варианту IDU-A, доминирующему в России. Тот факт, что 7 из 17 образцов подтипа B не были генотипированы в программе REGA, вероятнее всего, связан с недостатком информации о российских образцах в Стэндфордской базе данных. В связи с этим можно сделать вывод о том, что применение данной программы для генотипирования вариантов ВИЧ-1, циркулирующих в России менее эффективно, чем применение программы COMET. Отсутствие среди исследованной группы пациентов наиболее значимых мутаций лекарственной устойчивости к ингибиторам интегразы позволяет прогнозировать потенциальную эффективность применения данных препаратов в схемах ВААРТ среди пациентов г. Москвы. Полученные нами данные о 100%-ной распространенности в пределах исследуемой группы образцов варианта IDU-A мутации L74I позволяют предположить, что в случае применения препарата ралтегравир наиболее вероятным путем достижения устойчивости к нему будет путь накопления мутаций Y143H/R/C. Данная работа выполнена при финансовой поддержке Седьмой рамочной программы Европейского Союза по проекту: «Collaborative HIV and Anti-HIV Drug Resistance Network (CHAIN)» № 223131 и Международного Научно-технического Центра (МНТЦ), проект №3826.