Для выполнения измерений на полуавтоматическом ... мочевой кислоты Наименование параметра биохимическом анализаторах следует:


Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом
биохимическом анализаторах следует:
8.9. Установить программу определения содержания мочевой кислоты согласно таблице:
Наименование параметра
Значение
Метод измерения
Длина волны, нм
Конечная точка
Основная 520 (490-550),
дифференциальная 600
дист. вода
37 ОС, комнатная температура
мкмоль/л
0
Увеличивается
40:1
357
5 (37 ОС), 10 (комнатная температура)
0,1
Измерение против
Температура реакции
Единица измерения
Число знаков после запятой
Изменение оптической плотности
Соотношение реагент/проба
Концентрация калибратора, мкмоль/л
Время реакции, мин
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед.
опт. плот.
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед.
0
опт. плот.
Границы линейности, мкмоль/л
1,8 - 1190
Максимум нормы, мкмоль/л
458*
Минимум нормы, мкмоль/л
214*
* Нормальные значения в сыворотке или плазме крови мужчин.
8.10. Если результат измерения содержания мочевой кислоты выше 1190 мкмоль/л, следует
разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза, повторно провести измерение, полученный
результат умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «МОЧЕВАЯ КИСЛОТА -UTS» должен храниться в упаковке предприятияизготовителя при температуре +2-8 ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение набора
до 25 ОС не более 10 суток. Замораживание реагента не допускается.
9.2. Срок годности набора 18 месяцев с даты его изготовления.
9.3. Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре +2–8 ОС в темном месте не
более 1 месяца.
9.4. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
Список литературы
1. Shultz A. Uric acid. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984;
1262-1266 end 418.
2. Fassati A et al. Clin Chem 1980; 26: 227-231.
3. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
4. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «МОЧЕВАЯ КИСЛОТА –UTS» следует обращаться в
ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31,
8-800-333-91-31,
Факс: (495) 564-86-41;
E-mail: [email protected]; http://www.unimedao.ru
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 04.08. 2009 г. № 6237-Пр/09
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для количественного определения содержания мочевой
кислоты в сыворотке или плазме крови и моче человека ферментативным методом
«МОЧЕВАЯ КИСЛОТА - UTS»
Набор «МОЧЕВАЯ КИСЛОТА –UTS» разрешен к производству, продаже и применению на
территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05464
Кат. №
Информация для заказа набора «МОЧЕВАЯ КИСЛОТА –UTS»
Комплектация
Количество
определений
МК-09-003-100
Р1 (100) мл + калибратор (1мл)
МК-09-003-400
Р1 (400) мл + калибратор (4мл)
*v – объем фотометрической ячейки анализатора.
100/v*
400/v
ВНИМАНИЕ! Изменено количество компонентов набора – используется
монореагент.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «МОЧЕВАЯ КИСЛОТА -UTS» предназначен для определения содержания
мочевой кислоты в сыворотке или плазме крови и моче человека в клинико-диагностических и
биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения
пациентов.
1.2. Мочевая кислота и ее соли являются конечными продуктами метаболизма пуриновых оснований.
Являясь основной формой выведения избытка пуринов из организма почками, мочевая кислота во
внеклеточной жидкости, в том числе и в плазме, присутствует в виде солей натрия в концентрации
близкой к насыщению. Если концентрация мочевой кислоты превысит максимум нормы, то
существует возможность кристаллизации с образованием урата натрия. Повышение уровня мочевой
кислоты (гиперурикемия) может означать почечную недостаточность и часто связано с подагрой
[1,3,4] На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с
возможностью получения ложного результата анализа, что может привести к неправильно
поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного
риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с
применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Мочевая кислота (МК) исследуемого образца окисляется ферментом уриказой с образованием
аллантоина и перекиси водорода (1). Взаимодействие перекиси водорода с 4-аминоантипирином (4АА) и 2,4-дихлорфенолсульфонатом (ДХФС), катализируемое пероксидазой (2), приводит к
образованию окрашенного соединения красного цвета (хинонимина).
МК + 2Н2О + О2
Уриказа
2Н2О2 + 4-АФ + ДХФС
Аллантоин + СО2 + 2Н2О2
Пероксидаза
Хинонимин + 4Н2О
(1)
(2)
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине
волны 520 нм молекулами хинонимина [1,2]. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо
поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности
реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина измеряемой при 520 (490550) нм и, следовательно, прямо пропорционально содержанию мочевой кислоты в пробе.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Реагент и калибратор готовы к использованию.
Компоненты и их состав:
Наименование
Состав
Реагент 1 (Р1)
Фосфатный буфер рН 7,8
Ферментно-субстратный раствор,
Уриказа
pH 7,0
Пероксидаза
Аскорбатоксидаза
4-Аминоантипирин (4-АА)
2,4-Дихлорфенилсульфонат (ДХФС)
Неионогенные ПАВ
Калибратор
мочевая кислота, водный раствор
Концентрация
100 ммоль/л
>50 МЕ/л
>1000 МЕ/л
>100 МЕ/л
0,32 ммоль/л
2 ммоль/л
2г/л
357 мкмоль/л
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения содержания мочевой кислоты
от 1,8 до 1190 мкмоль/л, отклонение от линейности во всем указанном диапазоне не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 1,8 мкмоль/л.
4.3. Воспроизводимость - коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
4.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам,
аттестованным данным методом.
4.5. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется использовать
сывороточные калибраторы, аттестованные по значению активности мочевой кислоты данным
методом.
4.6. Коэффициент пересчета концентрации: 1 мкмоль/л = 1 мг/дл × 59,5
4.7. Нормальные величины содержания мочевой кислоты в сыворотке или плазме взрослого человека
составляют у мужчин 214–458 мкмоль/л, у женщин 149–405 мкмоль/л; в моче 1,49–4,5 ммоль/24ч [4].
4. 8. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение содержания мочевой кислоты,
приведены в обзоре [5].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент 1 содержит 2,4-дихлорфенилсульфонат, Реагент 2 содержит 4-аминоантипирин. Следует
избегать попадания реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые
оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые
перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные,
способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой
возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению содержания мочевой кислоты с применением набора
реагентов
«МОЧЕВАЯ
КИСЛОТА-UTS»
рекомендуется
использовать
фотометр,
фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы,
позволяющие выполнять измерение оптической плотности при длине 520 (490-550 нм) (режим по
конечной точке), и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре
+(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Негемолизированная сыворотка или плазма крови.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов не позднее 1 часа после
взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы стабильны 3-5 дней при +2..8 ОС или 6 месяцев при –20 ОС
7.4. Образцы мочи стабильны 4 дня при комнатной температуре. Значение рН в образцах мочи должно
составлять > 8,0.
7.5. Суточную мочу перед определением следует развести дистиллированной водой в 50 раз. Если
моча мутная, следует предварительно нагреть образцы при 60 ОС в течение 10 минут для растворения
образовавшихся кристаллов уратов и мочевой кислоты. Образцы не охлаждать.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Проведение ручного анализа с использованием фотометра или
фотоэлектроколориметра.
8.1. Реагент стабилен при температуре +2..8 ОС в течение всего срока годности, указанного на
этикетке.
8.2. Оптическая плотность реагента против холостой пробы при 520 нм должна составлять не более
0,16 ед. опт. плотн. (при использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм).
8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах,
указанных в таблице:
Внести в кювету, мкл
Холостая проба
Калибровочная
Анализируемая
проба
проба
Реагент
1000
1000
1000
Калибратор
25
Сыворотка, плазма крови или
25
разведенная моча
8.4. Перемешать, инкубировать 5 мин при +(37±0,5) ОС или 10 мин при комнатной температуре
(18 –25 ОС).
8.5. Измерить оптическую плотность анализируемой пробы и калибровочной пробы против холостой
пробы в кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 520 (490-550) нм. Окраска
растворов стабильна в течение 20 минут при комнатной температуре.
8.6. Содержание мочевой кислоты в сыворотке или плазме крови в мкмоль/л определить по формуле:

С
Аобр
Акал
 357
где: С – содержание мочевой кислоты в анализируемом образце сыворотки или плазмы, мкмоль/л;
Аобр – оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. плотн, против холостой пробы;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотн, против холостой пробы;
357 – содержание мочевой кислоты в калибраторе, мкмоль/л.
8.7. Если результат измерения содержания мочевой кислоты выше 1190 мкмоль/л, следует разбавить
пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза, повторно провести измерение, полученный результат
умножить на 2.
8.8. Содержание мочевой кислоты в суточной моче (в ммоль/сутки) определить по формуле:
Ссут 
Аобр  V  50
Акал 1000
 357
где: Ссут – содержание мочевой кислоты в анализируемом образце мочи, ммоль/сутки;
Аобр – оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. плотн;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотн;
V – количество мочи, собранной за сутки, л;
357 – содержание мочевой кислоты в калибраторе, мкмоль/л;
50 – коэффициент разведения мочи.