COMBAIDS – RS ADVANTAGE

COMBAIDS – RS Advantage
HIV 1+2 IMMUNODOT TEST KIT
(тест-гребёнка)
Точечная иммунологическая проба для определения антител к ВИЧ 1 и/или 2 в
цельной крови, сыворотке или плазме.
СПИД
(синдром
приобретённого
иммунодефицита)—это
широко
распространённое инфекционное заболевание, для которого характерна высокая
летальность. Возбудителем является ретровирус— вирус иммунодефицита человека
(ВИЧ). Несмотря на то, что вирус передаётся через кровь и её производные, в настоящее
время определить вирус рутинными методами невозможно. Однако выявление антител к
ВИЧ в цельной крови, сыворотке или плазме могло бы служить доказательством наличия
вируса и могло бы использоваться для скрининга крови и её производных,
предназначенных для переливания, с целью предотвращения передачи возбудителя. В
доступных в настоящее время тестовых системах в качестве антигенов используются
вирусные белки или некоторые участки их пептидной цепи. Специфичные белки,
используемые в данной методике, не являются производными собственно вирусных
частиц, а были синтезированы или получены методом рекомбинации. Следовательно, эти
антигены НЕ МОГУТ ВЫЗВАТЬ ЗАРАЖЕНИЕ, но в то же время являются
высокоспецифичными. Тестовые наборы Combaids – RS Advantage—это визуально
оцениваемая точечная иммунопроба, предназначенная для качественного определения in
vitro антител к ВИЧ 1 и/или 2 в цельной крови, сыворотке или плазме.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Точечная иммунологическая проба основана на том же принципе, что и
ферментная иммунопроба (EIA), при постановке которой иммобилизованные комплексы
антиген-антитело визуально оцениваются благодаря цветной (хромогенной) реакции. В
EIA окрашенное вещество образуется в результате сопряженной реакций между
ферментом, субстратом и хромогеном, тогда как в данном тесте окрашенная точка
появляется в результате связывания антитела с Протеином А, ассоциированным на
частицах Сигнального реагента «Коллоидное Золото – Протеин А». На каждый зубец
гребёнки нанесены 2 круглых пятна: тест-пятно, которое расположено на кончике зубца и
содержит оптимальную смесь ВИЧ 1 и ВИЧ 2 рекомбинантных антигенов и
синтетических пептидов, и контрольное пятно, которое расположено выше и содержит
Контрольный Реагент. Если исследуемый образец содержит антитела к ВИЧ 1 и/или ВИЧ
2, то при инкубации зубцов гребенки в образце, эти антитела связываются с ВИЧ
антигенами, расположенными в зоне тестирования на зубце гребёнки. Образовавшиеся
при этом иммунные комплексы становятся визуально видимыми после инкубации с
Сигнальным реагентом “Коллоидное Золото – Белок А”. Указанием на положительный
результат служит появление фиолетово-красного пятна/точки в зоне тестирования на
кончике зубца гребёнки, содержащем антигены. Пятно от встроенного контроля
наблюдается отдельно в верхней части зубца (контрольная зона), содержащей
Контрольный Реагент, функция которого — контроль над правильностью выполнения
процедуры. Фиолетово-красное пятно/точка в контрольной зоне должно появляться
всегда, независимо от наличия или отсутствия в исследуемом образце антител к ВИЧ.
ОБРАЗЦЫ
В качестве образцов могут быть использованы цельная кровь, сыворотка или плазма. В
случае непродолжительного хранения образцы могут находиться при 2 – 8оС. Однако при
длительном хранении их следует держать в замороженном состоянии (–20оС и ниже). Не
следует использовать образцы с признаками гемолиза или чем-либо загрязнённые.
СОСТАВ НАБОРА
Реагенты
1. Washing Buffer (5×) — буфер для отмывки
2. Сolloidal Gold Signal Reagent — Коллоидный Золотой Сигнальный Реагент
3. Sample Diluent — раствор для разбавления образцов
4. Negative Control — Отрицательный Контроль
5. Positive Control — Положительный Контроль
6. Antigen&Control Reagent Coated Comb — гребёнка с нанесенными
Контрольным Реагентом и антигенами
Принадлежности
1. Резервуар для отмывки
2. Стрипы с микроячейками и рамка для 4-х стрипов
3. Закрывающийся пакет
4. Одноразовые пластиковые трубочки
5. Резиновые «сосочки» для трубочек
6. Зажим
Необходимые принадлежности, не входящие в набор
1. Таймер
2. Абсорбирующая пластина или бумажное полотенце
3. Дезинфицирующее средство (5%-ный гипохлорит натрия или кальция или какое-либо
другое средство, содержащее 70% этанол)
4. Одноразовые перчатки
5. Мерный цилиндр на 100мл
6. Микропипетки на 100μл с одноразовыми наконечниками
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Все компоненты набора стабильны до истечения срока годности, указанного на упаковке,
при условии хранения при 2 – 8оС. Перед тем, как вскрывать пакет с гребенкой, нагрейте
его до комнатной температуры. Так как гребенки очень чувствительны к влаге,
рекомендуется использовать все 8 зубцов гребенки после того, как гребёнка извлечена из
упаковки. Только в крайнем случае, неиспользованную часть гребенки можно оставить на
хранение в пакете, не забыв положить в пакет мешочек с силикагелем во избежание
увлажнения гребенки и плотно закрыв пакет с помощью зажима, прилагаемого к набору.
Однако всякий раз, когда используется такая сохраненная часть гребенки, ее два зубца
должны быть предназначены для Положительного и Отрицательного Контролей, чтобы
подтвердить качество сохраненной части гребенки. Разбавленный до нужной
концентрации буфер для отмывки остается стабильным при 2 – 8оС в течение одной
недели.
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ
Так как никакой метод не может абсолютно гарантировать отсутствие инфекционных
агентов, все образцы для анализа должны считаться потенциально инфицированными, и
обращаться с ними надо осторожно.
Набор «Combaids – RS Advantage» содержит Положительный Контроль и Отрицательный
Контроль животного происхождения, которые были инактивированы путем тепловой
обработки при 60оС в течение 1 часа и таким образом являются на 100% не патогенными.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Остатки образцов, Контролей, буфера и содержимое ячеек планшетных полосок следует
выливать в емкость, предназначенную для этих целей. После окончания работы емкость
должна быть автоклавирована при 121оС в течение 1 часа либо обработана гипохлоритом
натрия или кальция в течение 30 минут.
2. Во время проведения теста будьте в перчатках, а после окончания работы, сняв
перчатки, тщательно вымойте руки.
3. Не пользуйтесь пипеткой с помощью рта.
4. Не курите, не принимайте пищу или напитки в местах работы с биологическими
образцами.
5. Избегайте разбрызгивания или пролития образцов.
6. Максимально старайтесь предотвратить возможную контаминацию образцов
микроорганизмами.
7. Не совмещайте при проведении конкретного теста гребенку и Сигнальный Реагент из
наборов, имеющих различные номера партий.
8. Используйте только не использовавшиеся ранее микропланшеты.
ПОДГОТОВКА К ПРОВЕДЕНИЮ ТЕСТА
Раствор для отмывки гребенок. Разбавьте концентрированный буфер (5х) для отмывки
дистиллированной водой в объемном соотношении 1:5. Для этого добавьте 15 мл
концентрированного буфера к 60 мл дистиллированной воды, избегая пенообразования.
Перелейте приготовленный раствор в резервуар для отмывки, избегая при этом
вспенивания раствора. В каждых 75 мл этого раствора отмывайте не более 4 гребенок.
ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА
К моменту начала работы все компоненты набора и образцы, предназначенные для
тестирования, должны нагреться до комнатной температуры. Чётко промаркируйте
образцы перед проведением анализа.
1. Пронумеруйте ячейки микропланшеты в соответствии с номерами образцов, которые
будут внесены в ячейки, и поместите в эти ячейки по 2 капли (по 100 мкл) раствора для
разбавления образцов. Не забудьте про ячейки для Положительного Контроля и
Отрицательного Контроля.
2. Добавьте по две капли (100 мкл) образцов либо Контролей в ячейки, содержащие
раствор для разбавления образцов. Перемешайте образцы с раствором путем
пипетирования или размешивания смеси с помощью насадки для пипетки. Запишите
расположение образцов на микропланшете и их номера.
3. Разрежьте пакет с гребенкой вдоль одного из краев и извлеките гребенку. Не
рекомендуется хранить распакованные, но не использованные гребёнки, однако в случае
необходимости можно поступить, как указано выше (см. «УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ»).
Напишите номера образцов на матовой стороне гребенки выше зубцов и опустите
гребенку зубцами вниз в соответствующий ряд ячеек на микропланшете. Инкубируйте
при комнатной температуре в течение 10 минут.
4. Тем временем внесите по 4 капли (по 200 мкл) Коллоидного Золотого Сигнального
Реагента в ячейки незадействованного ряда.
5. По окончании инкубации извлеките гребёнку из ячеек, содержащих образцы, и удалите
излишнюю влагу с зубцов, прикоснувшись самыми кончиками зубцов к абсорбирующему
материалу. НЕ ПРОМОКАЙТЕ РЕАКЦИОННУЮ ПОВЕРХНОСТЬ ЗУБЦОВ ГРЕБЕНКИ.
Возьмите гребёнку вертикально зубцами вниз и поводите ею в растворе для отмывки в
направлении вперёд-назад 10 раз. Снова удалите излишнюю жидкость с зубцов.
6. Поместите гребёнку в ячейки, содержащие Коллоидный Золотой Сигнальный Реагент.
Инкубируйте при комнатной температуре в течение 10 минут. По окончании инкубации
повторите процедуру отмывки, как указано в пункте 5.
7. Положите гребёнку на чистую поверхность реакционной стороной вверх. Не
промакивайте и не протирайте эту поверхность гребенки. Дайте гребенке высохнуть и
приступайте к прочтению результатов.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
На положительный результат указывает наличие фиолетово-красного пятна/точки в зоне
тестирования, т.е. в области кончика зубца гребенки, а также пятна в контрольной зоне,
расположенной выше зоны тестирования. Отсутствие окрашенного пятна в зоне
тестирования свидетельствует об отсутствии в образце антител к ВИЧ 1 и/или 2.
Положительный Контроль должен вызвать появление двух пятен/точек на
соответствующем зубце гребёнки.
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
В случае отрицательного результата пятно/точка не должно появиться в зоне
тестирования, и это говорит об отсутствии антител к ВИЧ 1 и/или 2. Однако, при этом
чёткое пятно/точка должно появляться в контрольной зоне на зубце гребенки. Каждый
образец сыворотки или плазмы должен вызывать появление пятна/точки в контрольной
зоне; появление этого пятна подтверждает внесение образца в инкубационную смесь и
качество реагентов набора. Если пятно в контрольной зоне не появилось, результаты
признаются недействительными, и процедура производится повторно со свежими
образцами и Контролями.
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Если в результате проведения теста в контрольной зоне не появляется пятно/точка, это
указывает на ОШИБКУ. Это может быть вызвано ошибкой в ходе выполнения анализа
или тем, что какой-то образец или реагент испорчены. В таком случае тест должен быть
проведен повторно с использованием новой гребенки.
Для надёжной работы и высокой точности теста все гребенки и реагенты должны всегда
храниться с соблюдением необходимых условий хранения, а также быть
использованными до истечения срока годности.
При прочтении результатов рассматривайте гребенку при умеренном освещении и
желательно держите ее над белой поверхностью. Поверхность гребенки должна
располагаться перпендикулярно (под углом в 90о) к глазам. Не пытайтесь рассматривать
гребенку, изменяя угол зрения, т. к. в этом случае неокрашенные пятна могут стать
заметными, что может привести к неверной интерпретации результатов.
КРИТЕРИИ КОНТРОЛЯ ЗА КАЧЕСТВОМ РАБОТЫ
Положительный и Отрицательный Контроли созданы для проверки эксплутационного
качества реагентов, входящих в состав конкретного набора. Положительный Контроль
должен всегда вызывать появление двух фиолетово-красных пятен: в верхней части зубца
в контрольной зоне и в нижней части в зоне тестирования.
Отрицательный контроль должен всегда вызывать появление только одного фиолетовокрасного пятна в верхней части зубца в контрольной области.
Каждый исследуемый образец должен всегда вызывать появление фиолетово-красного
пятна в верхней части зубца в контрольной зоне, независимо от того имеет он статус
положительного или отрицательного результата.
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И СПЕЦИФИЧНОСТЬ
При использовании известной панели образцов сывороток с подтвержденной ВИЧ 1и/или ВИЧ 2-положительной реакцией тестовая система в отношении выявления антител
показала 100%-ную чувствительность. Так как в настоящее время не существует
установленного стандарта для подтверждения наличия или отсутствия антител к ВИЧ в
человеческой крови, сравнительная экспертиза, проведенная на большом количестве
образцов из банка крови в сотрудничестве с другими лидирующими производителями,
показала специфичность в 100%. Для подтверждения результатов можно использовать
методы иммунофлуоресцентного анализа либо вестерн-блоттинга.
КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ
1. Дайте всем реагентам нагреться до комнатной температуры.
2. Определите необходимое количество зубцов (для образцов и контроля).
3. Разбавьте концентрированный буфер для отмывки.
4. Добавьте по 2 капли (100 мкл) раствора для разбавления образцов в ячейки
микропланшета.
5. Добавьте по 2 капли (100 мкл) образцов и Контролей в каждую ячейку, содержащую
раствор для разбавления.
6. Поместите гребёнки в соответствующие ячейки.
7. Инкубируйте 10 мин. при комнатной температуре.
8. Добавьте по 4 капли (200 мкл) Коллоидного Золотого Сигнального Реагента в
необходимое количество ячеек микропланшета.
9. Отмойте гребенки, перемещая их в направлении вперёд-назад в растворе для отмывки,
находящемся в резевуаре для отмывки гребенок.
10. Поместите гребёнки в ячейки с Коллоидным Золотым Сигнальным Реагентом.
11. Инкубируйте 10 мин. при комнатной температуре.
12. Отмойте гребёнки, как указано в пункте 9.
13. Высушите гребенки на воздухе, наблюдайте проявление цветных пятен на зубцах
гребенки.
Состав набора
Код № 25981
24 теста
Washing buffer (5×)
1×100 мл
Colloidal Gold Signal Reagent
1×6 мл
Sample Diluent
1×15 мл
Negative Control
1×0.5 мл
Positive Control
1×0.5 мл
Antigen&Control Reagent Coated Comb 1×3 пакета
Реагенты
Код № 25981B
48 тестов
1×100 мл
1×11 мл
1×15 мл
1×0.5 мл
1×0.5 мл
1×6 пакета
Код №. 25981A
96 тестов
1×100 мл
1×22 мл
1×15 мл
1×1.0 мл
1×1.0 мл
1×12 пакета
ХОД ТЕСТИРОВАНИЯ
Образцы помещаются в ячейки микропланшета
в раствор для разбавления образцов.
Зубцы гребенки маркируются номерами образцов.
Гребенка инкубируется в разбавленных 10 минут
при комнатной температуре.
Концентрированный раствор для отмывки разбавляется,
и полученный раствор помещается в резервуар для отмывки.
Гребёнка отмывается для удаления несвязавшихся белков.
Гребёнка инкубируется 10 мин. при комнатной температуре
в Коллоидном Золотом Сигнальном Реагенте, который
связывается с антителами, иммобилизованными на гребенке.
После инкубации с Сигнальным Реагентом
гребёнка отмывается с целью удаления несвязавшегося
Сигнального Реагента.
Результаты визуально оцениваются после высыхания
гребёнки. Фиолетово-красное пятно в зоне тестирования
указывает на положительную реакцию, то есть
на наличие антител к ВИЧ 1 и/или ВИЧ 2 в образце.