Белок YB-1 клеток млекопитающих является членом

М.А. МАЛЫШКИНА
Научный руководитель – Е.Ю. РЫБАЛКИНА1, к.биол.н., с.н.с.
Московский инженерно-физический институт (государственный университет)
1НИИ Канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Блохина РАМН, Москва, Россия
ИЗУЧЕНИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛЕТОК
К ЦИТОСТАТИКАМ ПРИ СНИЖЕНИИ
ЭНДОГЕННОГО БЕЛКА YB-1
В данной работе оценивалось влияние супрессии гена YB-1 на изменение
пролиферации и множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) опухолевых
клеток человека к лекарственным препаратам.
Белок
YB-1
клеток
млекопитающих
является
членом
мультифункционального семейства ДНК/РНК связывающих белков.YB-1
млекопитающих отвечает за повышение их устойчивости к
ультрафиолетовому облучению и ксенобиотикам и регулирует
практически все ДНК- и мРНК-зависимые процессы в клетке [1]. Имеются
данные, показывающие, что локализация YB-1 в ядрах опухолевых клеток
служит маркером множественной лекарственной устойчивости (МЛУ)
при ряде злокачественных новообразований и что ядерная локализация
YB-1 коррелирует с повышенной экспрессией гена МЛУ MDR1 и его
продукта Р-гликопротеина (Pgp) [2]. Известно, однако, что МЛУ –
сложный феномен, определяемый различными белками клетки.
Поскольку YB-1 является многофункциональным белком, можно
полагать, что он может регулировать различные гены и белки МЛУ,
оперируя на разных уровнях.
Исследования проводились на линиях опухолевых клеток человека
(CaOV-3, PC3, mS, mS-0,5-резистентный вариант mS). Снижение
количества YB-1 получали введением в клетки малой интерферирующей
РНК (siRNA). Оценку снижения экспрессии генов проводили методом
ОТ-ПЦР. С помощью моноклональных и поликлональных антител к
белкам YB-1, Pgp, MRP оценивали количество белка в клетках. Оценка
чувствительности клеток к цитостатикам (доксорубицину, винбластину)
проводилась методом МТТ.
Для линии клеток CaOV-3 (клеток опухоли молочной железы человека)
было показано, что снижение эндогенного YB-1 при воздействии на него
шпильки siRNA снизило количество клеток с ядерной локализацией YB-1.
Количество мРНК гена YB-1 также было снижено (Рис.1). Были получены
данные о влиянии уменьшения количества YB-1 на чувствительность
клеток опухоли молочной железы
доксорубицин и винбластин (Рис.2).
к
цитостатикам,
таким
как
Doxorubicine
% viable cells
125
siGFP
100
siYB-1
75
50
25
0
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
mcM
Рис.1. ОТ-ПЦР. Угнетение
экспрессии гена YB-1 под
действием шпильки против YB1 (siYB-1) (ген домашнего
хозяйства b2mg как контроль).
Рис.2 Кривые выживаемости
клеток с изменением
концентрации доксорубицина в
клетках со шпилькой против YB1 (siYB-1) и нормальных
опухолевых клетках (siGFP).
Ранее было показано, что подавление экспрессии YB-1 с помощью
шпильки siRNA сопровождается снижением уровня мРНК генов MRP1,
LRP, MDR1, но по-разному в клетках разного происхождения. Например,
в клетках mS-0.5 (резистентных к цитостатикам вариант
клеток
меланомы человека mS) - снижена экспрессия гена MDR1.
Таким образом, нокдаун эндогенного YB-1 с помощью малой
интерферирующей РНК показал корреляцию между снижением
количества YB-1 в клетке и повышением чувствительности клеток к
лекарствам.
Список литературы
1.
2.
Ohga, T., Uchiumi, T., Makino, Y., et al. (1998) Direct involvement of the Ybox binding protein YB-1 in genotoxic stress-induced activation of the human multidrug
resistance 1 gene. J. Biol. Chem. 273, 5997–6000.
Ставровская А.А. Механизмы лекарственной устойчивости клеток // Канцерогенез
Под ред. Д.Г. Заридзе. М.: Медицина, К19 2004. Гл. 13. С. 558-574.