Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации МАТЕРИАЛЫ Всероссийской научной конференции молодых ученых, посвященной 95-летию со дня рождения профессора А.А. Никулина «Достижения современной фармакологической науки» Рязань, 2018 УДК 615 (071) ББК 52.81 М341 Ответственный редактор: Доктор медицинских наук, профессор Якушева Е.Н. Редакционная коллегия: А.В. Щулькин, С.К. Правкин М341 Материалы Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной 95-летию со дня рождения профессора А.А. Никулина «Достижения современной фармакологической науки» / под ред. Е.Н. Якушевой. – Рязань: ОТСиОП РязГМУ, 2018. – 118 с. ISBN 978-5-8423-0190-4 Издание содержит материалы Всероссийской научной конференции молодых ученых, посвященной 95-летию со дня рождения профессора А.А. Никулина «Достижения современной фармакологической науки», зав. кафедрой фармакологии с курсом фармации ФДПО, ректора Рязанского медицинского института им. акад. И.П. Павлова. Представлены результаты экспериментальных исследований по изучению активности лекарственных средств и рецепторных механизмов их действия, работы по вопросам фармакокинетики, клинической эффективности лекарственных препаратов. Сборник адресован фармакологам, клиническим фармакологам, врачам разных специальностей. УДК 615 (071) ББК 52.81 ISBN 978-5-8423-0190-4 © ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, 2018 От редактора Глубокоуважаемые коллеги! 21 августа 2018 года исполнилось 95 лет со дня рождения профессора Анатолия Александровича Никулина (1923-1996), крупного ученого, доктора медицинских наук, основоположника рязанской школы фармакологов. В настоящем сборнике представлены материалы Всероссийской научной конференции молодых ученых «Достижения современной фармакологической науки», посвященной 95-летию со дня рождения профессора А.А. Никулина. Открывает сборник статья о жизни и деятельности профессора А.А.Никулина. Сборник содержит оригинальные исследования по актуальным вопросам фармакологии и клинической фармакологии, выполненные в крупных научных медицинских учреждениях нашей страны: Москвы, Санкт-Петербурга, Волгограда, Новосибирска, Курска, Астрахани, Саранска, Рязани. Представленные работы освещают вопросы фармакодинамики и фармакокинетики лекарственных средств в условиях нормы и экспериментальной патологии, новые подходы к изучению их механизма действия, эффективности лекарственной терапии при разных заболеваниях и патологических состояниях. Выражаю искреннюю благодарность коллегам, выступающим с докладами на конференции, приславшим свои публикации и принявшим участие в подготовке и издании сборника. 3 К 95-летию со дня рождения профессора Анатолия Александровича Никулина Кирюшин В.А., Узбекова Д.Г., Козеевская Н.А. ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, г. Рязань E-mail: [email protected] Анатолий Александрович Никулин родился 21 августа 1923 г. в г. Саратове в семье потомственных врачей. Отец Александр Иванович Никулин – доктор медицинских наук, профессор, фармаколог. В 1928 г. семья переезжает г. Смоленск, где глава семьи возглавил кафедру фармакологии Смоленского медицинского института. Школьные годы Анатолия Никулина прошли в Смоленске: в 1932 году он поступает в третью Смоленскую среднюю школу имени Н.Г. Чернышевского, в июне 1941 получает аттестат зрелости. С началом Великой Отечественной войны семья Никулиных вместе с институтом эвакуируется в Саратов, где в 1941 году Анатолий Александрович поступает на лечебный факультет Саратовского медицинского института. 4 В 1942 и 1944 гг. из-за новых назначений отца семья переезжает сначала в Пермь, затем – в Орджоникидзе (ныне Владикавказ), где А.А. Никулин продолжает обучение. В январе 1945 г. после скоропостижной смерти на работе отца Анатолий Александрович вместе с матерью вернулся в родной Саратов, где в 1946 г. окончил с отличием Саратовский мединститут и был оставлен аспирантом при кафедре фармакологии. В 1949 г. А.А. Никулин защитил кандидатскую диссертацию, выполненную под руководством проф. К.А. Шмелева, на тему «О сравнительном действии сосудодвигательных веществ на просвет сосудов некоторых органов лягушки в зависимости от активной реакции среды и тонуса сосудистой системы (экспериментальное исследование)» и стал работать в качестве ассистента кафедры. Следует отметить, что тема кандидатской диссертации в дальнейшем стала оригинальным направлением в экспериментальной ангиологии, которое А.А. Никулин успешно развивал со своими учениками. В сентябре 1950 г. в соответствии с приказом МЗ СССР А.А. Никулин выезжает в спецкомандировку в г. Улан-Батор – столицу Монгольской народной Республики – в качестве заведующего кафедрой фармакологии медицинского и ветеринарного факультетов Монгольского университета. Поскольку кафедры до приезда заведующего не существовало, Анатолию Александровичу пришлось приложить много сил и таланта для ее организации, подготовки научно-педагогических кадров, проведения научных исследований по систематизации местной лекарственной флоры По возвращении из Монголии (30.06.1953), в сентябре 1953 г. Анатолий Александрович был направлен для работы доцентом кафедры фармакологии Рязанского медицинского института имени академика И.П. Павлова. Работу на кафедре он успешно совмещал с административной в качестве заместителя декана лечебного факультета (1954), декана лечебного факультета (1956), проректора по учебной работе (1958). В 1959 г. А.А. Никулин возглавил кафедру фармакологии и руководил ею в течение 30 лет, до ухода на пенсию в декабре 1990 г. С 1990 г. по 1992 г. работал профессором-консультантом кафедры. С августа 1961 г. по ноябрь 1983 г. Анатолий Александрович Никулин – ректор института. Именно в этот период ярко раскрылся 5 его талант организатора и руководителя: основное внимание он сосредоточил на развитии материально-технической, учебной и научной базы ВУЗа, подборе и подготовке кадров высшей квалификации. В этот период в вузе по инициативе ректора были построены и введены в эксплуатацию виварий (1963), морфологический (1967) и биологический (1969) (ныне фармацевтический) учебные корпуса, 5-этажное здание студенческого общежития на 848 мест (1969). Со сдачей в эксплуатацию в восьмидесятых годах двух 9-этажных корпусов общежития на 1074 места, проблема обеспечения студентов жильем была решена. В начале 1980 г. были сданы в эксплуатацию учебный корпус для кафедр санитарно-гигиенического факультета (ныне медико-профилактический корпус), библиотека на 500000 томов, пристройка к учебному корпусу по ул. Маяковского, подготовлена сметная документация и начато строительство административного корпуса по ул. Высоковольтной, столовой на 300 посадочных мест. Отношение ректора к кадрам высшей квалификации достойно уважения: наряду с активной подготовкой докторов наук в стенах вуза, он буквально «собирал» по стране опытных, молодых и перспективных докторов наук и профессоров для руководства кафедрами. Так в вуз пришли профессора: Н.И. Сметанин (Ташкент), А.М. Ногаллер (Астрахань), Б.Л. Шура-Бура (Ленинград), В.Р. Чевпевцов (Караганда), П.Г. Ткачев (Волгоград), Н.С. Жаркова (Куйбышев), В.Я. Гармаш, Л.В. Анохин, П.А. Чумаченко (Воронеж), В.И. Криков (Пятигорск), доценты Ю.И. Окорокова (Свердловск), Е.А Шапошников (Краснодар) и др. Как умелый и заботливый руководитель, приглашая специалистов в институт для работы, ректор одновременно решал сложные вопросы обеспечения их семей достойным жильем из городского бюджета. Создание крепкой материальной базы института дало возможность увеличить набор студентов в ВУЗ, повысить качество подготовки выпускаемых специалистов. За время руководства вузом А.А. Никулиным были открыты новые факультеты – санитарно-гигиенический (ныне – медико-профилактический) (1962), фармацевтический (1966), усовершенствования врачей и провизоров (1984), создана и начала работу Центральная научно-исследовательская лаборатория (ЦНИЛ) с уникальным по тому времени стационарным электронным микроскопом. 6 Большое внимание Анатолий Александрович уделял организации учебного процесса. Лекции и практические занятия на кафедре сопровождались демонстрацией опытов на животных, видеофильмами о действии лекарственных веществ на организм. Для занятий в помощь студентам вышли в свет учебные пособия по разделу «Общая рецептура» (1960), «Задания для студентов на практических занятиях по фармакологии» (1961), «Лекарственные формы и рецепт» (1974), «Графы логических структур по фармакотерапии» (1983). Для лучшего усвоения студентами материала были подготовлены и изданы монотематические учебные пособия «Противоаритмические средства» (1988), «Препараты ферментов и коферментов, активаторы и ингибиторы ферментов» (1989), «Лекарственная непереносимость: некоторые вопросы взаимодействия и отрицательного побочного действия лекарственных веществ» (1990). В 1966 г. А.А. Никулин защитил докторскую диссертацию «Реактивность сосудистой системы организма после воздействия лучами Рентгена (научные консультанты – проф. Л.С. Сутулов и проф. Г.А. Узбеков). Изучение фармакологии кровеносных сосудов было своеобразной визитной карточкой рязанской школы фармакологов того времени. Ее становление началось с кандидатской диссертации Анатолия Александровича и было продолжено его учениками. А.А. Никулиным были разработаны методические подходы к изучению этой проблемы – биофизический и биохимический. В основу биофизического подхода было положено изучение биоэлектрогенеза сосудистой стенки и сопряженного с ним баланса электролитов. Большой вклад в разработку и развитие данного направления внесли сотрудники кафедры физики И.Ф. Воронков, А.В. Гулькин, В.П. Кузин, А.П. Пустовалов, фармакологии – В.М. Ериков, защитившие кандидатские диссертации. Биохимический подход предусматривал изучение метаболизма сосудистой стенки, ее патобиохимии при сосудистых поражениях, определение принципов медикаментозной коррекции обменных нарушений в стенке сосудов. По этой проблеме защищены диссертации В.К Петровым, А.К. Рачковым, В.С. Тишкиным, С.А. Литвиновым, А.А. Сысыкиным, А.Н. Рябковым, Е.Н. Якушевой, М.В. Семенченко, Л.А. Турковой, Н.В. Исаковой и др. 7 Ведущим направлением научных исследований профессора А.А. Никулина, а в дальнейшем и его учеников, явилось изучение действия вазоактивных средств на сердечно – сосудистую систему, лекарственной регуляции тонуса сосудистой стенки в условиях изменения состояния организма при взаимодействии с различными факторами внешней среды. В этой связи, основные вопросы, решаемые в рамках проблемы были следующие: 1. Физиология и фармакология кровеносных сосудов с изучением различных аспектов проблемы: действие лекарственных средств на сосуды при их измененном тонусе в комбинации с адреналином на фоне воздействия ионизирующей радиации; вазомоторная активность кровеносных сосудов и метаболизм сосудистой стенки; формирование сосудистой реакции при различных патологических состояниях; биохимические и биофизические аспекты механизма регуляции сосудистого тонуса при воздействии сосудистых средств; биоэнергетическое обеспечение функционального ответа кровеносных сосудов на вазомоторные средства; свертывание крови и стенка кровеносных сосудов. По данной проблеме защищены 2 докторские – А.К. Рачковым и В.К. Петровым и 15 кандидатских диссертаций. 2. Фармакокинетика различных лекарственных средств в условиях их курсового и сочетанного применения. Аспирантами кафедры выполнены и защищены 8 кандидатских, а Ю.Ф. Крыловым в дальнейшем – докторская диссертация. 3. Регуляция обменных процессов в организме с помощью различных лекарственных средств при патологических состояниях – эндокринных нарушениях, опухолевом росте. По данной проблеме выполнили и защитили докторские диссертации Е.А. Строев, Д.Г. Узбекова, В.В. Дунаев, а также несколько ассистентов и соискателей кафедры. В течение ряда лет сотрудники кафедры изучали действия на организм различных биологически активных веществ животного и растительного происхождения. По результатам этих исследований в клиническую практику было внедрено несколько высокоэффективных препаратов, изготовленных на основе различных масел: спермацетового (препарат «Спедиан»), облепихи, шиповника, подорожника, рябины. Эти исследования, а также широкое изучение продуктов пчеловодства – маточного молочка, пыльцы-обножки – позволили подготовить и защитить 10 кандидатских диссертаций. 8 Результаты изучения биологически активных веществ природного происхождения были изложены в ряде монографий «Спермацетовое масло» (1974), «Апилак» (1976), «Спермацетовое масло и регенерация» (1988). Многолетние исследования А.А. Никулина и его учеников внесли существенный вклад в развитие сосудистой фармакологии. Материалы кафедры фармакологии были обобщены в сборниках научных трудов, изданных под редакцией профессора А.А. Никулина: «Сосудистая стенка» (1976), «Кровеносные сосуды» (1981), «Фармакология кровеносных сосудов (1981). За монографию «Сосудистая стенка» решением Президиума ученого медицинского совета МЗ РСФСР в 1977 г. А.А. Никулину был присужден диплом III степени «За лучшую книгу, изданную в 1976 г.». В 1974 г. под редакцией проф. А.А. Никулина вышла в свет монография его ученика профессора Е.А Строева «Биохимия и фармакология опухолевого процесса». Всего под научным руководством профессора А.А. Никулина были подготовлены и защищены 9 докторских и 40 кандидатских диссертаций. Научная деятельность профессора А.А. Никулина и основанной им научной школы была признана научным сообществом как в нашей стране, так и за рубежом. В течение многих лет Анатолий Александрович был членом редколлегии журнала «Фармакология и токсикология», членом Правления Всесоюзного общества фармакологов, председателем его Рязанского отделения. Анатолию Александровичу были присущи высокие человеческие качества: внимательность, доброта, справедливость к сотрудникам и студентам института, он являлся примером высокой работоспособности, организованности и требовательности к себе и ко всем кто работал вместе с ним. Поражала его сдержанность, корректность во взаимоотношениях с подчиненными, терпимость к человеческим ошибкам. А.А Никулин вел активную общественную деятельность, неоднократно избирался народным депутатом Рязанского областного и городского Советов депутатов трудящихся, делегатом XXVI съезда КПСС (1971), являлся председателем Рязанского областного 9 отделения Общества советско-болгарской дружбы, председателем Совета ректоров вузов г. Рязани. За большие заслуги перед здравоохранением профессор А.А. Никулин был отмечен правительственными наградами – орденами «Октябрьской Революции» (1971), «Знак Почета» (1966), медалями «За доблестный труд» в ознаменование 100-летия со дня рождения В.И. Ленина (1970), Болгарской Народной Республики «25 лет народной власти» (1969) и «90 лет со дня рождения Георгия Димитрова (1973), «Ветеран труда» (1986), значком высшей школы СССР «За отличные успехи в работе». К 75-летию со дня рождения проф. А.А. Никулина в соответствии с решением Рязанского городского совета от 13 августа 1998 г. одна из улиц областного центра была переименована в улицу его имени. К 85-летию со дня рождения А.А. Никулина в административном корпусе университета был установлен бюст профессора А.А. Никулина (скульптор – Раиса Лысенина), проведена Первая научно-практическая конференция «Никулинские чтения» с изданием сборника воспоминаний о жизни и деятельности Анатолия Александровича. К 90-летию со дня рождения А.А. Никулина были проведены Вторые «Никулинские чтения», издан сборник воспоминаний «Никулин Анатолий Александрович: Вехи жизненного пути (1923-1996)» (2-е изд.) и Первый выпуск из серии «ДИНАСТИЯ», посвященный медицинской династии Никулиных («Династия. Вып. 1. Никулины»). Для студентов, активно работающих в научном обществе при кафедре фармакологии, Ученым Советом вуза были учреждены стипендии имени профессора А.А. Никулина. Литература 1. Никулин Анатолий Александрович: Автобиография (1953). Личный листок по учету кадров (1953) // Архив РМИ. Личное дело. – 1953-1991. 2. Анатолий Александрович Никулин: (К 60-летию со дня рождения) // Фармакология и токсикология. – 1983. – Т. 46, №4. – С. 120-121. 3. Памяти Анатолия Александровича Никулина // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 1997. – Т. 60, №2. – С. 88. 4. Никулин А.А. В кн.: Федоткин В.Н., гл. ред. Рязанская энциклопедия. – Рязань: Изд-во «Александрия», 2002. – Т. 3. – С. 333-334. 10 5. Никулин Анатолий Александрович (1923-1996): К 85-летию со дня рождения: библиогр. указатель / сост.: Н.А. Козеевская; науч. б-ка РязГМУ. – Рязань, 2008. – 59 с. 6. Рачков А. Любовь на всю жизнь / А. Рачков, Л. Горазеева // Рязанские ведомости. – 2008. – №156. – С. 2. 7. Никулин Анатолий Александрович: Вехи жизненного пути (19231996) / редкол.: д.м.н., проф. Д.Р. Ракита, д.м.н., проф. В.А. Кирюшин, д.м.н., проф. Д.Г. Узбекова, Н.А. Козеевская; РязГМУ. – Рязань, 2009. – 184 с. 8. Никулин Анатолий Александрович. В кн.: Козеевская Н.А., авторсоставитель; д.м.н., проф. Ракита Д.Р., д.м.н., проф. Кирюшин В.А., ред.; РязГМУ им. акад. И.П. Павлова; науч. б-ка. 60 лет на Рязанской земле (1950-2010): материалы по истории Рязанского гос. мед. ун-та им. акад. И.П. Павлова. – Рязань, 2010. – С. 17-20. 9. Никулин Анатолий Александрович: Вехи жизненного пути (19231996) / редкол.: д.м.н., проф. Р.Е. Калинин, д.м.н., проф. В.А. Кирюшин, д.м.н., проф. Д.Г. Узбекова, Н.А. Козеевская. – 2-е изд., перераб. и доп. – Рязань: РязГМУ, 2012. – 187 с. 10. ДИНАСТИЯ. Вып. 1: Никулины: (К 90-летию со дня рождения А.А. Никулина): сборник документов, воспоминаний и фотографий / сост.: Н.А. Козеевская; под ред. д.м.н., проф. Р.Е. Калинина, д.м.н., проф. В.А. Кирюшина; Ряз. гос. мед. ун-т им. акад. И.П. Павлова; науч. б-ка. – Рязань, 2013. – 110 с. 11 Влияние циклопролилглицина на характеристики связывания глутаматных и ГАМК-рецепторов в мозге мышей линии BALB/c Абдуллина А.А., Васильева Е.В., Кондрахин Е.А., Ковалѐв Г.И. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В.Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. ЦПГ (цикло-L-пролилглицин) был синтезирован и фармакологически изучен в НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, впоследствии там же было обнаружено, что ЦПГ является эндогенным веществом в мозге. Ранее были выявлены антиамнестическая, анксиолитическая, антигипоксическая, нейропротективная и антидепрессивноподобная активности ЦПГ, но механизм действия пептида до сих пор невыяснен. Цель. Изучить влияние ЦПГ (1 и 2 мг/кг/день) на NMDA-, mGluII-, ГАМКA-, ГАМКB-рецепторы в мозге мышей линии BALB/с. Материалы и методы. Исследования проводили на самцах мышей линии BALB/с массой 25-30 г. Животным в течение двух недель один раз в сутки внутрибрюшинно вводили физ. раствор (контрольная группа) и ЦПГ (опытная группа), после животных декапитировали и выделяли гиппокамп и фронтальную кору. С помощью радиолигандного анализа определяли влияние ЦПГ на характеристики связывания [G-3H]MK-801 (селективный антагонист) и [G-3H]-LY354740 (селективный агонист) с NMDA- и mGluRII-рецепторами гиппокампа, а также [G-3H]SR95531 (селективный антагонист) и [G-3H](-)-Баклофен (селективный агонист) с ГАМКA- и ГАМКB-рецепторами коры мозга, соответственно. Результаты экспериментов ex vivo оценивали с помощью рассчитанных по координатам Скетчарда величин Кd и Bmax, отражающих степень сродства рецептора к лиганду (нМ) и количество мест связывания лиганда (фмоль/мг белка). Результаты и их обсуждение. Под влиянием ЦПГ в обеих дозах величины Кd NMDA-, mGluII-, ГАМКA-, ГАМКB-рецепторов оставались неизменными. Двухнедельное введение ЦПГ в дозе 1 мг/кг/день повышало количество мест связывания ГАМКA-рецепторов на 36% в коре мозга, не вызывало изменений характеристик ГАМКBрецепторов в той же структуре мозга и NMDA-, mGluII-рецепторов в гиппокампе мышей Balb/c. Двухнедельное введение ЦПГ в дозе 2 12 мг/кг/день снижало плотность NMDA-рецепторов на 22% в гиппокампе мышей Balb/c и не влияло на показатели mGluIIрецепторов в той же структуре и ГАМК-рецепторов во фронтальной коре мозга. Полученные данные говорят о наличии разных механизмов действия ЦПГ в зависимости от выбранной дозы при одинаковых режимах введения. Выводы. 1. ЦПГ в выбранных дозах при двухнедельном введении не влиял на величины Кd NMDA-, mGluII-, ГАМКA-, ГАМКB-рецепторов мозга мышей BALB/с. 2. При двухнедельном введении ЦПГ в дозе 1 мг/кг/день повышается плотность ГАМК Aрецепторов во фронтальной коре мышей BALB/с. 3. При двухнедельном введении ЦПГ в дозе 2 мг/кг/день снижается плотность NMDA-рецепторов в гиппокампе мышей BALB/с. Определение содержания флавоноидов в листьях Гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.) Ажикова А.К., Сергалиева М.У. ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России, г. Астрахань E-mail: [email protected] Актуальность. Поиск и изучение новых источников биологически активных веществ растительного происхождения, обладающих широким спектром фармакологической активности, позволяет расширить сырьевую базу отечественных лекарственных растений. Научный интерес представляют реликтовые формы растений, среди которых наименее изучено растение Гинкго двулопастный (Ginkgo biloba L.). Уникальный химический состав листьев дерева Гинкгодвулопастного определяет широкий спектр физиологической активности, обусловленный действием биологически активных веществ первичного и вторичного метаболизма. Цель. Определение содержания флавоноидов в экстрактах листьев Гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.), произрастающего на территории Краснодарского края. Материалы и методы. Объектом исследования послужило воздушно-высушенное теневым способом сырье листьев Гинкго двулопастного, собранного на территории Краснодарского края. Для определения содержания флавоноидов в листьях Гинкго двулопастного 13 использовали методику количественного определения суммы флавоноидных гликозидов в растительном сырье. Процентное содержание флавоноидных гликозидов в сырье Гинкго двулопастного в пересчете на рутин определяли методом дифференциальной спектрофотометрии. Идентификация изучаемых биологически активных веществ основывалась на способности флавоноидных гликозидов образовывать окрашенный комплекс с алюминия хлоридом. Результаты и их обсуждение. В ходе определения содержания суммы флавоноидов, экстрагируемых из листьев Гинкго двулопастного, было установлено, что наибольший выход экстрактивных извлечений суммы флавоноидных гликозидов из сырья листьев Гинкго двулопастногонаблюдается при длине волны 400 nm. Содержание флавоноидов в водно-спиртовом экстракте листьев Гинкго двулопастногосоставило 1,35%. Выводы. Полученные экспериментальные данные флавоноидного состава свидетельствуют о значительном их содержании в листьях Гинкго двулопастного. Данный факт позволяет считать растение Гинкго двулопастное (Ginkgo biloba L.) ценным видом, обладающим широким спектром физиологической и фармакологической активности. Таким образом, исследуемый растительный источник является перспективным лекарственным сырьем и диктует необходимость дальнейших исследований химического состава, что послужит основанием для разработок новых эффективных лекарственных форм на его основе и будет способствовать импортозамещению отечественных лекарственных препаратов. Влияние хронической алкоголизации на содержание дезацил-грелина в головном мозге и эффекты грелина и его антагониста [D-Lys3]-GHRP-6 на условную реакцию предпочтения места этанола у крыс Азаренко С.В., Новикова В.С., Хохлов П.П., Лебедев А.А., Морозов В.И., Яклашкин А.Б., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Цель. У крыс, подвергнутых алкоголизации 15%-ным раствором этанола в течение 6 месяцев, изучали влияние грелина и его 14 антагониста [D-Lys3]-GHRP-6 на формирование, сохранение и угашение условной реакции предпочтения места (УРПМ) этанола (0,5 г/кг внутрибрюшинно) в 2-камерной установке. Материалы и методы. Крыс самцов Вистар алкоголизировали в течение 6 месяцев 15%-ным раствором этанола в качестве единственного источника жидкости при свободном доступе к сухому брикетированному корму. Для выработки условной реакции предпочтения места (УРПМ) этанола у крыс использовали 2камерную установку, различающуюся гладким и решетчатым полами. УРПМ вырабатывали 5 дней. На 5-й день эксперимента регистрировали время нахождения в отсеках с различной текстурой пола в течение 15 минут в условиях беспрепятственного перемещения крыс в 2-камерной установке. Полученные данные представляли в процентах по времени пребывания в отсеке, ассоциированном с введением этанола, к общему времени исследования. После поведенческих исследований крыс декапитировали и иммуноферментным методом определяли концентрацию дезацилгрелина в крови и мозге. Результаты и их обсуждение. Антагонист рецепторов грелина [D-Lys3]-GHRP-6, введенный интраназально в дозе 10 мкг в 20 мкл, блокировал выработку УРПМ, что проявлялось уменьшением на 29,5% времени нахождения в предпочитаемой камере, ассоциированной с введение этанола. После угашения УРПМ и грелин (20 мкг в 20 мкл интраназально), и его антагонист (10 мкг в 20 мкл) блокировали возобновление (экспрессию) УРПМ этанола в среднем на 30%. Методом иммуноферментного анализа определен уровень дезацил-грелина, изоформы грелина, стабильной в крови и тканях. Базальный уровень дезацил-грелина в различных структурах головного мозга крыс колебался: наибольшая концентрация дезацилгрелина зарегистрирована в миндалине и наименьшая – в гипоталамусе. В ходе хронической алкоголизации концентрация дезацил-грелина в миндалине снижалась, а в гиппокампе повышалась относительно базального уровня. Выводы. Сделано заключение об участии системы грелина в механизмах условного подкрепления. 15 Доклиническое изучение безопасности препарата с антидепрессивной и нейропротекторной активностью ГСБ-106 Алексеев И.В. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова синтезирован новый оригинальный препарат ГСБ-106, представляющий собой димерный пептид, обладающий антидепрессивной и нейропротекторной активностью. Цель. Изучение острой токсичности препарата ГСБ-106. Задачи исследования – определить среднелетальные дозы, а также установить выраженность токсического действия и переносимость препарата при однократном введении препарата ГСБ-106, зарегистрировать сроки развития интоксикации и гибели животных с подробным описанием клинической картины. Материалы и методы. Исследование проводили на белых беспородных мышах (n=48) и крысах (n=48) обоего пола. Препарат ГСБ-106 и 1% раствор крахмала в качестве контроля вводили однократно перорально и внутрибрюшинно. Определение средней смертельной дозы препарата не представлялось возможным из-за отсутствия гибели животных в условиях достижения максимально возможных концентраций и максимально допустимых объемов введения. Результаты и их обсуждение. При пероральном введении ГСБ106 в максимальной дозе 12 г/кг не было отмечено выраженных признаков интоксикации, за исключением кратковременного угнетения двигательной активности в первые часы после введения препарата. В дальнейшем, в течение всего 14 дневного периода наблюдения не было зарегистрировано ни одного случая гибели животных, дыхание, сердечно-сосудистая деятельность, состояние шерстного покрова, кожи и видимых слизистых оболочек, реакция на внешние раздражители соответствовали норме. При внутрибрюшинном введении препарата в дозе 4 г/кг у экспериментальных животных первые три дня двигательная активность и реакция на внешние раздражители была повышенной, у некоторых из них наблюдался тремор. Животные горбились, животы 16 и бока втянуты, шерсть взъерошена. С четвертых суток внешний вид и поведение у них постепенно улучшались, и к окончанию эксперимента были на уровне контроля. Выводы. В результате исследования установлено, что препарат ГСБ-106 при пероральном или внутрибрюшинном введении в максимально возможных объемах и дозах – 12 г/кг и 4 г/кг, соответственно, не вызывает гибели экспериментальных животных. Исходя из полученных данных препарат ГСБ-106 может быть отнесен к 5 классу токсичности – практически нетоксичного вещества (по классификации Сидорова К.К., 1973 г.) В соответствии с ГОСТОМ 12.1.007-76 препарат ГСБ-106 относится к 4 классу опасности для перорального способа введения. Исследование цитотоксических свойств наночастиц сложного оксида железа, легированного ионами марганца, на клеточных культурах в качестве модельной системы Акопджанов А.Г., Борисова А.И., Семейкин А.В., Шимановский Н.Л. ФГБОУ РНИМУ имени Н.И. Пирогова, г. Москва Е-mail: [email protected] Актуальность. Повышение эффективности ранней диагностики онкологических образований является одной из ключевых проблем в современной клинической онкологии. Одним из перспективных направлений ее решения является использование наночастиц сложного оксида железа (СЛОЖ), легированного ионами марганца, в качестве контрастного вещества в рентгенодиагностике. Сверхмалые наночастицы СЛОЖ с суперпарамагнитными свойствами представляются оптимальной основой для создания МРТ-контрастного средства, позволяющего влиять на основные параметры визуализации – времена продольной и поперечной релаксации (Т1 и Т2). Введение в структуру наночастицы атома марганца оптимизирует еѐ фармакологические и магнитные свойства, позволяя варьировать контрастность полученного МРТ-изображения. Цель. Целью данного исследования является определение цитотоксичности и биосовместимости сверхмалых наночастиц СЛОЖ, легированных двухвалентными магнитными металлами (в т.ч. марганца), предназначенных для биомедицинского применения в 17 качестве контрастного вещества для МРТ-диагностики и поиск препарата, сочетающего в себе высокую биосовместимость, а также оптимальные контрастные свойства. Материалы и методы. Получены препараты наночастиц СЛОЖ, легированных атомами марганца, магния, кобальта и цинка методом низкотемпературного химического синтеза по Элмору. Оценка биосовместимости синтезированных препаратов проводилась на клеточных культурах линии HeLa, DU-145, MeF методом культивирования клеток в 96-луночном планшете при 5% СО2 с добавлением различных концентраций растворов наночастиц в течение 24 и 48 часов, с последующей постановкой МТТ-теста. Повторяемость опытов: не менее 5 на каждый временной интервал. Результаты и их обсуждение. Установлено, что при 24 ч. инкубации цитотоксичность комплекса сложного оксида железа с марганцем меньше, чем у контрольного раствора сложного оксида железа на 6,1% для разведения 2 порядка; на 3,7% для разведения 3 порядка*. При 48ч. инкубации цитотоксичность комплекса сложного оксида железа с марганцем больше, чем у раствора сложного оксида железа на 25,2% для разведения 2 порядка; меньше на 12,1% для разведения 3 порядка*. Выводы. Синтезированные водные растворы сверхмалых наночастиц магнетита (СЛОЖ), легированных ионами марганца, магния, кобальта и цинка являются биосовместимыми. Изучение противоишемического действия производного триамина – соединения АЛМ-802 и препарата ранолазина на модели острой эндокардиальной ишемии миокарда у крыс с эндотелиальной дисфункцией Барчуков В.В. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Поиск новых оригинальных соединений, обладающих кардиопротективной активностью, несомненно, является * Зд.: указаны данные только для 1 препарата, на клеточной линии HeLa 18 актуальным. Ранее нами в ряду α,ωдиарилметильных производных бис(ωаминоалкил)аминов было выявлено соединение-лидер АЛМ802, которое по своей кардиопротективной активности, как минимум, не уступает эталонным pFOX ингибиторам триметазидину и ранолазину. Цель. Сравнительное изучение противоишемической активности соединения-лидера АЛМ802 и эталонного препарата ранолазин на модели острой эндокардиальной ишемии миокарда у крыс с эндотелиальной дисфункцией. Материалы и методы. Исследования проводились на белых беспородных крысах-самцах массой 250-300 г. Эндотелиальная дисфункция моделировалась посредством гипергомоцистеинемии, индуцированной алиментарным избытком аминокислоты метионина (3 г/кг, ежедневно, в течение 7 дней, в/ж). Острую эндокардиальную ишемию миокарда вызывали неселективным агонистом βадренорецепторов – изопротеренолом (20 мкг/кг/мин, в/в), интенсивность ишемии оценивалась по величине депрессии сегмента ST во II-м стандартном отведении на ЭКГ. АЛМ802 и ранолазин вводились в/в болюсом в дозах 2 мг/кг и 10 мг/кг соответственно за две минуты до начала инфузии изопротеренола. Результаты и их обсуждение. Депрессия сегмента SТ у интактных крыс, получавших АЛМ802 (0,02±0,01 мВ) и ранолазин (0,09±0,02 мВ), по сравнению с контролем (0,16±0,02 мВ) была статистически значимо меньше (p<0,001 и р=0,022 соответственно), что позволяет говорить о наличии противоишемической активности обоих веществ. У крыс же с эндотелиальной дисфункцией депрессию сегмента SТ предотвращало только соединение АЛМ802 (0,16±0,02 мВ), в то время как эталонный препарат ранолазин (0,33±0,07 мВ) в этих условиях оказался не эффективен (контроль: 0,28±0,03 мВ, p=0,02 и р=0,115 соответственно). Выводы. Представитель ряда α,ωдиарилметильных производных бис(ωаминоалкил)аминов – соединение АЛМ802 в отличие от препарата сравнения ранолазина в условиях эндотелиальной дисфункции у крыс проявляет выраженную антиишемическую активность. 19 Участие серотониновой системы в механизмах блокирующего воздействия SB-408124 на самостимуляцию латерального гипоталамуса у крыс Бессолова Ю.Н., Ефимов Н.С., Карпова И.В., Бычков Е.Р., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Актуальность. Реакция самостимуляции латерального гипоталамуса у крыс является одной из перспективных моделей для изучения фармакологических препаратов, потенциально способных купировать развитие патологических зависимостей. Значительное усиление реакции самостимуляции происходит при активности дофаминергической системы. В наших предыдущих исследованиях показано, что на фоне фенамина локальное введение антагониста орексиновых рецепторов первого типа (OX1R) SB-408124 в ядро ложа конечной полоски (ЯЛКП) блокирует самостимуляцию у крыс. Цель. Возникает вопрос, в чем состоит механизм обнаруженного блокирующего действия SB-408124? Материалы и методы. Исследование проводили на 27 самцах крыс Вистар массой 350-400 г. За неделю до начала экспериментов животным в латеральный гипоталамус вживляли электроды для самостимуляции и в ЯЛКП – канюли для микроинъекций. Электроды для самостимуляции вживляли билатерально, а канюли унилатерально (с правой или с левой стороны). Контролем служили интактные животные и крысы, получавшие фенамин. В день эксперимента животным вводили системно фенамин (1 мг/кг, в/б), а через 10 минут в ЯЛКП локально SB-408124 (1 мкг в 1 мкл на крысу). Через 15 минут после микроинъекции крыс декапитировали. Методом ВЭЖХ с электрохимической детекцией в левой и правой части гипоталамуса определяли уровень серотонина (5-ГТ) и его метаболита (5-ГИУК). Результаты и их обсуждение. У интактных животных уровень 5-ГИУК в левом гипоталамусе был выше, чем в правом (P<0,05). При системном введении фенамина соотношение 5-ГИУК/5-ГТ достоверно снижалось как в левом (P<0,01), так и в правом гипоталамусе (P<0,05). При этом содержание 5-ГТ и 5-ГИУК 20 становилось симметричным. Примечательно, что на фоне действия фенамина, эффекты антагониста орексина проявлялись только на стороне, контралатеральной микроинъекции, причем достоверные изменения показателей серотонинергической системы возникали только в левом гипоталамусе. При введении антагониста орексина в правое ЯЛКП содержание 5-ГТ в левом гипоталамусе повышалось как по сравнению с интактными крысами (P<0,05), так и по сравнению с контрольными животными, получавшими фенамин (P<0,05). Выводы. Левый гипоталамус играет ведущую роль в развитии реакции самостимуляции. Серотонинергическая система вовлечена в механизм блокирующего действия антагониста орексиновых рецепторов на самостимуляцию, активированную фенамином. Роль дофамина в орексигенных и подкрепляющих эффектах электрической стимуляции гипоталамуса у крыс Бессолова Ю.Н., Лебедев А.А., Ефимов Н.С., Абросимов М.Е., Ветлугин Э.А., Москалев А.Р., Лебедев В.А., Бычков Е.Р., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Цель. Исследование орексигенных и подкрепляющих эффектов при электрической стимуляции латерального гипоталамуса после введения антагониста D2 рецепторов дофамина сульпирида у крыс самцов Вистар. Материалы и методы. Для воспроизведения самораздражения мозга крыс обучали нажимать на педаль в камере Скиннера. Анализировали частоту и порог самостимуляции за 5 мин. Затем животное помещали камеру с кормушкой. Включали электрическую стимуляцию гипоталамуса в навязанном режиме и регистрировали латентный период подхода к кормушке и число съеденных пищевых шариков (100 мг) за 5 мин. Затем производили инъекцию сульпирида внутрибрюшинно и через 15-20 мин повторно регистрировали реакцию самостимуляции и показатели пищевого поведения. Результаты и их обсуждение. Электрическая стимуляция латерального гипоталамуса вызывала реакцию самостимуляции в камере 21 Скиннера и орексигенные эффекты крыс в камере для тестирования пищевого поведения. В экспериментах использовали сытых животных, которые без стимуляции мозга не подходили к кормушке. Сульпирид (5 мг/кг и 20 мг/кг, внутрибрюшинно) дозозависимо снижал как подкрепляющие свойства самостимуляции, так и орексигенные эффекты в камере для тестирования пищевого поведения. При введении сульпирида (5 мг/кг) снижалось число нажатий педали на 18% и повышался порог самостимуляции на 13%. После введения сульпирида (5 мг/кг) уменьшилось число съеденных пищевых шариков на 28% (p<0,05). При использовании сульпирида (20 мг/кг) уменьшалось число нажатий педали с 56,4±7,3 до 30,7±4,3 (p<0,01) и порог самостимуляции повышался на 38%. При этом на 50% уменьшалось число съеденных пищевых шариков (с 5,8±1,3 до 2,9±0,4; p<0,01). Выводы. Таким образом, в работе показано, что при электрической стимуляции одного и того же электрода в латеральном гипоталамусе наблюдается как реакция самораздражения в камере Скиннера, так и пищевая реакция у сытых крыс в камере для тестирования пищевого поведения. После введения сульпирида неизменно наблюдался дозозависимый эффект угнетения системы награды и пищевого поведения, как показатели чувствительности метода. Работа открывает перспективы анализа сопряжения пептидных и моноаминергических механизмов в орексигенных и подкрепляющих эффектах электрической стимуляции латерального гипоталамуса. Влияние нового производного хиназолина с гуанидиновым компонентом на пролиферативные процессы в иммунокомпетентных органах Борисов А.В. ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград E-mail: [email protected] Актуальность. Принимая во внимание значение иммунного дисбаланса в патогенезе заболеваний различной этиологии, в настоящее время актуальной проблемой остается поиск новых эффективных иммунокорригирующих средств. Одним из направлений поиска подобных препаратов является синтез и изучение производных пиримидина, в том числе и синтезированных производных хиназолина. 22 Целью работы явилось изучение иммунотропных свойств соединения под лабораторным шифром «ВМА-13-15», на фоне циклофосфамидной иммуносупрессии. Материалы и методы. Эксперименты проведены на белых беспородных мышах – самцах, 3-4 мес. возраста. Животные были разделены на группы (n=10): контроль 1 (позитивный) – животные, получавшие перорально дистиллированную воду в объеме, эквивалентном изучаемому соединению; контроль 2 (негативный) – мыши, получавшие перорально дистиллированную воду в объеме, эквивалентном изучаемому соединению и циклофосфамид (в дозе 200 мг/кг, внутрибрюшинно, однократно) и опытные животные, которые получали на фоне введения циклофосфамида изучаемое производное хиназолина «ВМА-13-15» (в дозе 9 мг/кг, перорально, в течение 4-х дней, за день до введения циклофосфамида). Иммунотропные свойства соединения «ВМА-13-15» оценивали по изменению лимфоидного индекса (ЛИ) и содержания ядросодержащих клеток (ЯСК) в органах системы иммунитета (тимуса и селезенки). Результаты были обработаны статистически с применением tкритерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Результаты и их обсуждение. Введение циклофосфамида вызывало снижение ЛИ селезенки на 40 % и количества ЯСК в ней более, чем на 75% (p˂0,05). Так же, отмечалось уменьшение ЛИ тимуса более чем на 30% и количества ЯСК в тимусе – на 60% (p˂0,05). Введение изучаемого соединения под лабораторным шифром «ВМА-13-15» вызвало стимуляцию пролиферативных процессов в иммунокомпетентных органах, на что указывает увеличение ЛИ селезенки и количества ЯСК на 29% (p˃0,05) и 40% (p˂0,05) соответственно по сравнению с негативным контролем. Количество тимоцитов после введения изучаемого соединения увеличилось в 2 раза (p˂0,05), и ЛИ на 27% относительно контроля 2 (p˂0,05). Выводы. Новое производное хиназолина, соединение под лабораторным шифром «ВМА-13-15», на фоне циклофосфамидной иммуносупрессии, способствует восстановлению лимфопролиферативных процессов в органах иммунной системы, что проявляется корригирующим действием на показатели ЛИ и клеточности тимуса и селезенки. 23 Влияние соединения АВ-19 на внутриглазное давление и изменение прозрачности хрусталика глаза у крыс со стрептозотоцин индуцированным сахарным диабетом Буняков М.В., Говорова Ю.А. ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград E-mail: [email protected] Актуальность. Диабетическая ретинопатия является одним из специфических проявлений сахарного диабета, приводящим к потере или ухудшению зрения у подавляющего большинства подверженных данной патологии людей. Кроме того, высокое содержание глюкозы в крови, приводит к развитию дегенеративных нарушений не только глазного дна, но и хрусталика. Цель. Изучение влияния соединения АВ-19 на внутриглазное давление и изменение прозрачности хрусталика глаза у крыс со стрептозотоцин индуцированным сахарным диабетом. Материалы и методы. Сахарный диабет вызывали внутривенным введением стрептозотоцина в дозе 45 мг/мл. Спустя двое суток после инъекции стрептозотоцина определяли уровень глюкозы крови у животных. В случае если уровень глюкозы превышал 20 ммоль/л, животное отбиралось для дальнейшего исследования. Соединение АВ-19 (синтезированное Уральским федеральным университетом, г. Екатеринбург) и аминогуанидин вводили животным один раз в сутки в течение трех месяцев. Осмотр глаза лабораторного животного проводился с применением портативной щелевой лампы Digital hand-held slit lamp. Перед исследованием животным закапывали тропикамид 1%. Изменения прозрачности хрусталика были классифицированы на 4 стадии. Внутриглазное давление определяли с помощью офтальмологического ветеринарного тонометра Tonovet (Финляндия). Результаты и их обсуждение. Согласно полученным данным отображение переднего сегмента показало, что в контрольной группе животных линзы были прозрачные до конца эксперимента. В группе со стрептозотоцин-индуцированным диабетом развивалась 2 стадия изменения прозрачности хрусталика глаза. У животных получающих ФС (фармакологическую субстанцию) АВ-19 в дозе 5 мг/кг развивалась 1 стадия изменения прозрачности хрусталика глаза. В 24 остальных группах наблюдалась дозозависимая отсроченная прогрессия катаракты по сравнению с группой диабетических животных. В группе животных, получающих аминогуанидин, изменения прозрачности хрусталика были такие же, как и в группах животных, получающих ФС АВ-19 в дозах 10, 20 и 50 мг/кг. Выявлено, что у животных со стрептозотоциновым диабетом на 32% повышается внутриглазное давление. В группах животных получающих ФС АВ-19 в различных дозах данный показатель снижался до нормы. У животных получающих аминогуанидин внутриглазное давление снижалось на 28%. Выводы. Фармакологическая субстанция АВ-19 способствует отсроченному развитию катаракты и нормализует внутриглазное давление лабораторных животных со стрептозотоцин-индуцированным диабетом. Влияние аналогов циклопролилглицина на характеристики связывания глутаматных и ГАМК-рецепторов в мозге мышей линии BALB/c Васильева Е.В., Абдуллина А.А., Кондрахин Е.А., Ковалѐв Г.И. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Цикло-L-пролилглицин (ЦПГ) был синтезирован в НИИ фармакологии им. В.В. Закусова, позднее там же обнаружилось, что он является эндогенным веществом в мозге, а также метаболитом Ноопепта, обладает антиамнестическим, анксиолитическим, антидепрессивным, антигипоксическим и нейропротективным действиями. Впоследствии были синтезированы структурные аналоги ЦПГ: цикло-L-пипеколилглицин (ГЗК-001), (S)тетрагидро-2H-пирроло[1,2-е]имидазол-1,3-дион (ГЗК-002), которые проявили схожие с ЦПГ виды активностей. Цель. Изучить влияние ГЗК-001 и ГЗК-002 (1 и 2 мг/кг/день) на NMDA-, mGluII-, ГАМКA-, ГАМКB-рецепторы в мозге мышей линии BALB/с. 25 Материалы и методы. Исследования проводили на самцах мышей линии BALB/с массой 25-30 г. Животным в течение 2 недель один раз в сутки в/б вводили физ. раствор (контроль) и аналоги ЦПГ. Животных декапитировали и выделяли гиппокамп и фронтальную кору. Радиолигандным методом определяли влияние ЦПГ на характеристики связывания [3H]MK-801 (селективный антагонист) и [3H]-LY354740 (селективный агонист) с NMDA- и mGluRIIрецепторами гиппокампа, [3H]SR95531 (селективный антагонист) и [3H] (-)Баклофен (селективный агонист) с ГАМКA-и ГАМКBрецепторами коры мозга, соответственно. Результаты экспериментов ex vivo оценивали с помощью рассчитанных по координатам Скетчарда величин Кd и Bmax, отражающих степень сродства рецептора к лиганду (нМ) и количество мест связывания лиганда (фмоль/мг белка). Результаты и их обсуждение. Под влиянием выбранных аналогов в обеих дозах величины Кd NMDA-, mGluII-, ГАМКA-, ГАМКB-рецепторов оставались неизменными. ГЗК-001 и ГЗК-002 в дозе 2 мг/кг/день повышали количество мест связывания NMDAрецепторов в гиппокампе на 20 и 15%, соответственно, в дозе 1 мг/кг/день изменений не наблюдалось. Все выбранные аналоги в обеих дозах понижали плотность ГАМКA-рецепторов (1 мг/кг/день: ГЗК-001 – 37%, ГЗК-002 – 33%; 2 мг/кг/день: ГЗК-001 – 40%, ГЗК-002 – 33%), но увеличивали число мест связывания ГАМКВ-рецепторов (1 мг/кг/день: ГЗК-001– 46%, ГЗК-002 – 25%; 2 мг/кг/день: ГЗК-001 – 27%, ГЗК-002 – 70%) в коре мозга. Оба аналога не влияли на показатели mGluII-рецепторов в гиппокампе. Полученнные данные говорят об однонаправленности действия исследуемых аналогов ЦПГ. Выводы. 1. Исследуемые аналоги в выбранных дозах при 2недельном введении не влияют на величины Кd NMDA-, mGluII-, ГАМКA-, ГАМКB-рецепторов мозга мышей BALB/с. 2. Оба аналога в дозе 2 мг/кг/день повышают плотность NMDA-рецепторов в гиппокампе. 3. Выбранные аналоги в обеих дозах изменяют количество мест связывания ГАМК-рецепторов в коре мозга: понижают ГАМКA- и увеличивают ГАМКB. 26 Исследование противовоспалительного действия мексидола при однократном внутрибрюшинном введении на модели уксусного перитонита у мышей Васильчук А.Г.1, Иванова Е.А.2, Воронина Т.А.2 Московский медицинский университет «РЕАВИЗ», г. Москва (1) ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва (2) Е-mail: [email protected] Актуальность. При воспалении происходит повышение проницаемости мембран клеток, интенсифицируются реакции свободно-радикального окисления липидов. Избыток активных форм кислорода приводит к деструкции клеточных мембран и повреждению макромолекул. Поэтому изучение влияния препаратов антиоксидантов на воспалительный процесс представляет интерес с целью оценки перспективы их использования в комплексной терапии воспалительных заболеваний. Цель. Оценить влияние ингибитора свободно-радикальных процессов препарата мексидола (этилметилгидроксипиридина сукцината) на экссудативное воспаление на модели уксусного перитонита у мышей. Материалы и методы. Опыт проводили на аутбредных мышахсамцах, массой 22-26 г. Перитонит вызывали внутрибрюшинным введением животным 1% раствора уксусной кислоты из расчѐта 1 мл раствора на 100 г массы тела. За 40 минут до индукции воспаления мышам опытных групп внутрибрюшинно вводили мексидол (субстанция) в дозах 50 мг/кг, 100 мг/кг и 200 мг/кг. Животным контрольной группы внутрибрюшинно вводили физиологический раствор в эквивалентном объѐме. Через 3 часа после введения раствора уксусной кислоты мышей подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации, вскрывали брюшную полость и собирали экссудат. О наличии у препарата противовоспалительного действия судили по уменьшению на его фоне массы экссудата относительно массы экссудата в контрольной группе. Данные представлены как среднее ± ошибка среднего. Результаты и их обсуждение. Результаты проведѐнного эксперимента показали, что масса экссудата в группах мышей, получавших мексидол во всех исследуемых дозах, значимо не отличалась от массы экссудата в контрольной группе. Однако стоит 27 отметит, что если при введении изучаемого препарата в дозе 50 мг/кг масса экссудата была практически такой же, как в контрольной группе (контроль: 504,5±34,9 мг; мексидол 50 мг/кг: 496,3±53,4 мг), то на его фоне в дозах 100 мг/кг и 200 мг/кг наблюдалось некоторое снижение степени экссудации: на 12,1% и 13,4%, соответственно, по сравнению с контрольной группой. Возможно, мексидол способен проявлять противовоспалительное действие в этих дозах при субхроническом или хроническом введении, либо на других экспериментальных моделях. Выводы. Мексидол при однократном внутрибрюшинном введении в дозах 50, 100 и 200 мг/кг не оказывает значимого влияния на выраженность экссудативного воспаления на модели уксусного перитонита у мышей. Влияние димерного дипептидного миметика фактора роста нервов ГК-2 на объем поражения мозга и неврологический дефицит у крыс Волкова А.А., Поварнина П.Ю. ФГБНУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. По данным ВОЗ инсульт – вторая причина смертности в мире и России в частности. Сегодня единственным эффективным методом лечения ишемического инсульта является тромболитическая терапия. Перспективной является стратегия фармакотерапии с помощью малых молекул, обладающих действием эндогенного нейропротекторного белка – фактора роста нервов (NGF). Димерный дипептидный миметик гексаметилендиамид бис-(Nмоносукцинил-L-глутамил-L-лизина) (ГК-2) был сконструирован на основе структуры наиболее экспонированного участка бета-изгиба 4-й петли NGF. В исследованиях in vitro было показано, что ГК-2 проявляет нейропротекторную активность в концентрациях 10-5-10-9 М [1]. ГК-2 активирует специфические для NGF TrkA-рецепторы и повышает уровень фосфорилирования Akt-киназы, но не влияет на фосфорилирование MAP-киназ. Ингибиторный анализ подтвердил, что нейропротекторная активность ГК-2 полностью опосредована активацией PI3K/Akt пути [2]. Для дипептида ГК-2 был показан терапевтический эффект на разных моделях церебральной ишемии у 28 грызунов. ГК-2 активен in vivo в дозах 0,01-5 мг/кг при внутрибрюшинном введении и 5-10 мг/кг при пероральном введении [3]. Цель. Изучение терапевтического окна нейропротекторного действия ГК-2. Материалы и методы. Для исследования была выбрана модель внутрисосудистой окклюзии средней мозговой артерии с последующей реперфузией. Перекрытие кровотока осуществляли в течение 1 ч. Объем инфаркта оценивали через 7 дней после операции с помощью морфометрии срезов мозга, окрашенных ТТХ. Для оценки неврологического дефицита на 3-и и 6-е сутки после операции проводили тест стимулирования конечностей. Для изучения терапевтического окна препарат вводили через 4, 6 или 8 ч после операции и затем раз в сутки в течение 7 дней внутрибрюшинно в дозе 1 мг/кг. Результаты и их обсуждение. Было установлено, что ГК-2 значимо снижает объем инфаркта мозга при введении через 4, 6 и 8 ч на 35, 65 и 50%, соответственно. Также ГК-2 значимо улучшал неврологический статус оперированных животных в условиях терапевтического окна 6 ч. как на 3-и, так и на 6-е сутки после операции. Что согласуется с данными, что объем инфаркта мозга, сформированный к 5-7-м суткам связан обратной зависимостью с концентрацией NGF в спинномозговой жидкости в 1 сутки после инсульта. Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности дальнейших испытаний ГК-2 в качестве нейропротективного препарата, потенциально способного снижать негативные последствия ишемического инсульта. Показатели активности антиоксидантной системы плазмы крови в оценке действия нейропротекторных средств при церебральной ишемии Ганцгорн Е.В., Хлопонин Д.П., Макляков Ю.С. ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России, г. Ростов-на-Дону E-mail: [email protected] Актуальность. Известно, что ишемия головного мозга (ИГМ) является мультифакториальным процессом, включающим, в том числе, активацию реакций оксидантного стресса, что обусловливает целесообразность изучения антиоксидантных (АО) свойств нейропротекторов. 29 Цель. Оценить показатели АО системы (АОС) крови крыс с экспериментальной ИГМ (ЭИГМ) при профилактическом введении пирацетама, винпоцетина и мелаксена. Материалы и методы. Исследование выполнено на 80 беспородных крысах-самцах массой 250-300 г., которые были разделены на 5 групп (гр.) по 16 крыс в каждой. Из них: 2 гр. контроля – гр. ложноооперированных крыс (гр. ЛО) и гр. животных, подвергшихся ЭИГМ (гр. ИШ)), получали физ. раствор в дозе 0,2 мл/сут в/б; и 3 опытных гр., которым производилась ЭИГМ путем двухсторонней окклюзии общих сонных артерий по окончании 2-х недельного курса пирацетама (П) в дозе 300 мг/кг/сут в/б (гр. П), винпоцетина (В) в дозе 5 мг/кг/сут в/б (гр. В) и мелаксена (М) в дозе 0,25 мг/кг/сут в/б (гр. М). Через 24 часа после ЭИГМ у выживших животных производили забор крови и оценивались параметры АОС плазмы крови: активность супероксиддисмутазы (СОД), каталазы, церулоплазмина (ЦП) и объем утилизированной гидроперекиси (H2O2). Статистический анализ выполнялся с применением пакета программ STATISTIСA 6.0 и критерия t-Стьюдента (при р<0,05). Результаты и их обсуждение. Анализ выживаемости показал, что в гр. ИШ 24-часовую окклюзию переживали 34,8% крыс. В опытных гр. самая высокая выживаемость наблюдалась в гр. В (61,5%), а низкая (44,4%) – в гр. П. Развитие окислительного стресса у крыс с ЭИГМ сопровождалось достоверно (р<0,05) более высокой активностью СОД в гр. ИШ по сравнению с животными гр. ЛО (1,15 и 0,98 у.е./мин∙мг Hb, соответственно). Кроме того, на 31,5% (р<0,01) увеличивался объем утилизированной H2O2, несмотря на то, что активность каталазы стала на 6% ниже (р<0,05) ее уровня в гр. ЛО. Среди опытных гр. наиболее выраженное влияние на показатели АОС было зафиксировано в гр. М: содержание СОД было достоверно (р<0,01) выше в 1,65 раза, чем в гр. ЛО и в 1,4 раза – по сравнению с гр. ИШ; уровень каталазы и объема расщепленной Н2О2 был несколько выше, чем в гр. ИШ; была значительно выше (р<0,01) активность ЦП (на 45,4% и 51,2%, чем у животных гр. ИШ и ЛО, соответственно). Выводы. Полученные данные позволяют предположить, что терапевтическая эффективность пирацетама и винпоцетина при ЭИГМ обусловлена в большей степени влиянием не на уровень 30 активности АОС, а иными механизмами. В отношении мелаксена, напротив, стимуляция активности АОС может выступать одним из важнейших потенциальных векторов его терапевтического воздействия в условиях церебральной ишемии. Роль прогестерона в регуляции функционирования белкатранспортера гликопротеина-Р Градинарь М.М., Есенина А.С., Щулькин А.В., Черных И.В., Якушева Е.Н. ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, г. Рязань E-mail: [email protected] Актуальность. Гликопротеин-Р (Pgp, ABCB1-белок) – АТФзависимый мембранный белок-транспортер, удаляющий из клеток вещества различной химической природы. Активность Pgp изменяется под влиянием различных факторов и веществ, в том числе гормональных препаратов. Цель. Изучить влияние прогестерона на активность Pgp in vivo. Материалы и методы. Работа выполнена на 23 половозрелых кроликах-самках породы шиншилла массой 3000-3500 г. Все животные были разделены на 4 группы. Первой, контрольной, группе кроликов (n=5) была выполнена «ложная операция». Второй группе кроликов (n=6) проводили овариоэктомию. Третьей группе животных (n=6) выполняли овариоэктомию и с 15 сут после операции начинали вводить прогестерон per os в дозе 2 мг/кролик один раз в день в течение 4 недель. Четвертой группе кроликов (n=6) выполняли овариоэктомию и с 15 послеоперационных сут вводили прогестерон по указанной выше схеме в дозе 15 мг/кролик. До начала эксперимента и на 42 сут у животных определяли активность Pgp по фармакокинетике его маркерного субстрата фексофенадина после его перорального введения в дозе 67,5 мг/кг. Концентрацию фексофенадина в плазме крови определяли методом ВЭЖХ-УФ. Полученные результаты обрабатывали тестом ANOVA. Результаты и их обсуждение. У животных, подвергнутых «ложной операции», фармакокинетика фексофенадина достоверно не изменялась. У животных второй группы на 42 сут овариоэктомии отмечалось увеличение Cmax фексофенадина в 2,43 раза (90% ДИ 1,87; 3,15, 31 p=0,0008), AUC0-t – в 2,24 раза (90% ДИ 1,53; 3,28, p=0,0017) по сравнению со значениями до овариоэктомии, что свидетельствуют о снижении активности Pgp. У животных третьей группы на 42 сут эксперимента отмечалось повышение Cmax в 1,17 раза (90% ДИ 1,05; 1,29 p=0,065) по сравнению с показателями до операции. По сравнению со значениями группы овариоэктомии Cmax и AUC0-t были их ниже в 0,45 раза (90% ДИ 0,30; 0,68, р=0,0038) и в 0,45 раза (90% ДИ 0,28; 0,72, р=0,0086) соответственно. Полученные результаты показывают, что прогестерон в низкой дозе стимулирует Pgp, но недостаточно, для восстановления его исходной активности. У животных четвертой группы на 42 сут эксперимента фармакокинетические параметры фексофенадина достоверно не отличались от значений до операции. По сравнению с показателями группы овариоэктомии C max фексофенадина была ниже аналогичного показателя в 0,27 раза (90% ДИ 0,18; 0,41, р=0,00005), а AUC0-t – в 0,29 раза (90% ДИ 0,18; 0,46, р=0,00026). Полученные результаты показывают, что при введении прогестерона в высокой дозе активность Pgp повышается до исходного, дооперационного уровня. Выводы. Прогестерон является индуктором гликопротеина-Р в эксперименте in vivo. Работа поддержана грантом РФФИ 18-015-00259 а Изучение лекарственного ответа на статинотерапию у пациентов с ИБС в условиях полиморбидной патологии в ассоциации с генетическим полиморфизмом Грибовская И.А. ФГБОУ ВО КГМУ Минздрава России, г. Курск E-mail: [email protected] Актуальность. Ишемическая болезнь сердца (ИБС) БС является ведущей в структуре летальности и инвалидизации среди болезней сердечно-сосудистой системы (ССС). Сегодня отсутствие лекарственного ответа при фармакотерапии отмечается у 20% больных. 32 Цель. Изучение выраженности лекарственного ответа розувастатина у больных с полиморбидной патологией (ИБС в сочетании с острой респираторной вирусной инфекцией (ОРВИ)) в сравнении с больными ИБС при генетическом полиморфизме цитокинов. Материалы и методы. Определение уровня липидов и интерлейкинов в сыворотке крови. Генотипирование полиморфизмов генов IL-1β –511C>T, IL-6 –174G>C, IL-4 –589C>T, IL-10 –1082G>А. Статистическая обработка данных в программе Microsoft Office Excel 2007. Результаты и их обсуждение. НаI визите целевой уровень холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) при приеме розувастатина 10 мг/сут. был достигнут у 55,7%. На II визите (присоединение ОРВИ) отмечалось достижение целевого уровня у 49,7% больных. Так, ОРВИ привела к дестабилизации атеросклероза и ИБС, что требовало изучения механизмов развития данного процесса и изменения тактики ведения пациентов. В основе прогрессирования атеросклероза лежит воспалительная теория атерогенеза с вовлечением цитокиновой системы. Определяемый на II визите уровень цитокинового профиля показал повышение IL-1β до 33,00 пг/мл (N=5,00 пг/мл) и IL-6 до 19,20 пг/мл (N=9,00 пг/мл), снижение IL-4 до 8,30 пг/мл (N=13,00 пг/мл) и IL-10 до 19,40 пг/мл (N=31,00 пг/мл). К 12-й неделе наблюдения (VI визит) IL-1β снизился до 20,70 пг/мл, а IL-6 – до 12,80 пг/мл. IL-4 и IL-10 повысились до 15,80 пг/мл и 33,50 пг/мл соответственно. У больных ИБС без ОРВИ не получено динамически значимого изменения уровня интерлейкинов. На II визите IL-1β соответствовал 10,30 пг/мл, IL-6 – 12,40 пг/мл, а на VI – 13,00 пг/мл и 14,00 пг/мл. IL4 и IL-10 составляли на II визите 19,70 пг/мл и 32,30 пг/мл, на VI – 23,20 пг/мл и 34,20 пг/мл соответственно. Исследовав взаимосвязь генотипов генов цитокинов с липидным профилем и уровнем самих интерлейкинов, показана ассоциация – 511CT гена IL-1β с повышением синтеза IL-1β и ХС ЛНП; –511СС гена IL-1β – с повышением ХС ЛНП; –174GG гена IL-6 – с ростом IL6 и ХС ЛНП; –1082GG гена IL-10 – с повышением IL-10, снижением ХС и С-РБ; –589ТТ гена IL-4 – с ростом С-РБ, уровнем IL-4. Выводы. Наличие генотипов –511CT, –174GG, –1082AAу всех больных мотивирует увеличение дозы розувастатина до 20 мг/сут для достижения целевого ХС ЛНП. 33 1-({4-[(4-хлорбензоил)амино]фенил}сульфонил-L-пролин – потенциальный новый ингибитор матриксной металлопротеиназы 9 Григоркевич О.С., Мокров Г.В., Столярук В.Н. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В лечении сердечнососудистых заболеваний важную роль играют цинк-содержащие металлопротеиназы такие как ангиотензинпревращающий фермент (АПФ) [Gupta S.P. Chemical Reviews. 2007; 107(7):3042-87]. В свою очередь матриксные металлопротеиназы 2-го (ММП-2) и 9-го (ММП-9) типов [Spinale F.G., Physiol. Rev. 2007; 87:1285-342] являются ключевыми в патологии миокарда и их активность важна при прогнозе раннего постинфарктного ремоделирования сердца [Simova J., et al. Folia Biol. 2013; 59(5):181-7]. Цель. Определение предполагаемой ингибиторной активности нового соединения, 1({4[(4хлорбензоил)амино]фенил}сульфонил-Lпролина (АЛ-828), по отношению к ММП-9. Материалы и методы. Для конструирования АЛ-828 был использован метод молекулярного докинга (программа Glide). Для определения кардиотропной активности АЛ-828 использовали модель острого инфаркта миокарда, вызванного перевязкой левой коронарной артерии. Для определения содержания ММП-9 использовали «сэндвич»-метод иммуноферментного анализа («Chem Well 2910 Combi», набор RMP900 для R&D Systems, США). Для определения ингибиторной активности по отношению к АПФ использовался спектрофотометрический метод анализа (спектрофотометр Beckman DU-65) в присутствии субстрата, NBz-Gly-His-Leu, с последующим добавлением 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой [Matsui T. et al., Biosci. Biotech. Biochem., 56 (3), 517-518, 1992]. Результаты и их обсуждение. На основании данных о фармакофоре ингибитора ММП-9 нами был сконструирован предполагаемый ингибитор, 1({4[(4хлорбензоил)амино]фенил}сульфонил-L-пролин (АЛ-828) [Григоркевич О.С. и др. Хим.-фарм. журнал. 2018. Т. 52, №1. С. 8-14]. Молекулярный докинг подтвердил, что соединение АЛ-828 отвечает структурным требованиям ингибитора ММП-9. Показано, что АЛ-828 в концентрациях 10-4М-10-5М не 34 проявляет ингибиторной активности по отношению к АПФ. Соединение АЛ-828 в дозе 20 мг/кг/сут перорально в условиях острого инфаркта миокарда достоверно уменьшал иммунореактивность ММП-9 в плазме крови крыс на уровне доксициклина. Выводы. Полученный потенциальный ингибитор ММП-9 1({4[(4хлорбензоил)амино]фенил}сульфонил-L-пролин, снижает иммунореактивность ММП-9 в плазме крови крыс с инфарктом миокарда, что предполагает кардиотропную активность этого соединения. Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 18-015-00244. Исследование действия бензодиазепиновых транквилизаторов на поведение Danio rerio в тесте стресса новизны Девяшин А.С., Блаженко А.А., Лебедев В.А., Бычков Е.Р., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Актуальность. Тест стресса новизны у лабораторных рыбок Danio rerio основан на инстинкте поиска защиты от незнакомой обстановки погружением на дно, фризингом (обездвиживанием или «примерзанием») и снижением двигательного и исследовательского поведения. Активное плавание, адаптация к новой обстановке, короткий репродуктивный период, высокая плодовитость и низкая себестоимость дают возможность использовать Danio rerio в качестве животных моделей для лабораторных исследований. Цель. Провести фармакологический анализ действия анксиолитиков бензодиазепинового ряда на примере феназепама и диазепама на поведение Danio rerio. Материалы и методы. В работе использованы 102 половозрелые рыбы Danio rerio в возрасте 6-8 месяцев. Для экспериментов оценки новизны применяли просмотровый аквариум (объем 1,5 л). Аквариум разделяли чертой на 2 равные части, верхнюю и нижнюю. Рыбку помещали сначала в мерный стакан 200 мл с растворенным фармакологическим веществом (или Н2О) на 5 35 мин, затем – на 5 мин в аквариум до тестирования (10х10х10 см3) и далее – в просмотровый аквариум на 6 мин. В последнем за каждую минуту опыта регистрировали двигательную активность, число переходов в верхнюю половину аквариума, время в последней, число и время фризингов. Для анализа использовали феназепам (ОАО «Новосибхимфарм», Россия) и диазепам (Германия). Препараты растворяли в воде для аквариумов и применяли в дозах 0,1-20 мг/л. Поведение (видеотреки рыбки) регистрировали автоматически с помощью системы Noldus EthoVision XT7. Система позволяет снимать показания, как в цифровом выражении, так и визуально контролировать видеотрек. Результаты и их обсуждение. Было показано, что после адаптации к новой обстановке двигательная активность рыбок увеличивается, уменьшается время и число фризингов и увеличивается число переходов в верхнюю половину аквариума. Феназепам и диазепам дозозависимо снижали, по сравнению с контрольной группой рыб, время фризингов, увеличивали число переходов в верхнюю половину аквариума и время плавания в последней. Действие феназепама осуществлялось в диапазоне 0,1-1 мг/л, а действие диазепама – в диапазоне 1-10 мг/л. Выводы. Таким образом, отечественный транквилизатор феназепам действует в меньших дозах, чем диазепам. Перспектива использования Danio rerio в качестве животных моделей в поведенческой фармакологии весьма существенна и не уступает исследованиям на грызунах, а по ряду позиций даже их превосходит. Новый дипептидный лиганд TSPO: дизайн, синтез и фармакологическая активность Деева О.А., Ребеко А.Г., Гудашева Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. 18 kDa транслокаторный белок (TSPO) участвует в транспорте холестерина от внешней к внутренней митохондриальной мембране, что является лимитирующей стадией в синтезе нейростероидов (Rupprecht R., et al. Nat. Rev. 2010). Нейростероидные гормоны взаимодействуют с отличным от 36 бензодиазепинового участком рецептора ГАМКА и обладают анксиолитической активностью без побочных эффектов. Цель. Конструирование, направленный синтез и изучение фармакологических эффектов новых лигандов TSPO на основе замещенных триптофанил-содержащих дипептидов. Материалы и методы. С использованием оригинальной стратегии пептидного дизайна (Гудашева Т.А. Изв. академии наук, 2015) был получен первый дипептидный лиганд TSPO: амид N-карбобензокси-Lтриптофанил-L-изолейцина (ГД-23) (Гудашева Т.А. и др. ДАН. 2015). Для ГД-23 показана анксиолитическая активность в двух фармакологических тестах на грызунах в интервале доз 0,1-1,0 мг/кг при i.p. и p.o. введении. С помощью фармакологического ингибиторного анализа были доказаны его лигандные свойства (Гудашева Т.А. и др. ДАН. 2016). Молекулярный докинг ГД-23 в активный центр TSPO с помощью программного обеспечения Glide уточнил структуру дипептидного лиганда: боковая цепь остатка Ile в структуре ГД-23 была заменена на остаток Leu, а карбобензокси-радикал – на фенилпропионильный. Поэтому был синтезирован новый дипептидный лиганд амид N-фенилпропионил-L-триптофанил-L-лейцина, (ГД-102). ГД-102 получали методом активированных сукцинимидных эфиров. Фармакологическую активность ГД-102 изучали в следующих поведенческих тестах: анксиолитическую активность в тесте «Открытое поле со световой вспышкой» (ОП) в интервале доз 0,01-5,0 мг/кг i.p. на мышах линии BALB/c и «Приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ) в интервале доз 0,1-1,0 мг/кг i.p. на мышах линии ICR, антидепрессивную активность изучали в тесте «Вынужденное плавание» по Порсолту в интервале доз 0,01-0,05 мг/кг i.p. на мышах линии BALB/c. Результаты и их обсуждение. Установлено, что ГД-102 достоверно (p<0.05) обладал анксиолитической активностью в дозах 0,01, 0,05, 0,1 мг/кг i.p. в тесте ОП, в дозах 0,1, 0,5, 1,0 мг/кг i.p. в тесте ПКЛ по относительному времени пребывания в открытых рукавах и в дозе 0,5 мг/кг по относительному числу заходов в открытые рукава. ГД102 проявил антидепрессивную активность в дозах 0,01 и 0,05 мг/кг i.p. С помощью фармакологического ингибиторного анализа с использованием селективного антагониста TSPO, были доказаны лигандные свойства ГД-102 к TSPO в тесте ПКЛ у мышей ICR. Выводы. Таким образом, нами получен новый дипептидный лиганд TSPO, обладающий анксиолитической и антидепрессивной активностями. Работа поддержана грантом РФФИ № 17-04-00861. 37 Влияние метаболизма омепразола на антигипертензивную эффективность амлодипина у больных артериальной гипертонией и кислотозависимыми заболеваниями Дорофеева М.Н. ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова (Сеченовский университет) Минздрава России, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Одним из современных направлений в медицине является персонифицированная терапия, основанная на методах фенои генотипирования, что позволяет оптимизировать и индивидуализировать режим назначения лекарственных средств (ЛС) для достижения максимального терапевтического эффекта и безопасности. Цель. Изучить влияние метаболизма омепразола через цитохром 3А4 на антигипертензивную эффективность амлодипина у больных артериальной гипертонией (АГ) с сопутствующими кислотозависимыми заболеваниями (КЗЗ). Материалы и методы. В исследование включены 51 пациент АГ, находившихся на терапии амлодипином в дозе 10 мг/сут. По поводу обострения КЗЗ пациенты получали омепразол в дозе 20 мг/сут. Всем больным проводили исследование генотипа, измерение в динамике офисного АД и суточного мониторирования АД (СМАД). Результаты и их обсуждение. Результаты генотипирования пациентов, находящихся на фармакотерапии амлодипином и омепразолом показали, что 41,2% больных не имели мутантного аллеля гена 2С19 («экстенсивные метаболизаторы»). Мутантный аллель по варианту CYP2C19*2 и CYP2C19*3, который ассоциируется с замедленным метаболизмом ЛС встречался у 23,5% пациентов («медленные метаболизаторы»), 35,3% пациентов имели мутантный аллель по варианту CYP2C19*17, который ассоциируется с ускоренным метаболизмом ЛС («быстрые метаболизаторы»). Оценка динамики показателей офисного измерения АД и результаты СМАД показали, что у пациентов АГ – «медленных метаболизаторов» отмечается более выраженный антигипертензивный эффект по сравнению с больными АГ – «экстенсивными метаболизаторами» и больными АГ – «быстрыми метаболизаторами». 38 Результаты нашего исследования продемонстрировали более выраженное угнетение активности CYP 3А4 Р450 на фоне комбинированной терапии омепразол+амлодипин у больных АГ – «медленных» метаболизаторов по сравнению с больными АГ с другим видом метаболизма. Выводы. Учет генетических факторов может послужить основой для разработки индивидуального подхода к выбору режима дозирования амлодипина у больных АГ и избежать возникновения межлекарственного взаимодействия с омепразолом при наличии сопутствующих КЗЗ. Исследование эффективности лимфотропной эндоназальной терапии на модели интрацеребральной геморрагии Ершов К.И., Бахарева К.И., Байкалов Г.И. ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России, г. Новосибирск E-mail: [email protected] Актуальность. В настоящее время цереброваскулярная патология по-прежнему остается одной из ведущих причин смертности и инвалидизации населения. По данным ВОЗ инсульт повсеместно является второй по значимости причиной в этом списке. В России ежегодно регистрируется 450 тыс. инсультов. На сегодняшний день существует необходимость создания эффективной терапии, способной уменьшить сдавливание гематомой и образующимся отеком тканей головного мозга. Цель. Выявить эффективность эндоназальной терапии пегилированной гиалуронидазой при моделированном кровоизлиянии в головном мозге. Материалы и методы. Эксперимент проводили на 40 крысах Wistar, весом 180-200 г. Из бедренной вены наркотизированных животных набирали кровь. Аутокровь в объеме 200 мкл вводили интрацеребрально по стереотаксическим координатам: 1,8 мм вправо, 3,5 мм вниз от брегмы, на глубину 1,5 мм. Далее животных делили на три группы: с интроназальным введением физиологического раствора и пегилированной гиалуронидазы, а также без лечения. Витальную окраску зоны ишемии, некроза у крыс производили Эвансом синим и трифенилтетразолием хлоридом. Для оценки неврологии использовали шкалу неврологического статуса Гарсиа у крыс. По 39 данной методике анализировали расстройства двигательной, чувствительной сферы, а также координацию движений, сочетание синдромов и их выраженность. Результаты и их обсуждение. После введения аутокрови макроскопически выделялась четкая гематома в месте инъекции. Через 2 ч. после геморрагии при окраске Эвансом синим, вокруг очага кровоизлияния различалась зона ишемии. В результате вызванной геморрагии 10% мозга было лишено кровоснабжения, ишемия отчетливо присутсовала на всех 6 срезах. Отек в правом полушарии, куда вводилась аутокровь, составил 10,32%. Через 2 суток после геморрагии в группе получающих физиологический раствор и животных без лечения зона некроза составляла 8% и площадь отека 6,24%. Неврологически это проявлялось в нарушении спонтанной и двигательной активности, чувствительности. В группе крыс получающих интраназально пегилированную гиалуронидазу зона некроза и площадь отека были меньше в 4 раза по сравнению с другими экспериментальными группами. Неврологический статус у них восстанавливался быстрее и достигал нормальных физиологических значений по спонтанной и двигательной активности. Выводы. Эндоназальный метод лимфостимуляции пегилированной гиалуронидазой головного мозга при геморрагическом инсульте способствует активному восстановлению ишеминизированных участков нервной ткани, а также предотвращает развитие отека мозга и способствует более активному восстановлению неврологических функций. Изменение активности ABCB1-белка in vitro под действием комплекса веществ пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare) Есенина А.С., Черных И.В., Щулькин А.В., Градинарь М.М., Кириченко Е.Е., Мыльников П.Ю., Якушева Е.Н. ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, г. Рязань E-mail: [email protected] Актуальность. ABCB1-белок – это АТФ-зависимый мембранный белок-транспортер, играющий ключевую роль в резистентности опухолевых клеток к химиотерапии. Ингибирование АВСВ1-белка 40 можно использовать с целью повышения эффективности фармакотерапии онкологических заболеваний. Цель. Исследовать влияние комплекса веществ пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare) (КВ) на активность ABCB1-белка in vitro. Материалы и методы. Работа выполнена на линии клеток Caco2, гиперэкспрессирующих ABCB1-белок в лунках transwell-системы при достижении трансэпителиального сопротивления 500 мОм*см2. Активность ABCB1-белка оценивали по транспорту его маркерного субстрата – фексофенадина (150 мкмоль/л) через полупроницаемую мембрану с клетками Caco-2. Рассчитывали суммарный коэффициент потока для данного вещества. Концентрации фексофенадина в транспортной среде определяли методом ВЭЖХ с УФ детектированием при длине волны 220 нм. КВ экстрагировали по авторской методике и проводили его стандартизацию. Целевое вещество имело среднюю молярную массу 3,8 кДа. В качестве препарата сравнения использовался классический ингибитор ABCB1-белка – верапамил (200 мкМ). Влияние КВ на активность ABCB1-белка оценивали добавлением его в транспортную среду в концентрации 10 мкМ. В каждой серии выполняли по три повторения. Результаты и их обсуждение. Суммарный коэффициент потока в контрольной серии (в transwell-системе содержался только фексофенадин) составил 4,02. Добавление в транспортную среду верапамила (препарат сравнения, классический ингибитор ABCB1-белка) приводило к снижению суммарного коэффициента потока на 41,0% (p<0,05) по сравнению с показателями контрольной серии, что свидетельствует об ингибировании ABCB1-белка. Добавление в среду инкубации КВ в концентрации 10 мкМ приводило к снижению коэффициента потока на 55,5% (p<0,05), по сравнению со значениями контрольной серии. При этом достоверных различий между верапамилом и КВ по изучаемому показателю получено не было (p>0,05). Выводы. Комплекс веществ пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare) в опытах in vitro ингибирует функциональную активность ABCВ1-белка. Работа поддержана грантом РФФИ №18-315-00159мол_а. 41 Участие орексина в регуляции системы положительного подкрепления Ефимов Н.С., Бессолова Ю.Н., Лебедев А.А., Ветлугин Э.А., Москалев А.Р., Абросимов М.А., Лебедев В.А., Бычков Е.Р., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Актуальность. В настоящее время не определено значение орексинов в механизмах подкрепления при самостимуляции, тем более в механизмах функционирования системы расширенной миндалины. Орексины, нейропептиды гипоталамуса, (наряду с другими нейропептидами) участвуют в механизмах подкрепления, пищевого поведения и регуляции уровня бодрствования. Механизмы пробуждения и регуляции уровня бодрствования в большей степени связаны с активацией OX2R, в то время как регуляция системы положительного подкрепления – с активацией OX1R. Показана тормозная роль антагонистов OX1R в эффектах поведенческой сенситизации, условной реакции предпочтения места и реакции самовведения психостимуляторов. Цель. В настоящей работе мы исследовали действие антагониста рецепторов орексина OX1R SB-408124 на вызванную психоактивными средствами активацию реакции самостимуляции латерального гипоталамуса при введении пептидных препаратов в желудочки мозга и при их локальном введении в структуры расширенной миндалины (ядро ложа конечной полоски, центральное ядро миндалины и медиальный отдел прилежащего ядра). Это позволяло уточнить роль рецепторов орексина в механизмах подкрепления и поведенческих компонентов зависимости от ряда психоактивных средств (фенамин, МК-801, тримеперидин). Результаты и их обсуждение. Показано, что орексин А модулирует подкрепляющие (наркогенные) свойства данных психоактивных веществ через структуры расширенной миндалины. В механизмы этой модуляции вовлекаются рецепторы орексина OX1R и дофамина. В то же время системная блокада OX1R при введении их антагониста SB-408124 в желудочки мозга оказывает менее выраженный эффект по сравнению с внутриструктурным введением. Полученные результаты позволяют методически обосновать и адекватно оценить подкрепляющие свойства орексинов и их 42 антагонистов в экспериментальных условиях с помощью относительно простых поведенческих тестов, основанных на изучении безусловного подкрепления (самостимуляция латерального гипоталамуса) у крыс. Наибольшей эффективностью действия обладал антагонист OX1R рецепторов SB-408124 при локальном введении в ядро ложа конечной полоски и центральное ядро миндалины. После введения в боковой желудочек SB-408124 обладал меньшей эффективностью действия на подкрепляющие свойства аддиктивных средств. На фоне блокады рецепторов орексина антагонистом OX1R SB-408124, введенным в боковой желудочек, ядро ложа конечной полоски, центральное ядро миндалины и прилежащее ядро, исследуемые психоактивные средства (фенамин, МК-801 и тримеперидин) снижали свое активирующее действие на реакцию самостимуляции латерального гипоталамуса. Антагонист OX1R SB-408124 наиболее выраженно блокировал подкрепляющие свойства антагониста NMDA рецепторов МК-801, и в меньшей степени – эффекты непрямого адреномиметика фенамина и агониста опиоидных рецепторов тримеперидина. Локальное введение антагониста OX1R SB-408124 в структуры системы расширенной миндалины может направленно подавлять механизмы центрального действия психостимуляторов и гипноседативных средств. Выводы. Антагонисты орексина типа SB-408124 могут рассматриваться как возможные перспективные средства профилактики и лечения зависимости от соответствующих аддиктивных средств. Особенности подкрепляющих свойств левосторонней стимуляции латерального гипоталамуса Ефимов Н.С., Бессолова Ю.Н., Карпова И.В., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Актуальность. В протоколах современных фармакологических исследований реакции самостимуляции у грызунов, стимулирующие электроды или световоды часто вживляют унилатерально. При этом по умолчанию предполагается, что подкрепляющие свойства раздражения левого и правого гипоталамуса идентичны. 43 Цель. Выяснить, различается ли возможность выработать реакцию самостимуляции при раздражении левого и правого гипоталамуса. Материалы и методы. Исследование проведено на половозрелых самцах крыс Вистар. Электроды вживляли билатерально в латеральный гипоталамус. Крыс, у которых при электрическом раздражении наблюдалась реакция приближения, обучали самостимуляции в камере Скиннера, выбирая в качестве подкрепления стимуляцию гипоталамуса (правого или левого), который с наименьшим порогом давал положительную реакцию. Результаты и их обсуждение. При левосторонней стимуляции у большинства крыс возникали реакции приближения (81,8%), при этом самостимуляцию удавалось выработать у 72,7% от общего числа животных. На стимуляцию правого гипоталамуса положительно реагировали только 46,2%, а самостимуляцию удалось выработать только у 30,8% крыс. Пороги положительных и отрицательных реакций, зарегистрированных при электрическом раздражении обеих сторон гипоталамуса, достоверно различались между собой (H(3, N=31)=14,92; Р=0,002). Но эти различия были связаны не с латерализацией, а со знаком реакции: в целом пороги приближения были выше, чем пороги избегания. Выводы. При электрическом раздражении левого гипоталамуса вероятность получить реакцию приближения и на ее основе выработать самостимуляцию, выше, чем при аналогичном воздействии на правый. Возрастные изменения гематологических показателей при снижении чувствительности к следовым аминам Жуков И.С.1,4, Козлова А.А.2, Дагаев С.Г.1,3, Кубарская Л.Г.1,3, Кашуро В.А.3, Гайнетдинов Р.Р.2 ФГБНУ Институт экспериментальной медицины (1), ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный университет (2), ФГБУН Институт токсикологии ФМБА РФ (3), ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный политехнический университет, г. Санкт-Петербург (4) E-mail: [email protected] Актуальность. Рецепторы следовых аминов первого типа (TAAR1) лежат в основе механизма центрального действия 44 психостимуляторов. Поскольку ген TAAR1 экспрессируется не только в ЦНС, но и в клетках крови, их чувствительность к следовым аминам может быть одним из механизмов сопряжения нервного и иммунного ответа. Цель. Сравнительная оценка количества форменных элементов крови и осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ) у мышей дикого типа и животных с нокаутом по гену TAAR1. Материалы и методы. Исследовали кровь половозрелых самцов генетически модифицированных мышей (F1), полученных на основе линии C57Bl, двух возрастов: молодых (12 недель) и старых (50 недель), нокаутных по гену TAAR1. Контролем служили особи дикого типа соответствующего возраста. Количество форменных элементов крови определяли с помощью проточного гемоцитометра Advia 2120 (Siemens, Германия). ОРЭ оценивали по содержанию гемоглобина в пробах, полученных при добавлении 5 мкл эритроцитарной массы к 2,5 мл одного из 6-ти растворов NaCl (0,250,65%). Содержание гемоглобина в пробах определяли на спектрофотометре Beckman Coulter (США) (длины волн 541, 555 и 577 нм). Средние значения концентрации точки 50% гемолиза эритроцитов определяли графически. Данные обрабатывали при помощи стандартного пакета статистических программ GraphPad Prism 6.0. Результаты и их обсуждение. По показателям красной крови и ОРЭ молодые мыши контрольной и нокаутной групп не различались. Однако у старых мышей с нокаутом гена TAAR1 можно отметить тенденцию к уменьшению количества ретикулоцитов. Достоверных возрастных изменений ОРЭ выявлено не было. При сравнении параметров белой крови у молодых и старых животных дикого типа достоверных различий выявлено не было. Однако у старых мышей с нокаутом гена TAAR1 число лимфоцитов было достоверно больше, чем у молодых животных той же группы (P<0,05). Выводы. На основе проведенного исследования можно сформулировать гипотезу о том, что нормальная чувствительность к следовым аминам препятствует возрастным изменениям системы крови. 45 Рецепторы следовых аминов предопределяют характер возрастных изменений свободного поведения у мышей Жуков И.С.1,3, Тиссен И.Ю.1, Козлова А.А.2, Карпова И.В.1, Гайнетдинов Р.Р.2, Шабанов П.Д.1 ФГБНУ Институт экспериментальной медицины (1), ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный университет (2), ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный политехнический университет, г. Санкт-Петербург (3) E-mail: [email protected] Актуальность. Рецепторы следовых аминов, являясь мишенями психоактивных веществ, могут влиять на аддиктивные свойства препаратов. Так, мыши, нокаутные по гену TAAR1, демонстрируют более выраженное предпочтение места введения фенамина, чем животные дикого типа [1]. При этом особенности поведения, характерные для нарушения рецепции следовых аминов, до сих пор не изучены. Цель. Сравнительная оценка возрастных изменений свободного поведения у мышей с нокаутом гена TAAR1 и аналогичных параметров у животных дикого типа. Материалы и методы. Опыты проводили на половозрелых самцах генетически модифицированных мышей (F1), полученных на основе линии C57Bl, нокаутных по гену TAAR1. Контролем служили мыши дикого типа. В каждой группе было по 6 животных двух возрастов: молодых (20 недель) и старых (45 недель). Параметры свободного поведения последовательно оценивали в двух тестах: «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт». Тестирование в «открытом поле» проводили при дневном освещении в течение 3-х минут. Регистрировали количество проявлений следующих элементов поведения: горизонтальная и вертикальная двигательная активность, заглядывания в отверстия, принюхивание, фризинг (замирание, «примерзание») и груминг. Затем мышь на 5 минут помещали в «приподнятый крестообразный лабиринт», где измеряли время, проведенное в открытых (хорошо освещенных) рукавах, количество свешиваний с платформы (индикатор высокой исследовательской активности при низком уровне страха), груминг (показатель смещенной активности). 46 Результаты и их обсуждение. В тесте «открытое поле» нокаутные мыши проявляли тенденцию к повышенному уровню двигательной активности по сравнению с контрольными животными соответствующих возрастных групп. Локомоция в «открытом поле» с возрастом не менялась. По частоте фризинга группы молодых контрольных и нокаутных мышей не различались между собой. Однако с возрастом у контрольных мышей частота соответствующих реакций увеличивалась (P<0,01), а у нокаутных оставалась на прежнем уровне. В результате старые мыши дикого типа демонстрировали фризинг чаще, чем нокаутные животные данной возрастной группы (P<0,05). По числу проявлений груминга в открытом поле, у молодых нокаутных мышей наблюдалась тенденция к пониженной смещенной активности. Однако у старых нокаутных мышей проявление груминга в «открытом» поле возрастало (P<0,05) и достигало значений, характерных для молодых и старых животных дикого типа. В «приподнятом крестообразном лабиринте» у мышей дикого типа общее время пребывания в открытых рукавах с возрастом не изменялось, в то время как у нокаутных мышей – снижалось. Таким образом, общее время пребывания в открытых рукавах лабиринта у старых нокаутных мышей оказывалось достоверно меньше, чем у старых мышей дикого типа (P<0,05). При этом старые нокаутные мыши демонстрировали меньшее число реакций свешивания с открытых руковов лабиринта, чем молодые животные и старые мыши дикого типа (P<0,05). На фоне более длительного пребывания в комфортных условиях (закрытые рукава приподнятого крестообразного лабиринта) старые нокаутные животные демонстрируют меньше проявлений груминга, чем старые животные дикого типа (P<0,05). Выводы. Нокаут по гену TAAR1 приводит к изменениям возрастной динамики свободного поведения. В дискомфортной обстановке (открытое поле) старые нокаутные животные проявляют повышенную смещенную активность, в то время как старые животные контрольной группы более склонны к фризингу. В приподнятом крестообразном лабиринте старые нокаутные мыши выбирают более комфортные условия (темные рукава), при этом уменьшая смещенную активность, в то время как старые животные контрольной группы продолжают проводить много времени в открытых рукавах, демонстрируя при этом высокий уровень 47 смещенной активности. Стратегия выбора более комфортного места пребывания, проявляющаяся с возрастом у мышей с нокаутом гена TAAR1, согласуется с данными литературы об усилении выработки условного предпочтения места у этих животных. Нокаут по гену TAAR1 не изменяет содержание тиреоидных гормонов в сыворотке крови Жуков И.С.1,3, Тиссен И.Ю.1, Козлова А.А.2, Коренькова О.М.2, Синица Е.Л.3, Власова О.Л.3, Гайнетдинов Р.Р.2 ФГБНУ Институт экспериментальной медицины (1), ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный университет (2), ФГБОУ ВО Санкт-Петербургский государственный политехнический университет, г. Санкт-Петербург (3) E-mail: [email protected] Актуальность. Генетически модифицированные животные – перспективный объект научных исследований, позволяющий выяснить механизмы действия фармакологических препаратов. В последнее время было выяснено, что важным звеном взаимодействия центральных и висцеральных систем являются следовые амины. Было высказано предположение, что экспрессия гена рецептора следовых аминов первого типа (TAAR1) в фолликулярном эпителии щитовидной железы позволяет регулировать секрецию тиреоидных гормонов. Цель. Провести сравнительное исследование содержания свободного трииодтиронина (FT3) и тироксина (FT4) в сыворотке крови мышей дикого типа и животных, нокаутных по гену TAAR1. Материалы и методы. Опыты проведены на половозрелых (20 недель) самцах мышей (F1), нокаутных по гену TAAR1, полученных на основе линии C57Bl (N=6). Контролем служили особи дикого типа того же возраста (N=6). Содержание FT3 и FT4 в сыворотке крови определяли иммунохемолюминисцентным методом с использованием анализатора Advia Centaur XP (Siemens , Германия). Активность дейодиназ 2 и 3 типа оценивали по соотношению FT3/FT4. Результаты и их обсуждение. При содержании контрольных и «нокаутных» мышей в стандартных условиях вивария, статистически достоверных различий по уровням FT3 и FT4 и их соотношению обнаружено не было. 48 Вывод. В отсутствии физиологических и фармакологических нагрузок, нокаут по гену TAAR1 у самцов мышей не влияет на регуляцию тиреодных гормонов и дейодиназ. Изучение противоопухолевой и антиметастатической активности производного 5-оксипиримидина (СНК-411) Журиков Р.В., Никитин С.В. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Онкологические заболевания уносят каждый год не менее 300 тысяч жизней только в России, в течение следующих 5-7 лет, по прогнозам ВОЗ, смертность из-за онкологических заболеваний выйдет на первое место в мире. В связи с многообразием различных форм рака и различным уровнем нарушений иммунного гомеостаза, в настоящее время активно развиваются различные направления иммуноонкологии и иммунотерапии опухолей. Цель. Изучение противоопухолевой и антиметастатической активности производного 5-оксипиримидина (СНК-411, 2-изобутил4,6- диметил-5-оксипиримидина) на модели меланомы B-16 в опытах на мышах С57Вl/6. Материалы и методы. Штамм опухолевых клеток меланомы В16 получен из банка клеточных культур НИИ ЭДиТО НМИЦ онкологии имени Н.Н. Блохина. Стандартная прививочная доза составляла 5х106 клеток/мышь. День подкожной прививки клеток опухолевого штамма считали нулевым днем развития опухоли. СНК411 в дозах 10 и 25 мг/кг вводили мышам С57Вl/6 внутрибрюшинно (в/б) со 2 по 15 дни развития опухоли. В качестве контроля и совместно с СНК-411 вводили доксорубицина гидрохлорид однократно в/б на 2 день развития опухоли в дозе 4 мг/кг. 50 животных рандомизировали в следующие группы: 1. активный контроль (меланома В-16), которым вводили дистиллированную воду; 2. В-16 и СНК-411 в дозе 10 мг/кг; 3. В-16 и СНК-411 в дозе 25 мг/кг; 4. В-16 и доксорубицин в дозе 4 мг/кг, 5. В-16, СНК-411 в дозе 10 мг/кг и доксорубицин в дозе 4 мг/кг (однократно). Результаты и их обсуждение. При в/б введении СНК-411 в течение 14 дней достоверное торможение роста опухоли в 2,6 (ТРО 49 61,5%) и 1,7 раза (ТРО 41%) на 11 и 15 сутки развития опухоли выявили при курсовом введении СНК-411 в дозе 10 мг/кг и однократном введении доксорубицина в дозе 4 мг/кг. При однократном введении доксорубицина достоверное торможение роста опухоли (ТРО 22%) определили на 11 сутки развития опухоли. Выраженное подавление антиметастатической активности в легких мышей на 21 день развития опухоли выявили при курсовом введении СНК-411 в дозе 10 мг/кг (на 87,1%), в дозе 25 мг/кг (на 83,7%) и при совместном введении СНК-411 в дозе 10 мг/кг с доксорубицином (на 87,6%). При развитии опухолевого процесса происходит активация синтеза цитокинов в микроокружении опухоли и еѐ клетках, в частности ИЛ-4, который способствует метастазированию. Ранее было показано, что СНК-411 обладает иммуномодулирующими и выраженными противовоспалительными свойствами. При изучении курсового введения СНК-411 на рост карциномы легкого Lewis (LLC) у мышей C57BL/6 было выявлено 4х-кратное уменьшение содержания ИЛ-4 и антиметастатическая активность. Выводы. Полученные на модели меланомы В-16 данные подтверждают наличие у СНК-411 противоопухолевой и выраженной антиметастатической активности. Доклиническое изучение безопасности анксиолитика ГМЛ-1 Захаров А.Д. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» разработано новое лекарственное средство ГМЛ-1 – быстродействующий анксиолитик на основе производного пиррола[1,2а]пиразина, лиганда 18 кДа транслокаторного белка (TSPO). Цель. Изучение острой токсичности препарата ГМЛ-1. Задачи исследования – установить среднелетальные дозы, а также определить класс токсичности препарата ГМЛ-1. Материалы и методы. Исследование проводили на белых беспородных мышах (n=48) и крысах (n=48) обоего пола. Препарат ГМЛ-1 или 1% раствор крахмала в качестве контроля вводили однократно перорально и внутрибрюшинно. 50 Результаты и их обсуждение. В ходе эксперимента было установлено, что среднюю смертельную дозу препарата ГМЛ-1 определить было невозможно из-за отсутствия гибели животных в условиях достижения максимально возможных концентраций и максимально допустимых объемов введения. При пероральном введении ГМЛ-1 в максимальной дозе 4 г/кг не было отмечено выраженных признаков интоксикации. В течение всего 14 дневного периода наблюдения не было зарегистрировано ни одного случая гибели животных, дыхание, сердечно-сосудистая деятельность, состояние шерстного покрова, кожи и видимых слизистых оболочек, реакция на внешние раздражители соответствовали норме. При внутрибрюшинном введении препарата в дозе 1 г/кг у экспериментальных животных первые двое суток эксперимента наблюдали резкое снижение массы тела и ее прироста на фоне уменьшения потребления корма и воды. К окончанию эксперимента не было выявлено закономерных различий в показателях прироста массы тела и потребления корма и воды по сравнению с контрольными данными. Выводы. В результате исследования установлено, что препарат ГМЛ-1 при пероральном или внутрибрюшинном введении в максимально возможных объемах и дозах – 4 г/кг и 1 г/кг, соответственно, не вызывает гибели экспериментальных животных. Исходя из полученных данных, препарат ГМЛ-1 может быть отнесен к 4 классу токсичности – малотоксичного вещества (по классификации Сидорова К.К. – 1973 г.) В соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 препарат ГМЛ-1 относится к 3 классу опасности для перорального способа введения. NGF-миметик ГК-2 ослабляет накопление маркера оксидативного стресса на модели диабета у крыс Вистар Иванов С.В., Золотов Н.Н., Островская Р.У. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Заболеваемость сахарным диабетом (СД) продолжает оставаться одной из основных проблем здравоохранения. 51 Наличие антидиабетической активности миметика 4-й петли NGF соединения ГК-2 (гексаметилендиамид бис-(N-сукцинил-глутамиллизина)), созданного в ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова (Середенин С.Б., Гудашева Т.А. Патент РФ №2410392), было продемонстрировано в опытах на крысах (Поварнина П.Ю. и др., 2013). В опытах на мышах установлено сохранение его активности при пероральном введении (Ягубова С.С. и др., 2017). Цель. Принимая во внимание роль оксидативного стресса в патогенезе СД, представляло интерес изучить влияние ГК-2 при различных путях введения на уровень маркера перекисного окисления малонового диальдегида (МДА) на стрептозотоциновой (СТЗ) модели СД. Материалы и методы. Использовались взрослые крысы Wistar (n=50). СД моделировали путем однократного в/бр введения СТЗ 45 мг/кг. В эксперимент включали крыс с уровнем гликемии не менее 12-15 ммоль/л. Животным экспериментальных групп вводили ГК-2 в дозах 0,5 мг/кг в/бр и 5 мг/кг перорально в течение 28 дней. Определение уровня глюкозы проводили с помощью глюкометра One Touch Ultra (USA) в крови, взятой из хвостовой вены крыс в 1, 7, 14, 21, 28-й дни эксперимента. Определение уровня МДА проводили спектрофотометрически (Yagi Y. еt al., 1976). Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ Excel 2007 (MS Office). Результаты и их обсуждение. Стабильная гипогликемическая активность ГК-2 проявлялась при обоих путях введения. К 28-у дню эксперимента отмечалось двукратное снижение гликемии по сравнению с группой активного контроля: при уровне глюкозы 6,4±0,2 ммоль/л у здоровых животных и 24,5±1,9 ммоль/л у нелеченных диабетических крыс, введение ГК-2 как в/бр, так и перорально способствовало ее снижению до 10,8±0,9 ммоль/л и 12,2±1,4 ммоль/л соответственно (различия с активным контролем достоверны, р<0,05). У диабетических животных, не получавших лечения, уровень МДА составлял 0,982±0,005 мкмоль/л, т.е. был на 81% выше, чем у здоровых (0,546±0,039 мкмоль/л). Терапия ГК-2 способствовала снижению данного показателя до 0,689±0,001 мкмоль/л в группе в/бр введения (снижение на 30%) и 0,634±0,035 мкмоль/л в группе перорального введения (снижение на 36%) (различия с активным контролем достоверны, р<0,05). 52 Выводы. Продемонстрирована способность NGF-миметика ГК-2 оказывать гипогликемический эффект и ослаблять накопление продукта оксидативного стресса МДА при в/бр и пероральном введении. Изучение противопаркинсонических свойств новых производных 2-аминоадамантана Калинина А.П., Капица И.Г., Иванова Е.А., Воронина Т.А., Авдюнина Н.И. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва Email: [email protected] Актуальность. В качестве основного препарата при болезни Паркинсона (БП) назначается леводопа, эффективность которой через несколько лет снижается, проявляются побочные эффекты в виде дискинезий (Zesiewicz T.A. et al., 2007). В качестве альтернативы на начальных стадиях БП назначаются, в частности, производные адамантана, которые также могут применяться в составе комплексной терапии заболевания. В клинике активно применяется амантадина сульфат-производное 1-аминоадамантана, блокатор глутаматных NMDA рецепторов, снижающий акинезию и ригидность мышц. В ФГБНУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова было синтезировано производное 2-аминоадамантана – гимантан (N-(2-адамантил)гексаметиленимина гидрохлорид). В эксперименте было показано, что гимантан превосходит амантадина сульфат по эффективности (Воронина Т.А. и др., 2012; Иванова Е.А. и др., 2015) и снижает побочные эффекты леводопы (Капица И.Г. и др., 2011). Кроме того, гимантан оказался эффективным в клинике при лечении больных с БП (Катунина Е.А. и др., 2008). Все вышеперечисленное делает группу производных 2-аминоадамантана крайне интересной для изучения. Цель. Изучение противопаркинсонических свойств новых производных 2-аминоадамантана (АДК-450а и АДК-1126а), имеющих в структуре ариламиногруппу. Материалы и методы. Исследование проведено на мышах линии C57BL/6, которым вводился нейротоксин МФТП (30 мг/кг 53 внб). Данная модель воспроизводит основные симптомы паркинсонического синдрома (ПС). Исследуемые препараты вводили в дозе 10 мг/кг (внутрибрюшинно) за 30 минут до МФТП. Оценку выраженности ригидности проводили через 15 минут после введения нейротоксина, измеряя длину шага животного (Stride Length test). Для оценки олигокинезии использовали тест «Вертикальный стержень» (Pole test) и актометр «Opto-Varimex» (Columbus Instruments, США). Через 24 часа после введения МФТП мышам вводили галоперидол (0,1 мг/кг внб), вызывая каталепсию, которую оценивали по продолжительности пребывания животного в «позе лектора». Результаты и их обсуждение. При введении АДК-450а мышам с ПС отмечалось достоверное уменьшение олигокинезии в тесте «Вертикальный стержень»: время поворота тела в направлении «домашней» клетки (сверху – вниз) снижалось в 3 раза, а время спуска – в 1,95 раза по сравнению с группой, получавшей МФТП. АДК-1126а уменьшил в 1,14 раза ригидность и в 3,83 раза каталепсию относительно группы, получавшей галоперидол на фоне предшествующего введения МФТП. В целом оба вещества обладали тенденцией к уменьшению основных симптомов ПС. Выводы. Полученные данные свидетельствуют о наличии противопаркинсонических свойств у новых производных 2аминоадамантана, однако, на весь симптоматический комплекс заболевания они при однократном применении в используемой дозе – 10 мг/кг, значимого действия не оказывают. Возможная роль 5α-редуктазы АТФ-зависимых калиевых каналов в поведенческих эффектах оригинального гетероциклического соединения ГИЖ-72 Касабов К.А., Кудряшов Н.В., Калинина Т.С., Шимширт А.А., Волкова А.В., Куршин А.А., Жмуренко Л.А., Воронина Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. ГИЖ-72 (4,6-диметил-2-(4-хлорфенил)-2,3-дигидро1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-он) обладает анксиолитическим эффектом. Тест «закапывание шариков» – трансляционная модель 54 обсессивно-компульсивного расстройства (ОКР) – показал, что однократное введение ГИЖ-72 (20 мг/кг в/б) в условиях хронического умеренного стресса приводит к развитию анти-ОКР эффекта у мышей инбредных линий BALB/C и C57BL6. Анализ фармакологических свойств близких по структуре соединений позволил предположить, что возможными мишенями ГИЖ-72 являются система эндогенных нейростероидов и АТФ-зависимые калиевые каналы. Цель. Оценка роли 5α-редуктазы и АТФ-зависимых калиевых каналов в анти-ОКР эффекте ГИЖ-72. Материалы и методы. Исследования были проведены на мышах инбрендной линии C57BL6. Анти-ОКР эффект оценивали в тесте «закапывание шариков». ГИЖ-72 (20мг/кг в/б) вводили за 30 мин до теста, PK11195 (1; 3 мг/кг), финастерид (1,25; 2,5; 5 мг/кг) и глибенкламид (0,01; 0,1; 1 мг/кг) вводили за 30 мин до ГИЖ-72. Результаты и их обсуждение. ГИЖ-72 в дозе 20 мг/кг значимо увеличивал количество закопанных шариков по сравнению с контролем (p<0,001), PK11195 (1 и 3 мг/кг) не оказывал эффекта на компульсивное поведение. Введение финастерида (2.5 и 5 мг/кг) и глибенкламида (1 мг/кг) приводило к усилению компульсивного поведения в тесте «закапывание шариков» (p<0.01). Предварительное введение PK11195 (1 и 3 мг/кг) не изменяло анти-ОКР эффект ГИЖ72, однако он полностью устранялся финастеридом (2.5 или 5 мг/кг) (p<0.01). При совместном введении глибенкламида (0.01 и 0.1 мг/кг) и ГИЖ-72 (20 мг/кг) было установлено усиление анти-ОКР эффекта в тесте «закапывание шариков». Выводы. Было установлено, что (1) финастерид (2,5 или 5 мг/кг) и глибенкламид (1 мг/кг) демонстрируют анти-ОКР эффект в тесте «закапывание шариков» у мышей. Финастерид, но не глибенкламид, дозозависисимо снижает компульсивное поведение. (2) В настоящем исследовании установлено, что анти-ОКР эффект оригинального препарата ГИЖ-72 в тесте «закапывание шариков» может зависеть от активности как 5α-редуктазы, так и АТФ-зависимых калиевых каналов. 55 Доклиническое изучение безопасности нового оригинального препарата ГК-2 Качалов К.С. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова был разработан новый оригинальный препарат ГК-2, который обладает нейропротекторной активностью. ГК-2 представляет собой димерный дипептидный миметик 4-й петли фактора роста нервов. Цель. Изучение острой токсичности препарата. Задачи исследования – определить среднелетальные дозы, а также установить выраженность токсического действия и переносимость препарата при однократном введении, зарегистрировать сроки развития интоксикации и гибели животных с подробным описанием наблюдаемой клинической картины, и определить класс токсичности препарата ГК-2. Материалы и методы. Исследование было проведено на самках и самцах беспородных белых мышей (n=120) и крыс (n=84). ГК2вводили однократно внутривенно и внутрибрюшинно в максимально возможных концентрациях и максимально возможных объемах для каждого из видов животных. В качестве контроля был использован изотонический раствор NaCl (0,9 %), который вводили внутривенно в латеральную хвостовую вену (мышам в объеме 0,5 мл, крысам – 2 мл), и вода для инъекций, которую вводили внутрибрюшинно (мышам в объеме 1 мл, крысам – 5 мл). Результаты и их обсуждение. При изучении острой токсичности препарата ГК-2 при внутривенном введении на беспородных белых мышах обоего пола в максимально допустимых объемах и концентрациях в дозе 11,4 г/кг определение средней смертельной дозы не представлялось возможным из-за отсутствия гибели мышей. При изучении острой токсичности препарата ГК-2 при внутривенном введении на беспородных белых крысах обоего пола в максимально допустимых объемах и концентрациях в дозе 9 г/кг определение средней смертельной дозы не представлялось возможным из-за отсутствия гибели крыс. При внутрибрюшинном введении ГК-2 беспородным белым мышам LD50 составила 15,4 (14,5-16,4) г/кг (самки) и 15,7 (14,6-16,9) г/кг (самцы). 56 При внутрибрюшинном введении ГК-2 беспородным белым крысам LD50 составила 6,9 (4,5-10,6) г/кг (самки) и 6,9 (4,5-10,6) г/кг (самцы). Выводы. Таким образом, в результате изучения острой токсичности удалось установить, что препарат ГК-2 при внутривенном или внутрибрюшинном введении является относительно безвредным (по классификации Сидорова К.К., 1973 г.) может быть отнесен, соответственно, к 6 классу токсичности. Действие нового препарата бензотрена, синтезированного на основе креатина, на эмоциональное и исследовательское поведение крыс Каширин А.О., Духовлинов И.В., Пшеничная А.Г., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Цель. В работе исследовали действие нового препарата бензотрена (50 мг/кг в/бр), синтезированного на основе креатина, на эмоциональное и исследовательское поведение у крыс Вистар. Материалы и методы. Для оценки поведенческих эффектов бензотрена (фенилкреатина) использовали тесты «открытого поля» и «приподнятого крестообразного лабиринта» для крыс. В качестве вещества сравнения применяли нейропротектор мексидол (200 мг/кг в/бр, Фармасофт, Россия). Бензотрен и мексидол вводили за 30 минут до поведенческих исследований. Результаты и их обсуждение. В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» мексидол и бензотрен вызывали снижение выходов в центр и в открытые рукава лабиринта, что свидетельствует об умеренных анксиогенных свойствах мексидола и бензотрена. Число свешиваний с открытых рукавов лабиринта и число выглядываний из закрытых рукавов после введения как мексидола, так и бензотрена не увеличились, что подтверждает их умеренные анксиогенные свойства. В тесте «открытое поле» после введения бензотрена общее число актов поведения снижалось более чем в 3 раза. Это сопровождалось достоверным снижением как горизонтальной, так и вертикальной активности, по сравнению с 57 контрольной группой, и 5-кратным снижением числа актов движения на месте. В то же время наблюдали достоверное увеличение актов сидения. Таким образом, бензотрен, синтезированный на основе креатина, обладает явным седативным эффектом, т.е. вызывает общее неспецифическое торможение. Общий тормозной эффект также проявляется по сравнению и с мексидолом. В то же время после введения бензотрена, по сравнению с мексидолом, достоверно увеличивается время и вероятность появления заглядываний в норки, что говорит об увеличении исследовательской активности. Выводы. Таким образом, новый препарат бензотрен, синтезированный на основе креатина, умеренно повышая тревожность у крыс в «приподнятом крестообразном лабиринте», обладает явным седативным эффектом в «открытом поле», т.е. вызывает общее неспецифическое торможение. В то же время исследованный нами препарат бензотрен значительно превосходит мексидол по показателям исследовательской активности (как потенциальное ноотропное средство). Действие новых производных кумарина на эмоциональное и исследовательское поведение крыс Каширин А.О., Полукеев В.А., Пшеничная А.Г. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Цель. В работе исследовали действие новых соединений, синтезированных на основе кумарина, ИЭМ-2262 и ИЭМ-2263 (50 мг/кг в/бр), на эмоциональное и исследовательское поведение у крыс. Материалы и методы. Для оценки поведения крыс Вистар использовали методы «открытого поля» и «приподнятого крестообразного лабиринта». В качестве вещества сравнения применяли нейропротектор мексидол (200 мг/кг в/бр, Фармасофт, Россия). Результаты и их обсуждение. В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» мексидол, в отличие от производных кумарина, вызывал снижение выходов в центр и в открытые рукава лабиринта, что свидетельствует об анксиогенных свойствах мексидола и отсутствии таковых у исследованных препаратов, особенно ИЭМ-2263. Число свешиваний с открытых рукавов лабиринта и число выглядываний из закрытых рукавов после 58 введения ИЭМ-2263 достоверно увеличилось, в сравнении с мексидолом, что подтверждает отсутствие у него анксиогенных свойств. Таким образом, кумарины (особенно, ИЭМ-2263), не обладают в отличие от мексидола анксиогенными свойствами (не повышают тревожности), в то же время, их анксиолитическое (противотревожное) действие не показано в данном эксперименте. В тесте «открытое поле» производные кумарина, особенно препарат ИЭМ-2262, достоверно снижали число дефекаций, что говорит об уменьшении негативной эмоциональности (косвенно говорит о снижении страха). При этом после введения кумаринов, особенно препарата ИЭМ-2263, достоверно увеличивалось время локомоции и уменьшение числа болюсов дефекаций. Увеличение времени локомоции также может интерпретироваться как снижение негативной эмоциональности. В то же время кумарины, по сравнению с мексидолом, вызывают снижение времени и вероятности обнюхивания, что в свою очередь говорит об уменьшении исследовательской активности. Выводы. Таким образом, новые соединения, производные кумарина, ИЭМ-2262 и ИЭМ-2263, не увеличивают по сравнению с мексидолом тревожности крыс в приподнятом крестообразном лабиринте, что может быть использовано в дальнейшем для применения кумаринов как нейропротекторов при посттравматическом стрессовом расстройстве с паническими атаками. В то же время исследованные нами соединения, синтезируемые на основе кумарина, значительно уступают веществу сравнения мексидолу по влиянию на исследовательскую активность как потенциальные ноотропные средства. Новые ингибиторы α-глюкозидазы фенилхроменового ряда Клочков В.Г., Бабков Д.А. ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград E-mail: [email protected] Актуальность. Сахарный диабет 2 типа является одним из наиболее распространенных социально-значимых заболеваний. Одним из способов его фармакокоррекции является ингибирование фермента α-глюкозидазы. Производные фенилхромена представляют интерес как новый класс ингибиторов α-глюкозидазы в связи со схожестью с ингибиторами класса природных флаваноидов. 59 Цель. Поиск новых ингибиторов α-глюкозидазы в ряду синтетических производных фенилхромена. Материалы и методы. Синтез исследованных соединений (11) фенилхроменового ряда выполнен в СамГТУ. Оценка ингибирующей α-глюкозидазу активности проводилась по методике, описанной ранее. Для скрининга использовалась концентрация веществ 1 мМ, при определении зависимости концентрация-активность – диапазон концентраций от 0,1 мкМ до 1 мМ. Молекулярный докинг. Расчеты выполняли с помощью программы Auto Dock Vina 1.1.2. Конформации лигандов были получены с помощью программы Marvin Sketch. Для анализа взаимодействий использовалась программа Discovery Studio Visualizer 2016 (Biovia). Антигипергликемическая активность in vivo оценивалась тестом толерантности к мальтозе при введении самцам крыс Wistar с экспериментальным сахарным диабетом 2 типа, индуцированным высокожировой диетой и стрептозотоцином. В качестве положительного контроля и препарата сравнения использовали акарбозу (Sigma, США). Результаты и их обсуждение. В результате скрининга выявлено 5 активных соединений. Проведено исследование механизма связывания с активным центром фермента, определены аминокислоты, взаимодействующие с молекулой ингибитора – Trp572, Trp659, Asp719. Соединение-лидер ФХ-7 (IC50 62,3 мкМ) проявило значимую антигипергликемическую активность, превосходящую препарат сравнения в эквимолярной дозе. Выводы. Выявлен эффективный ингибитор α-глюкозидазы ряда фенилхромена ФХ-7, превосходящий препарат сравнения акарбозу по активности и обладающий антидиабетической активностью на животной модели. Он может рассматриваться как объект дальнейших фармакологических исследований и направленной модификации. Анализ зависимости антигипоксической активности от структуры соединений в ряду замещенных глипролинов Колясникова К.Н., Николаев С.В., Кузнецова Е.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Ранее в НИИ фармакологии им. В.В. Закусова был открыт эндогенный нейропептид цикло-пролилглицин (ЦПГ) 60 (Gudasheva T.A., et al. FEBS Lett. 1996). ЦПГ обладает ноотропным, анксиолитическим, нейропротекторным и антигипоксическим действием, оказывает положительное модулирующее действие на AMPA-рецепторы и приводит к усилению синтеза нейротрофина BDNF (Гудашева Т.А., и др. ДАН. 2016). Нами был сконструирован этиловый эфир N-фенилацетил-глицил-L-пролина (ГЗК-111), для которого было показано in vitro, что он превращается в ЦПГ и проявляет характерные для последнего ноотропный, анксиолитический и антигипоксический эффекты (Гудашева Т.А., и др. Хим.-фарм. журн. 2016). Цель. В настоящей работе синтезирован ряд аналогов ГЗК-111 с разным замещением по C-концу (амид, метиламид, кислота) и изучена их фармакологическая активность. Материалы и методы. Дипептиды получали с использованием метода смешанных ангидридов. Антигипоксическое действие изучали в тесте нормобарической гипоксии с гиперкапнией на белых беспородных мышах-самцах в дозах 0,1; 0,5 и 1,0 мг/кг в/б. Нейропротекторную активность изучали in vitro на модели 6-оксидофаминовой токсичности с использованием клеток нейробластомы человека линии SH-SY5Y. Результаты и их обсуждение. Установлено, что антигипоксической активностью в ряду вновь синтезированных соединений обладает только амид N-фенилацетил-глицил-L-пролина (ГЗК-113). Активная доза 1,0 мг/кг в/б. Эффект ГЗК-113, также, как и ГЗК-111 является стереоспецифичным: активностью обладает только энантиомер на основе природного L-пролина. ГЗК-113 проявлял нейропротекторную активность в диапазоне концентраций 10-7-10-5 М. Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что эффект наблюдается только для незамещенного амида (ГЗК-113), который, как и низкоалкильный эфир (ГЗК-111), предположительно может превращаться в ЦПГ после энзиматического отщепления Nфенилацетильной группы. Выводы. Таким образом, активность проявляется только у соединений, которые могут метаболизироваться с образованием ЦПГ – эфир и незамещенный амид. 61 Изучение противоопухолевой активности СНК-411 на экспериментальной модели рака шейки матки у мышей линии СВА Коржова К.В., Никитин С.В., Коваленко Л.П. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. По данным мировой литературы раком шейки матки (РШМ) ежегодно заболевают до 500 000 женщин. Вирус папилломы человека (ВПЧ) является основным предшественником онкопатологии шейки матки. В настоящее время известно, что баланс между цитокинами различных оппозиционных групп определяет характер развития иммунного ответа против ВПЧ и индуцированных ими предопухолевых и опухолевых заболеваний шейки матки. Цель. В настоящей работе была изучена противоопухолевая активность СНК-411 (2-изобутил-4,6-диметил-5-оксипиримидина) на модели рака шейки матки (РШМ-5) в опытах на самках мышей линии СВА. Материалы и методы. Штамм опухолевых клеток был получен из банка клеточных культур НИИ ЭДиТО РОНЦ имени Н.Н. Блохина. Взвесь опухолевых клеток РШМ-5 имплантировали 40 самкам мышей линии СВА подкожно по 30 мг в 0,3 мл раствора Хэнкса на мышь. СНК-411 в дозе 25 мг/кг вводили животным в/б в течение 2-х недель со 2 по 15 дни развития опухоли. В качестве контроля и совместно с СНК-411 вводили доксорубицин. Доксорубицина гидрохлорид (ЭБВЕ Фарма Гес.м.б.Х.Нфг.КГ, Австрия) вводили однократно в/б на 2 день развития опухоли в дозе 4 мг/кг. 40 животных рандомизировали в следующие группы: 1. активный контроль (РШМ-5), которым вводили дистиллированную воду; 2. РШМ-5 и СНК-411 в дозе 25 мг/кг; 3. РШМ-5 и доксорубицин в дозе 4 мг/кг; 4. РШМ-5, СНК-411 в дозе 25 мг/кг и доксорубицин в дозе 4 мг/кг. На 7 сутки после окончания 2-х недельного введения веществ животных забивали, извлекали опухоль и взвешивали на аналитических весах. Противоопухолевый эффект (ТРО) регистрировали по массе опухоли в момент забоя. Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программы Statistica 10. Результаты и их обсуждение. Степень торможения роста опухоли (ТРО) при курсовом введении СНК-411 в дозе 25 мг/кг составила 62 46,3%, ТРО при однократном в/б введении доксорубицина в дозе 4 мг/кг составило 31,6%. При совместном введении СНК-411 и доксорубицина отмечена аддитивность эффекта от совместного введения препаратов, степень торможения роста опухоли составила 66,4%. Согласно данным ранее выполненных исследований, СНК-411 обладает иммуномодулирующими и выраженными противовоспалительными свойствами, на модели LLC при введении СНК-411 в дозе 25 мг/кг было определено значительное уменьшение содержания проонкогенного цитокина ИЛ-4. Выводы. Полученные на модели РШМ-5 данные указывают на эффективность малотоксичных иммунотропных препаратов и возможную аддитивность их противоопухолевого действия с доксорубицином. Особенности кроликов породы Шиншилла как тест-системы для изучения препаратов половых гормонов Котлярова А.А., Щулькин А.В., Черных И.В., Якушева Е.Н. ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, г. Рязань E-mail: [email protected] Актуальность. Млекопитающие классифицируются на спонтанных и индуцированных овуляторов. Спонтанные овуляторы (крупный рогатый скот, люди) характеризуются циклическими изменениями в яичниках и эндометрии. Индуцированные овуляторы (кролики, кошки) требуют стимуляции, связанной со спариванием, чтобы вызвать овуляцию. Цель. Изучить гормональный фон кроликов породы Шиншилла в норме и на фоне экспериментальных воздействий. Материалы и методы. Исследование выполнено на половозрелых самках кроликов породы Шиншилла, массой 3000-3500 г. Все животные были разделены на следующие группы. Первая группа – контроль, интактные кролики, которые содержались в виварии в течение 28 сут (n=5). Вторая группа – животные, подвергнутые овариоэктомии (n=6) и наблюдаемые в течение 42 сут. Третья группа – кролики, которым per os один раз в день в течение 21 сут вводили комбинацию этинилэстрадиола (6,5 мкг/кг) и гестодена (16,5 мкг/кг) 63 (n=8). Четвертая группа – животные (n=8), которых спаривали с самцами и наблюдали в течение 28 сут. Во всех группах у животных каждую неделю забирали кровь из ушной вены и определяли концентрации половых гормонов (эстрадиола, прогестерона и тестостерона) радиоиммунным методом. Полученные данные анализировали с помощью критерия Фридмана, попарные сравнения выполняли с использованием критерия Вилкоксона с поправкой Бонферонни. Результаты и их обсуждение. У интактных самок кроликов концентрация эстрадиола составила 485,56±77,74 пг/мл, прогестерона – 1,27±0,39 нг/мл, тестостерона – 0,11±0,029 нмоль/л. Содержание кроликов в течение 28 сут не сопровождалось изменениями концентрации половых гормонов, они статистически значимо не отличались от исходных значений. Выполнение овариоэктомии приводило к снижению уровня эстрадиола на 42 сут овариоэктомии – на 29,7% (p<0,05) по сравнению с исходными показателями. В тоже время концентрация прогестерона снижалась уже на 14 сут после операции на 30,9% (p<0,05), на 28 сут – на 54,9% (p<0,05), а на 42 сут – на 48,7% (p<0,05) соответственно. Содержание тестостерона достоверно при овариоэктомии не изменялось. При введении комбинации этинилэстрадиола и гестодена на 14 сут отмечалось снижение концентрации эстрадиола в сыворотке крови на 25,6% (p<0,05), прогестерона на 26,2% (p<0,05), тестостерона на 51,9% (p<0,05), на 21 сут – уменьшение содержания эстрадиола на 30,1% (p<0,05), тестостерона на 43,1% (p<0,05) по сравнению с исходными данными. C 7 сут беременности происходило повышение концентрации прогестерона в 3,2 раза (p<0,05), тестостерона на 82% (p<0,05), а уровень эстрадиола существенно не изменялся по сравнению с исходными показателями. Данные изменения сохранялись до 28 сут беременности. Выводы. Кролики породы Шиншилла являются удобной тестсистемой для изучения фармакологических эффектов препаратов половых гормонов. Работа поддержана грантом РФФИ№ 18-015-00259 а. 64 Поведение и обучение крыс на фоне введения иммуноактивных препаратов из тимуса и кожи Крючкова А.В.1, Иноземцев А.Н.1, Белова О.В.2 МГУ имени М.В. Ломоносова, г. Москва (1), НИЦ Курчатовский институт, г. Москва (2) E-mail: mailto:[email protected] Актуальность. Изучению взаимодействия нервной, иммунной и эндокринной систем в настоящее время уделяется большое внимание. Центром взаимодействия этих трех систем является тимус, традиционно рассматривающийся как один из центральных органов иммунной системы. В последнее время также разрабатывается концепция представления кожи как нейроиммуноэндокринного органа. Цель. Изучение влияния трех иммуноактивных препаратов тимической и кожной природы на поведение крыс и выработку условной реакции пассивного избегания (УРПИ). Материалы и методы. Опыты были проведены на 79 крысахсамцах Wistar, разделенных на четыре группы. Каждой группе вводили внутрибрюшинно в дозе 0,4 мг/кг одно из исследуемых веществ: тактивин, высокомолекулярную (м.м. от 150 до 200 кДа) пептидную фракцию тимуса крупного рогатого скота (ВМФТ), гетерогенный препарат из свиной кожи К-активин, ежедневно в течение 5 суток до эксперимента. Животным контрольной группы вводили физиологический раствор. Были использованы тесты открытое поле, темно-светлая камера, приподнятый крестообразный лабиринт. Результаты и их обсуждение. Анализ приведѐнных результатов показал минимальное влияние трех изучаемых препаратов на свободное поведение животных в этих тестах. Кроме того, вырабатывали УРПИ в оригинальной трехкамерной установке, отличающейся от стандартной наличием двух темных отсеков, для каждого животного один из которых становится «опасным» (в нем крыса получает электроболевое воздействие), а второй, соответственно, «безопасным». Модифицированная камера для УРПИ позволила установить тонкие отличия в паттернах обучения всех групп крыс благодаря возможности оценивать показатели посещений опасного и безопасного темных отсеков. Обучение животных УРПИ относительно контроля улучшалось при введении 65 тактивина и К-активина, и ухудшалось при введении ВМФТ. При этом животные, получающие К-активин, показывали более длительное сохранение памятного следа, чем получающие тактивин. Выводы. Таким образом, изучаемые вещества показывают различное действие на обучение крыс. Полученные данные позволяют предположить наличие ноотропных свойств у тактивина и К-активина, но не у ВМФТ. Исследование специфического связывания [3H](+)-пентазоцина в мембранных фракциях головного мозга мышей BALB/c и C57Bl/6 при эмоционально-стрессовом воздействии и введении анксиолитиков Курбанов Р.Д. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Действие классических бензодиазепиновых анксиолитиков сопровождается множеством побочных эффектов. Поэтому актуальным является поиск новых мишеней для достижения анксиолитического действия. Известно, что шаперон sigma-1 (SigmaR1) обладает способностью к лигандной активации и имеет большое значение для регуляции адаптивных процессов в условиях клеточного стресса. Учитывая данные о переходе физиологического стресса в клеточный (Hayashi T., 2015), шаперон SigmaR1 является перспективной фармакологической мишенью для достижения анксиолитического действия, однако вклад шаперона в развитие ответа на эмоциональный стресс и действие анксиолитиков не изучено. Цель. Сравнительное изучение влияния афобазола и диазепама на связывание [3H](+)-пентазоцина sigma-1 рецепторами в мембранных фракциях головного мозга мышей BALB/c и C57Bl/6 после экспозиции в тесте «открытое поле» Материалы и методы. Стрессовое воздействие моделировали в тесте «открытое поле» (ОП) на мышах BALB/c и C57Bl/6, характеризующихся противоположными фенотипами эмоциональнострессовой реакции. Лиганд SigmaR1 афобазол (Середенин, 2009) в анксиолитической дозе 2,5 мг/кг, диазепам в дозах 1 мг/кг (анксиолитическая доза) и 5 мг/кг (седативная доза) вводили 66 внутрибрюшинно за 30 минут до декапитации или до экспозиции в ОП. Специфическое связывание [3H](+)пентазоцина определяли методом радиолигандного анализа ex vivo. Результаты и их обсуждение. У мышей BALB/c афобазол в дозе 2,5 мг/кг увеличивал специфическое связывание [ 3H](+)пентазоцина в P3 фракциях в сравнении с интактными животными. Афобазол и последующая экспозиция в тесте ОП приводили к увеличению специфического связывания и в Р3 и в Р2 фракциях. У животных линии С57Bl/6 эффект афобазола на специфическое связывание [3H](+)-пентазоцина отличался от установленного для BALB/c и выражался в снижении связывания радиолиганда в Р2 фракции при сравнении с интактными животными. Внутрибрюшинное введение афобазола и экспозиция в ОП приводили к снижению специфического связывания в обеих мембранных фракциях. Действие диазепама на связывание [3H](+)-пентазоцина у мышей BALB/c и C57Bl/6 в обеих дозах оказалось схожим и приводило к снижению связывания в P2 и P3 фракциях. После экспозиции в ОП действие диазепама не изменялось. Выводы. Обнаружены межлинейные различия в действии афобазола, заключающиеся в разнонаправленном влиянии препарата на специфическое связывание [3H](+)-пентазоцина в P2 и P3 фракциях головного мозга мышей BALB/c и C57Bl/6. Диазепам в анксиолитической и седативной дозах снижает специфическое связывание [3H](+)пентазоцина в обеих фракциях гомогенатов головного мозга мышей BALB/c и C57Bl/6. Исследование влияния производного оксима дибензофурана ГИЖ-272 на выживаемость и энцефалографические показатели мозга крыс с ишемическим инсультом Кутепова И.С., Литвинова С.А., Неробкова Л.Н., Воронина Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва Е-mail: [email protected] Актуальность. Ишемический инсульт, как заболевание, относящееся к числу основных причин смертности населения, обуславливает поиск клинически успешных соединений и исследование их нейропротективной активности. 67 Цель. Оценка влияния ГИЖ-272 на выживаемость и биоэлектрическую активность структур мозга крыс после перенесенного ишемического инсульта. Материалы и методы. Моделирование ишемического инсульта (ИИ) у крыс проводили с помощью билатеральной перевязки сонных артерий. Опытной группе №1 вводили ГИЖ-272 (10 мг/кг, 7 дней, n=14), контрольным крысам № 1 с ИИ (n=14) – физиологический раствор (ф.р.). Электрофизиологические (ЭЭГ) исследования у крыс с ИИ проводили на отдельных группах: опытной №2 вводили ГИЖ-272 (10 мг/кг, 7 дней, n=10), контрольной № 2 – ф.р. (7 дней, n=10). До операции крысам вживляли долгосрочные электроды в структуры мозга – стриатум, кора, гипоталамус и гиппокамп и через 5-6 дней проводили фоновую ЭЭГ запись. Затем моделировали ИИ и осуществляли ЭЭГ запись у свободноподвижных крыс (21-канальный аппаратно-программный комплекс, «НЕЙРО-КМ» с ПО «BRAINSYS») в течение 3 часов на 1, 2, 3, 5, 7, 14 , 21 и 28 сутки после ИИ. Результаты и их обсуждение. Установлено, что соединение ГИЖ-272 защищало животных от гибели в течение 14 суток после ИИ, увеличивая выживаемость крыс относительно контрольной группы с ИИ на 33% (p≤0,05). Защита от гибели животных с ИИ и получивших ГИЖ-272 сопровождалась ослаблением неврологического дефицита, включающего манежные движения, слабость, парезы конечностей, птозы и полуптозы. ЭЭГ – исследование контрольной группы крыс на 1-е сутки после ИИ показало замедление волн и снижение амплитуды во всех диапазонах частот относительно фона: дельта (δ) в диапазоне – (0,5-4), тета1 (θ1) в диапазоне (4-8), тета2 (θ2) в диапазоне (8-13), бета1 (β 1) в диапазоне (13-20), бета2 (β 2) в диапазоне (20-30). Спектральный анализ ЭЭГ записей контрольной группы с ИИ при сравнении с фоновыми показателями показал снижение % мощности δ-ритмов на 2, 3, 5 и 7 сутки после ИИ. Как правило, такие животные погибали к концу 7-х суток. Нарастание % мощности δ-ритма (на 5, 7, 14 и 21-й день) и θ1(6-8) ритмов в постинсультный период (14, 21 и 28-й день) относительно 1-х суток после ИИ сопровождалось снижением неврологического дефицита и, как следствие, выживанием животных. ГИЖ-272 способствовал более раннему нарастанию δ-ритма начиная со 2-х суток после ИИ и θ-ритма (диапазон 6-8) начиная с 5-7-х суток постинсультного периода. 68 Выводы. ГИЖ-272 обладает отчетливым нейропротективным эффектом, способствующим выживанию животных после ишемического инсульта, что сопровождается увеличением % мощности δ активности в постинсультный период и более раннему появлению θ-ритма в диапазоне частот 6-8 относительно контрольной группы с ИИ. Малые аполипопротеины позвоночных – изучение филогении и эволюции антиатерогенных белков Лизунов А.В., Орлов С.В., Бычков Е.Р. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail:[email protected] Актуальность. Малые аполипопротеины осуществляют перенос липидов в плазме крови, благодаря чему обладают антиатерогенным эффектом. Их исследование перспективно для поиска методов профилактики сердечнососудистых заболеваний. Гены аполипопротеинов встречаются у всех групп позвоночных животных, наиболее консервативными структурами у семейства малых аполипопротеинов являются первые амфипатные структуры из 11 и 22 аминокислотных остатков (Li W.-H., et al. The apolipoprotein multigene family: biosynthesis, structure, structure-function relationships, and evolution. J Lipid Res. 1988; 29:245-65). Цель: создать схему филогении генов малых аполипопротеинов, включая: 1) анализ сходства первичных последовательностей аполипопротеинов; 2) построение схемы кластеризации генов суперсемейства малых аполипопротеинов; 3) реконструкцию общей эволюции семейства малых аполипопротеинов. Материалы и методы. Использовали базы данных аминокислотных последовательностей серверов NCBI и Santa-Crus. Для построения множественного выравнивания и дендрограмм применяли пакеты программ Mega5 и PhyML5.0. Проводили скрининг баз данных аминокислотных и нуклеотидных последовательностей. Отбирали последовательности с позитивной 69 гомологией не менее 40%. Анализировали кластеризацию генов аполипопротеинов. По последовательностям аполипопротеинов строили дендрограмму методом Maximum Likelihood. Результаты и их обсуждение. У изученных групп позвоночных гены аполипопротеинов группируются в кластеры трех типов: АпоА-кластер фланкируется генами SIK-kinase и ZPR1, АпоЕкластер фланкируется генами Clptm1 и Tomm40L и АпоА2 кластер – фланкируется генами Clptm1 и Fcel1g/UFC1. У хрящевых рыб есть прото-АпоА кластер. У латимерии есть АпоА и АпоЕ кластеры. У костистых рыб делетировался АпоА кластер и дуплицировался АпоЕ кластер. У рептилий возникает ген АпоС3, у птиц отсутствует АпоЕ кластер, у млекопитающих инвертирована группа генов после АпоА2. Наиболее примитивный вариант аполипопротеинов ген LAL2 миног. Гомологичные гены образуют отдельные ветви на дендрограмме. Выводы. Ближайшим к предковой форме является LAL2 миног. Эволюция генов аполипопротеинов шла путем серии последовательных дупликаций предкового гена с образованием кластеров. Первым кластером был АпоА кластер. Увеличение числа генов и амфипатных сегментов аполипопротеинов вторично. Нейропротекторное действие дипептидных миметиков разных петель BDNF и их избирательная активация систем трансдукции сигнала TrkB рецептора Логвинов И.О., Тарасюк А.В., Николаев С. В., Круглов С.В., Сазонова Н.М., Антипова Т.А., Гудашева Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В патогенезе нейродегенеративных заболеваний выявлено снижение содержания нейротрофина BDNF – мозгового нейротрофического фактора, являющегося эндогенным нейропротектором. Поскольку нейротрофины не доступны для системного введения, в НИИ фармакологии имени В.В. Закусова были синтезированы димерные дипептидные миметики 1-й, 2-й и 4-й петель BDNF – ГСБ-214, ГСБ-106 и ГТС-201 соответственно. 70 Цель. Выявление нейропротекторных свойств данных пептидов на модели окислительного стресса, определение эффективных концентраций и исследование их влияния на активацию специфического рецептора BDNF – TrkB, а также его основных пострецепторных сигнальных путей PI3K/Akt – и MAPK/Erk. Материалы и методы. Эксперименты проводили на культуре гиппокампальных нейронов линии НТ-22. Окислительный стресс моделировали путем внесения в клеточную среду раствора Н2О2 (1,5 мМ). Миметики (10-5 – 10-8М) и BDNF (50 нг/мл, положительный контроль) вносили за 24 ч. до повреждения клеток. Жизнеспособность клеток определяли с помощью МТТ-теста при длине волны 600 нм. Влияние ГСБ-214, ГСБ-106 и ГТС-201 на процесс активации TrkB, PI3K/Akt- и MAPK/Erk-киназ определяли методом Вестерн-блот анализа с использованием специфических антител к этим белкам. Клетки лизировали через 5 мин, 15 мин, 30 мин и 60 мин после инкубации с пептидами или с BDNF. Результаты и их обсуждение. Подобно BDNF, соединения ГСБ214, ГСБ-106 и ГТС-201 защищали клетки от окислительного стресса, индуцированного перекисью водорода, во всех исследуемых концентрациях. На модели окислительного стресса также были определены и отобраны наиболее эффективные концентрации для экспериментов по изучению влияния миметиков на фофорилирование TrkB, Akt- и Erk-киназ. Нами показано, что ГСБ-214 (10-7М), ГСБ-106 (10-8М) и ГТС-201 (10-7М) статистически достоверно увеличивали фосфорилирование TrkB. Миметик 4-й петли ГСБ-106 через 15 мин активировал оба пострецепторных сигнальных пути. В отличие от него, миметик 1-й петли ГСБ-214 активировал только PI3K/Aktкиназый и не активировал MAPK/Erk-киназый, а миметик 2-й петли наоборт – активировал MAPK/Erk-киназый путь, но не влиял на фосфорилирование PI3K/Akt-киназного пути. Выводы. 1. На модели окислительного стресса в культуре гиппокампальных нейронов линии НТ-22 выявлено нейропротекторное действие дипептидных миметиков BDNF и определены их эффективные концентрации. 2. Установлено различие в активации систем трансдукции сигнала TrkB рецептора миметиками, полученными на основе разных петель BDNF. 71 Исследование противоболевого и противовоспалительного действия гелей гимантана Матюшкин А.И., Иванова Е.А., Воронина Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Наружные лекарственные формы нестероидных противовоспалительных средств (НПВС) широко применяются при терапии воспалительных заболеваний суставов, в связи с чем создание новых местных НПВС является актуальной задачей для фармацевтики. Цель. Выявить наиболее эффективную гелевую лекарственную форму гимантана на моделях боли и воспаления у крыс. Материалы и методы. Эксперименты проводили на аутбредных крысах-самцах, массой 270-300 г. Работу выполняли в два этапа. На 1 этапе оценивали противовоспалительный и анальгетический эффекты гелевых форм гимантана с минимальным количеством наполнителей, различающихся концентрацией действующего вещества: 1 и 5%. На 2 этапе работы изучали противовоспалительную и противоболевую активность 5%-ных гелевых лекарственных форм гимантана, отличающихся между собой наличием активатора всасывания диметилсульфоксида (ДМСО) в составе вспомогательных веществ. Противовоспалительную и анальгетическую активность оценивали в тесте формалинового отѐка лапы и формалиновой боли, соответственно, в сравнении с 1%-ным гелем диклофенака (Hemofarm). Результаты и их обсуждение. 1 этап исследования. 5%-ный гель гимантана, как и гель диклофенака, снижал выраженность боли в тоническую, обусловленную развитием воспаления, фазу формалиновой боли, и воспалительную реакцию у крыс. 1%-ный гель гимантана значимого влияния на боль и воспаление не оказывал. В отличие от геля диклофенака, 5%-ный гель гимантана ещѐ и уменьшал чувствительность крыс в острую фазу формалиновой боли, обусловленную влиянием альгогена на первичные афференты боли. Таким образом, 5%-ная концентрация гимантана была выбрана для дальнейшей работы по созданию гелевых лекарственных форм на его основе. 2 этап исследования. 5%-ный гель гимантана с активатором всасывания ДМСО в своем составе, как и 1%-ный гель диклофенака, достоверно снижал степень формалинового отѐка и болевую реакцию 72 крыс в тоническую фазу формалиновой боли. 5%-ный гель гимантана, в составе которого отсутствовал активатор всасывания ДМСО, был менее эффективен: на его фоне уменьшалась выраженность тонической фазы формалиновой боли, однако значимого снижения отѐчности лап животных не наблюдалось. Выводы. Результаты проведѐнного исследования обнаружили наличие противовоспалительных и анальгетических свойств у 5%ных гелевых форм гимантана. Наиболее эффективен 5%-ный гель гимантана, содержащий в своем составе ДМСО в качестве активатора всасывания. Исследование цитотоксичности наноструктурированной полисахаридной формы доксорубицина на культуре клеток L929 Минаева О.В., Бродовская Е.П., Петров П.С., Жарков М.Н., Сюсин И.В. ФГБОУ ВО МГУ имени Н.П. Огарева, г. Саранск E-mail: [email protected] Актуальность. В настоящее время предложено множество различных систем доставки лекарственных препаратов, основанных на различных особенностях опухолевых клеток. Относительно новым подходом является использование специфической экзокринной активности опухолей. Опираясь на факт гиперпродукции амилазы некоторыми опухолями, мы предположили, что полисахаридные наночастицы ассоциированные с доксорубицином (Doх) будут более эффективны в терапии за счет специфической биодеградации in situ. На первом этапе нами были получены стабильные наночастицы из декстрана сульфата (Ds), содержащие Doх. Цель. Изучение базовой цитотоксичности наноструктурированной полисахаридной формы доксорубицина in vitro. Материалы и методы. Исследование базовой цитотоксичности проводили методом МТТ-теста на культуре клеток L929; сравнивались «чистый» доксорубицин, наночастицы из декстрана сульфата с доксорубицином (DsDoxNP), с добавлением амилазы и без. Кроме того, проводили двойное окрашивание акридиновым оранжевым и пропидием йодидом (AO/PI, Sigma) для оценки морфологических изменений в клетках и выяснения ведущего механизма гибели клеток. 73 Результаты и их обсуждение. Данные МТТ теста показали снижение жизнеспособности клеток L929 при воздействии различных форм доксорубицина, причем, цитотоксичность «чистого» доксорубицина была выше, чем DsDoxNP. Добавление амилазы в среду инкубации приводило к статистически значимому усилению цитотоксического эффекта DsDoxNP с амилазой на 10-15% относительно Dox и на 15-20% относительно его наноформы. Анализ результатов двойного AO/PI окрашивания показал, что основным механизмом клеточной гибели при воздействии доксорубицина является апоптоз (67%). В образцах, обработанных DsDoxNP, как с амилазой, так и без нее, визуализировалось большее количество некротических клеток (43%). Вероятно, это связано со скоростью развития цитолиза, возникновением т.н. вторичного некроза, который развивается как завершающая стадия апоптотического процесса при воздействии наноформы препарата. Выводы. Выявленные особенности цитотоксичности in vitro позволяют предположить уменьшение системных токсических эффектов при химиотерапии изучаемым препаратом in vivo, и усиление антибластмной активности при попадании в микроокружение амилазопродуцирующих опухолей. Тем самым, может быть достигнут эффект избирательности действия при терапии некоторых видов онкопатологии. Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 18-315-00250. Влияние полиморфизмов генов ABCB1 и CYP3A5 на степень изменения протромбинового времени под влиянием ривароксабана у пациентов после эндопротезирования крупных суставов нижних конечностей Миннигулов Р.М., Сычев Д.А., Рыжикова К.А., Юдина И.Ю., Лычагин А.В., Морозова Т.Е. ФГАОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В клинической практике для тромбопрофилактики после эндопротезирования крупных суставов нижних конечностей 74 уже осуществился переход с нефракционированного гепарина на низкомолекулярные гепарины, на данный момент в распоряжении врача появились прямые пероральные антикоагулянты (ППОАК), в частности, ривароксабан, который удобен в использовании, не требует титрования дозы и лекарственного мониторинга. Однако остается потребность в дальнейшем улучшении эффективности и безопасности применения ППОАК, которая может быть реализована посредством использования фармакогенетических методов исследования. Цель. Оценить влияние носительства полиморфизмов ABCB1 3435C>T (rs1045642) и CYP3A5 6986A>G (rs776746) на степень изменения протромбинового времени (ПВ) у пациентов после эндопротезирования крупных суставов нижних конечностей, принимающих с целью тромбопрофилактики ривароксабан. Материалы и методы. Включено 65 пациентов после тотального эндопротезирования тазобедренного (n=19; 29,2%) или коленного суставов (n=46; 70,8%); средний возраст: 59±12 лет; ж. – 48 (73,8%), м. – 17 (26,2%), которым был назначен ривароксабан 10 мг 1 р/сут. Генотипирование проводилось с помощью ПЦР в реальном времени. Забор венозной крови проводили на 5 сут приема антикоагулянта 2 раза: за 1 ч до и через 3 ч после приема ривароксабана. ПВ определялось мануально. После вычисления %ΔПВ пациенты делились на 2 группы: 1) %ΔПВ≤0 или 2) %ΔПВ>0. Результаты и их обсуждение. У 7 (10,8%) пациентов имела место парадоксальная реакция снижения ПВ (%ΔПВ≤0), у остальных 58 (89,2%) пациентов ПВ на фоне приема ривароксабана увеличивалось (%ΔПВ>0). В группе c %ΔПВ≤0 у 6 пациентов (85,7%) наблюдалось носительство генотипа ABCB1 3435TC, в то время как носителей генотипа ABCB1 3435TT в данной группе выявлено не было. Между группами процентного изменения протромбинового времени относительно распределения генотипов полиморфизма ABCB1 3435C>T (rs1045642) была определена статистически достоверная разница (χ2=6,64; p=0,027). Относительно распределения генотипов полиморфизма CYP3A5 6986A>G (rs776746) статистически значимой разницы между группами процентного изменения протромбинового времени обнаружено не было (χ2=0,101; p=1,0). Выводы.Выявлено статистически значимое влияние полиморфизма ABCB1 3435C>T (rs1045642) на характер изменения протромбинового времени у пациентов после эндопротезирования 75 крупных суставов нижних конечностей, получающих с целью тромбопрофилактики ривароксабан. Сравнительное изучение особенностей кардиопротекторного действия триметазидина и афобазола у крыс с алкогольной кардиомиопатией Мирошкина И.А., Ионова Е.О., Цорин И.Б., Столярук В.Н., Вититнова М.Б., Сорокина А.В., Крыжановский С.А., Дурнев А.Д. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В последние десятилетия в ряду сердечнососудистых заболеваний выделена новая назологическая единица – алкогольная кардиомиопатия (АКМП). Для лечения данной патологии широко используют препарат триметазидин, который эффективно купирует патогномоничную АКМП дилатационную сердечную недостаточность, однако не предупреждает развитие сопутствующих злокачественных нарушений сердечного ритма. Цель. Сравнительное изучение кардиопротективных эффектов ингибитора р-FОХ триметазидина и агониста σ1-рецепторов афобазола у крыс с АКМП. Материалы и методы. Эхокардиографические, морфометрические и электрофизиологические исследования проводились на разработанной ранее трансляционной модели АКМП у крыс (Крыжановский С.А. и др., 2015). Афобазол (в/б 15 мг/кг/сут.) и триметазидин (в/б 30 мг/кг/сут.) начинали вводить с конца 24 нед. алкоголизации и продолжали в течение 28 дней абстиненции. Результаты и их обсуждение. Патоморфологическим признаком АКМП является расширение полостей сердца при минимальной неравномерной гипертрофии миокарда или еѐ отсутствии. Показано, что у контрольных животных через 24 нед. алкоголизации формировалась АКМП. Например, конечный систолический размер (КСР) левого желудочка (ЛЖ) сердца в группе алкоголизированного контроля был статистически значимо (p=0,024) больше, чем у интактных крыс – соответственно 3,41±0,21 мм и 2,83±0,15 мм. Площади полостей ЛЖ и правого желудочка (ПЖ) у 76 алкоголизированных крыс были также статистически значимо больше, чем у интактных. Афобазол и триметазидин способствовали обратному ремоделированию сердца. Например, относительная площадь полости ЛЖ после 28 дней экспериментальной терапии афобазолом была статистически значимо меньше, чем в контроле: 10,0±2,6% и 22,5+2,8% (р≈0,0004) соответственно. Сходным действием обладал триметазидин. В группе крыс, получавших афобазол, порог электрической фибрилляции желудочков (ПЭФЖ) сердца был статистически значимо выше, чем в контроле (p≈0,030) – соответственно 0,7 (0,5÷0,7) и 0,4 (0,4÷0,4) мА, и не отличался от данного показателя в интактной группе. Препарат сравнения триметазидин не влияет на ПЭФЖ. Выводы. Курсовая экспериментальная терапия р-FОХ ингибитором триметазидином и агонистом σ1-рецепторов афобазолом животных со сформировавшейся АКМП, находящихся в условиях отмены этанола, способствует обратному ремоделированию сердца и тем самым значительно уменьшает интенсивность сопутствующей этой патологии хронической сердечной недостаточности. Афобазол, в отличие от триметазидина, восстанавливает электрическую стабильность кардиомиоцитов. Влияние производных ГАМК на память потомства крыс с экспериментальной преэклампсией в условиях скополаминовой амнезии Музыко Е.А.1, Ткачева Г.А.2 ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград (1), ФГБОУ ВО ВГСПУ, г. Волгоград (2) E-mail: [email protected] Актуальность. Одним из важнейших звеньев формирования памяти является холинергическая система. Нарушение ее развития в эмбриональном периоде ведет к когнитивному дефициту потомства в постнатальном онтогенезе. Цель. Оценить влияние производных ГАМК – сукцикарда, фенибута и препарата сравнения пантогама – на формирование памяти при блокаде холинергической системы потомства крыс с экспериментальной преэклампсией (ЭП). 77 Материалы и методы. Исследование проводили на белых беспородных 3-месячных крысах, рожденных от самок с ЭП, смоделированной заменой питьевой воды на 1,8% р-р NaCl с 1 по 21 день гестации. Были сформированы группы: 1 – позитивный контроль – потомство от интактных самок, получавшее дистиллированную воду (n=19); 2 – негативный контроль – потомство от самок с ЭП, получавшее дистиллированную воду (n=20); 3, 4, 5 – опытные – потомство от самок с ЭП, получавшее сукцикард в дозе 22 мг/кг (n=20), фенибут – 25 мг/кг (n=20) и пантогам – 50мг/кг (n=19). Дистиллированную воду и препараты вводили с 40 по 70 день жизни перорально один раз в сутки. Функции холинергической системы исследовали в тесте «Условный рефлекс пассивного избегания» (УРПИ) с применением скополамина, который вводили в дозе 1,75 мг/кг перед 1,3,7,14 и 21 днями воспроизведения навыка. Для статистической обработки результатов использовали критерии Фишера и Крускалла-Уоллиса с пост-тестом Данна. Результаты и их обсуждение. В тесте УРПИ латентный период (ЛП) захода темную камеру (ТК) на1-й день воспроизведения у интактных крыс был в 1,1 раза, на 3-й и 7-й – в 1,2 раза, на 14-й и 21-й – в 1,5 раза (р<0,05) больше, чем у негативного контроля. У животных, получавших сукцикард и фенибут, ЛП на 1-й день был больше в 1,1 раз, на 3-й – в 1,15 и 1,2 раза, на 7-й – в 1,1 раза, на 14-й – в 1,4 и 1,3 раза, на 21-й – в 1,5 и 1,3 раза (р<0,05) соответственно по сравнению с потомством крыс с ЭП, получавшим дист.воду. У потомства, получавшего пантогам, достоверных отличий выявлено не было. С 1-го по 14-й дни воспроизведения в группе позитивного контроля ТК посетила одна крыса (5,3%), на 21-й день – 10,5% животных. У потомства негативного контроля на 1-й день в ТК зашло 15% крыс, на 3-й – 5%, на 7-й – 35%, на 14-й – 55% (φ>2,31), на 21-й – 65% (φ>2,31). Крысы, получавшие сукцикард, посетили ТК на 3-и сутки 5%, на 7-е и 14-е – 10% (φ>2,31), на 21-е – 15%. Животные, получавшие фенибут, начали заходить в ТК с 7-го дня – 15%, на 14-й – 20%, на 21-й – 30%. Потомство, получавшее пантогам, посещало ТК с 1-го дня – 5,3%, на 3й – 10,5%, на 7-й – 15,8%, на 14-й – 26,3%, на 21-й – 31,6%. Выводы. При введении скополамина потомству от самок с ЭП, получавшему дист.воду, отмечаются более выраженные когнитивные нарушения по сравнению с интактными животными. Сукцикард, фенибут и препарат сравнения пантогам ограничивают негативное действие ЭП на память. 78 Современные подходы к доклиническим исследования в РФ Мурашев А.Н. 1,2, Яворский А.Н. 2, Дьяченко И.А. 1,2 Филиал Института биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (1), Пущинский государственный естественно-научный институт, г. Пущино (2) E-mail: [email protected] В РФ доклинические исследования лекарственных средств для медицинского применения контролируются Росздравнадзором путем проведения плановых выездных проверок организаций, их выполняющих. Предметом таких проверок является оценка соблюдения требований, установленных: Федеральным законом от 12.04.2010 № 61-ФЗ «Об обращений лекартвенных средств»; приказом Министерства здравоохранения от 01.04.2016 №199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики»; ГОСТ 33044-2014 «Принципы надлежащей лабораторной практики» (GLP). Информацию о результатах выездных плановых проверок организаций, выполняющих доклинические исследования лекарственных средств для медицинского применения, можно найти на сайте Росздравнадзора. Кроме плановых проверок Росздравнадзора, согласно Постановлению правительства от 17.12.2013 №1172 «О признании и об оценке соответствия испытательных лабораторий (центров) принципам надлежащей лабораторной практики…» организации, выполняющие доклинические исследования (испытательных лаборатории), могут обратиться в Федеральную службу по аккредитации (Росаккредитацию), которая назначена органом по мониторингу испытательных лабораторий на предмет их соответствия принципам GLP. Получение признания соответствия принципам GLP осуществляется испытательными лабораториями в добровольном порядке. Информация о результатах инспекций Росаккредитации заносится в соответствующий реестр, с которым можно ознакомиться на сайте. Испытательные лаборатории в добровольном порядке могут получить признание соответствия принципам GLP в Росаккредитации, что может указывать на основании Федерального закона от 22.12.2014 №429-ФЗ «О внесении 79 изменений в Федеральный закон «Об обращении лекартвенных средств». Информация о результатах инспекций Росаккредитации может быть использована Минздравом России при оценке результатов доклинических исследований с целью принятий решения о регистрации лекарственного средства или о выдаче разрешения на проведения клинических исследований. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината на экспрессию HIF-1α в головном мозге крыс Мыльников П.Ю., Якушева Е.Н., Черных И.В., Щулькин А.В. ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, г. Рязань E-mail: [email protected] Актуальность. Этилметилгидроксипиридина сукцинат (ЭС) – оригинальный отечественный лекарственный препарат, обладающий выраженным антигипоксическим и антиоксидантным действием. В ходе 20-летнего применения он доказал свою высокую клиническую эффективность, которая на данный момент не может быть объяснена только особенностями его структуры. Цель. Изучить влияние ЭС на экспрессию транскрипционного фактора HIF-1α в коре лобной доли больших полушарий головного мозга крыс при односторонней окклюзии общей сонной артерии. Материалы и методы. Исследование выполнено на половозрелых крысах самцах вистар массой 220-300 г. Животные были распределены на 5 групп. 1 группе вводили дистиллированную воду 3 раза в день в течение 14 сут, 2 группе вводили ЭС per os в дозе 100 мг/кг по той же схеме, 3 группе однократно внутрибрюшинно вводили ЭС в дозе 120 мг/кг; 4 группе 14 сут до моделирования окклюзии общей сонной артерии и затем после неѐ вводили дистиллированную воду 3 раза в день; 5 группе аналогично 4 группе вводили ЭС per os в дозе 100 мг/кг. Четвертая и пятая группы включали по 4 серии – 4 и 12 ч, 5 и 12 сут после окклюзии общей сонной артерии. Экспрессию HIF-1α определяли иммуногистохимически. Полученные результаты анализировали с помощью критерия Крускала-Уоллиса. 80 Результаты и их обсуждение. У животных первых трѐх групп не наблюдалось статистически значимого изменения экспрессии HIF1α в ядрах клеток лобной доли головного мозга крыс. При моделировании окклюзии общей сонной артерии через 4 ч с момента ее пережатия в клетках лобной коры головного мозга увеличилось количество HIF-1α-позитивных ядер на 71,2% (p<0,05) по сравнению с нормой, в последующие сроки данный показатель нормализовался. Применение ЭС при окклюзии общей сонной артерии приводило к увеличению количества HIF-1α-позитивных ядер клеток коры лобной доли мозга через 4 ч на 49,0%, через 12 ч на 69,2% (p<0,05) по сравнению с нормой. На 5-е сутки окклюзии количество HIF-1αпозитивных ядер на фоне введения препарата на 28,2% (p<0,05) превышало данный показатель контрольных животных. Выводы: 1) Однократное и курсовое введение ЭС интактным крысам не влияет на экспрессию HIF-1α в клетках коры лобной доли головного мозга; 2) Применение ЭС при односторонней окклюзии общей сонной артерии приводит к повышению экспрессии HIF-1α в клетках коры лобной доли головного мозга крыс. Антиапоптотические свойства димерного дипептидного миметика NGF ГК-2 в условиях окислительного стресса in vitro Николаев С.В., Логвинов И.О., Пекельдина Е.С., Антипова Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В. В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В настоящее время важным направлением в кардиологии является создание лекарственных средств, регулирующих процессы ангиогенеза. В основе этого направления лежит поиск биоподобных препаратов, в том числе низкомолекулярных миметиков фактора роста нервов (NGF), обладающих ангиогенными свойствами. Созданный в НИИ фармакологии дипептидный миметик фактора роста нервов ГК-2 показал ангиогенную активность in vitro в интактной культуре эндотелиальных клеток человека HUVEC. Цель. Исследование эффектов ГК-2 на клетки HUVEC в условиях окислительного стресса. 81 Материалы и методы. Исследования проводились на культуре клеток эндотелия человека HUVEC. Клетки рассеивали на 96луночные культуральные планшеты. После образования монослоя для моделирования окислительного стресса вносили перекись водорода в концентрации 200 мкМ. Спустя 24 ч среду заменяли на обычную и добавляли ГК-2 (10-6М) и, в качестве положительного контроля, NGF (10-9М). Затем ГК-2 и NGF вносили каждые 48 ч в течение 6 дней. Спустя 24 ч после последнего внесения проводили измерение длины отростков с помощью световой микроскопии, жизнеспособности клеток методом MTT-теста, окрашивание клеток ядерным красителем Hoechst 33258 для выявления нарушенной структуры хроматина. Результаты и их обсуждение. В условиях окислительного стресса длина отростков клеток была достоверно (р≤0,05) ниже (87±10 мкм), чем у контрольных клеток (125±24 мкм). Внесение ГК-2 и NGF достоверно предотвращало это снижение (132±16 и 138±14 мкм соответственно, р≤0,05). Поскольку известно, что H2O2 в концентрации 200 мкМ индуцирует апоптоз, было проведено измерение жизнеспособности клеток эндотелия HUVEC и окраска клеток с поврежденным хроматином с использованием ядерного красителя Hoechst 33258 в условиях окислительного стресса. Окислительный стресс приводил к достоверному снижению жизнеспособности клеток по сравнению с контролем (78±5% и 100±6% соответственно, р≤0,05). Внесение как ГК-2, так и NGF предотвращало снижение жизнеспособности клеток HUVEC под действием H2O2 (95±3% для ГК-2 и 97±4% для NGF против 78±5% для H2O2, р≤0,05). Количество клеток с конденсированным хроматином в контроле составило 9±2 в поле зрения, после внесения Н2О2 78±9 (р≤0,05 по сравнению с контролем). Внесение NGF или ГК-2 после Н2О2 достоверно снижало число таких клеток (44±9 и 41±8, соответственно) (р≤0,05 по сравнению с H2O2) и препятствовало развитию морфологических изменений ядерного хроматина. Выводы. Таким образом, в условиях окислительного стресса ГК-2, подобно NGF, препятствует изменению длины отростков эндотелиальных клеток HUVEC и снижению их жизнеспособности, а также предотвращает повреждение ядерного хроматина. 82 Влияние хронического введения мемантина на поведение мышей с большим и малым весом мозга Огиенко Н.А., Перепелкина О.В., Полетаева И.И. МГУ имени М.В. Ломоносова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Препарат мемантин, используемый в терапии болезни Альцгеймера, являясь антагонистом NMDA-рецепторов, способен противостоять эксайтотоксичности и, таким образом, обладает нейропротекторным действием, что делает актуальным изучение вопроса о возможности применения мемантина при других нарушениях ЦНС. В качестве объекта исследования были использованы мыши двух линий, селектированных на большой и малый вес мозга – линии БМ и ММ, соответственно (самцы, N=42). Цель. Изучение влияния мемантина на различные поведенческие характеристики мышей двух указанных линий. Материалы и методы. В проведенном исследовании введение мемантина животным осуществлялось ежедневно, внутрибрюшинно, в дозе 5 мг/кг, в течение 7 недель (в течение 3 недель до начала поведенческого тестирования и 4 недели параллельно с проведением тестов). Для оценки различных поведенческих параметров были использованы следующие тесты: (1) темно-светлая камера; (2) спонтанное чередование в Т-лабиринте; (3) «копание»; (4) тест на гипонеофагию; (5) «закапывание шариков»; (6) поиск входа в укрытие; (7) открытое поле. Результаты и их обсуждение. Было выявлено неодинаковое влияние мемантина на мышей разных линий. У животных линии БМ («большой мозг») эффект мемантина в проведенных тестах не наблюдался: мыши данной линии, получавшие препарат, не отличались по своим поведенческим параметрам от животных, которым вводили физраствор. Напротив, у экспериментальной группы мышей ММ («малый мозг», мемантин), были выявлены отличия как от животных контрольной группы этой же линии, так и от мышей линии БМ, получавших мемантин. У мышей линии ММ, получавших мемантин, наблюдалось ингибирование реакции избегания аверсивной обстановки (ярко освещенного пространства) в темно-светлой камере, сниженная исследовательская активность в Т-лабиринте, сниженная активность в закапывании постороннего предмета (шарика). На основании этого, 83 можно предположить, что введение мемантина привело к проявлению у мышей линии ММ пассивной реакции на аверсивные стимулы – такие как новая обстановка или незнакомый предмет. В когнитивном тесте (поиск входа в укрытие) влияние мемантина на решение задачи мышами всех групп выявлено не было. Выводы. На основании результатов проведенного исследования можно сделать вывод, что мемантин, как препарат, блокирующий NMDA-рецепторы, может оказывать неодинаковое действие на животных с разных весом мозга. Фармакологический скрининг при разработке фармацевтических композиций из лекарственного растительного сырья Панин В.П., Панина М.И., Токарева М.Г., Джавахян М.А. ФГБНУ ВИЛАР, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В терапии психо-неврологических расстройств растительные лекарственные препараты, несмотря на успехи синтетической химии, занимают значительное место и не потеряли своего значения до настоящего времени. Поиск перспективных природных источников для получения лекарственных препаратов седативного действия является актуальным в рамках Национальной программы «Превентивная медицина». Цель. Разработка фармацевтической композиции из лекарственного растительного сырья, обладающей седативной фармакологической активностью. Материалы и методы. Для достижения поставленной цели нами проводился фармакологический скрининг экспериментальных образцов извлечений из композиций, составленных в различных соотношениях из травы Пустырника – herba Leonuri (сем. Lamiacae), травы Зверобоя – herba Hyperici (сем. Hypericacae), травы Чабреца – herba Serpylli (сем. Lamiacae), травы Мелиссы – herba Melissae (сем. Lamiacae). В эксперименте использовались белые нелинейные мыши массой 18-20 г в количестве 122 особей. Животные содержались в стандартных условиях вивария на полноценном пищевом рационе с соблюдением требований «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных 84 целей (Strassburg, 1998)». На первом этапе скрининговое изучение седативного действия извлечений проводилось на модели хлоралгидратного сна. Все исследуемые образцы и препарат сравнения «Фито Ново-Сед» вводили мышам внутрижелудочно через зонд в дозах 10 мг/кг и 100 мг/кг в пересчете на сухой остаток, а контрольные животные получали эквивалентный объем дистиллированной воды. На следующем этапе было проведено сравнительное изучение влияния растительных извлечений (в дозах 10 и 100 мг/кг) на нервную и сердечнососудистую систему лабораторных мышей после курсового 8-дневного внутрижелудочного введения экстрактов. В течение 8 дней опытным животным вводили растительные извлечения и препараты сравнения «Фито Ново-Сед» и «Ново-Пассит», а контрольные животные получали эквивалентный объем дистиллированной воды. Мышей тестировали на установке «вращающийся стержень», определяли уровень спонтанной двигательной активности в актометре, измеряли систолическое и диастолическое артериальное давление, частоту пульса на аппарате «Систола». Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ Statistica 10.0, достоверность различий между группами оценивали по критерию Манна-Уитни. Результаты и их обсуждение. В результате проведенных скрининговых исследований был выбран один экспериментальный образец извлечения из растительной композиции, обладающий наиболее выраженной седативной и гипотензивной активностью, как наиболее перспективный для создания лекарственного растительного препарата. Сравнение результатов фармакокинетического исследования на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии и математического моделирования фармакокинетикинетических параметров ванкомицина Раменская Г.В., Шохин И.Е., Лукина М.В., Андрущишина Т.Б., Чукина М.А., Царев И.Л., Вартанова О.А., Морозова Т.Е. ФГАОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В клинической практике возможной альтернативой фармакокинетическим исследованиям (ФКИ) является методика математического моделирования (ММ) фармакокинетических (ФК) и фармакодинамических (ФД) параметров для расчета доз антибактериальных препаратов (АБП). 85 Цель. Сравнить ФК параметры ванкомицина, полученные в ходе ФКИ на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и методом ММ. Материалы и методы. В ходе проспективного исследование на базе УКБ №1 Первый МГМУ им. И.М. Сеченова включен 61 пациент (возраст 60,59±12,23 лет, мужчин – 47, женщин – 14), Сравнивали клинически значимые ФК параметры: равновесные остаточные концентрации (Сtrough,мкг/мл) и площадь под фармакокинетической кривой за 24 часа (ПФК24, мкг *ч/мл) через 48 часов от начала терапии ванкомицином и на момент завершения АБТ. Статистический анализ проводили с помощью пакета прикладный программ IBM SPSS Statistics 18.0. и R 3.4.0 Результаты и их обсуждение. Фактические значения Ctrough1 через 48 часов от начала терапии достоверно ниже значений полученных при ММ (12,8±5,9 и 18,7±8,4 мкг/мл, соответственно)(р=0,004). При этом на момент завершения АБТ значения Ctrough2 по данным ФКИ и ММ близки к целевым и достоверно не различаются между собой (15,7±9,2 и 14,4±16,7 мкг/мл, р=0,092). ПФК24 по данным ФКИ и ММ достоверно различались лишь на момент завершения АБТ (597,4±180,8 и 484,8±419 мкг *ч/мл) (р=0,011). Выводы. Различия ФК параметров полученных различными методиками свидетельствуют о необходимости проведения ФКИ в клинической практике. Эпидемиологическое исследование случаев инфекции Clostridium difficile тяжелого течения в многопрофильном стационаре Родионов Б.А.1,2, Потешкина Н.Г.1,2, Лысенко М.А.1,2, Журавлева М.В.3, Андреев С.С.1, Илюхина Н.Н.1 ГБУЗ ГКБ №52 ДЗМ, г. Москва (1), ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н.И. Пирогова, г. Москва (2), ФГБОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет), г. Москва (3) E-mail: [email protected] Актуальность. Рост количества случаев актуальной госпитальной инфекции Clostridium difficile (CDI) обусловлен высокой устойчивостью спор во внешней среде, а увеличение риска неблагоприятных исходов – с распространением гипервирулентных штаммов. 86 Цель. Изучение распространенности CDI в отделениях ГКБ №52 и определение факторов риска и неблагоприятного исхода CDI. Материалы и методы. В 2017 году проведено эпидемиологическое исследование по изучению случаев тяжелой CDI, потребовавших перорального назначения ванкомицина. Диагноз CDI основывался на данных анамнеза; клинических, лабораторных и инструментальных (фиброколоноскопия, УЗИ, МСКТ органов брюшной полости) методов исследования. Результаты и их обсуждение. В 2017 г. подтверждѐная или высоковероятная тяжелая CDI, потребовавшая назначения ванкомицина перорально, зарегистрирована у 436 пациентов, что составило 8,2 случая/1000 пролеченных больных (в 2016 г. у 339 – 6,3/1000 пролеченных). Средний возраст пациентов: 63±16,9 лет; распределение по профилям: отделения реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) – 137 (31,4%), нефрологии – 121 (27,8%), терапии – 80 (18,3%), хирургии – 54 (12,4%), онкогематологии – 44 (10,1%) случаев. Основными факторами риска тяжелого течения CDI были применение цефалоспоринов III и/или фторхинолонов в предшествующие 90 дней у 79%, контакт с ОРИТ > 48 часов у 64,6%, применение ингибиторов протонной помпы (ИПП) у 89,7%, коморбидность у 51,7% пациентов. Длительность госпитализации пациентов с тяжелой CDI: 24,3±17,4 койко-дней (в среднем в ГКБ №52 за 2017 г. – 6,0 койко-дней). Смерть от всех причин в группе пациентов с установленным диагнозом CDI тяжелого течения составила 28,9% (126 из 436), наибольшая смертность была у пациентов в ОРИТ – 56,9% (78 из 137). Выводы. Тяжелая CDI приводит к росту летальности и длительности госпитализации пациентов. Основные факторы риска тяжелой CDI: контакт с ОРИТ, коморбидность, применение цефалоспоринов III и фторхинолонов, применение ИПП. С целью своевременной диагностики, дифференциальной диагностики госпитальной диареи и ограничения распространения CDI регулярно проводятся образовательные мероприятия для врачей, разработан и внедрен алгоритм диагностики и лечения CDI; внедрены протоколы по рациональной антимикробной терапии с ограничением применения цефалоспоринов III поколения; разработан протокол персонализированного назначения ИПП. 87 Эпидемиологическое исследование распространенности госпитальных инфекций в многопрофильном стационаре Родионов Б.А.1,2, Потешкина Н.Г.1,2, Лысенко М.А.1,2., Журавлева М.В.3, Андреев С.С.1, Илюхина Н.Н.1 ГБУЗ ГКБ №52 ДЗМ, г. Москва (1), ГБОУ ВО РНИМУ имени Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва (2), ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет), г. Москва (3) E-mail: [email protected] Актуальность. Грамотрицательные бактерии, устойчивые к цефалоспоринам и карбапенемам, являются наиболее частыми возбудителями госпитальных инфекций (ГИ) в стационарах РФ. Цель. Изучение распространенности инфекций грамотрицательными бактериями с множественной (MDR) и экстремальной (XDR) резистентностью в отделениях ГКБ №52, определение наиболее актуальных возбудителей, факторов риска и разработка локальных протоколов антимикробной терапии ГИ. Материалы и методы. В 2017 году проведено эпидемиологическое исследование по изучению случаев инфекций, сопровождавшихся бактериемией грамотрицательными бактериями, резистентными к карбапенемам (XDR) и цефалоспоринам III генерации (MDR). Результаты и их обсуждение. В 2017 г. бактериемия XDR зарегистрирована у 76 пациентов; основные патогены: Kl.pneumoniae 50 (65,8%), A.baumannii 17 (22,4%), Ps.aeruginosa 7 (9,2%); 16 случаев бактериемии у пациентов, переведенных из других стационаров, 60 – пациенты с ГИ, возникшими в отделениях ГКБ №52 в среднем на 18 сутки. Анализ случаев ГИ: в 44,7% (26 пациентов) инфекции респираторного тракта (вентилятор-ассоциированная пневмония (ВАП) у 22 пациентов, длительность ИВЛ 18,0±8,7 суток); в 28,9% (19 пациентов) фебрильная нейтропения, длительностью 13,0±7,7 дней. Развитие инфекции чаще происходило на фоне антимикробной терапии карбапенемами и аминогликозидами (15 пациентов) в среднем на 5,9 день. Пациенты с бактериемией MDR (n=42): 30 – ГИ в среднем на 17 сутки, 12 пациентов – переведены из других 88 стационаров или имели инфекции, связанные с оказанием медицинской помощи; основные патогены в группе ГИ: Kl.pneumoniae 25 (59,5%), E.coli 13 (31%). По локализации инфекции: респираторный тракт – 11 пациентов (5 случаев ВАП, длительность ИВЛ 21±3,0дня), нейтропеническая лихорадка – 9 пациентов, длительностью 8,7±3,0дня. ГИ MDR чаще развивалась на фоне антимикробной терапии цефалоспоринами III – у 13 пациентов, в среднем на 7,8 день. Регистрировалась высокая летальность: в группе XDR умерло 55 пациентов (72,4%), в группе MDR – 20 пациентов (47,6%). Относительный риск смерти пациентов с инфекцией XDR был выше, чем у пациентов из группы MDR (ОР 1,52 95%ДИ 1,082,15, p<0,05). Увеличивалась длительность госпитализации: в группе XDR до 26±13,9 дней, MDR до 21,7±12,8 дней. Выводы. Случаи поздней ГИ связаны с грамотрицательными XDR и MDR патогенами, что приводит к росту летальности и длительности госпитализации. Основные факторы риска: предшествующее применение карбапенемов и цефалоспоринов III поколения более 5 суток, ИВЛ и нейтропения в среднем более 14 дней, перевод из другого стационара. В локальных протоколах антимикробной терапии предусмотрено: ограничено применение цефалоспоринов III, обеспечена доступность препаратов для лечения XDR грамотрицательных ГИ в гематологическом отделении и ОРИТ. Изучение влияния экстракта травы Астрагала лисьего на показатели перекисного окисления липидов в тимусе в условиях иммунного стресса Самотруева М.А., Сергалиева М.У. ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России, г. Астрахань E-mail: [email protected] Актуальность. В последние десятилетия интерес к проблеме стресса вызван непрерывным ростом социальных, экономических, экологических, технологических и других изменений нашей жизни. Одной из неспецифических реакций на различные стрессорные воздействия является развитие окислительного дисбаланса, приводящее к модуляции скорости перекисного окисления 89 биомолекул, что влечет изменение функциональности на клеточном, тканевом и органном уровнях. Для повышения резистентности организма к повреждающим стрессовым воздействиям наряду с традиционными нейропротекторами применяются различные средства коррекции, в частности, адаптогены, представленные средствами преимущественно растительного происхождения. Таковыми являются растения рода Астрагал, в частности Астрагал лисий (Astragalus vulpinus Willd.), произрастающий на территории Астраханской области. Цель. Изучение влияния экстракта травы Астрагала лисьего на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в тимусе в условиях липополисахарид-индуцированного иммунного стресса. Материалы и методы. Эксперимент проведен на белых нелинейных крысах-самцах (6-8 мес.) возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария. Животные были разделены на группы (n=10): 1-я – контрольные животные; 2-я – крысы, подвергнутые воздействию иммунного стресса, который моделировали путем однократного введения липолисахарида (ЛПС), выделенного из микробных клеток Salmonella typhi, в дозе 100 мкг/кг; 3-я – особи, получавшие экстракт Астрагала лисьего внутрижелудочно (14 дней) в дозе 50 мг/кг и подвергавшиеся воздействию иммунного стресса. Результаты были обработаны статистически с помощью программ Microsoft Office Excel 2007, BIOSTAT 2008 Professional 5.8.4.3. с применением t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Результаты и их обсуждение. В условиях ЛПСиндуцированного иммунного стресса в ткани тимуса наблюдалось увеличение уровня ТБК-реактивных продуктов на 59%, скорости спонтанного окисления липидов – на 27% и аскорбатзависимого ПОЛ – на 42% по сравнению контрольными крысами. Введение экстракта травы Астрагала лисьего на фоне иммунного воздействия привело к снижению исходного уровня ТБК-реактивных продуктов более чем на 28%, скорости спонтанного ПОЛ – 26% и аскорбатзависимого ПОЛ – на 33% относительно стрессированных особей. Выводы. Таким образом, установлено, что экстракт травы Астрагала лисьего в условиях ЛПС-индуцированного иммунного стресса проявляет антиоксидантное действие, восстанавливая свободно-радикальные процессы. 90 Влияние Семакса на поведение крыс-самцов в «Суок-тесте» в условиях «социального» стресса Самотруева М.А., Ясенявская А.Л., Мурталиева В.Х. ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России, г. Астрахань E-mail: [email protected] Актуальность. В связи с постоянно усложняющимися условиями жизнедеятельности, остро встает вопрос поиска оптимального средства фармакологической коррекции стрессогенных воздействий. Перспективным средством коррекции стресс-индуцированных нарушений является Семакс, синтетический аналог фрагмента АКТГ4-10, обладающий широким спектром фармакологического действия. С целью изучения особенностей развития стресс-индуцированных нарушений используют экспериментальное моделирование на животных, которое позволяет воспроизводить формы стрессогенных воздействий, встречающихся в повседневной жизни. Цель. Изучение влияния Семакса на поведение крыс-самцов в «Суок-тесте» в условиях «социального» стресса. Материалы и методы. Исследование выполнено на беспородных крысах-самцах (6-8 мес.). «Социальный» стресс у животных моделировали путем формирования агрессивного и субмиссивного типов поведения самцов в условиях сенсорного контакта. Животные были разделены на 3 группы (n=10): 1-я – интактные самцы, определенные по одному в клетках; 2-я – животные, подвергавшиеся воздействию «социального» стресса (20 дней); и 3-я – крысы, подвергавшиеся воздействию «социального» стресса (20 дней) и получавшие интраназально Семакс (0,1% раствор) в дозе 150 мкг/кг/сут. Поведение животных оценивали с помощью «Суок-теста». Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью определения t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Результаты и их обсуждение. В ходе изучения в «Суок-тесте» психоэмоционального состояния животных, подверженных воздействию «социального» стресса, наблюдалось статистически значимое снижение времени пребывания в светлой половине теста, числа «исследовательских» заглядываний вниз, направленных движений головой, а также числа посещенных сегментов, как у 91 агрессоров, так и у жертв по сравнению с интактными животными. Изменения в поведении животных под влиянием Семакса в условиях стресса характеризовались значимым увеличением показателей двигательной и исследовательской активности в обеих половинах «Суок-теста»: возросло число посещенных сегментов, число переходов через центр, исследовательских «заглядываний» вниз, направленных движений головой, а также увеличилось время, проведенное в аверсивном отсеке в обеих опытных группах. Наряду с перечисленными изменениями выше, у животных с агрессивным и субмиссивным типами поведения отмечалось снижение числа актов кратковременного груминга и количества фекальных болюсов. Выводы. Результаты проведѐнного эксперимента свидетельствуют о способности Семакса оказывать психомодулирующее действие в условиях «социального» стресса, устраняя депрессивноподобные нарушения в поведении животных. Исследование антиагрегантных свойств нового 5-НТ2А-антагониста Семенова Ю.В., Морковина Я.В., Салихов Д.А. ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минзрава России, г. Волгоград E-mail: [email protected] Актуальность. Согласно одной из теорий патогенеза мигрени существует взаимосвязь между функциональной активностью тромбоцитов, и возможностью серотонин-опосредованной активации интактных тромбоцитов через 5-НТ2А – звено. В связи с этим, при проведении расширенных доклинических исследований (РДИ) кандидатов в противомигренозные лекарственные препараты целесообразным является изучение их антиагрегантной активности. Цель. Стартовое изучение антиагрегантной активности in vitro нового 5-НТ2А-антагониста. Материалы и методы. Агрегация тромбоцитов изучалась по методу G. Born в модификации З.А. Габбасова на обогащенной тромбоцитами плазме кроликов-самцов. В качестве индукторов использовались серотонин (Sigma, США) (10 мкМ), АДФ (Sigma, США) (5 мкМ) и адреналин (Sigma, США) (1 мкМ). Препаратами 92 сравнения для изучаемого 5-НТ2А-антагониста соединения Ib являлись кислота ацетилсалициловая (Sigma, США) (АСК) и ципрогептадин (Sigma, США) (0,1-10 мкМ). Результаты и их обсуждение. В условиях серотонининдуцированной агрегации тромбоцитов для соединения Ib была зафиксирована значимая антиагрегантная активность, достоверно превосходящая показатели препаратов сравнения во всем исследуемом диапазоне. При моделировании адреналининдуцированной агрегации тромбоцитов – в концентрации 10 мкМ соединение Ib проявляет достоверно большую активность (1,47 раза), чем ципрогептадин, уступая при этом группе кислоты ацетилсалициловой. На модели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов, в максимальной из исследуемых концентраций 10 мкМ, выявлено статистически значимое превосходство ингибирующей активности соединения Ib (в 2,0 раза) над показателями группы ципрогептадина и незначительное – над группой АСК. Выводы. Для соединения Ib показана значимая антиагрегантная активность в условиях серотонин-индуцированной агрегации тромбоцитов в диапазоне 0,1-10 мкМ, статистически значимо превосходящая активность ципрогептадина и кислоты ацетилсалициловой. В условиях АДФ- и адреналин-индуцированной агрегации, антиагрегантная активность соединения Ib проявляется только в концентрации 10 мкМ. Изменения метаболического профиля шванном и менингиом, вызываемые утратой гена NF2 Степанова Д.С., Браун Л.А. ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Нейрофиброматоз 2 типа (НФП) – тяжелое заболевание, наследуемое по аутосомно-доминантному типу и характеризующееся постоянным образованием опухолей в ЦНС и ПНС. Молекулярный патогенез данного заболевания изучен слабо, а фармакотерапия до сих пор не предложена. В настоящее время 93 единственным предлагаемым пациентам лечением остаѐтся хирургическое удаление опухолей, что не может не сказываться на качестве жизни больных НФII. Поиском терапии данного заболевания в России на данный момент занимается только одна лаборатория – кафедра молекулярной фармакологии и радиобиологии им. акад. Сергеева МБФ. Цель. Исследование метаболических особенностей опухолей с целью поиска мишеней для таргетной терапии нейрофиброматоза II типа. Материалы и методы. ВЭЖХ-МС/МС, ГХ-МС/МС, иммуноблоттинг, полимеразная цепная реакция. Результаты и их обсуждение. Выполнено метаболическое профилирование Nf2-отрицательных и нормальных клеток, в Nf2отрицательных клетках выявлено значительное повышение уровня жирных кислот и метаболитов цикла трикарбоновых кислот, а также метаболитов глютамина, что свидетельствует о повышении уровня энергетического метаболизма. Показана избирательность цитотоксического действия ингибиторов синтазы жирных кислот (церуленина, GSK2194069) на Nf2-отрицательные клетки. При комбинировании церуленина и GSK2194069 с ингибитором киназы пируватдегидрогеназы дихлорацетата натрия EC50 ингибиторов СЖК в отношении опухолевых клеток снижалась более, чем в 2 раза. Выводы. Для Nf2-отрицательных клеток характерно повышение уровня энергетического метаболизма. Nf2-отрицательные клетки чувствительны к цитотоксическому действию ингибиторов синтазы жирных кислот в комбинации с модулятором метаболического фермента киназы пируватдегидрогеназы. Выяснение механизмов цитотоксичности статинов в отношении NF2-отрицательных опухолей Степанова Д.С., Титерина Е.К. ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Нейрофиброматоз II типа – тяжѐлое наследственное заболевание, которое проявляется в виде доброкачественных 94 опухолей центральной нервной системы. На сегодняшний день доступны только его лучевая или хирургическая терапия, медикаментозного лечения не существует. Это связано со слабой изученностью молекулярных основ канцерогенеза. Выяснение этих механизмов может помочь в разработке лекарственной терапии данного заболевания. Цель. Выяснение механизмов цитотоксичности статинов в отношении клеток опухолей, возникающих при нейрофиброматозе II типа. Материалы и методы. Использованы линии клеток: MEF Nf2flox/flox, SC4-9 и RT4. Клетки выращивали в модифицированной среде DMEM при 370С, 5% СО2. Получение фибробластов, нокаутных по гену Nf2. Иммортализованные клетки MEF Nf2flox/flox трансфецировали плазмидным вектором (ПВ) pMSCV-Cre-GFP. Контрольные клетки MEF Nf2flox/flox трансфецировали ПВ pMSCVGFP, несущим только GFP. Через 48 часов на цитофлуориметре отбирали флуоресцентные клетки. Делеция гена Nf2 подтверждалась геномным типированием. Активность малой ГТФазы Rac1 оценивалась методом резонансного переноса энергии флуоресценции. Результаты и их обсуждение. Механизм селективной токсичности статинов связан с нарушением геранил – геранилирования малых ГТФазы, а точнее – Rac1. При нарушении геранилирования (при ингибировании геранилтрансфераз селективными ингибиторами) наблюдалось усиление эффекта статинов, при добавлении геранил-гераниола наоборот, их противоопухолевая активность снижалась. С помощью метода резонансного переноса энергии было показано, что тпанслоцированная в ядро малая ГТФ-аза Rac1 связывается там с субстратом – белком Pix, то есть проявляет активность. Патологическое связывание ГТФазы с субстратом вызывает нарушения функционирования цитоскелета. Выводы. Таким образом, механизм действия статинов заключается в нарушении геранилирования Rac1 и еѐ патологической транслокации в ядро с последующим проявлением активности, что приводит к гибели опухолевых клеток. 95 Поиск лекарственных средств для лечения нейрофиброматоза II типа Степанова Д.С., Тюльганова Д.А. ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н.И. Пирогова Минздрава России, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность: Нейрофиброматоз II типа – тяжѐлое заболевание, наследуемое по аутосомно-доминантному типу и проявляющееся образованием множественных доброкачественных опухолей в ЦНС и ПНС, ухудшающих качество и продолжительность жизни пациентов. Заболевание связано с возникновением инактивирующих мутаций в гене NF, кодируещем белок мерлин, однако молекулярный патогенез опухолевой трансформации до сих пор не изучен, а медикаментозная терапия не разработана. Цель. Поиск лекарств, обладающих селективной цитотоксичностью против опухолей, ассоциированных с нейрофиброматозом II типа. Материалы и методы: Использованные линии клеток: MEF Nf2flox/flox, SC4-9 и RT4). Клетки вырашивали в модифицированной среде DMEM при 370С, 5% СО2. Получение фибробластов, нокаутных по гену Nf2. Иммортализованные клетки MEF Nf2flox/flox трансфецировали плазмидным вектором (ПВ) pMSCV-Cre-GFP. Контрольные клетки MEF Nf2flox/flox трансфецировали ПВ pMSCVGFP, несущим только GFP. Через 48 часов на цитофлуориметре отбирали флуоресцентные клетки. Делеция гена Nf2 подтверждалась геномным типированием. Скрининг коллекции низкомолекулярных биоактивных соединений. Скрининг был осуществлѐн на двух клеточных линиях: MEF Nf2-/- и MEF Nf2flox/flox. В качестве отрицательного контроля взят ДМСО. В качестве положительного контроля – стауроспорин. Действие веществ оценивали MTT-тестом. Веществами, показавшими положительный результат, считали такие, для которых MEF Nf2-//MEF Nf2flox/flox было < 0,8, расценивая разницу в 20% как умеренные различия, a ожидаемая доля ложных отклонений гипотез по методу Бенджамини-Хохберга < 20%. Результаты и их обсуждение. Проведен ненаправленный фармакологический скрининг 485 биоактивных соединений на MEF 96 Nf2-/- и MEF Nf2flox/flox, выяснено, что ловастатин и другие статины обладают выраженным направленным цитотоксическим действием в их отношении. Установлено, что механизм цитотоксичности связан с истощением внутриклеточного пула геранил-гераниола и нарушением геранилирования малой ГТФазы Rac1. При этом Rac1 отсоединяется от клеточной мембраны и транслоцируется в ядро. Моделирование дефицита внимания у мышей: сравнение эффектов атомоксетина и пантогама Сухорукова Н.А., Салимов Р.М., Ковалѐв Г.И. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В лаборатории радиоизотопных методов исследований ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова разработан тест «закрытый обогащенный крестообразный лабиринт» (ЗОКЛ) для изучения состояния дефицита внимания (СДВ) у аутбредных мышей. Цель. Изучение поведенческих эффектов Пантогама (100 мг/кг/день) и препарата сравнения Атомоксетина (3 мг/кг/день) при их субхроническом внутрибрюшинном введении на мышах аутбредной линии CD-1 в новой экспериментальной модели синдрома дефицита внимания без гиперактивности. Материалы и методы. В экспериментах использовались самцы аутбредной линии мышей CD-1 (категория SPF, вес 25-30, возраст 1 месяц). Лабиринт состоял из плексигласовых закрытых пустых отсеков. Мышь помещали в центральный отсек лабиринта (№5), и с помощью программы Behavior регистрировали последовательность и продолжительность ее переходов из одного рукава в другой. В качестве объектов для удерживания внимания использовали 2 стеклянные колбы с шариками из алюминиевой фольги, помещенные в противоположные рукава лабиринта (№1 и №3 или №2 и №4). Во время эксперимента расположение объектов для каждого животного изменяли в случайном порядке. Статистическую обработку результатов экспериментов проводили с помощью пакета статистических программ Statistica 10.0. 97 Результаты и их обсуждение. Выявлены два фенотипа грызунов, различающихся по величинам индекса внимания к новым объектам (ED-ratio, отношение времени, проведенного животными в отсеках с объектами, ко времени в пустых отсеках, в %). Особи подтипа ED-low характеризовались дефицитом внимания к объектам по сравнению с животными подтипа ED-high. При субхроническом введении пантогама и атомоксетина оба препарата проявили избирательность действия в отношении предложенного индекса EDratio в популяции мышей с исходно низким значением показателя внимания. В популяции ED-High статистически значимых отличий от контрольной группы не обнаружено. Выводы. Избирательная направленность действия атомоксетина и пантогама на мышей с исходным дефицитом внимания допускает возможность применения теста ЗОКЛ в скрининге препаратов для коррекции СДВ. Дипептидный миметик мозгового нейротрофического фактора ГСБ-106 проявляет антиангедонические свойства в модели острого социального стресса у мышей Таллерова А.В., Поварнина П.Ю., Гудашева Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Развитие ангедонии (снижение способности испытывать удовольствие) является ведущим симптомом выраженного стресса и депрессии. Данный симптом исследуется в экспериментальных стрессовых моделях депрессии in vivo и детектируется у грызунов как снижение потребления сладких растворов. Согласно нейтротрофической теории развитие симптомов депрессивного состояния связанно с нарушением активации BDNFTrkB сигнальных путей, которые вовлечены в сопряжѐнные механизмы регуляции обмена веществ и нейрональной пластичности. В НИИ фармакологии им. В.В. Закусова разрабатывается в качестве антидепрессанта дипептид ГСБ-106, миметик бета-изгиба 4-й петли BDNF, представляющий собой гексаметилендиамид бис(Nмоносукцинил-L-серил-L-лизина) (Середенин С.Б., Гудашева Т.А., 98 Патент РФ №2410392/16.02.2009). ГСБ-106 активирует TrkB, MAPK/ERK и PI3K/AKT (Гудашева Т.А. и др. ДАН. 2013). В тестах на грызунах установлена антидепрессивная активность ГСБ-106, как при внутрибрюшинном введении в дозах 0,1-1,0 мг/кг (Середенин С.Б. и др. Acta Naturae. 2013) так и при пероральном введении (Таллерова А.В. и др. Хим.-фарм. журнал. 2018]. Цель. Исследование антиангедонических свойств ЛФ дипептидного миметика мозгового нейротрофического фактора ГСБ106 при пероральном введении в модели 3-х дневного социального стресса у самцов-мышей С57Bl/6. Материалы и методы. Моделирование 3-х дневного социального стресса у мышей-самцов С57Bl/6 проводили согласно международным протоколам (Golden S.A., et al. Nat. Prot. 2011). Cамцам-жертвам предоставляли стресс ежедневно 3 дня. ЛФ ГСБ-106 (таблетки) растворяли в 1% растворе крахмала и вводили мышам p.o. в дозе 0,1 мг/кг ежедневно, однократно, в течение 3-х дней после предоставления стресса. Влияние 3-х дневного стресса и ГСБ-106 на гедоническое поведение у мышей самцов-жертв оценивали в тесте предпочтения 1% раствора сахара с двумя бутылками. Потребление воды и раствора сахара оценивали путем взвешивания бутылки. Предпочтение раствора сахара вычисляли по формуле: (Vсахара/(Vсахара + Vводы)×100%). Результаты и их обсуждение. Установлено, что у мышей, подвергнутых 3х-дневному стрессу достоверно снижается предпочтение сахара на 26,6% (контроль: 89,5 ± 7,3% против стресса: 62,9±5,11). Введение ГСБ-106 в значительной степени предотвращало развитие гедонии у мышей при стрессе, потребление раствора сахара не отличалось от контрольной группы (стресс + ГСБ-106: 87,5±6,14%). Выводы. Таким образом, потенциальный антидепрессант, дипептид ГСБ-106 обладает выраженными антиангедоническими свойствами в модели острого социального стресса у мышей. 99 Синтез аналогов димерного дипептидного миметика фактора роста нервов ГК-2 и изучение их нейропротекторной активности in vitro Тарасюк А.В., Сазонова Н.М., Антипова Т.А., Гудашева Т.А. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. В НИИ фармакологии им. В.В. Закусова на основе структуры β-изгиба 4-й петли NGF был создан дипептидный миметик (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-L-глутамил-Lлизина) (ГК-2). В экспериментах in vitro ГК-2 в наномолярных концентрациях проявлял нейропротекторную активность, не обладая, в отличие от NGF, дифференцирующей активностью (Гудашева Т.А. и др. ДАН. 2010. Т. 434, №4. С. 549-552). ГК-2, как и NGF, селективно активирует TrkA-рецептор и PI3K/Akt пострецепторный сигнальный путь, вовлеченный в реализацию нейропротекторных эффектов (Гудашева Т.А. и др. ДАН. 2014. Т. 456, №2. С. 231-235). Цель. Для изучения влияния длины димеризующего спейсера в структуре ГК-2 на проявление нейропротекторной активности, в настоящей работе был синтезирован ряд его аналогов с разной длиной спейсера и изучена их нейропротекторная активность in vitro. Материалы и методы. Аналоги ГК-2 получали методом активированных N-оксисукцинимидных эфиров с использованием Boc/Z (Bzl) – стратегии защитных групп. Наращивание пептидной цепи вели с N-конца. Нейропротекторная активность была изучена in vitro на культуре клеток гиппокампа мыши линии HT-22 в условиях окислительного стресса, вызванного H2O2. Результаты и их обсуждение. Были синтезированы пять аналогов ГК-2, в которых дипептидный фрагмент Glu-Lys димеризован с помощью спейсеров, содержащих 3, 4, 5, 6 и 18 сигма связей между соответствующими амидными фрагментами. Аналоги с укороченным по сравнению с ГК-2 спейсером, содержащие 3-6 сигма связей были димеризованы с помощью олигометилендиаминов, удлиненный аналог был получен с помощью триметилендиамида бис-(6аминогексановой кислоты). Общий выход пептидов составил 16-28%. В экспериментах in vitro было показано, что как при увеличении (18 сигма-связей), так и при уменьшении (6 сигма-связей) спейсера 100 наблюдается увеличение активной концентрации по сравнению с ГК2 (от 10-9 М до 10-5 М и 10-8 М соответственно). При уменьшении до 53 сигма-связей активность вообще пропадает. Это может быть связано с тем, что во взаимодействии с TrkA-рецептором участвуют две молекулы миметика, связанные солеобразованием или водородными связями, но из-за недостаточного расстояния между способными взаимодействовать с TrkA-рецептором дипептидными участками, активации рецептора не происходит. Выводы. Таким образом, гексаметилендиаминовый спейсер, содержащийся в структуре ГК-2 является наиболее оптимальным и способствует проявлению миметиком максимальной нейропротекторной активности. Реактивные изменения нейронов орексинергического и дофаминергического ядер ствола мозга в механизме алкогольной зависимости, формируемой в перинатальном периоде Федоров А.В., Маградзе Р.Н., Раптанова В.А., Попковский Н.А., Дробленков А.В. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Актуальность. Устойчивый дефицит дофамина, вырабатываемого в дофаминергических ядрах среднего мозга и гиперпродукция олигопептидов семейства орексинов в дорсальной перифорникальной области каудального гипоталамуса, происходящие в результате морфофункционального взаимодействия нейронов соответствующих ядер ствола мозга, предрасполагают к развитию алкогольной зависимости. Цель. Выявление малоизученных реактивных изменений нейронов перифорникального орексинергического (ПФ) и паранигральнгого дофаминергического (ПН) ядер ствола мозга, а также изменения уровня секреции орексина А (основной тип орексина) при алкогольной зависимости, формируемой в перинатальном периоде. Материалы и методы. У самцов крыс (n=5) в возрасте 60 дней после алкоголизации в перинатальном периоде и у интактных самцов (n=5) гистологически исследовали орексинергическое и дофаминер101 гическое ядра ствола мозга. Полупринудительную алкоголизацию самок проводили, начиная с 1-го дня беременности до 17-го дня постнатального развития. Использованы методики световой микроскопии и количественной морфометрии (подсчет числа неизмененных/малоизмененных и теневидных нейронов в 0,01 мм2 площади этих ядер, вычисление площади тел малоизмененных нейронов) при помощи программы Imagescope (Россия) в гистологических срезах, окрашенных по Нисслю. Рассчитывали среднее арифметическое, среднее квадратическое отклонение и стандартную ошибку среднего, различия определяли по t-критерию Стьюдента при Р<0,05. Об уровне выработки орексина А судили на основании визуальной оценки числа гранул протеина в цитоплазме нейронов после их иммуноцитохимического выявления в ПФ гипоталамическом ядре. Для этого использовали поликлональные кроличьи антитела к орексину А (Китай) для крыс в концентрации 200 µg/ml, набор “VECTASTAIN ABC”, CША и хромоген DAB). Результаты и их обсуждение. Морфологическим выражением алкогольной зависимости, формируемой в перинатальном периоде, являются уменьшение размеров и гибель значительной части нейронов дофаминергического и орексинергического ядер (Р<0,05). Повреждение нейронов в орексинергическом ядре, индуцированное этанолом, выражено в меньшей степени, чем в дофаминергическом ядре, и сочетается с увеличением выработки орексина А. Альтеративные изменения нейронов обоих исследованных ядер, индуцированные этанолом, сопровождаются усилением компенсаторного влияния клеток макроголии на жизнеспособные нейроны. Арил-гидрокарбоновый рецептор Т-лимфоцитов – потенциальная мишень для разработки иммуноммодуляторов мукозальной иммунной системы кишечника Хомякова Т.И.1, Хомяков Ю.Н.2 ФГБНУ НИИ морфологии человека, г. Москва (1) ФКУЗ Противочумный центр Роспотребнадзора, г. Москва (2) E-mail: [email protected] Применение пробиотиков в качестве иммуномодуляторов имеет ряд недостатков, и не всегда эффективно, поскольку время 102 взаимодействия пробиотических бактерий ограничено скоростью их пассажа через кишечник. Одним из механизмов иммуномодулирующего действия лактобактерий является стимулирующее действие их метаболитов на рецепторы клеток-компонентов мукозальной иммунной защиты с последующей индукцией системного ответа организма. Дисбиоз, как правило, связан со снижением доли лактобацилл в микробном спектре. При ВИЧ-инфицировании происходят изменения микробиома, характеризующиеся снижением видового разнообразия, преимущественно касающиеся типов Bacteroidetes, Firmicutes, и Proteobacteria и увеличением доли возбудителей оппортунистических инфекций. У ВИЧ-больных в острой фазе в крови обнаруживаются маркеры транслокации и воспаления жкт с одновременным снижением уровня полезных бактериальных родов, Bacteroidetes, Lactobacillus , Bifidobacteria. По сравнению со здоровыми людьми у ВИЧ-инфицированных снижен уровень интраэпителиальных Тлимфоцитов, одновременно несущих маркеры CD4 и CD8 (doublepositive intraepithelial Т lymphocytes , DP IELs) в ЖКТ мышей, причем уровень DP IELs коррелирует с присутствием Lactobacillus reuteri. Обнаружено, что дифференцировка интраэпителиальных CD4+ T до DP IELs происходит при действии производных индола, которые активируют арил-гидрокарбоновый рецептор. Указанные производные индола являются побочным продуктом ферментативного гидролиза триптофана бактерией L. Reuteri. Вместе с тем, производные индола при высоких концентрациях являются токсичными для человека, в связи с чем необходима разработка нетоксичных соединений, избирательно связывающихся с арил-гидрокарбоновым рецептором Т-лимфоцитов собственной пластинки кишки. Помимо действия на лимфоциты, данный препарат может иметь и другие эффекты, поскольку арилгидрокарбоновый рецептор (AHR) является лигандактивированным транскрипционным фактором, который опосредует индукцию CYP1 семейства цитохрома Р450 и ряда ферментов детоксикации, а также участвует в регуляции сигнальных факторов роста, клеточного цикла пролиферации, дифференциация и апоптоза. 103 Соединения на основе нитротиадиазолопиримидина, способные замедлять процесс неферментативного гликирования Хохлачева Е.А., Соколова Е.В., Шамшина Д.Д., Батычѐк А.Е. ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград E-mail: [email protected] Актуальность. Сахарный диабет (СД) – актуальная медикосоциальная проблема, что обосновано широтой распространения и ранней инвалидизацией из-за развития осложнений заболевания. Общим механизмом развития осложнений СД является гликирование белков, влекущее накопление конечных продуктов гликирования (КПГ), которое интенсивно протекает на фоне гипергликемии и повышенного содержания переходнях металлов (Cu 2+ и др.) в средах организма. Цель. Изучить влияние производных нитротиадиазолопиримидина, соединений 1ntp, 2ntp, 3ntp, 4ntp и 5ntp на способность тормозить гликирование и связывать катионы меди (II). Материалы и методы. Вещества синтезированы и предоставлены Химико-технологическим институтом УрФУ при участии Русинова В.Л. (выражаем искреннюю признательность). При исследовании антигликирующей активности использован спектрофлуориметрический метод детекции КПГ (λex=370 нм, λem=440 нм, прибор Infinite M200 PRO, Tecan, Австрия) в среде, содержащей соединение (1 мМ) или растворитель диметилсульфоксид (ДМСО), 0,5 М глюкозы и 1 мг/кг бычьего сывороточного альбумина, инкубированные 24 часа. Вещество сравнении – аминогуанидин. Для оценки медь (II) связывающей активности использован метод спектрофотометрической детекции (λ=265 нм, прибор APEL PD-303 UV) при аутоокислении аскорбиновой кислоты (0,1 мМ) в среде веществом (40 мкМ) или ДМСО, индуцированном раствором CuSO4 (95 мкМ). Вещество сравнения – альфа-липоевая кислота. Результаты и их обсуждение. Установлено, что для веществ 1ntp, 2ntp, 3ntp, 4ntp, 5ntp и аминогуанидина антигликирующая активность составила 30,54±6,25*, 40,56±4,45*, 29,60±3,62*, 78,99±1,18*, 76,56±2,72*, 12,26±3,45 и 57,83±0,58* (*-статистическая значимость, ANOVA, пост-тест Туке, р≤0,05). Для лидеров по активности – соединений 4 и 5 IC50 составили 134,4 и 166,8 мкМ соответственно. В 104 отношении медь (II) связывающей таковая установлена только для вещества 3ntp. Количественно процент активности составил 49,40±0,85 (ANOVA, пост-тест Туке, р≤0,05). Величина IC50 составила 29,4 мкМ против 68.4 мкМ для липоевой кислоты. Выводы. Производные нитротиадиазолопиримидина 1ntp, 2ntp, 3ntp, 4ntp и 5ntp являются перспективной основой для создания препаратов, способных подавлять процесс гликирования и связывать катионы меди (II), что определяет их антидиабетический потенциал. Вещества 4ntp и 5ntp оказались активнее аминогуанидина, а вещество 3ntp – активнее липоевой кислоты. Ингибирование гликопротеина-P в гематоэнцефалическом барьере как метод повышения эффективности фармакотерапии острого нарушения мозгового кровообращения Черных И.В., Щулькин А.В., Гацанога М.В., Мыльников П.Ю., Есенина А.С., Градинарь М.М., Якушева Е.Н. ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России, г. Рязань E-mail: [email protected] Актуальность. Повышенная функциональная активность белкатранспортера гликопротеина-P (Pgp) в гематоэнцефалическом барьере − это одна из возможных причин неэффективности нейропротекторной фармакотерапии при ишемическом инсульте. Цель. Оценить перспективность ингибирования функциональной активности Pgp для повышения эффективности фармакотерапии острого нарушения мозгового кровообращения. Материалы и методы. Работа выполнена на 33 крысах-самцах вистар массой 200-280 г. Животные были разделены на 4 серии (n=7 в каждой); 1-й серии моделировали окклюзию-реперфузию средней мозговой артерии; 2-й − воспроизводили аналогичную патологию с внутривенным введением нимодипина (0,4 мг/кг) в момент реперфузии, 3-й − в момент реперфузии внутривенно вводили омепразол (17,6 мг/кг), а 4-й − комбинацию нимодипина и омепразола. Дополнительно 5 животным выполняли «ложную» операцию окклюзии-реперфузии средней мозговой артерии. Окклюзия средней мозговой артерии выполнялась эндоваскулярно на протяжении 60 минут с 105 последующей 24-часовой реканализацией. Нейропротекторную активность вводимых веществ оценивали по снижению площади очага некроза путем окраски срезов головного мозга трифенилтетразолием по стандартной методике. Результаты и их обсуждение. 60-минутная окклюзия средней мозговой артерии с последующей реперфузией в течение 24 часов привела к формированию очага некроза в среднем 32,2% головного мозга контрольных крыс. Изолированное введение животным нимодипина в момент реперфузии приводило к достоверному снижению размера некротического очага на 27,7% по сравнению с группой контроля патологии (p=0,0019). Изолированное введение ингибитора Pgp – омепразола не вызвало изменения площади очага некроза (p=0,9141). Комбинированное введение крысам нимодипина и омепразола вызвало снижение площади некроза по сравнению с контролем на 28,8% (p=0,0089), а по сравнению с группой омепразола − на 33,2% (p=0,0027), однако по сравнению с серией изолированного введение нимодипина статистически значимых различий выявлено не было (p=0,9509). Таким образом, комбинирование омепразола и нимодипина не усиливает нейропротекторный потенциал последнего, а ингибирование Pgp нельзя рассматривать в качестве перспективной цели для повышения эффективности фармакотерапии острого нарушения мозгового кровообращения. Выводы. Комбинация нейропротектора-субстрата Pgp и ингибитора данного транспортера не приводит к сокращению зоны некроза головного мозга крыс по сравнению с изолированным введением субстрата. Изучение доклинической фармакокинетики и биотрансформации антидепрессанта ГСБ-106 Шевченко Р.В., Бочков П.О., Грибакина О.Г. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва Е-mail: [email protected] Актуальность. Депрессия и связанные с ней расстройства психики в последние годы затронули порядка 350 миллионов 106 человек. Клинические и экспериментальные данные свидетельствуют о вовлечении в патогенез депрессии нейротрофинов, в частности BDNF (brain-derived neurotrophic factor). В ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова на основе структуры четвертой петли BDNF сконструирован и синтезирован низкомолекулярный миметик ГСБ-106, представляющий собой замещенный димерный дипептид, гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-L-серил-Lлизина), обладающий антидепрессивной активностью у мышей линии Balb/c при однократном введении в тесте вынужденного плавания по Порсолту. Цель. Изучение экспериментальной фармакокинетики (ФК) соединения ГСБ-106 после его внутривенного (в/в) и перорального (п/о) введения. Материалы и методы. ФК ГСБ-106 изучали на белых беспородных крысах-самцах (масса тела 200±30 г). Фармацевтическую субстанцию вводили животным п/о и в/в в виде водного раствора в дозе 150 мк/кг. Содержание ГСБ-106 определяли в плазме крови, гомогенатах печени, селезенки, скелетной мышцы, почек, мозга. Для определения ГСБ-106 и его метаболитов в плазме крови и органах использовали метод ВЭЖХ с масс-спектрометрией. Для интерпретации данных использовали режим измерения общего ионного тока (TIC), где регистрировали молекулярный ион исходного соединения с m/z=374. Результаты и их обсуждение. После однократного п/о введения исследуемое вещество в организме крыс определяется на протяжении 4 ч. Период полуэлиминации составил 0,65 ч. Тканевая доступность ГСБ106 в хорошо васкуляризированных органах (печень, почки, селезенка) оказалась выше, чем в скелетной мускулатуре крыс. В органе-мишени – мозге – данный показатель составил 0,05. На основании массспектрометрических исследований в плазме крови крыс помимо исходного соединения (m/z=374) обнаружены молекулярные ионы с m/z=395 и 402, что, вероятно, соответствует алкилированным метаболитам. После однократного п/о введения ГСБ-106 крысам в дозе 150,0 мг/кг в суточной моче исходного соединения не обнаружено, а в кале обнаружено 0,0001% ГСБ-106 от введенной дозы. Выводы. Период полуэлиминации составил 0,65 часа, поэтому ГСБ-106 можно отнести к группе «короткоживущих» лекарственных веществ. Миметик распределяется по органам и тканям неравномерно. Абсолютная биодоступность соединения у крыс 107 составила 5,6%. ФК ГСБ-106 линейна в диапазоне доз 50,0-150,0 мг/кг. Помимо исходного соединения ГСБ-106 в плазме крови крыс обнаружены молекулярные ионы, соответствующие алкилированным метаболитам. Окончательная идентификация выявленных производных ГСБ-106 может быть проведена только после получения массспектрометрических характеристик стандартов, полученных встречным синтезом. Синтез мономерного дипептидного миметика мозгового нейротрофического фактора ГСБ-104 и изучение его антидепрессивной активности Шульга Н.В., Лубин А.А., Тарасюк А.В. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва E-mail: [email protected] Актуальность. Существуют хорошо документированные доказательства участия нейротрофина BDNF в патогенезе депрессии (Adlam J., Zaman R. Psychiat. Danub. 2013). Ранее, в нашем Институте на основе структуры β-изгиба 4-й петли BDNF был создан дипептидный миметик (гексаметилендиамид бис-(N-моносукцинил-Lсерил-L-лизина) (ГСБ-106). В экспериментах in vitro ГСБ-106 в наномолярных концентрациях проявлял нейропротекторную активность (Гудашева Т.А. и др. Биоорг. хим. 2012), а в ряде in vivo тестов на грызунах в дозах 0,1-1 мг/мг обладал выраженной антидепрессивной активностью (Середенин С.Б. и др. Acta Naturae. 2013; Таллерова А.В. и др. Хим-фарм. журнал. 2018). Цель. Синтез мономерного дипептидного миметика 4-й петли BDNF ГСБ-104 (амид N-моносукцинил-L-серил-L-лизина) и изучение его антидепрессивной активности in vivo. Материалы и методы. ГСБ-104 получали методом активированных N-оксисукцинимидных и пентафторфениловых эфиров с использованием Z/Boc – стратегии защитных групп. Наращивание пептидной цепи вели с С-конца. Антидепрессивную активность ГСБ-104 оценивали в тесте вынужденного плавания по Порсолту на 50 мышах самцах линии Balb/с весом 17-21 г в дозах 0,1; 0,5; 1,0 и 5,0 мг/кг при внутрибрюшинном введении. 108 Результаты и их обсуждение. Синтез ГСБ-104 состоял из 9 стадий. Амид защищенного лизина получали из Z-Lys(Boc)-OSu аммонолизом в ДМФА. Удаление Z-защитных групп проводили каталитическим гидрогенолизом в присутствии 10% Pd/C (выход более 95%), полученный амид далее конденсировали с Z-Ser-OPfp в ДМФА (выход 80%). Полученный амид дипептида Z-деблокировали и ацилировали янтарным ангидридом. Защищенный амид дипептида Boc-деблокировали ацидолизом трифторуксусной кислотой. Общий выход ГСБ-104 после очистки на ОФ ВЭЖХ составил 43%. Все промежуточные и конечные соединения охарактеризованы 1Н-ЯМР-спектрами, хроматографической подвижностью в тонком слое силикагеля, температурой плавления и углами удельного оптического вращения. Установлено, что ГСБ-104 во всех дозах не снижает время иммобильности у мышей в тесте вынужденного плавания по Порсолту, что свидетельствует об отсутствии у него, в отличие от димерного ГСБ-106, антидепрессивной активности. Выводы. Таким образом, установлено, что для проявления антидепрессивного эффекта необходима димерная структура миметика BDNF. ГСБ-214, низкомолекулярный миметик BDNF, обладает антидепрессивными свойствами на модели диабета Ягубова С.С. ФГБНУ НИИ фармакологии имени В.В. Закусова, г. Москва Е-mail: [email protected] Актуальность. Хорошо известна коморбидность сахарного диабета с депрессиями, важную роль в патогенезе этих заболеваний играет дефицит мозгового нейротрофического фактора (BDNF). Нативная молекула BDNF непригодна для использования в лечении диабета из-за неудовлетворительных фармакокинетических свойств и развития побочных эффектов. В НИИ фармакологии имени В.В. Закусова на основе структуры β-изгиба 1-й петли BDNF синтезирован его димерный дипептидный миметик – ГСБ-214 (Гудашева Т.А. и др. Биорг. хим. 2012). Ранее нами выявлена антигипергликемическая активность этого соединения (Островская Р.У. и др., 2017). 109 Цель. Изучение влияния ГСБ-214 на выраженность депрессивноподобного состояния на модели диабета 2-го типа, вызванного стрептозотоцином (СТЗ). Материалы и методы. Эксперименты выполнены на 36 самцах мышей C57Bl/6, разделенных на 3 группы: пассивный контроль (дистиллированная вода (ДВ)); активный контроль (ДВ+СТЗ 100 мг/кг+ДВ), опытная группа (ГСБ-214+СТЗ 100 мг/кг+ГСБ-214). ГСБ214 вводили внутрибрюшинно (в/б) в дозе 0,5 мг/кг в течение 2х недель, на 15-й день вводили СТЗ, потом продолжали вводить ГСБ214 в течение 14 дней. Оценку депрессивно-подобного состояния проводили в тесте Порсолта (оригинальная (Porsolt R.D. et al., 1978) и модифицированная методики (Perona M.T. et al., 2008) на 61-е и 62-е сутки после введения СТЗ (45-е и 46-е сутки после прекращения введения ГСБ-214). Статистическую обработку результатов проводили с помощью критерия Манна-Уитни, результаты считали достоверными при p≤0,05. Результаты и их обсуждение. СТЗ вызывал нарастание суммарного времени иммобилизации в тесте Порсолта, ГСБ-214 снижал этот показатель как на первый (пассивный контроль – 59,94±11,11, активный контроль – 130,46±11,52, ГСБ-214 – 91,42±15,71 с), так и на второй дни эксперимента (пассивный контроль – 154,66±15,57, активный контроль – 206,99±14,76, ГСБ-214 – 149,19±20,36 с), т.е. на поздних фазах развития диабета. Следует отметить, что в экспериментах по изучению антидепрессивной активности ГСБ-214 в тесте Порсолта на интактных мышах соединение не проявляло антидепрессивную активность (Гудашева Т.А. и др. Биорг. хим. 2012; Гудашева Т.А. и др. ДАН. 2015). Такая разница в эффектах на интактных и диабетических животных, возможно, связана с описанным ранее угнетением при диабете PI3K/Akt пути (Dickson L.M. et al., 2004), устраняемым данным миметиком BDNF. Выводы. Выявлена способность ГСБ-214 в дозе 0,5 мг/кг проявлять антидепрессивную активность на модели СТЗ-диабета. 110 Грелиновая система влияет на выбор величины и вероятности подкрепления в модели игровой зависимости у крыс Якушина Н.Д., Лебедев А.А., Тиссен И. Ю., Грамота К.Е., Бычков Е.Р., Карпова И.В., Хохлов П.П., Пшеничная А.Г., Шабанов П.Д. ФГБНУ Институт экспериментальной медицины, г. Санкт-Петербург E-mail: [email protected] Актуальность. Посылкой для выполнения работы послужили данные об участии ряда нейрохимических систем в регуляции игровой зависимости и механизмов эмоционального подкрепления мозга. Выбор вероятности и величины подкрепления является основой формирования стратегий целенаправленного поведения и применяется в качестве инструментальной модели игровой зависимости у грызунов. Мы предполагаем участие грелиновой системы в формировании нехимических форм зависимости. Пептидный гормон грелин, вырабатывается в слизистой оболочке желудка и дугообразном ядре гипоталамуса, оказывает возбуждающее аппетит действие и активирует механизмы подкрепления. Цель. В настоящей работе мы апробировали метод обучения в ситуации выбора силы и вероятности пищевого подкрепления в лабиринте при интраназальном введении грелина и антагониста его рецепторов [D-Lys3]-GHRP-6 у крыс. Материалы и методы. Опыты выполнены на 27 крысах самцах Вистар массой 200-250 г. Животных содержали в стандартных пластмассовых клетках в условиях специальной диеты, ограничивая время приема пищи 4 часами, при свободном доступе к воде. В конце недели крысы получали 100% рацион. Крыс в течение трех недель обучали побежкам в трех-лучевом лабиринте. В конце каждого рукава лабиринта располагалась автоматическая кормушка. В кормушке 1 подавали 1 семечку в режиме FR1/1 (т.е. каждая побежка в рукаве 1 лабиринта подкреплялась пищей), в кормушке 2 – 2 семечки в режиме FR2/2 (т.е. каждая вторая побежка в рукаве 2 подкреплялась пищей), в кормушке 3 – 3 семечки в режиме FR3/3 (т.е. каждая третья побежка в рукаве 3 подкреплялась пищей). Животное каждый день помещали на стартовую площадку и 111 тестировали побежки в течение 10 мин без подачи каких-либо световых или звуковых сигналов. После периода обучения интраназально вводили препарат грелин (20 мкг/20 мкл/крысу, по 10 мкл в каждую ноздрю) или антагонист рецепторов грелина [D-Lys3]GHRP-6 (20 мкг/20 мкл/крысу). Контрольной группе обученных животных интраназально вводили 20 мкл изотонического раствора. Через 7-10 мин после введения вещества крыс тестировали в лабиринте. Результаты и их обсуждение. Введение грелина и антагониста его рецепторов [D-Lys3]-GHRP-6, в отличие от изотонического раствора, изменяли число побежек в рукава лабиринта. После введения препарата грелин наблюдалось увеличение числа заходов в 3-й рукав на 17% (p<0,05), а после введения антагониста его рецепторов [D-Lys3]-GHRP-6 – увеличение числа заходов в 1-й рукав на 13% (p<0,05). Таким образом, в работе показано, что введение грелина повышает число побежек в рукав с низкой вероятностью, но большей величиной подкрепления, в то время как введение [D-Lys3]GHRP-6 увеличивает число побежек в рукав с высокой (100%) вероятностью, но меньшей величиной подкрепления. Подобное изменение числа нажатий педали по выбору с разным режимом и величиной подкрепления интерпретируется как модель игрового поведения в тесте IOWA при использовании антагонистов и агонистов дофамина. Однако метод IOWA предполагает использование хинина в качестве отрицательного подкрепления и сахарозы – в качестве положительного. Выводы. Предложенный нами метод трехлучевого лабиринта не уступает IOWA по чувствительности и более физиологичен для грызунов, так как в качестве отрицательного подкрепления выступает отсутствие подачи пищи, а не аверсивные стимулы. Кроме того, применение элементов естественного питания, а не сахарозы, позволяет проводить длительные эксперименты в условиях пищевой депривации для оценки динамики формирования игровой зависимости и тестирования продолжительного воздействия фармакологических препаратов. 112 СОДЕРЖАНИЕ От редактора…………………………………………………………………... 3 Кирюшин В.А., Узбекова Д.Г. , Козеевская Н.А. К 95-летию со дня рождения профессора Анатолия Александровича Никулина……………... Абдуллина А.А., Васильева Е.В., Кондрахин Е.А., Ковалѐв Г.И. Влияние циклопролилглицина на характеристики связывания глутаматных и ГАМК-рецепторов в мозге мышей линии BALB/c……….. Ажикова А.К., Сергалиева М.У. Определение содержания флавоноидов в листьях Гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L.)………………………... Азаренко С.В., Новикова В.С., Хохлов П.П., Лебедев А.А., Морозов В.И., Яклашкин А.Б., Шабанов П.Д. Влияние хронической алкоголизации на содержание дезацил-грелина в головном мозге и эффекты грелина и его антагониста [D-Lys3]-GHRP-6 на условную реакцию предпочтения места этанола у крыс………………………………………………………………… Алексеев И.В. Доклиническое изучение безопасности препарата с антидепрессивной и нейропротекторной активностью ГСБ-106………….. Акопджанов А.Г., Борисова А.И., Семейкин А.В., Шимановский Н.Л. Исследование цитотоксических свойств наночастиц сложного оксида железа, легированного ионами марганца, на клеточных культурах в качестве модельной системы………………………………………………… Барчуков В.В. Изучение противоишемического действия производного триамина – соединения АЛМ-802 и препарата ранолазина на модели острой эндокардиальной ишемии миокарда у крыс с эндотелиальной дисфункцией…………………………………………………………………... Бессолова Ю.Н.,Ефимов Н.С., Карпова И.В., Бычков Е.Р., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. Участие серотониновой системы в механизмах блокирующего воздействия SB-408124 на самостимуляцию латерального гипоталамуса у крыс………………………………………………………….. Бессолова Ю.Н., Лебедев А.А., Ефимов Н.С., Абросимов М.Е., Ветлугин Э.А., Москалев А.Р., Лебедев В.А., Бычков Е.Р., Шабанов П.Д. Роль дофамина в орексигенных и подкрепляющих эффектах электрической стимуляции гипоталамуса у крыс………………………….. Борисов А.В. Влияние нового производного хиназолина с гуанидиновым компонентом на пролиферативные процессы в иммунокомпетентных органах………………………………………………………………………… Буняков М.В., Говорова Ю.А. Влияние соединения АВ-19 на внутриглазное давление и изменение прозрачности хрусталика глаза у крыс со стрептозотоцин индуцированным сахарным диабетом………… Васильева Е.В., Абдуллина А.А., Кондрахин Е.А., Ковалѐв Г.И. Влияние аналогов циклопролилглицина на характеристики связывания глутаматных и ГАМК-рецепторов в мозге мышей линии BALB/c……….. 113 4 12 13 14 16 17 18 20 21 22 24 25 Васильчук А.Г., Иванова Е.А., Воронина Т.А. Исследование противовоспалительного действия мексидола при однократном внутрибрюшинном введении на модели уксусного перитонита у мышей………………………………………………………….. Волкова А.А., Поварнина П.Ю. Влияние димерного дипептидного миметика фактора роста нервов ГК-2 на объем поражения мозга и неврологический дефицит у крыс…………………………………………… Ганцгорн Е.В., Хлопонин Д.П., Макляков Ю.С. Показатели активности антиоксидантной системы плазмы крови в оценке действия нейропротекторных средств при церебральной ишемии…………………... Градинарь М.М., Есенина А.С., Щулькин А.В., Черных И.В., Якушева Е.Н. Роль прогестерона в регуляции функционирования белка-транспортера гликопротеина-Р………………………………………………………………. Грибовская И.А. Изучение лекарственного ответа на статинотерапию у пациентов с ИБС в условиях полиморбидной патологии в ассоциации с генетическим полиморфизмом………………………………………………. Григоркевич О.С., Мокров Г.В., Столярук В.Н. 1-({4-[(4-хлорбензоил)амино]фенил}сульфонил-L-пролин – потенциальный новый ингибитор матриксной металлопротеиназы 9……. Девяшин А.С., Блаженко А.А., Лебедев В.А., Бычков Е.Р., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. Исследование действия бензодиазепиновых транквилизаторов на поведение Danio rerio в тесте стресса новизны…….. Деева О.А., Ребеко А.Г., Гудашева Т.А. Новый дипептидный лиганд TSPO: дизайн, синтез и фармакологическая активность…………………... Дорофеева М. Н. Влияние метаболизма омепразола на антигипертензивную эффективность амлодипина у больных артериальной гипертонией и кислотозависимыми заболеваниями………………………………………… Ершов К.И., Бахарева К.И., Байкалов Г.И. Исследование эффективности лимфотропной эндоназальной терапии на модели интрацеребральной геморрагии…………………………………………………………………….. Есенина А.С., Черных И.В., Щулькин А.В., Градинарь М.М., Кириченко Е.Е., Мыльников П.Ю., Якушева Е.Н. Изменение активности ABCB1-белка in vitro под действием комплекса веществ пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare)………………………………………….. Ефимов Н.С., Бессолова Ю.Н., Лебедев А.А., Ветлугин Э.А., Москалев А.Р., Абросимов М.А., Лебедев В.А., Бычков Е.Р., Шабанов П.Д. Участие орексина в регуляции системы положительного подкрепления………………………………………………………………….. Ефимов Н.С., Бессолова Ю.Н., Карпова И.В., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. Особенности подкрепляющих свойств левосторонней стимуляции латерального гипоталамуса……………………………………. Жуков И.С., Козлова А.А., Дагаев С.Г., Кубарская Л.Г., Кашуро В.А., Гайнетдинов Р.Р. Возрастные изменения гематологических показателей при снижении чувствительности к следовым аминам……………………... 114 27 28 29 31 32 34 35 36 38 39 40 42 43 44 Жуков И.С., Тиссен И.Ю., Козлова А.А., Карпова И.В., Гайнетдинов Р.Р., Шабанов П.Д. Рецепторы следовых аминов предопределяют характер возрастных изменений свободного поведения у мышей…………………... Жуков И.С., Тиссен И.Ю., Козлова А.А., Коренькова О.М., Синица Е.Л., Власова О.Л., Гайнетдинов Р.Р. Нокаут по гену TAAR1 не изменяет содержание тиреоидных гормонов в сыворотке крови………………… Журиков Р.В., Никитин С.В. Изучение противоопухолевой и антиметастатической активности производного 5-оксипиримидина (СНК-411)……………………………………………………………………... Захаров А.Д. Доклиническое изучение безопасности анксиолитика ГМЛ-1... Иванов С.В., Золотов Н.Н., Островская Р.У. NGF-миметик ГК-2 ослабляет накопление маркера оксидативного стресса на модели диабета у крыс Вистар…………………………………………………………………. Калинина А.П., Капица И.Г., Иванова Е.А., Воронина Т.А., Авдюнина Н.И. Изучение противопаркинсонических свойств новых производных 2-аминоадамантана…………………………………………………………… Касабов К.А., Кудряшов Н.В., Калинина Т.С., Шимширт А.А., Волкова А.В., Куршин А.А., Жмуренко Л.А., Воронина Т.А. Возможная роль 5α-редуктазы АТФ-зависимых калиевых каналов в поведенческих эффектах оригинального гетероциклического соединения ГИЖ-72…………………. Качалов К.С. Доклиническое изучение безопасности нового оригинального препарата ГК-2………………………………………………. Каширин А.О., Духовлинов И.В., Пшеничная А.Г., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. Действие нового препарата бензотрена, синтезированного на основе креатина, на эмоциональное и исследовательское поведение крыс……….. Каширин А.О., Полукеев В.А., Пшеничная А.Г. Действие новых производных кумарина на эмоциональное и исследовательское поведение крыс……………………………………………………………….. Клочков В.Г., Бабков Д.А. Новые ингибиторы α-глюкозидазы фенилхроменового ряда……………………………………………………… Колясникова К.Н., Николаев С.В., Кузнецова Е.А. Анализ зависимости антигипоксической активности от структуры соединений в ряду замещенных глипролинов……………………………………………………. Коржова К.В., Никитин С.В., Коваленко Л.П. Изучение противоопухолевой активности СНК-411 на экспериментальной модели рака шейки матки у мышей линии СВА………………………………………………………….. Котлярова А.А., Щулькин А.В., Черных И.В., Якушева Е.Н. Особенности кроликов породы Шиншилла как тест-системы для изучения препаратов половых гормонов……………………………….. Крючкова А.В., Иноземцев А.Н., Белова О.В. Поведение и обучение крыс на фоне введения иммуноактивных препаратов из тимуса и кожи……… Курбанов Р.Д. Исследование специфического связывания [3H](+)-пентазоцина в мембранных фракциях головного мозга мышей BALB/c и C57Bl/6 при эмоционально-стрессовом воздействии и введении анксиолитиков……… 115 46 48 49 50 51 53 54 56 57 58 59 60 62 63 65 66 Кутепова И.С., Литвинова С.А., Неробкова Л.Н., Воронина Т.А. Исследование влияния производного оксима дибензофурана ГИЖ-272 на выживаемость и энцефалографические показатели мозга крыс с ишемическим инсультом……………………………………………………... Лизунов А.В., Орлов С.В., Бычков Е.Р. Малые аполипопротеины позвоночных – изучение филогении и эволюции антиатерогенных белков………………………………………………………………………….. Логвинов И.О., Тарасюк А.В., Николаев С.В., Круглов С.В., Сазонова Н.М., Антипова Т.А., Гудашева Т.А. Нейропротекторное действие дипептидных миметиков разных петель BDNF и их избирательная активация систем трансдукции сигнала TrkB рецептора……………………………………….. Матюшкин А.И., Иванова Е.А., Воронина Т.А.Исследование противоболевого и противовоспалительного действия гелей гимантана… Минаева О.В., Бродовская Е.П., Петров П.С., Жарков М.Н., Сюсин И.В. Исследование цитотоксичности наноструктурированной полисахаридной формы доксорубицина на культуре клеток L929…………………………… Миннигулов Р.М., Сычев Д.А., Рыжикова К.А., Юдина И.Ю., Лычагин А.В., Морозова Т.Е. Влияние полиморфизмов генов ABCB1 и CYP3A5 на степень изменения протромбинового времени под влиянием ривароксабана у пациентов после эндопротезирования крупных суставов нижних конечностей…………………………………………………………………… Мирошкина И.А., Ионова Е.О., Цорин И.Б., Столярук В.Н., Вититнова М.Б., Сорокина А.В., Крыжановский С.А., Дурнев А.Д. Сравнительное изучение особенностей кардиопротекторного действия триметазидина и афобазола у крыс с алкогольной кардиомиопатией…………………………………….. Музыко Е.А., Ткачева Г.А. Влияние производных ГАМК на память потомства крыс с экспериментальной преэклампсией в условиях скополаминовой амнезии…………………………………………………….. Мурашев А.Н., Яворский А.Н., Дьяченко И.А. Современные подходы к доклиническим исследования в РФ……………………………………….. Мыльников П.Ю., Якушева Е.Н., Черных И.В., Щулькин А.В. Влияние этилметилгидроксипиридина сукцината на экспрессию HIF-1α в головном мозге крыс………………………………………………………... Николаев С.В., Логвинов И.О., Пекельдина Е.С., Антипова Т.А. Антиапоптотические свойства димерного дипептидного миметика NGF ГК-2 в условиях окислительного стресса in vitro………………………………. Огиенко Н.А., Перепелкина О.В., Полетаева И.И. Влияние хронического введения мемантина на поведение мышей с большим и малым весом мозга... Панин В.П., Панина М.И., Токарева М.Г., Джавахян М.А. Фармакологический скрининг при разработке фармацевтических композиций из лекарственного растительного сырья……………………… 116 67 69 70 72 73 74 76 77 79 80 81 83 84 Раменская Г.В., Шохин И.Е., Лукина М.В., Андрущишина Т.Б., Чукина М.А., Царев И.Л., Вартанова О.А., Морозова Т.Е.Сравнение результатов фармакокинетического исследования на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии и математического моделирования фармако-кинетикинетических параметров ванкомицина………………….. Родионов Б.А., Потешкина Н.Г., Лысенко М.А., Журавлева М.В., Андреев С.С., Илюхина Н.Н.Эпидемиологическое исследование случаев инфекции Clostridium difficile тяжелого течения в многопрофильном стационаре…………………………………………………………………….. Родионов Б.А., Потешкина Н.Г., Лысенко М.А., Журавлева М.В., Андреев С.С., Илюхина Н.Н.Эпидемиологическое исследование распространенности госпитальных инфекций в многопрофильном стационаре…………………………………………………………………….. Самотруева М.А., Сергалиева М.У. Изучение влияния экстракта травы Астрагала лисьего на показатели перекисного окисления липидов в тимусе в условиях иммунного стресса……………………………………… Самотруева М.А., Ясенявская А.Л., Мурталиева В.Х. Влияние Семакса на поведение крыс-самцов в «Суок-тесте» в условиях «социального» стресса…………………………………………………………………………. Семенова Ю.В., Морковина Я.В., Салихов Д.А. Исследование антиагрегантных свойств нового 5-НТ2А-антагониста……………………... Степанова Д.С., Браун Л.А. Изменения метаболического профиля шванном и менингиом, вызываемые утратой гена NF2………………………. Степанова Д.С., Титерина Е.К. Выяснение механизмов цитотоксичности статинов в отношении NF2-отрицательных опухолей……………………... Степанова Д.С., Тюльганова Д.А. Поиск лекарственных средств для лечения нейрофиброматоза II типа………………………………………….. Сухорукова Н.А., Салимов Р.М., Ковалѐв Г.И. Моделирование дефицита внимания у мышей: сравнение эффектов атомоксетина и пантогама…….. Таллерова А.В., Поварнина П.Ю., Гудашева Т.А. Дипептидный миметик мозгового нейротрофического фактора ГСБ-106 проявляет антиангедонические свойства в модели острого социального стресса у мышей……………………………………………………………………….. Тарасюк А.В., Сазонова Н.М., Антипова Т.А., Гудашева Т.А. Синтез аналогов димерного дипептидного миметика фактора роста нервов ГК-2 и изучение их нейропротекторной активности in vitro……… Федоров А.В., Маградзе Р.Н., Раптанова В.А., Попковский Н.А., Дробленков А.В. Реактивные изменения нейронов орексинергического и дофаминергического ядер ствола мозга в механизме алкогольной зависимости, формируемой в перинатальном периоде…………………….. Хомякова Т.И., Хомяков Ю.Н. Арил-гидрокарбоновый рецептор Т-лимфоцитов – потенциальная мишень для разработки иммуномодуляторов мукозальной иммунной системы кишечника………………………………............................................................ 117 85 86 88 89 91 92 93 94 96 97 98 100 101 102 Хохлачева Е.А., Соколова Е.В., Шамшина Д.Д., Батычѐк А.Е. Соединения на основе нитротиадиазолопиримидина, способные замедлять процесс неферментативного гликирования…………………….. Черных И.В., Щулькин А.В., Гацанога М.В., Мыльников П.Ю., Есенина А.С., Градинарь М.М., Якушева Е.Н. Ингибирование гликопротеина-P в гематоэнцефалическом барьере как метод повышения эффективности фармакотерапии острого нарушения мозгового кровообращения…………………………………………………... Шевченко Р.В., Бочков П.О., Грибакина О.Г. Изучение доклинической фармакокинетики и биотрансформации антидепрессанта ГСБ-106………. Шульга Н.В., Лубин А.А., Тарасюк А.В. Синтез мономерного дипептидного миметика мозгового нейротрофического фактора ГСБ-104 и изучение его антидепрессивной активности……………………………… Ягубова С.С. ГСБ-214, низкомолекулярный миметик BDNF, обладает антидепрессивными свойствами на модели диабета……………………….. Якушина Н.Д., Лебедев А.А., Тиссен И.Ю., Грамота К.Е., Бычков Е.Р., Карпова И.В., Хохлов П.П., Пшеничная А.Г., Шабанов П.Д. Грелиновая система влияет на выбор величины и вероятности подкрепления в модели игровой зависимости у крыс……………………… 118 104 105 106 108 109 111 Научное издание Материалы Всероссийской научной конференции молодых ученых, посвященной 95-летию со дня рождения профессора А.А. Никулина с Международным участием «Достижения современной фармакологической науки» Подписано в печать 29.10.2018. Формат 60х84/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Усл. печ. л. 7,5. Тираж 50 экз. Заказ № 171. Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации 390026, г. Рязань, ул. Высоковольтная, 9. Отпечатано в типографии Book Jet 390005, г. Рязань, ул. Пушкина, д.18 Сайт: http://bookjet.ru Почта: [email protected] Тел.: +7(4912) 466-151
