Загрузил Amina M

Гибридизация животных клеток

Реклама
Гибридизация — процесс образования или получения гибридов, в основе которого лежит
объединение генетического материала разных клеток в одной клетке.
Может осуществляться в пределах одного вида (внутривидовая гибридизация) и между разными
систематическими группами (отдалённая гибридизация, при которой происходит объединение
разных геномов). Для первого поколения гибридов часто характерен гетерозис, выражающийся в
лучшей приспособляемости, большей плодовитости и жизнеспособности организмов. При
отдалённой гибридизации гибриды часто стерильны.
А. А. Нейфах, Е. Р. Лозовская
ГЕНЫ И РАЗВИТИЕ ОРГАНИЗМА
Разнообразные методы гибридизации заключаются в объединении в яйце различных
хромосом (половая гибридизация), в одной клетке – двух ядер разного происхождения
(гибриды соматических клеток) или в одном организме – клеток с разным генотипом
(химеры). Создание необычных, неестественных комбинаций как бы размыкает невидимые
до того связи между генами, между ядром и цитоплазмой и между клетками. Это позволяет
исследователю увидеть взаимоотношения частей того, что выглядело как неразрывное
целое, – генотип, клетка или организм.
При половой гибридизации взаимодействие двух генотипов в одном ядре зависит от того,
одинаково ли гены двух видов отвечают на сигналы цитоплазмы, «понятные» для генов
материнского вида, но, может быть, чужеродные для генов отцовского вида. Это
взаимодействие будет зависеть и от продукции этих генов, т. е. от совместимости
кодируемых ими белков. Таким образом, проблема гибридизации животных – это во многом
проблема совместимости двух генотипов.
При гибридизации соматических клеток путем их искусственного слияния сначала
возникают гетерокарионы – клетки, содержащие по два различающихся ядра. Это могут
быть ядра двух видов, иногда очень далеких, или ядра двух типов клеток одного вида. На
таких гетерокарионах можно исследовать многие проблемы ядерно-цитоплазматических
взаимоотношений, и прежде всего влияние цитоплазмы на работу ядер. Аналогичные
проблемы можно решать в опытах, когда ядра, полученные из зародышей разных тканей,
переносятся (трансплантируются) в цитоплазму ооцита или оплодотворенного яйца.
В ходе первых делений гетерокарионы часто образуют клетки с объединенным ядром,
содержащим хромосомы двух видов. Так, удается, правда только в культуре тканей,
получить гибридные клетки между очень далекими видами, такими, например, как мышь и
человек. Этот метод сейчас широко используется для картирования хромосом человека –
установления того, какие гены находятся в каждой из хромосом.
На гибриды животных несколько похожи химерные организмы, искусственно создаваемые
путем смешивания на ранней стадии развития клеток двух линий одного вида. Эти работы
сейчас в основном проводятся на млекопитающих, но химерные организмы получают на
дрозофиле, а также у зародышей морских ежей и амфибий. У химер также происходит
взаимодействие двух генотипов, но уже не в одном ядре, а на уровне целых клеток. В этих
случаях соединяют клетки очень похожих зародышей. Поэтому развитие химер обычно
происходит нормально, а различия между клетками могут служить хорошим маркером для
решения некоторых проблем эмбриологии.
Гибриды животных
Изучение гибридов в биологии развития обычно состоит в обнаружении проявления
отцовских признаков на различных стадиях развития. При выборе скрещиваемых пар
исследователь сталкивается с противоречием: чем ближе скрещиваемые особи, тем лучше
развивается гибрид, но тем труднее обнаружить различия между материнским и отцовским
видами, особенно в раннем развитии. Действительно, различия между близкими видами
обычно затрагивают лишь детали строения, которые проявляются на поздних стадиях
развития.
Несовместимость при скрещивании близких и более далеких видов сама по себе может
быть предметом изучения, так как позволяет понять многие важные особенности
процессов развития. На пути развития гибридов существует несколько препятствий, или
порогов. Первый из них: невозможность оплодотворения из-за несовместимых свойств
поверхности яйца и сперматозоидов. Это препятствие мешает скрещиванию многих, даже
близких, видов амфибий. Его, однако, иногда удается обойти, если зрелые ооциты одного
вида поместить в полость тела лягушки другого вида. Такие ооциты проходят через
яйцевод, окружаются чужими наружными оболочками и после этого становятся
доступными для оплодотворения. Вместе с тем, например у рыб, оплодотворение часто
удается не только между близкими видами, но и между видами из разных родов и даже
отрядов и не требует специальных ухищрений.
Если оплодотворение осуществилось и хромосомы обоих видов оказались в одном ядре, их
последующая судьба может быть различной. При отдаленном скрещивании часто
происходит элиминация (потеря) всех или некоторых чужеродных отцовских хромосом.
Механизмы элиминации до конца неизвестны, но элиминируются в первую очередь
хромосомы, которые сильнее отличаются по размеру от хромосом материнского вида.
Элиминация, как предполагают, происходит из-за того, что нити веретена «не умеют»
растаскивать в митозе чужие хромосомы, или из-за того, что репликация отцовских
хромосом происходит в иное время, чем синтез ДНК в материнских хромосомах. В
результате элиминации зародыш по многим хромосомам, а значит, и генам оказывается
гаплоидным. Поэтому развитие таких зародышей нарушается, а отцовские признаки не
проявляются.
О других препятствиях для гибридизации мы можем только догадываться. Вероятно, одним
из них является отсутствие «общего языка» между отцовскими генами и активирующими
сигналами материнской цитоплазмы. Из-за этого отцовские гены вообще не активируются
или активируются не те, которые нужны. Однако, у андрогенетических гаплоидных
гибридов рыб (материнское ядро убито и в ядрах находится лишь один набор отцовских
чужеродных хромосом) гибель разных гибридов происходит в разные сроки. Это указывает
на какое-то участие ядер в процессе развития и скорее согласуется с тем, что в отцовских
хромосомах активируются «неправильные» гены.
Другой порог гибридизации может состоять в том, что чужеродные белки, которые
синтезируются под контролем отцовских генов, в лучшем случае не способны обеспечить
осуществление процессов развития, а в худшем – нарушают нормальный и
сбалансированный ход метаболизма, что приводит к остановке развития и гибели
зародьшей. Этим можно объяснить то, что в обычных диплоидных гибридах самок вьюна с
самцами из другого отряда, т. е. в присутствии собственных хромосом, развитие ранних
стадий протекает относительно нормально, но позже нарушается и в конце концов
завершается гибелью всех зародышей или ранних личинок. Развитие же
андрогенетических гибридных гаплоидов, лишенных материнских хромосом, обычно
останавливается на стадии бластулы.
Наконец, последним порогом гибридизации может быть полноценное участие геномов
обоих родителей, в результате чего создаются организмы с «промежуточными»
признаками, не способные к жизни. Об этом говорят многочисленные опыты, когда кусочки
тканей гибрида, пересаженные на один из родительских организмов, жили нормально, в то
время как целые гибридные организмы погибали.
Интересной особенностью многих гибридных комбинаций является различная судьба
реципрокных(взаимные) гибридов, когда, например, курица скрещивается с перепелом и
перепелка – с петухом. В то время как в первом варианте выводятся жизнеспособные
птенцы, во втором они погибают в яйце. Различна судьба у реципрокных гибридов
ручьевой и озерной форели. В некоторых случаях было показано, что появление
определенных признаков (например, пигментация глаз) у реципрокных гибридов
происходит на разных стадиях. Все эти случаи можно объяснить, если предположить, что
гены одного вида чувствительны к регуляторным белкам другого вида, а гены второго вида
плохо воспринимают регуляцию со стороны первого вида.
Выше мы уже подробно рассматривали, как в биологии развития гибриды используются
для установления времени начала работы генов. Возможности, которые они открывают для
других исследований, еще далеко не исчерпаны. Дело тут, очевидно, в том, что при
гибридизации взаимоотношения между двумя видами происходят одновременно на многих
этажах: между хромосомами и генами двух видов, между генами одного вида и
цитоплазмой другого, между белками двух видов и т. д. Разобраться в этом обычно не
просто. Поэтому метод гибридизации, так много давший для генетики, гораздо меньше мог
пока дать для решения проблем биологии развития.
Иной подход был использован при получении гибридов соматических клеток в условиях
культуры тканей. Если в один сосуд для культуры тканей поместить два вида клеток и
добавить туда же агент, обратимо повреждающий их оболочки, часть клеток сольется друг
с другом. Слияние клеток происходит случайно, но с достаточной частотой сливаются две
(или больше) различные клетки, в результате чего образуется клетка с разными ядрами –
гетерокарион. В таких гетерокарионах можно наблюдать взаимоотношения разных ядер и
влияние веществ из цитоплазмы одного типа клеток на ядра другого типа.
Гетерокарионы часто вступают в митоз одновременно, хромосомы при этом смешиваются и
после деления образуются две одноядерные клетки (синкарионы), содержащие хромосомы
обоих типов клеток. Такие клетки продолжают делиться и дают начало клонам
соматических гибридов. Если для гибридизации использованы клетки разных видов
животных, то обычно в ходе последующих делений часть хромосом постепенно
утрачивается (элиминируется, как у отдаленных половых гибридов) и возникают клоны
клеток, содержащие весь хромосомный набор одного вида и лишь несколько или даже одну
хромосому другого вида. Это дает возможность исследовать функцию генов одной или
немногих хромосом.
Гибридизация клеток (cell hybridization) [лат. hybrida — помесь] — процесс искусственного
слияния соматических клеток (см. Слияние клеток) с образованием жизнеспособной гибридной
клетки (гетерокариона, содержащего ядра обоих родительских типов) с последующим
формированием от нее клеточной линии. Г.к. лежит в основе клеточной инженерии
(см. Клеточная инженерия), используется для получения гибридом (см. Гибридома), а также
применяется при картировании генов за счет того, что при межвидовой Г.к. в результате
элиминации хромосом во время последовательных митозов могут быть получены клетки с
полным набором хромосом одного вида и только с одной хромосомой (или ее фрагментом)
другого вида. Г.к. играет важную роль в исследовании механизмов реактивации генома
покоющейся клетки и степени фенотипического проявления (экспрессивности) отдельных
генов, клеточного деления, в картировании генов в хромосомах человека и в анализе причин
злокачественного перерождения клеток. Феномен Г.к. впервые наблюдал Б. Эфрусси в 1960 г.
Первые искусственные гибриды (см. Гетерокарион), образованные клетками мыши и человека,
получил Г. Харрисом в 1965 г.; первый межвидовой гибрид при слиянии протопластов из
клеток разных видов растений (табака) был получен в 1972 г. П. Карлсоном.
Одним из наиболее популярных методов отнесения генетического маркера (функционально
активного гена) к конкретной группе сцепления является гибридизация (слияние друг с
другом) соматических клеток разных биологических видов организмов, один из которых исследуемый. У межвидовых гибридов соматических клеток в процессе культивирования
происходит утрата хромосом преимущественно одного из биологических видов. Потеря
хромосом носит, как правило, случайный характер, и образующиеся клоны клеток содержат
оставшиеся хромосомы в разных сочетаниях. Анализ клонов, содержащих разные наборы
хромосом исследуемого вида, позволяет определить, с какой из этих оставшихся хромосом
ассоциирована экспрессия исследуемого маркера, и, следовательно, локализовать ген на
конкретной хромосоме.
Межвидовые гибриды животных
Межвидовая гибридизация животных - явление не столь частое, а потому довольно интересное.
Межвидовые гибриды животных обычно неспособны производить потомство, так как нарушен процесс
формирования половых клеток. Но сами они, помимо необычной внешности, иногда проявляют
качества, превосходящие родительские виды (более крупные, более выносливые и т.д.). Такое
явление называется гетерозис.
Лигры не встречаются в природе главным образом потому, что в естественной среде львы и тигры
почти не имеют шансов встретиться: современный ареал льва включает в основном центральную и
южную Африку (хотя в Индии существует последняя уцелевшая популяция азиатских львов), в то
время как тигр — исключительно азиатский вид. Поэтому скрещивание видов происходит, когда
животные долгое время живут в одном вольере или клетке (например, в зоопарке или цирке), но
потомство дают лишь 1—2 % пар, из-за чего в мире сегодня числится не более двух десятков лигров.
Самцы тигрольвов всегда стерильны, в то время как самки — нет.
Скачать
Случайные карточки
Физические термины

8 Карточек Cards

Создать карточки