GFP

Оптимизация условий
экспрессии в бактериальной
системе и очистки зеленого
флуоресцентного белка
(TagGFP2)
Крат Сергей, МБФ, гр. 4004
Руководитель: н.с. ЦНИЛ Першина А.Г.
Актуальность
• Оценка эффективности
трансфекции и экспрессии
генетического материала в
клетке
• Модельный белок для
иммобилизации на
наночастицах
Fluorescent Proteins and Their Applications in Imaging Living Cells and Tissues, Chudacov et. Al, 2010
TagGFP2
• Мономер
• Флуоресценция (105% от
EGFP)
• Не агрегирует
• Не токсичен
• Быстро созревает
• Фотостабилен
• Не требует доп.факторов
созревание флуорофора
http://www.evrogen.ru/protein-descriptions/TagGFP2-description.pdf
Задачи исследования
• Провести трансформацию E.coli XL-blue
плазмидой pQE30-TagGFP2
• Оптимизировать условия экспрессии
TagGFP2 в бактериальной системе
• Выделить и очистить белок TagGFP2
• Разработать методику определения
концентрации белка с
использованием флуориметра
Материалы и методы
• Трансформация с использованием хлористого
кальция (Маниатис, 1984)
• Оптимизация экспрессии при варьировании
концентрации IPTG (0.1мМ – 1мМ) и
температуры (25-40°C)
• Очистка белка с использованием Ni-NTA
агарозы (Qiagen)
• Определение концентрации
флуориметрическим (VersaFluor, Bio-Rad) и
спекртофотометрическим методом (Лоури,
Nanodrop 2000, Thermo scientific)
Планируемые результаты
• Будут подобраны оптимальные условия
экспрессии, выделения и очистки
флуоресцентного белка TagGFP2
• Будет получен высокоочищенный препарат
TagGFP2
Благодарю за
внимание!