Лизоцим • 1922 Открыт сэром Александром Флемингом, который изучал антибактериальное действия слизи носовой полости • 1962 Пьер Жолле и соавт. установили аминокислотную последовательность лизоцима куриного яйца • 129 АА • 1962 Дэвид Хилтон Филлипс, барон Элсмирский Трехмерная структура низкого разрешения (6 А) • 1966 Структура высокого разрешения (2 А). Трехмерная структура 129 аминокислотных остатков, молекулярная масса 17 кД. «Неупорядоченный белок» Разрушает полисахариды клеточной стенки бактерий Пептидная сшивка Сахара Разрушает полисахариды клеточной стенки бактерий • Связывает фрагмент полисахарида из шести аминосахаров NAG — NAM — NAG NAM — NAG — NAM A B C D E F • Ингибируется NAG — NAG — NAG, гипотеза напряжения (Филлипс, 1967) • Левитт (1974) опровержение гипотезы напряжения Механизм катализа Механизм Филлипса • 1. Связывание субстрата Механизм Филлипса • 2. Образование первого промежуточного состояния Механизм Филлипса • 3. Распад первого промежуточного состояния, уход первого продукта реакции Механизм Филлипса • 4. Приход молекулы воды, переход ко второму промежуточному состоянию Механизм Филлипса • Распад второго промежуточного состояния, уход второго продукта реакции Альтернативный механизм (Кошланда, Уитерса, etc.) • Отличается образованием ковалентного комплекса на стадии первого переходного состояния Экспериментальная проверка • мутантный фермент + легко уходящая группа Музыка лизоцима Human lysozyme C Lysozyme C precursor ! = end of the signal sequence ( ) = alpha helix [ ] = beta strand { } = turn MKALIVLGLVLLSVTVQG! KVFE(RCELARTLKR) {LG}M{DG}Y{RG}IS (LANWMCLAKWES) {GY}N{TR}A [TNYN]{AGDR}[STDY] {GIFQ}[IN]{SRYW} CNDGKT{PG}AVN{AC}HLS (CSALL)QDN(IADAVACAKRVV) {R}D{PQ} (GIRA)W(VAWRNR) {CQN}RDV(RQY){VQG}CGV Green monkey Lysozyme C Mouse Lysozyme C Echidna Lysozyme C MKAVIILGLVLLSVTVQG! KIFER(CELARTLKR) {LG}L{DG}Y{RG}IS (LANWVCLAKWES) {GY}N{TQ}A [TNYN]{PGDQ}[STDY] {GIFQ}[IN]{SHYW} CNNGKT{PG}AVN{AC}HIS (CNALL)QDN(IADAVTCAKRVV) {R}D{PQ}(GIRA)W(VAWRNH) {CQN}RDV(SQY){VQG}CGV MKTLLTLGLLLLSVTAQA! KVYER(CEFARTLKR) {NG}M{AG}Y{YG}VS (LADWVCLAQHES) {NY}N{TR}A [TNYN]{RGDQ}[STDY] {GIFQ}[IN]{SRYW} CNDGKT{PR}AVN{AC}GIN (CSALL)QDD(ITAAIQCAKRVV) {R}D{PQ}(GIRA)W(VAWRAH) {CQN}RDL(SQY){IRN}CGV (No signal in data) KILK(KQELCKNLVA) {QG}M{NG}Y{QH}IT (LPNWVCTAFHES) {SY}N{TR}A [TNHN]{TDG}[STDY] {GILQ}[IN]{SRYW} CHDGKT{PG}SKN{AC}NIS (CSKLL)DDD(ITDDLKCAKKIA) {G}E{AK}(GLTP)W(VAWKSK) {CRG}HDL(SKF)KC By Mary Anne Clark