Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В
СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И
БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
Институт медицинской биотехнологии
Федерального государственного учреждения
науки «Государственный научный центр
вирусологии и биотехнологии «Вектор»
КО М П Л Е КС Н Ы Й Л Е Ч Е Б Н О ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ
П Р О Т И В О В И РУ С Н Ы Й П Р Е П А РАТ Н А
О С Н О В Е А Н СА М БЛ Я Д ВУ С П И РА Л Ь Н Ы Х И
ОД Н О Ц Е П ОЧ Е Ч Н Ы Х Р Н К
А Л И К И Н Ю . С , Л Е Б Е Д Е В Л . Р. ,
П ОД ГО Р Н Ы Й В . Ф . , ВОЛ О С Н И КО ВА
Е.А.,
ТЕЛЕГИНА Ю.В.
БЕРДСК
2009
Несмотря на впечатляющие
успехи современной
фармакологии и медицины, грипп
и другие ОРВИ по-прежнему
сохраняют свою
эпидемиологическую
значимость..
В настоящее время все большей популярностью в
клинической практике пользуются индукторы
интерферона, которые при введении в организм
вызывают активацию макрофагов и
нейтрофилов, натуральных киллеров,
стимулируют образование эндогенных
цитокинов, усиливают Т- и В-клеточный
иммунный ответ.
Показано, что дсРНК при ее применении отдельно
или в комплексе с другими противовирусными
препаратами усиливают образование
активированными макрофагами свободных
радикалов азота и кислорода.
Двуспиральные РНК взаимодействуют с
рецептором TLR-3, находящимся на поверхности
клеток, и вызывают интерфероногенез.
Фрагменты дсРНК и оцРНК взаимодействуют с
рецепторами TLR-7, -8, -9 в цитоплазме клеток.
Состав и длина цепи РНК влияют на её
биологическую активность
В настоящее время в лечебную и исследовательскую практику
медицины и ветеринарии внедрены препараты на основе РНК:
Ридостин (Вестин), Полирибонат, Провест и Рифастин
Эти средства разработаны в
ИМБТ ГНЦ ВБ «Вектор», производство их
организовано в ООО «Диафарм».
Препарат Полирибонат представляет собой высокополимерную одноцепочечную
РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Препарат Полирибонат повышает
содержание Т-лимфоцитов, стимулирует гемопоэз, проявляет иммуноадъювантные
свойства
при
совместном
использовании
с
антибактериальными
и
противовирусными вакцинами.
Препарат Ридостин (Вестин) представляет собой композицию L- и М-форм дсРНК
(вирусоподобных частиц) из киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и
высокополимерной одноцепочечной РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
Препарат применяется в качестве противовирусного средства, иммуномодулятора и
стимулятора неспецифической резистентности.
Препарат Провест представляет собой композицию L- и М-форм дсРНК
(вирусоподобных частиц) из киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и
высокополимерной одноцепочечной РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae с
поливинилпирролидоном,
обладающую
пролонгированным
действием,
и
применяется в качестве иммуномодулятора и стимулятора неспецифической
резистентности.
Препарат Рифастин представляет собой композицию L-, M- и S-форм дсРНК фага
φ6, репродуцирующегося в Pseudomonas phaseolicola, и высокополимерной
одноцепочечной РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
Практическое применение Ридостина в медицине
Вид патологии
Способ применения
Вирусная инфекционная
Грипп и ОРВИ
Герпес
(простой,
опоясывающий)
Профилактика и лечение
генитальный,
Лечение
Цитомегаловирусная инфекция
Лечение
Клещевой энцефалит
Профилактика и лечение
Бактериальная инфекционная
Хламидиоз (урогенитальный, офтальмо)
Лечение
Неинфекционная
Сахарный диабет
Иммуномодуляция
Рассеянный склероз
Иммуномодуляция
Практическое применение Вестина в
ветеринарии
Животное - Вид патологии
Молодняк КРС -ассоциированные диареи
- микоплазмоз
-риновирусная инфекция
Молодняк
лошадей
сальмонеллезный аборт
мыт
лошадей,
Способ применения
Лечение совместно с пробиотиками (субалин,
ветом, бактерин - SL)
Лечение
совместно
с
ФНО-
и
леватетрасульфином
Профилактика и лечение
Совместно с вакциной
Поросята-ассоциированные гастроэнтериты
классическая чума свиней и сальмонеллез
Профилактика и лечение острых
вспышек в
ранний постнатальный и послеотъемный
период
повышение эффективности вакцинации
Плотоядные:
собаки-чума,
парвовирусный
энтерит, аденовироз, гепатит, пироплазмоз
кошки-панлейкопения, кальцевироз и др.
Профилактика
и
этиотропное
лечение,
предотвращение вторичных инфекций
Профилактика и лечение
Лабораторные животные: мыши, крысы, морские
свинки, кролики, обезьяны
Для профилактики в инфекционном вирусном
очаге, для получения безвирусных племенных
ядер
Птицы: цыплята - бройлеры и яйценоских пород
Стимулятор роста, профилактика и лечение
вирусных заболеваний в племенных ядрах
Рыбы
Профилактика
инфекций
и
лечение
рабдовирусных
Противовирусные эффекты препарата
Ридостин (Вестин).
1. ALPHAVIRIDAE
Venezuelan equine
encephalomyelitis(10-50%)
Eastern equine
encephalomyelitis(60-75%)
Western equine
encephalomyelitis(25-63%)
2. FLAVIVIRIDAE
Tick-born encephalitis
(30-60%)
3. RHABDOVIRIDAE
Rabies (30%)
4. ORTHOMYXOVIRIDAE
Influenza (23-83%)
5. PICORNAVIRIDAE
Encephalomyocarditis (20-56%)
Экспериментальное
изучение
противовирусной
активности
Ридостина (Вестина)
Мыши
1. RHABDOVIRIDAE
Spring viremia of carps
(78-100%)
1.
Морские
свинки
Рыбы
Телята
Собака
Птица
Поросята
ORTHOMYXOVIRIDAE
Grippus avium (65-72%)
1. FILOVIRIDAE
Marburg virus (20%)
2. ALPHAVIRIDAE
Venezuelan equine
encephalomylitis (29%)
3. HERPESVIRIDAE
Herpes genitalis (70%)
PICORNAVIRIDAE
Bovine
rhinotracheitis virus
(57%)
1. PARAMYXOVIRIDAE
Pestis canum (70-95%)
2.PARVOVIRIDAE
Parvoviral enteritis 75-80%)
1. CORONAVIRIDAE
Transmissible gastroenteritis (40%)
2. REOVIRIDAE rotovirus (57%)
Для
дальнейшего
рассмотрения данного феномена были получены
обогащенные формы L- и М-дсРНК киллерных дрожжей. В ходе исследований
было
выявлено, что выделенные формы РНК оказывают различные
биологические эффекты.
Все препараты дcРНК вызывают индукцию интерферона в исследованных
условиях. Уровень интерферона в крови мышей, которым вводили препарат
суммарной дcРНК и его формы, был значительно выше, чем показатель группы
положительного контроля (поли (И):поли (Ц)). L-дсРНК оказалась в 4,1 раза
более активной в отношении интерферонообразования, а М-дсРНК в 1,9 раза,
чем исходный препарат. L-дсРНК оказалась в 2 раза более активной в
отношении индукции интерферонообразования, чем М-дсРНК.
Дополнительное исследование показало, что уровень интерферона в сыворотке
крови мышей зависит от молекулярной массы препаратов дcРНК и
уменьшается с её снижением.
Препарат М-дсРНК отличался также более выраженной фагоцитозстимулирующей активностью, по сравнению с суммарным препаратом и LдсРНК. Эффект индивидуальных форм дсРНК на пролиферативную активность
лимфоцитов носил более пролонгированный характер по сравнению с
суммарным препаратом дсРНК.
Несмотря на различающиеся свойства этих двух форм, их сочетанный эффект в
препарате Ридостин (Вестин) является выраженным, а сам препарат обладает
широким противовирусным спектром.
сыворотках
мышей через 5 ч после введения препаратов
дцРНК.
1000
900
800
титр интерферона
700
600
500
400
300
200
100
0
4500п.о.
1500п.о.
500п.о.
150п.о
длина фрагментов дсРНК,п.о.
50п.о
Фагоцитарная активность мышиных
Макрофагов после инкубации в среде, содержащей
L- и М- формы дцРНК в различных концентрациях
(объект – опсонизированные эритроциты овцы).
ФА, %
*
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
*
*
L-форма дсРНК
Контроль
0,01 мкг/мл
М-форма дсРНК
0,1 мкг/мл
1 мкг/мл
10 мкг/мл
Состав и время обработки композиций
на основе дцРНК сывороточными РНК-зами
№
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Состав исследуемого препарата
дцРНК впРНК, РПГ
ПВП
мкг
мкг (м.м 40 (м.м 20
кД),мг
кД),мг
10
10
10
10
5
5
5
5
5
200
200
200
200
5
5
5
-
5
5
5
Время полного
гидролиза
дцРНК,
мин.
4-8
>200
120
60
>200
120
>200
60
>200
Совокупность полученных данных свидетельствуют, что эффективность
лекарственных средств может быть значительно повышена за счет включения
в их состав РНК и ее фрагментов. В работе предлагается направление
исследований и разработки средств иммунопрофилактики и лечения вирусных
инфекций на основе комплекса двуспиральных и одноцепочечными РНК
(дсРНК и оцРНК). В связи с этим была проработана схема создания
конструкции на основе РНК разной природы, состава и свойств.
Примером такого композиционного препарата может быть Рибомикс,
представляющий собой ансамбль одноцепочечных и двуспиральных
рибонуклеиновых кислот, полученных из эукариотических (киллерный штамм
Saccharomyces cerevisiae) и прокариотических микробиологических источников
(фаг φ6, паразитирующий на Pseudomonas phaseolicola). Комплекс включает
три формы геномной дсРНК фага Φ6 (6,3, 4,0 и 2,9 т.п.н.) и две формы дсРНК
вирусоподобных частиц киллерных штаммов S. cerevisiae (4,8 и 1,8 т.п.н.).
ОцРНК
представлены
высокополимерными
РНК
S.
cerevisiae,
преимущественно рибосомальными.
Была исследована интерферониндуцирующая
активность препарата
Рибомикс в сравнении с оцРНК, Вестином (Ридостином), L- и M-формами
дсРНК из Saccharomyces cerevisiae. Препарат Рибомикс обладал более
выраженной способностью к индукции интерферона в ранние сроки после
введения по сравнению с другими препаратами.
Определение интерферониндуцирующей активности препаратов РНК
в сыворотках мышей:
оцРНК,- 2,5 мг/кг;
Ридостин, -2,5 мг/кг (дсРНК- 0,5 мг/кг, оцРНК -2,0 мг/кг);
L-форма дсРНК, -0,5 мг/кг;
М-форма дсРНК, -0,5 мг/кг;
Рибомикс, (дсРНК,- 0,3 мг/кг);
Контроль - изотонический раствор.
обратное значение титров интерферона
10000
1000
контроль
Контроль
о/цРНК
оцРНК
дсРНК
Ридостин
L-форма
L-форма
100
М-форма
М-форма
Рибомикс
препарат
,
10
1
5ч
12ч
24ч
время после введения препаратов
48ч
Таким образом, показана возможность
увеличения биологической
и противоинфекционной активности
препаратов на основе дсРНК и оцРНК,
перспективных для лечения инфекций,
в том числе гриппа,
путем подбора и комбинации
разных форм и видов РНК.
Предварительные данные показали,
что препарат Рибомикс, представляющий собой
смесь разных форм дцРНК,
является эффективным
индуктором интерферона
и отличается длительным
эффектом индукции интерферонов.
Спасибо за внимание!