Колбин И.А.

Изучение функциональной активности
нейтрофильных
гранулоцитов
периферической венозной крови доноров
при воздействии суспензии наночастиц
SiO2
разной
концентрации
Аспирант кафедры биологии ЧелГМА:
И.А. Колбин
Научный руководитель: зав.кафедрой
биологии ЧелГМА,
профессор, доктор медицинских наук
О.Л. Колесников.
Актуальность работы
1. Проект о «Концепции токсикологических
исследований, методологии оценки риска,
токсичности, методов идентификации
и
количественного
определения
наноматериалов», который был утвержден
постановлением Главного Государственного
санитарного врача РФ Г.Г. Онищенко №79
от 31.10.07г.
2. Анализ данных литературы показал, что
наночастицы обладают более высокой
токсичностью по сравнению с обычными
микрочастицами.
3. Установлено, что наночастицы обладают
высокой проникающей способностью в
клетку: легко проникают через мембраны
клеток, обнаруживаются в клеточном ядре.
4. Это может приводить к увеличению
продукции
свободных
радикалов
и
активных форм кислорода и далее – к
повреждению биоструктур.
5. Токсичность наночастиц зависит от
формы, размера, способа введения,
концентрации
и
продолжительности
влияния на организм.
6. Самым распространенным в биосфере
нашей планеты после кислорода является
кремний.
Цель исследования:
• оценить жизнеспособность и
функциональную активность нейтрофилов
периферической крови после 6 часовой
инкубации с наночастицами SiO2 в
концентрациях 1,08, 0,54 и 0,27 × 10¹³
частиц/мл. Размер наночастиц в среднем
составлял 9 нм.
Задачи исследования:
ОЦЕНИТЬ:
1. Процент жизнеспособных нейтрофилов периферической
крови доноров.
2. Общее
количество
нейтрофильных
гранулоцитов
периферической крови доноров.
3. Абсолютное количество жизнеспособных нейтрофильных
гранулоцитов периферической крови доноров.
4. Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофильных
гранулоцитов периферической крови доноров.
5. Активность и интенсивность спонтанного и индуцированного
НСТ-теста нейтрофильных гранулоцитов периферической
крови доноров.
6. Активность лизосомальной люминесценции нейтрофильных
гранулоцитов периферической крови доноров.
Материалы и методы
• Объектом исследования были
нейтрофильные гранулоциты, выделенные
из периферической венозной крови
доноров в возрасте 18-35 лет.
Методы исследования:
1.
2.
3.
4.
5.
Оценка процента жизнеспособных нейтрофилов
по стандартному методу суправитального
окрашивания клеток трипановым синим.
Подсчет общего количества нейтрофилов в
камере Горяева.
Исследование
фагоцитарной
активности
нейтрофилов
на модели поглощения
частиц латекса (К.А. Лебедев, И.Д. Понякина,
1990)
НСТ-тест нейтрофилов (А.И. Карпищенко, 1998 г.).
Определение
лизосомальной
активности
нейтрофилов (И.С. Фрейдлин, 1984)
Показатели жизнеспособности
нейтрофилов, %
Общее количество нейтрофилов,
(Х10⁶ клеток/мл)
Абсолютное количество
жизнеспособных нейтрофилов
*
***
Показатели активности фагоцитоза
нейтрофилов, %
*
Показатели интенсивности
фагоцитоза, усл. ед.
Показатели активности спонтанного и
индуцированного НСТ-теста
нейтрофилов, %
***
Показатели интенсивности спонтанного и
индуцированного НСТ-теста нейтрофилов,
усл.ед.
***
*
Показатели активности лизосомальной
люминесценции нейтрофилов, %
Выводы:
1. Наночастицы диоксида кремния
снижают
процент трипанонегативных и
абсолютное
количество жизнеспособных нейтрофильных
гранулоцитов периферической крови доноров.
2. Наночастицы диоксида кремния увеличивают
функциональную активность нейтрофильных
гранулоцитов.
БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!!!