Наумова Концепция Hematoflow высокие технологии в рутинную

РОССИЙСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ПОСЛЕДИПЛОМНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
КАФЕДРА КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
Группа гематологии и проточной цитометрии
Концепция Hematoflow
высокие технологии в
рутинную практику!?!
Наумова Елена Владимировна
к.м.н. , доцент кафедры
КЛД РМАПО, Москва
Барнаул 2015
Общий анализ крови
Гематологический
анализатор
НОРМА или ПАТОЛОГИЯ?
Выдача
результата
ПАТОЛОГИЯ
Общий анализ крови
Гематологический
анализатор
Параметры общеклинического анализа крови
– Сell blood count (CBC)
• WBC Количество (абсолютная концентрация) лейкоцитов
• UWBC Нескорректированное количество лейкоцитов
• RBC Абсолютная концентрация эритроцитов
• HGB Концентрация гемоглобина
• HСT Гематокрит
• MCV Средний объем эритроцита
• MCH Среднее содержание гемоглобина в эритроците
• MCHC Средняя концентрация гемоглобина в эритроците
• RDW Ширина распределения эритроцитов по объему
• RDW-SD Стандартное отклонение ширины распределения
эритроцитов
• Plt Абсолютная концентрация тромбоцитов
• MPV Средний объем тромбоцитов
• @PDW Ширина распределения тромбоцитов по объему
• @PCT Тромбокрит
Общий анализ крови
Гематологический
анализатор
Параметры общеклинического анализа крови
– Сell blood count (CBC)
• WBC Количество (абсолютная концентрация) лейкоцитов
• UWBC Нескорректированное количество лейкоцитов
• RBC Абсолютная концентрация эритроцитов
• HGB Концентрация гемоглобина
• HСT Гематокрит
• MCV Средний объем эритроцита
• MCH Среднее содержание гемоглобина в эритроците
• MCHC Средняя концентрация гемоглобина в эритроците
• RDW Ширина распределения эритроцитов по объему
• RDW-SD Стандартное отклонение ширины распределения
эритроцитов
• Plt Абсолютная концентрация тромбоцитов
• MPV Средний объем тромбоцитов
• @PDW Ширина распределения тромбоцитов по объему
• @PCT Тромбокрит
WBC - Количество лейкоцитов
Лейкоцитарная
гистограмма
Лимф Моно
оциты циты
50 –
90 90 fL 160 fL
R1 R2
R3
Гранулоциты
160 - 450 fL
R4
R1 – дальний левый регион: агрегаты тромбоцитов,
гигантские тромбоциты, эритробласты
R2 – регион лимфо-моно: варианты лимфоцитов, бласты,
плазматические клетки,
базо-, эозинофилия
R3 – регион моно – грануло: незрелые гранулоциты,
анормальные клетки
R4 – дальний правый регион: высокое абсолютное
количество гранулоцитов
Технология VCS
V - Volume
C - Conductivity
S - Scatter
Метод многопараметрической проточной
цитометрии – оценка объема,
электропроводимости, светорассеивания.
Многопараметрическая проточная
цитометрия – технология VCSn
Лазерная и оптическая система
• диодный лазер
• новая лазерная оптика
• новая (запатентованная) конструкция проточной
ячейки, обеспечивающая высокое разрешение
• 7 различных сигналов, 5 из которых –
параметры
светорассеяния.
1. Верхний и нижний электрод для
определения объема (DC)
2. Верхний и нижний электрод для
определения проводимости (RF)
3. Ослабление светового потока в прямом
направлении (ALL) 0˚
4. Светорассеяние под малыми углами
(LALS) 5.1˚
5. Светорассеяние под углами меньше
среднего (LMALS) 10˚ – 20˚
6. Светорассеяние под углами больше
среднего (UMALS) 20˚ - 42˚
7. Пятый канал светорассеяния
представляет собой сумму LMALS и
UMALS.
Точное измерение размера
Технология VCS - Volume
Объем (размер) клетки измеряется
с использованием принципа Культера на основе
измерения сопротивления при постоянном токе.
Информация о размере клетки используется для
уточнения данных, получаемых при анализе
проводимости и рассеяния.
Анализ внутреннего
состава клеток
Технология VCS - Сonductivity
Измерение проводимости в переменном токе высокой
частоты характеризует непрозрачность (структурную
электропроводимость) клетки.
Позволяет оценить объем, плотность клеточного ядра
и внутренний состав клетки.
Анализ гранулярности
Технология VCS
– Rotated Light Scatter
Рассеяние лазерного света под разными углами
позволяет получить информацию о структуре
клеточной поверхности, гранулярности
цитоплазмы и лобулярности ядра.
Cell Population Data (CPD)
Семь позиционных параметров для каждого
типа лейкоцитов
– Дополнительная информация для
характеристики клеточной популяции
– CPD могут быть использованы в правилах
принятия решений
– Дополняют данные флагов, дают
предварительную морфологическую
информацию и облегчают идентификацию
патологических популяций
56 дополнительных исследовательских
параметров
Параметры лейкоцитов.
Новые параметры лейкоцитов актуальные для
диагностики мегалобластных анемий (В12- и
фолиеводефицитной):
- средний объем нейтрофила MVNe (РЗ: 132-144 ед.)
- средний объем моноцита MVMo (РЗ: 157-167 ед.)
(Simon-Lopez R., Sukhacheva E., Tsvetaeva N.,
Egorova M. et al., 2008.)
Параметры лейкоцитов
Параметры лейкоцитов
Параметры лейкоцитов
LS
Параметры лейкоцитов
Параметры лейкоцитов.
@EGC# - early granulocyte count – незрелые
формы гранулоцитов – абсолютное количество
незрелых гранулоцитов,
@EGC # = (@ EGC х WBC)/100, N x 103 кл/мл
@EGC% выражается в процентах от общего
числа WBC, показатель из DIFF канала VCSn.
Зачем нужно
микроскопическое
исследование?
Достоинства и недостатки
«традиционного» подхода
+ Дешевый метод, оценка
-
морфологической структуры клетки
(особенности ядра, включения,
зернистость), морфология эритроцитов,
тромбоцитов
Высокая занятость специалистов,
выполняющих морфологические
исследования
- Сложность подсчета при лейкопении –
подсчет 50 клеток
- Неравномерное распределение
лейкоцитов в мазке крови
-В сложных случаях требуется опытный
морфолог
- По морфологии невозможно выделение
субпопуляций лимфоцитов и моноцитов
• HematoFlow™ : комплексное решение Beckman
Coulter объединяющее возможности
гематологических анализаторов и проточной
цитофлуориметрии.
Цитофлуориметр
FC500
микроскопия
DxH800 Beckman Coulter
• CytoDiff™ : реагент проточной цитометрии,
используемый для контроля флагов
гематологического анализатора (IVD)
CytoDiff Autogating Algorithm Overview
B
CD19+
Baso & Xt
FS High
Leucocytes
CD45+
EO & IG
CD2/CRTH2+
3 septembre 2013
Neutrophil
CD16+
Mono
CD36+
LyB & Xb
CD45+
Mono & Xm
CD 45+
EO + IG
CD 16-/SS High
Mono & ProI
CD 16+/-
4 новых определяемых
популяций клеток
T + NK
CD45+
Baso + Xt
CD2/CRTH2 -
LyTC+NK & LyTnC
CD16+Tc+NK/-TNc
14
CytoDiff™ : набор меченных
моноклональных антител для
проточной цитометрии, используемый
для контроля флагов
гематологического анализатора (IVD)
CytoDiff Панель
5 –цветный коктейль из 6 антител,
который позволяет идентифицировать
16 клеточных популяций
Маркер
Экспрессия клетками
CD36-FITC Моноциты, Эритроциты, Тромбоциты
CD2-PE
T-Лимфоциты, NK клетки, T-бласты
CD294-PE
Эозинофилы, Базофилы,
Активированные T клетки
CD19-ECD
B лимфоциты, B-бласты
CD16-PC5
Нейтрофилы, провоспалительные
моноциты, цитотоксическиеT/NK клетки
Незрелые гранулоциты
CD45-PC7
Все лейкоциты + Бласты
Продукт, одобренный в настоящее
время Советом Европы (CE)
Донор 44 г
WBC 8,56х109/л
Neu%-37,8
Lym%-56,3
Mon%-4,5
Eos%-1,2
Bas%-0,2
Navios - Beckman Coulter
CD5/CD19
CD20/CD23
CD19λ
Сравнение гистограмм пациента
с В-клеточным хроническим
лимфолейкозом и Донора.
донор
В-ХЛЛ
В-ХЛЛ (n=51)
Субпопу
ляции
клеток
B лифоциты
Доно
ры
(n=331) %
Больны
е ВХЛЛ(n=51)
%
1.61-8.53
12.1-94.6
T- лимфоциты
12.64-45.06
0.96-28.98
T+ лимфоциты
1.71-17.34
0.13-8.41
T&NK
17.70-57.16
1.81-36.47
Все лимфоциты
21.73-61.34
48.64-98.69
M-
4.52-10.81
0.02-5.43
M+
0.18-1.54
0.01-1.65
Все моноциты
4.73-11.58
0.02-6.69
Незрелые
0.01-0.53
0.01-0.45
0.77-8.32
0.04-2.82
29.04-67.52
0.66-45.2
29.34-67.64
1.51-6.03
лимфоциты
Гранулоциты
Эозинофилы
Зрелые
Нейтрофилы
Все Нейтрофилы
В-ХЛЛ (n=51)
Субпопуля
Доноры
ции клеток
(n=331) *109/l
Больные ВХЛЛ(n=51) *109/l
B лифоциты
0.09-0.70
T- лимфоциты
0.84-3.2
2.34-8.47
T+ лимфоциты
0.11-1.25
0.39-1.58
T&NK лимфоциты
1.13-3.69
2.73-9.05
Все лимфоциты
1.35-4.31
3.65-183.36
M-
0.27-0.9
0.04-1.23
M+
0.01-0.10
0.01-0.38
Все моноциты
0.29-0.97
Незрелые
0.00-0.05
0.00-0.38
Эозинофилы
0.04-0.70
0.05-0.54
Зрелые Нейтрофилы
1.49-6.02
1.07-6.76
Все Нейтрофилы
1.51-6.03
1.09-6.77
0.92-169.72
0.04-1.46
Гранулоциты
Сравнение гистограмм пациента
с диагнозом волосатоклеточный
лейкоз и Донора.
ВКЛ
донор
Преимущества и
недостатки метода
CytoDiff
• Анализ большого массива клеток (не
менее 20000 клеток до 0.5%)
• Объективная иммунологическая
классификация различных типов
лейкоцитов с использованием МКА
• Возможность оценить субпопуляции
лимфоцитов и моноцитов
• Снижение числа микроскопических
исследований мазков крови
• Снижение трудоемкости и ошибок,
связанных с человеческим фактором
• Недостаток – высокая стоимость
оборудования
Сравнение гистограмм
пациента с пароксизмальной
ночной гемоглобинурией и
донора
донор
ПНГ
Проточная цитометрия дело
творческое! :)
[email protected]