Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом
advertisement
Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии Научный центр педиатрии и детской хирургии, г. Алматы • Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей из 100 тысяч заболевают лейкемией в возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев приходится на детей 2-6 лет. • В Казахстане ежегодно заболевают 130 детей. • Хромосомные изменения обнаруживают приблизительно у 60-70 % больных. • неблагоприятные факторы внешней среды: ионизирующее излучение, действие электромагнитного поля, химических веществ, бензола, медикаментов, в состав которых входят алкилирующие соединения. • вирусы (HTLV-I - Т-клеточный лйкоз/лимфома взрослых; вирус ЭпштейнаБарр – лимфома Беркитта, Лимфома Ходжкина) ! Особенно чувствительны к воздействию электромагнитного излучения дети школьного возраста, организм которых еще не сформировался: даже всего несколько часов в неделю, проведенных около компьютера, опасны для их здоровья. В 1997 году в США опубликованы данные по увеличению количества заболеваний детей лейкозом, которые более 2 часов в день играли на компьютере и в видео игры. лейкозы острые хронические В Т ХЛЛ редкие миелобласт лимфобласт ные ные ХМЛ • Основной клинической симптоматикой ОЛ служат процессы гиперплазии опухолевой ткани (бластная трансформация костного мозга, увеличение лимфатических узлов, органов, появление опухолевых инфильтратов и т.д,) и признаки подавления нормального кроветворения. Клиническая симптоматика развернутой стадии ОЛ складывается из 5 основных синдромов: • 1. гиперпластического • 2. геморрагического • 3. анемического • 4. интоксикационного • 5. инфекционных осложнений • Л.- опухолевые клональные заболевания кроветворной системы с первичным поражением костного мозга. Мишенью опухолевой трансформации являются стволовые кроветворные клетки и коммитированные клеткипредшественники. Субстрат опухоли представлен бластами. FAB-классификация, 1976 • Лф: L1, L2, L3 • Миело: М0, М1, М2, М3,М4, М5,М6, М7 Иммунофенотипирование • CD – кластер дифференцировки • Антитела (мембранные гликопротеины, карбогидраты, гликолипиды) • Проточная цитометрия является современной технологией быстрого оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов. Образцы для проточной цитометрии • • • • • • • кровь костный мозг ликвор суставная жидкость плевральная жидкость асцитическая жидкость клетки тканей (например, опухолей) Проточные цитофлюориметры • Концепция соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки. В большинстве случаев ОЛ бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки. Иммунологическая идентификация включает: • Определение линейной принадлежности злокачественных клеток • Анализ клеточного созревания, т.е. уровня дифференцировки, степени гетерогенности популяции злокачественных клеток • Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов • Клональности • Определение количества гемопоэтических клеток • Контроль и мониторинг эффективности терапии • Выявление минимальной остаточной болезни • Лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев. К основным типам аберрантности фенотипа л.клеток относятся: • Коэкспрессия антигенов нескольких линий • Асинхронная экспрессия антигена • Избыточная экспрессия антигенов • Отсутствие экспрессии или низкий уровень экспрессии антигена • Фенотипический профиль, практически не встречающийся в норме Структура иммунологических вариантов острых лейкозов НЦПиДХ 1,6% 24,6% 73,8% ОЛЛ ОМЛ бифенотипы Частота выявления различных фенотипических вариантов ОЛ 1,91% 1,6% 4,8% 4,0% В1 В2 12,7% В3 Т 6,4% М0 9,5% 5,6% 54,0% М1-2 М3 М4 Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза • 1995, 2009 • Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров «чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20% клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают более 2 баллов. Учитывается также СИФ. Иммунологическая диагностика бифенотипического лейкоза Баллы Маркеры В ряда Маркеры Т ряда Маркеры миелоряда 2 CD79a cyIgM cyCD22 CD3cy/mem TCRαβ TCRγδ MPO 1 CD19 CD10 CD20 CD2 CD5 CD8 CD13 CD33 0,5 TdT CD24 TdT CD7 CD1a CD14 CD15 CD64 CD117 За последние 5 лет в НЦПиДХ было выявлено 6 бифенотипических лейкозов, причем 3 из них имели фенотип Т-линейной и миелоидной направлений дифференцировки, и 3 случая В-линейной и миелоидной направлений дифференцировки. Суммарный иммунофенотип Т+миело: CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLADR+CD34+MPO+ В+миело: CD19+CD22+CD79а+CD13+CD33+CD117+CD 15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+ R1 100 101 100 101 102 CD4 5 PerCP 103 104 100 101 102 CD7 FITC 103 104 100 101 102 CD2 FITC 103 104 R1 102 CD4 5 PerCP 103 104 100 101 100 102 CD2 2 FITC 101 103 102 CD2 2 FITC 104 103 100 104 101 102 CD1 0 FITC 103 104 Мегакариоцитарный лейкоз (М7) • С 2010 по 2014гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д, с-м Дауна - 3 • CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34MPO• CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DRCD34-MPO-, • Коэкспрессия CD4, CD7, CD56 Мегакариоцитарный лейкоз (М7) 07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.444 07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.456 R1 100 101 102 CD45 Pe rCP 103 104 100 07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.449 100 101 102 CD20 FITC 103 101 102 103 CD42a FITC 104 07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.458 104 100 101 102 CD37 FITC 103 104 Эритробластный лейкоз (М6) 26.02.1 0-Ata kul aev.33 4 26 .02.10-Ataku laev.3 34 R1 0 100 200 400 600 800 26 .02.10-Ataku laev.3 FSC-Heigh t 44 101 102 CD38 FITC 103 100 0 104 100 101 102 CD45 Pe rCP 103 104 Плазмобластный лейкоз 16 .02.10-Sol tanb aev.24 5 15 .02.10-Sol tanb aev.21 6 R1 100 101 102 CD45 Pe rCP 103 104 100 101 102 CD38 FITC 103 104 16 .02.10-Sol tanb aev.24 6 15 .02.10-Sol tanb aev.22 2 100 100 101 102 CD7 FITC 103 104 101 102 CD38 FITC 103 104 Спасибо за внимание!
