ДИАГНОСТИКА ПЕРОКСИСОМНЫХ НАРУШЕНИЙ У ДЕТЕЙ

И.С. Мамедов, Ю.А. Смолина, В.С. Сухоруков
НИЛ общей патологии ФГУ МНИИ
педиатрии и детской хирургии
1

катаболизм полиаминов

«пероксисомное дыхание»

синтез плазмологенов

β-окисление длинноцепочечных (С24-26 и более)и
разветвлённых жирных кислот (С 26 и более)

биосинтез эфиросодержащих липидов

α-окисление жирных кислот

детоксикация глиоксилата
2
Критерии разделения:
 морфологический: отсутствие или
наличие пероксисом в печени
 биохимический:
нарушение одной или
нескольких функций пероксисом
3
1-ая группа
Пероксисомы в печени отсутствуют или их количество значительно
уменьшено, полное нарушение биогенеза.

Синдром Целльвегера (СНЦ)

Инфантильная форма болезни Рефсума

Неонатальная адренолейкодистрофия

Точечная остехондродисплазия

Ряд форм амавроза Лебера

Гиперпипеколовая ацидемия

Ризомиелическая точечная хондродисплазия (РТОХД) первого
типа
4
2-ая группа
Нарушение нескольких биологических функций, нормальное
количество пероксисом в печени

целльвегероподобный синдром

синдром недостаточности D-бифункциональных белков

синдром псевдоцелльвегера
5
3-ая группа
Нарушение одной биологической функции нормальное количество
пероксисом в печени

Пероксисомные нарушения β-окисления:
X-сцепленная адренолейкодистрофия (Х-АЛД)
Недостаточность ацил-КoA-оксидазы
Недостаточность D-бифункциональных белков
Недостаточность белка, транспортирующего стирол (СТБ)
Недостаточность 2-метил-ацил-КоА-редуктазы (МАКoАР)

Нарушения биосинтеза эфиросодержащих липидов:
РТОХД второго типа
РТОХД третьего типа

Нарушения α-окисления фитановой кислоты:
Болезнь Рефсума

Нарушение детоксикации глиоксилата
Гипероксалурия первого типа
6
ДЦЖК
Пристановая к-та
Фитановая к-та
Спектр нарушений Целльвегера (СНЦ)
↑
N-↑*
N-↑*
Ризомиелическая точечная
хондродисплазия (РТОХД) первого типа
N
N-↑*
N-↑*
X-сцепленная адренолейкодистрофия
↑
N
N
Недостаточность ацил-КoA-оксидазы
↑
N
N
Недостаточность D-бифункциональных
белков
↑
N
N-↑*
Недостаточность белка,
транспортирующего стирол (СТБ)
N
N-↑*
N-↑*
Недостаточность 2-метил-ацил-КоА
редуктазы (МАКoАР)
N
N-↑*
N-↑*
РТОХД второго типа
N
N
N
РТОХД третьего типа
N
N
N
N
N-↓
N-↑*
N
N
N
Пероксисомные нарушения β-окисления
Нарушения биосинтеза эфиросодержащих липидов
Нарушения α-окисления фитановой кислоты
Болезнь Рефсума
Нарушение детоксикации глиоксилата
Гипероксалурия первого типа
7
 Фитановая
кислота (C19H39COOH)
 Пристановая
кислота
 Гексакозаеновая
кислота (С26:0)
 Лигноцериновая
кислота (С24:0)
 Бегеновая
кислота (С22:0)
 C24/C22
 C26/C22
8
9
10
11
Agilent 6850/5375
12
Shimadzu GS 17A/GSMS-QP 5050
13
Rf/DC Voltage
14
Материалом для исследования служит плазма,
собранная аспирацией венозной крови как детей, так и
взрослых пациентов.
Для длительного хранения, чтобы исключить
изменения уровней содержания исследуемых
соединений, плазма замораживается.
Большое число образцов плазмы пациентов,
поступающих в лабораторию из различных клинических
баз РГМУ, объединяются и тщательно перемешиваются.
Для каждой серии анализа используются образцы,
полученные из смеси плазмы одной выборки.
15
1)
Кислотный гидролиз
2)
Щелочной гидролиз
3)
Экстракция гексаном
4)
Упаривание эстрагента в токе гелия
5)
Дериватизация ацилирующим
реагентом MBTFA
16
17
Концентрации ДЦЖК в плазме контрольных
образцов, в мкмоль/л .
Определяемые
соединения
Среднее значение
5-95% доверительный
интервал
С22:0
75
40-119
С24:0
56
33-84
С26:0
0,79
0,45-1,32
C24/С22
0,75
0,57-0,92
C26/С22
0,01
0,01-0,02
Верхние эталонные значения фитановой и пристановой
кислот для людей в возрасте 2-х лет и более:
фитановая кислота – 10 мкмоль/л
пристановая кислота – 3 мкмоль/л
18
СС26:0
мкмоль/л
14
3-12
12
10
8
6
2-4
4
2
1,1-2,9
0,45-1,32
0
норма
С-м Целлвегера X-АЛД, мужчины X-АЛД, женщины
Рис. 1. Уровни содержания жирной кислоты С26:0 в плазме крови
пациентов с различными наследственными пероксисомными
заболеваниями и контрольной группы в мкмоль/л.
19
С24/С22
1.2
1
1,06
0,57-0,92
0,8
0.8
0.6
0.4
0.2
0
норма
X-АЛД, мужчины
X-АЛД, женщины
Рис. 2. Значение соотношения С24/C22 для пациентов с Хсцепленной адренолейкодистрофией и контрольной группы.
20
СФитановой к-ты
мкмоль/л
1500
1600
1400
1200
200-900
1000
800
600
400
200
10
0
норма
Болезнь Ревсума
РТОХД первого типа
Рис. 3. Уровни содержания фитановой кислоты в плазме крови
пациентов с болезнью Рефсума, РТОХД первого типа и контрольной
группы в мкмоль/л.
21



Нами показано, что концентрация длинноцепочечных
жирных кислот в плазме контрольной группы не
зависит от возраста в то время, как для фитановой и
пристановой кислот корреляция прослеживается в
определённой степени.
Верхний эталонный уровень для фитановой кислоты,
равен 10 мкмоль/л, тогда как для пристановой - 3
мкмоль/л для пациентов в возрасте от 2-х лет и более.
Совместный анализ длинноцепочечных жирных кислот,
пристановой и фитановой кислот является
действенным методом для выявления больных с
пероксисомными нарушениями, что особенно важно на
ранних стадиях заболевания.
22