"Карфентанил, флупертин, специфика потребления

Карфентанил, флупиртин,
специфика потребления
наркотических, психотропных
веществ и лекарственных средств
в подростковой среде в Псковской
области
Врач-лаборант химико-токсикологической
лаборатории
ГБУЗ «Наркологический диспансер
Псковской области»
Никитина Наталья Михайловна
каннабиноиды
фенилалкиламины
опиаты (героин, меторфан) и опиоиды (метадон)
Вещества фентанилового ряда (карфентанил, 3-метилфентанил)
Лекарственные вещества для немедицинского применения
каннабимиметики
Опыт внедрения методик обнаружения новых наркотических и
психотропных веществ в биологических жидкостях и образцах волос
методами ГХ-МС в Псковской области
Химико-токсикологическая
лаборатория Псковской области
Опыт внедрения методик обнаружения новых наркотических и
психотропных веществ в биологических жидкостях и образцах волос
методами ГХ-МС в Псковской области
В рамках исполнения межведомственного Приказа по
Псковской области Государственным управлением
образования Псковской области РФ, Псковским областным
центром психолого-педагогической реабилитации и
коррекции «Призма» и Наркологическим диспансером
Псковской области было организовано тестирование
подростков в возрасте 15-17 лет на наличие в биологических
объектах ПАВ и их метаболитов с целью
выявления
немедицинского потребления наркотических
и психотропных веществ.
В ноябре 2011г. было проведено пробное
тестирование, где обкатывались два варианта
проведения процедуры отбора проб биологического
материала и проведены его исследования.
2 варианта пробоотбора: с выездом в учебное заведение и в стенах
наркологического диспансера.
В 2012-2013 гг. тестирование уже приобрело массовый характер.
Тестирование подростков Псковской области на содержание
наркотических веществ и их метаболитов
Тестирование проводилось в
2011-2013 гг.:
• общеобразовательные
школы г. Пскова и области
• вечерние школы
• профтехучилища
• высшие учебные заведения
По результатам первого года тестирования наиболее
удобным был выбран вариант проведения процедуры
тестирования с выездом бригады в учебные заведения.
Тестирование подростков Псковской области на
содержание наркотических веществ и их метаболитов
Вся процедура непосредственно
тестирования организована в
соответствии с Приказом МЗ и СР
РФ №40 от 2006г. и включает в себя
следующие операции:
1) пробоотбор,
2) исследования мочи на предмет фальсификации,
3) предварительные исследования с
использованием групповых методов анализа на
наркотические и лекарственные вещества (ИХА),
4) подтверждающие исследования методом
газовой хроматографии с масс-селективным
детектированием – при получении
положительных результатов.
Тестирование подростков Псковской области на
содержание наркотических веществ и их метаболитов
ПРАВИЛА ПРИЕМА МОЧИ НА ИССЛЕДОВАНИЕ
(согласно приказу МЗ РФ № 40)
1. Анализ собирается непосредственно в стенах
диспансера в чистый сухой пластмассовый желательно
градуированный сосуд с широким горлом объемом 50
– 100 мл (не менее половины стакана).
2.
Отбор
проводится
под
наблюдением
сопровождающего
лица
или
персонала
для
предупреждения фальсификации пробы.
3.
В
течение
первых
5
минут
проводится
предварительное исследование мочи по следующим
показателям:
Температура (33оС – 37оС)
рН (4 – 8 ед. рН)
Относительная плотность (1,008 – 1,025)
Отсутствие белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты
Общий осмотр мочи на присутствие посторонних
примесей, мути, обильной неопадающей пены и др.
Запах
Тестирование подростков Псковской области на содержание
наркотических веществ и их метаболитов
В процессе работы были выявлены следующие
варианты фальсификаций:
1) Подмена мочи.
2) Разбавление образца мочи.
3) Концентрирование мочи
4) Употребление продуктов, содержащих
аскорбиновую кислоту
5) Добавление инородных веществ в образец мочи.
При проведении тестов на фальсификацию мочи необходимо
учитывать возрастные физиологические особенности
молодого организма. Так, при не полностью
сформировавшейся функции клеточных мембран у
подростков возможно обнаружение белка в моче после
физических нагрузок.
Тестирование подростков Псковской области на
содержание наркотических веществ и их метаболитов
Сравнительный анализ результатов тестирования
подростков Псковской области
Проведение скрининговых исследований методом
иммунохроматографии (ИХА)
Преимущества:
Недостатки:
• Простота метода (нет необходимости в
дополнительных реагентах и приборах, все
необходимые иммунореагенты для анализа
нанесены заранее на мембрану).
• Определение может быть проведено
неподготовленным персоналом в
нелабораторных условиях.
• Быстрота метода.
• Визуальная детекция результатов для
качественного или полуколичественного
анализа
• неселективность метода (групповые
реакции)
• чувствительность к изменениям
биохимических показателей мочи
(несрабатывание тест-полосок,
получение ложноотрицательных
результатов)
• кросс-реактивность (получение
ложноположительных результатов)
• ограниченное количество аналитов, на
которые разработаны наборы
Необходимость разработки скрининговых
методов анализа на основе экспертных
подтверждающих физико-химических
методов вызвана многообразием
химических соединений, которые при
определенных обстоятельствах могут
стать источником одурманивания и
отравлений. Круг этих веществ постоянно
расширяется по мере синтеза новых
соединений.
 Комбинированный метод – хромато-масс-спектрометрия –
рассматривается как два раздельных метода, дающего возможность
использовать его не только в качестве скринингового, но и экспертного
подтверждающего .
 С помощью хроматографии происходит разделение смеси на
отдельные компоненты. С помощью масс-спектрометрии проводят
обнаружение и количественное определение разделенных веществ
смеси.
Тестирование подростков Псковской области на
содержание наркотических веществ и их метаболитов
Случай 1. Синтетические каннабимиметики
Cилильное производное метаболита синтетического каннабимиметика
РВ22F на хроматограмме, снятой в режиме полного сканирования,
идентифицированное по характеристическим ионам. Время удерживания
метаболита – 14.26 мин и его масс-спектр
Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра
существующего алгоритма проведения тестирования
Случай 2. Баклофен
Хроматограмма, снятая в режиме полного сканирования, и производное
баклофена на ней, идентифицированное по характеристическим ионам.
Время удерживания баклофена – 10.4 мин и его масс-спектр
Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра
существующего алгоритма проведения тестирования
Случай 3. Дицикломин (триган-Д)
Хроматограмма мочи, снятая в режиме полного сканирования, после
употребления таблеток «Триган Д». Время удерживания парацетамола –
10.2, дицикломина – 12.16. Масс-спектр дицикломина
Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра
существующего алгоритма проведения тестирования
Случай 4. Прегабалин + флупиртин
Хроматограмма мочи, снятая в режиме полного сканирования, после
употребления таблеток. Время удерживания прегабалина – 7.17, флупиртина
– 16.93. Масс-спектры флупиртина и прегабалина
Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра
существующего алгоритма проведения тестирования
Случай 5. Карфентанил
Хроматограмма исследуемой пробы (SCAN) по экстрагированным
ионам, соответствующим карфентанилу. Вещества идентифицированы по
временам удерживания и по масс-спектрам. Пик с временем удерживания
20.019 мин соответствует карфентанилу
Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра
существующего алгоритма проведения тестирования
Методика пробоподготовки и
инструментального ГХ-МС анализа
Аппаратура ГХ-МС. Agilent 7820/5975 с колонкой НР-5MS.
Условия анализа: газ-носитель гелий, скорость потока через колонку 2 мл/мин.
Программа: 500С(0.5мин) 990С /мин 1000С (1мин) 150С/мин 280 0С Объем вводимой
пробы - 1,0 мл
ЖЖЭ
3-4г хлорида натрия, карбонатного буфера и
смесь растворителей
(гептан:изопропанол:дихлорметан) , либо
(изооктан:этилацетат), вносили в стеклянный
флакон на 10 мл.
30 мкл внутреннего стандарта (дифениламин
в ацетонитриле) и 3 мл исследуемой мочи,
либо ее же после щелочного гидролиза.
Экстрагировали в течение 10-15 мин.
Центрифугировали в течение 5 минут при 4
000 об/мин.
Органическую фазу отделяли, упаривали.
К сухому остатку добавляли 500 мкл
этилацетата, либо дериватизировали, и
анализировали
ТФЭ
Кондиционирование колонки
3 мл метанола
3 мл фосфатного буфера (рН = 6,0)
5 мл отцентрифугированного образца мочи
или волос после гидролиза
Промывка колонки
3 мл ацетата натрия (рН = 4,5)
1,5 мл метанола
Элюирование аналита
3 мл смеси дихлорметан / изопропанол /
аммиак (78/20/2)
Выпаривали пробу. К сухому остатку
добавляли 500 мкл этилацетата, либо
дериватизировали и анализировали.
Сравнение биобъектов
Двойная экстракция волос для ГХ-МС анализа
Проба волос или ногтей
50 мкл
Отмывка от внешних загрязнений
Взвешивание и измельчение
+ 1,5 мл метанола в
ультразвуковой бане
Экспозиция 6-7 часов
Экстракт переносится в
виалу, упаривается при 40оС,
реэкстрагируется в 100 мкл
этилацетата
Осадок + 2 мл 2,5н раствора NaOH
при 40оС в течение 12 часов
ТФЭ
Экстракт переносится в
виалу, упаривается при 40оС,
реэкстрагируется в 100 мкл
этилацетата
1 мкл экстракта закалываем в
хроматограф
Опыт внедрения методик обнаружения новых наркотических и
психотропных веществ в биологических жидкостях и образцах волос
методами ГХ-МС в Псковской области
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ !