Слайд 1 - Службе крови

1995
МЕЖДУНАРОДНАЯ РАБОЧАЯ ГРУППА ВОЗ ПО
СТАНДАРТИЗАЦИИ МЕТОДОВ ГЕНОМНОЙ
АМПЛИФИКАЦИИ ДЛЯ ТЕСТИРОВАНИЯ КРОВИ И ЕЕ
ПРОДУКТОВ НА ВИРУСНУЮ И БАКТЕРИАЛЬНУЮ
БЕЗОПАСНОСТЬ
WHO INTERNATIONAL WORKING GROUP ON THE
STANDARTIZATION OF GENOMIC AMPLIFICATION
TECHNOLOGIES FOR THE VIROLOGICAL SAFETY TESTING
OF BLOOD AND BLOOD PRODUCTS (SoGAT)
NAT – NUCLEIC ACIDS AMPLIFICATION TECHNOLOGY
Концентрации вирусов в международных
NAT-стандартах ВОЗ
1)HIV-1
100 000 МЕ/мл
2)HCV
100 000 МЕ/мл
3)HBV
1 000 000 МЕ/мл
4)B19
1 000 000 МЕ/мл
5)HAV
100 000 МЕ/мл
НОВОЕ НАЗВАНИЕ
SoGAT
Standartization of qualitative and
quantitative nucleic acids tests to
contribute to the safety of blood,
tissues and organs with regard to
blood borne pathogens
НОВЫЕ ЦЕЛИ SoGAT
(обсуждены и одобрены участниками 16-ой конференции
SoGAT 1-3.07.2003)
1. Международные стандарты на все патогены;
2. Международное сотрудничество по воспроизводимости;
3. Обмен информацией по научным и техническим аспектам в
контролирующих организациях, академических лабораториях,
производствах препаратов крови и диагностических наборов,
диагностических лабораториях, банках крови;
4. Новые поколения реагентов и стандартов;
5. Стандарты для тестирования новых патогенов;
6. Мультиплексное тестирование и микрочипы;
7. Корреляция между концентрацией нуклеиновых кислот и
инфекционностью;
8. Методы для оценки уменьшения патогенов.
Калибровка национального NATстандарта на HCV по международному
ВОЗ-стандарту 98/790 и Италии
(Karen Cristiano, SoGAT XV, 2002, Афины)
Mean log10IU/ml=4.93
Mean log10IU/ml=3,66
Istituto Superiore di Sanita, 2002
Определение лимита детекции HCV-RNA в национальном
Центре крови Италии при помощи рабочего NAT- стандарта
на HCV с титром 1698МЕ/мм для 4 способов экстракции
РНК
Экстракция Амплификация
нуклеиновых (тест-система)
кислот
Лимит
детекции
Qiagen
Roche 1.0
85 ME/мл
(534 г экв/мл)
Organon
Roche 1.0
42 ME/мл
(267 г экв/мл)
In house
Roche 1.0
17 ME/мл
(107 г экв/мл)
Roche 2.0
Roche 2.0
7,9 ME/мл
(50 г экв/мл)
M. Testi et. al, VI Eur. Congr. of ISBT. May 9-13, 1999, p.73
Остаточный риск (число инфицированных донаций
на миллион) трансфузионной передачи ВГС, ВИЧ-1
и ВГВ после скринирования крови или плазмы
Остаточный риск
Вирус
До введения NAT
После введения NAT
Плазма
Цельная кровь
Плазма
Цельная кровь
ВГС
33-36
10
не определялось
1.6-3.2
ВИЧ-1
1.5
2
не определялось
1.3-1.4
ВГВ
19-256
6.3-15
не определялось
6.7
Из статьи Tabor E. and Epstein J.C. NAT screening of blood and plasma
donations: evolution of technology and regulatory policy. – Transfusion 2002,
v.42, p.1230-1236.
NAT в национальной службе
крови Англии
Roger Eglin, XVI SoGAT, 03.07.2003
01/04/1999 – 30/06/2001
Donor type
no. of donations tested
anti-HCV (+) NAT (+)
anti-HCV (+) NAT (-)
Anti-HCV (+) NAT not tested
anti-HCV pos
anti-HCV (-) NAT (+)
Repeat donors New donors
1/7/01 - 31/03/03
Repeat donors
New donors
5 117 292
46
31
9
86
587 961
223
75
22
320
3 938 618
25
5
6
36
440 735
165
34
3
202
2
1
5
0
Преимущество технологиии минипул-генотестирования
для вируса гепетита В по сравнению с
иммунохемилюминесцентным* определением HbsAg
Minegishi et al Japanese Red Cross
Vox sang 2003 84:287
W.H.Gerlich, XVI SoGAT, 03.07.2003, PEI
• >11 million donations tested in pools of 50
• Prescreened with RPHA for HBsAg* and high anti-HBc
• 181 HBV DNA positive donations found (early phase)
-----------------------------------------------------copies/mL**
N
HBsAg* neg.
<100
14
13
100 – 1000
28
24
1000 - 104
59
26
>104
80
6
total
181
76
-----------------------------------------------------*Abbotts Prism
*ca 13500 positive **Taqman
Sixth Engelhardt conference on molecular biology, 2003
Diagnosis of Viral Hepatitis in the Blood
Transfusion Services: NAT or NOT?
Howard A .Fields., Ph.D. Centers for Disease Control and
Prevention (CDC)
NAT or NOT?
Are We Going to Live in a NAT World?
It Depends:
For resource-adequate regions: YES
For resource-challenged regions: NAT NOT YET
NAT в отличие от ИФА является прямым и
количественным методом и позволяет
концентрировать патогены путем:
1. связывания моноклональными антителами
2. гибридизационного захвата
3. фильтрации
4. центрифугирования
5. увеличения объема материала для экстракции ДНК или РНК
6. использования многокопийных генов, например, гена 16S рРНК
Материал для NAT-тестирования может храниться:
1. в лизирующем растворе
2. высушенном состоянии (на фильтровальной бумаге)
3. в замороженном состоянии
NAT позволяет определять:
1. концентрацию патогена в крови
2. генотип патогена (штамм)
3. возможно мультиплексное тестирование
нескольких патогенов