На правах рукописи ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ИММУННО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ
реклама
На правах рукописи БЕЛЯЕВА Светлана Николаевна ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ИММУННО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ БИОКОРРЕКТОРА ТИМОГЕНА Специальность: 03.00.13 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Белгород 2009 2 Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор Безбородов Николай Васильевич Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Семенютин Владимир Владимирович кандидат биологических наук Амельченко Ирина Анатольевна Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» Защита состоится «____» _________ 2009 г., в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Россия, Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова 1; тел. /факс (4722) 39-22-62. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белгородской государственной сельскохозяйственной академии. Автореферат разослан «____» __________ 2009 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Ю.Н. Литвинов 3 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Из всех отраслей животноводства, птицеводство наиболее рентабельно и высокопродуктивно, а Белгородская область – одна из лидирующих областей РФ по объему производства птицеводческой продукции (Огурцов А., 2007; Родионов В., 2008; Фисинин В.И., 2008; Шапочкин В., 2009). Несмотря на достигнутые высокие показатели, в промышленном птицеводстве остается много нерешенных проблем. Важнейшие из них – снижение стрессфакторов, вызывающих иммунодепрессивное состояние птицы, и производство экологически чистой продукции, решение которых позволит получить качественную продукцию и одновременно повысит экономическую эффективность отрасли. Как известно, в промышленном птицеводстве при выращивании цыплят-бройлеров проявляется высокая частота вторичных иммунодефицитных нарушений, которые осложняются возрастными (физиологическими) иммунодефицитами (Болотников И.А., 1983; Барабина М.Т., 1996; Джавадов Э.Д., 2003; Карпуть И.М., 2005; Mazurkiewicz M., 2005 и др.). В последние годы эффективно ведется поиск профилактических мероприятий, направленных на повышение продуктивности и резистентности сельскохозяйственной птицы. Сохранить и даже повысить ее можно, проводя коррекцию иммунодефицитных состояний организма птицы, за счет применения препаратов из группы биокорректоров, способных за короткое время активизировать неспецифическую резистентность организма и оптимизировать обменные процессы. К числу таких средств относится биокорректор Тимоген®, состоящий из глутаминовой кислоты и триптофана. Цель и задачи исследований. Целью исследований было изучение механизма действия и определение эффективности применения глутамил-триптофанового комплекса при активизации функциональных связей иммунной системы и адаптационно-метаболических процессов у цыплят-бройлеров в период выращивания, направленных на повышение их сохранности и продуктивности. Для достижения данной цели были поставлены на разрешение следующие задачи: исследовать иммунологическую реактивность цыплят-бройлеров в процессе роста и развития, до и после введения тимогена; исследовать морфологические и биохимические показатели крови цыплят, характеризующие уровень обменных процессов и адаптационнометаболический гомеостаз, до и после применения тимогена; выявить характер гистоморфологических изменений в иммунокомпетентных органах цыплят – тимусе, бурсе и селезенке, отражающих их функциональное состояние после применения тимогена; определить рациональный способ применения тимогена в промышленном птицеводстве для повышения сохранности и продуктивности цыплят-бройлеров. Научная новизна. Результаты исследований дополняют и расширяют имеющиеся представления о механизмах развития функциональной системы иммунитета и гемодинамики цыплят-бройлеров, что дает возможность выявления дополнительных критериев, характеризующих состояние птицы. Впервые комплексными исследованиями изучены иммунно-биохимические изменения, характеризующие процессы адаптации у клинически здоровых цыплят-бройлеров после внутримышечного и перорального введения синтетического биокорректора тимогена. Результаты проведенных исследований значительно расширяют 4 существующие представления о механизмах пептидной регуляции и становлении гомеостаза у цыплят-бройлеров в период их промышленного выращивания. Теоретическая и практическая значимость. На основании результатов исследований дано научное и практическое обоснование по применению синтетического тимогена в промышленном птицеводстве для профилактики и снижения иммунодефицитного состояния цыплят-бройлеров, повышения их сохранности и продуктивности в процессе выращивания. Разработан доступный групповой метод обработки птицы, повышающий устойчивость организма к неблагоприятным факторам внешней среды – выпаивание 0,01% р-ра тимогена в критические периоды развития цыплят, что обеспечивает повышение резистентности организма. Установлены ростостимулирующая и профилактическая эффективность тимогена в процессе выращивания цыплятбройлеров. Положения, выносимые на защиту 1. Глутамил-триптофановый комплекс (тимоген) активизирует функциональную активность клеточного иммунитета (неспецифического и специфического) в процессе постнатального роста и развития цыплят-бройлеров. 2. Коррекция адаптационно-метаболических процессов у клинически здоровых цыплят, после воздействия синтетического тимогена, способствует повышению уровня естественной резистентности организма. 3. Картина морфологических и гистоструктурных изменений в центральных (тимус и бурса) и периферических (селезенка) иммунокомпетентных органах подтверждает биокорригирующее влияние тимогена на морфофункциональное развитие органов иммуногенеза. 4. Разработанный новый доступный групповой метод повышения устойчивости организма птиц к неблагоприятным факторам внешней среды, путем выпаивания 0,01% р-ра тимогена в критические периоды развития цыплят-бройлеров, обеспечивает повышение сохранности и продуктивности птицы. Апробация работы Материалы и результаты полученных исследований представлены на XII и XIII междунар. научно-производственных конференциях «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», г. Белгород, 2008, 2009 гг.; на междунар. научной конференции «Молекулярные механизмы адаптации», г. Махачкала, 2008 г.; на II Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека», г. Кишинев, 2008 г.; во II и III этапе Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди аспирантов и молодых ученых ВУЗ Минсельхоза РФ, г. Белгород, 2008, 2009 гг.; г. Москва, 2009 г.; на конференции молодых ученых ЦФО, г. Калуга, 2009 г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 статей. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах печатного текста. Список литературы включает 271 отечественных и 88 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 16 рисунками. 1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса «Росс-508» и «Хаббард F-15» в течение всего цикла выращивания (42 дня), подобранные по принципу пар-аналогов в группы. 5 Всего в опытах было использовано около 60 тыс. клинически здоровых цыплятбройлеров. Исследования проходили в два этапа: в лабораторных – первая серия и производственных условиях – вторая серия опытов, алгоритм которых представлен на рис. 1. Основные лабораторные исследования проведены на факультете ветеринарной медицины во Вроцлавском университете наук о жизни и окружающей среде, Польша (Wroclaw University of Environmental and Life Sciences); на факультете ветеринарной медицины в Белгородской государственной сельскохозяйственной академии; в аккредитованной испытательной лаборатории ФГОУ ВПО БелГСХА; в ФГУ «Белгородской Межобластной ветеринарной лаборатории» (вирусологический и гистологический отделы). В качества средства активизирующего адаптационно-иммунологические процессы в организме цыплят-бройлеров использовали биокорректор тимоген (ТУ 10.07.169-91), который представляет собой синтетический дипептид, иммуномодулирующей направленности действия (С12H2N3O5Na). В первой серии опытов (виварий Вроцлавского университета наук о жизни и окружающей среде) объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса «Росс-508» с суточного до 42 дня жизни, которые в 5-ти суточном возрасте по принципу пар-аналогов были разделены на опытные – II, III, IV и контрольные – Iк, IIa, IIIa, IVa группы цыплят. Условия содержания, кормления и поения (свободный доступ) соответствовали общепринятым зоогигиеническим стандартам технологии. Целью лабораторного опыта было изучение становления иммунно-биохимического гомеостаза у птиц и сравнение разных способов применения 0,01% р-ра тимогена. Для этого препарат вводили птице различными методами (парентерально, внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела птицы и перорально в дозе 0,1 мл/голову) и в разные периоды онтогенеза c учетом возрастных (физиологических) иммунодефицитов на 5-е и 15-е сутки выращивания, в течение 10 дней. Цыплята «Iк» группы (n=25) служили общим контролем для всех групп. Цыплятам «II» (n=25) группы вводили 0,01%-ный раствор тимогена внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела с 5-го по 14-й день жизни в течение 10 дней; «III» (n=20) – внутримышечно с 15-го по 24-й день жизни; «IV» (n=20) – перорально с 15-го по 24-й день жизни в дозе 0,1 мл/гол. Кроме того, для экспериментальных групп были созданы дополнительные группы контроля – IIa (n=12), IIIa (n=12) и IVa (n=12), цыплятам которых вводили 0,9%-ный физиологический раствор, в той же дозе и тем же способом, что и 0,01%-ный р-р тимогена для опытных групп. Для исследований у птицы (n=6) брали кровь из подкрыльцовой вены (v. cutanea ulnaris) на 5-е; 11-е; 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42 сутки эксперимента, а так же тимус, бурсу и селезенку после декапитации птицы. Количество Т-лимфоцитов с фенотипами TCR, CD3, CD4 и СD8 и В-лимфоцитов – СD19 определяли методом проточной цитофлюориметрии на цитометре FACSCalibur фирмы «Веcton Dickinson», США, c программным обеспечением CellQuest при помощью моноклональных антител к маркерам клеточной поверхности, меченных флуорохромами – флуоресцеин изотиоционатом (FITС) и фикоэритрином (PE) (Воронин Е.С., 2002; Zeromski J., 1996). Количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобин определяли на гематологическом автоанализаторе с программным обеспечением (Vet 2.3) для животных Cell-Dyn 3500 и ABC PACK LMGE for animal blood, а гематокрит – микрокапиллярным методом. Содержание отдельных видов лейкоцитов путем подсчета лейкограмм маз- 6 ков крови. Исследование окрашенных по Паппенгейму мазков крови цыплят проводили черырехпольным методом при подсчете 100 лейкоцитов на микроскопе Микмед-1 ОАО «Ломо», используя объектив с масляной иммерсией (Симонян Г.А., Хисамутдинов Ф.Ф., 1995; Campbell T. W., 1988). Уровень глюкозы в плазме крови птицы определяли на автоматическом биохимическом анализаторе МAXMAT унифицированным тестом. Общий белок определяли на универсальном спектрофотометре ВioTek с помощью набора реактивов фирмы Sigma-Aldrich; белковые фракции – в сыворотке крови методом электрофореза на бумаге (Кондрахин И.П., 2004). Функциональные и иммунно-биохимичекие изменения у цыплят-бройлеров после применения биокорректора тимогена I СЕРИЯ ОПЫТА ТИМОГЕН II СЕРИЯ ОПЫТА (5–14-е сут.) II IIa Внутримышечно 0,1мл/кг массы птицы Контроль – в/м 0,9% р-р NaCI III (15–24-е сут.) IIIa Внутримышечно 0,1мл/кг массы птицы IV Энтерально 0,1мл/гол птицы Контроль – в/м р-р NaCI (15–21-е сут.) V Энтерально 0,1мл/гол. птицы NaCI IVa Контроль – энтерально р-р NaCI р-р NaCI Iк VIк Контроль – интактное поголовье птицы Контроль – интактное поголовье птицы Изучаемые показатели Оценка иммунного статуса организма птицы Морфологические показатели крови цыплят Биохимические исследования крови цыплят Показатели естественной резистентности птицы Гистоморфологические изменения в иммунокомпетентных органах цыплят 7 Продуктивные показатели цыплят-бройлеров в период выращивания ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ Рис. 1 – Алгоритм исследований Сохранность поголовья учитывали путем ежедневной оценки клинического состояния птицы. Живую массу тела и среднесуточные приросты цыплят определяли путем индивидуального взвешивания, используя весы AXIS B 15W (max=15 kg, min=20 g, e=5 g), в суточном возрасте и далее на 5-е, 10-е, 15-е, 20-е, 25-е, 30-е, 35-е и 42-е сутки выращивания; а массу иммунокомпетентных органов птицы – взвешиванием на электронных весах Wag I Elektroniczne 53-143 RAR Wag-Dolnyśląsk (max=36 g, min=2mg, e=1 mg) на 5-е, 15-е, 26-е и 42-е сутки исследований. Индексы тимуса, бурсы и селезенки определяли по отношению массы органа к массе тела умноженное на 1000 (Апатенко В.М., 1988). Во второй серии опытов, проходивших в производственных условиях птицефабрики ООО «Лопанское» Белгородского агрохолдинга «БЭЗРК-Белгранкорм» Белгородской области, объектом исследования были цыплята-бройлеры кросса «Нubbard F-15», из которых были сформированы две группы по принципу параналогов, из суточных цыплят одной партии, вывода и кросса: V – опытная группа (n=29200 гол.) и VIк – контрольная группа (n=29000 гол.). Условия содержания – напольное выращивание и кормление полноценным комбикормом по периодам выращивания (ГОСТ Р 51851-2001) были идентичными. В опытной группе цыплятамбройлерам применяли методом выпойки 0,01%-ный р-р тимогена в дозе 0,1 мл/гол/сут., в течение 7 дней, с 15-х по 21-е сутки откорма, дополнительно к основным лечебно-профилактическим мероприятиям, проводимых в хозяйстве. В контрольной группе тимоген не применяли. Учетный период наблюдений за цыплятами-бройлерами продолжался с суточного возраста до конца откорма (42-го дня). Целью второй серии опыта было определение эффективности применения и изучение биокорригирующих свойств тимогена в промышленном птицеводстве. Для исследований у птицы (n=6-10) брали кровь из подкрыльцовой вены (v. cutanea ulnaris) на 5-е; 11-е; 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42 сутки эксперимента; тимус, бурсу и селезенку после декапитации птицы на 42-е сутки опыта, которые фиксировали в 10%-ном нейтральном растворе формалина; грудные и ножные мышцы в конце откорма, на 42-е сутки. Форменные элементы (количество лейкоцитов и эритроцитов) определяли по стандартной методике, подсчитывая их в камере Горяева; гемоглобин крови – гемиглобинцианидным методом; количество иммуноглобулинов – нефелометрическим методом на фотоэлектроколориметре (цинк-сульфатный тест). Общий белок определяли в сыворотке крови по биуретовой реакции; белковые фракции сыворотки крови – методом электрофоретического фракционирования на бумаге (Кондрахин И.П., 2004). Фагоцитарную активность псевдоэозинофилов в крови цыплят определяли постановкой опсоно-фагоцитарной реакции в условиях in vitro по следующим показателям: процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число, используя отправные критерии по оценке естественной 8 резистентности с.-х. животных (Новосибирск, 2003). В качестве тест культуры для ОФР использовали E. coli. Гистологические препараты приготавливали по общепринятым методикам (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996), окрашивая их гематоксилин-эозином, и анализировали под сканирующим микроскопом «Микмед2» установки «Видео-тест. При гистоморфологических описаниях иммунокомпетентных органов у птицы учитывали отправные критерии, разработанные для определения иммуносупрессии и иммунодефицитов у птицы (Колоусова Н.Г., 1988). Серологические исследования на напряженность иммунитета цыплят (к болезни Ньюкасла) проводили на 15-е, 26-е, 35-е и 42-е сутки опыта: по 20 проб сыворотки крови цыплят-бройлеров из группы в РТГА (согласно утвержденным методическим указаниям по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации от 23 июня 1988г. № 988 Минсельхозпрод России). Сохранность поголовья учитывали путем ежедневной оценки клинического состояния птицы. Живую массу и среднесуточные приросты определяли при групповом взвешивании птицы по 100-300 голов на 1-е; 5-е; 10-е; 15-е; 20-е; 25-е; 30е; 35-е и 42 сутки выращивания цыплят-бройлеров. В конце откорма цыплят рассчитывали конверсию корма и индекс продуктивности (Тучемский Л.И., 2004). Качество полученной мясной продукции учитывали по химическому составу тушки (грудные и ножные мышцы) и белково-качественному показателю, используя методические рекомендации по определению качества мяса сельскохозяйственных животных и птицы (1982). Оксипролин в мясе определяли по Ньюмену и Логану с применением методики кислотного гидролиза мяса по Вербицкому. Триптофан в мясе определяли по методу Спайза и Чемберза в модификации Геллера (1958). Полученный цифровой материал обрабатывали статистически на ПЭВМ с использованием пакета программ Microsoft Office 2003. Достоверность полученных результатов исследований определяли методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990). Разницу в значениях считали статистически достоверной при *р<0,05 и менее. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Морфологические и иммунно-биохимические показатели крови цыплят после применения тимогена 3.1.1. Морфологические показатели крови Результаты исследований, в I и во II серии опытов, при изучении морфологического анализа крови показали, что наблюдается возрастная тенденция изменчивости показателей крови во всех группах: количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина изменяется закономерно: максимально возрастая к 26-35 суткам и понижаясь к 42-у дню исследований. Так, на 42-е сутки исследований количество лейкоцитов в опытных группах – II; III и IV – было достоверно выше по сравнению с Iк группой соответственно на 26,69%; на 30,27% и на 30,88%, а количество лимфоцитов – на 4%; 8,0 и 6,0%. Учитывая то, что в качестве гематологического показателя, характеризующего степень напряжения организма при выращивании, важно использовать отношение гетерофилов (псевдоэозинофилов) к лимфоцитам (Г/Л) как наиболее информативный и доступный показатель, позволяющий выявить зависимость антистрессовых реакций от силы раздражителя, представленные ниже данные (табл. 1) показывают, как меняется соотношение гетерофилов к лимфоцитам в процессе откорма, отражая 9 динамику адаптации (приспособления) птицы к окружающей среде содержания (Gross W.B., Siegel H.S., 1983; Graczyk S., 1999; 2005; Бусловская Л.К. с соавт., 2008; Ковалева О.Л., 2008; Ковтуненко А.Ю., 2008; 2009). Так, на 15-е сутки исследований, во IIa группе цыплят выявлено достоверное повышение данного показателя по отношению к остальным группам почти в 2 раза. На 21-е сутки исследований выявлено достоверное повышение соотношения Г/Л в IIIa и повышение в IVa группах цыплят. Таблица 1 – Соотношение Г/Л в периферической крови цыплят Группы , n=6 На 5-е сут. 0,19±0,0 1 0,19±0,0 8 0,20±0,0 7 0,23±0, 1 0,29±0, 2 II – – IIIa – – IV – – IVa – – Iк II IIa На 11-е сут. – Время исследований На На На 15-е 21-е 26-е сут. сут. сут. 0,25±0,0 0,31±0,1 – 6 8 0,23±0,0 0,25±0,0 – 3 6 На 35-е сут. 0,38±0,1 0 0,34±0,0 5 На 42-е сут. 0,45±0,0 4 0,45±0,0 7 – – – – 0,27±0,0 4 0,37±0,2 4 0,26±0,0 4 0,32±0,0 6 0,31±0,1 2 0,35±0,0 8 – – 0,28±0,0 4 0,39±0,0 9 – – 0,45±0,1 0,22±0,1 5 0,24±0,0 2 0,28±0,2 6 0,23±0,0 9 0,21±0,07 0,43±0,09 * 0,25±0,10 0,31±0,11 _____________________________ Здесь и далее: –*р<0,05 (внутри группы по отношению к предыдущему дню); –*р<0,05 (между изучаемыми группами по дням исследований). По-видимому, эффект воздействия тимогена на организм цыплят-бройлеров имеет «временной» характер, который определяет его действие: во II группе цыплят, которой применяли тимоген с 5-х по 14-е сутки выращивания, эффект сохраняется до 35-х суток (снижение с 0,34±0,05 до 0,45±0,07 при р<0,05), т.е. около 20 дней; в то время как во второй части I серии опыта, когда тимоген применяли как парентерально, так и энтерально, (с 15-х суток) действие препарата проявляется до конца периода откорма. Таким образом, проведенные морфологические исследования крови цыплят, получавших пептидный иммуномодулятор тимоген парентерально (0,1 мл/кг массы тела) и энтерально (0,1 мл/гол) в течение 10 дней в критические периоды развития (на 5-е и 15-е сутки развития) выявили положительное влияние тимогена на физиологическое состояние птицы. 3.1.2. Активизация специфических факторов клеточного иммунитета Проведенные исследования по иммунофенотипированию клеток периферической крови показали, что процентное соотношение Т- к В- лимфоцитам в 10 разные дни жизни цыплят оставалось постоянным в периферической крови и составило 65-85% по Т-лимфоцитам и 15-35% – В-лимфоцитам. Количество Т-лимфоцитов в разные периоды онтогенеза (на 15-е, 21-е и 26-е сутки исследований) было выше у опытных групп цыплят в отличие от их дополнительных контрольных групп от 14% до 100%, а по отношению к общему контролю от 2% до 17%. Повышение В-лимфоцитов наблюдали на 21-е и 26-е сутки исследований. По количеству Т- и В-лимфоцитов на 35-е сутки исследований между изучаемыми группами достоверных различий не выявлено. Незначительное понижение количества В-лимфоцитов наблюдаемое во второй группе цыплят, на 15-е сутки, можно, по-видимому, объяснить тем, что Т-клеточные цитокины, особенно те, которые стимулируют макрофаги, подавляют функции В-клеток. Количество цитотоксических или супрессорных клеток с фенотипом СD8+ на 15-е, 21-е, 26-е и 35-е сутки исследований во всех группах цыплят изменялись незначительно, имея тенденцию к снижению, в то время как хелперные клетки с фенотипом СD4+ достоверно увеличивались с 15-х к 35-м суткам исследований. Это подтверждает тот факт, что у молодых цыплят более выражены супрессорные функции лимфоцитов, а с возрастом возрастает их хелперная функция. Объективным тестом, позволяющим оценить функцию лимфоцитов, служит регуляторный индекс, определяемый как соотношение СD4/СD8 или хелперов/супрессорам, значения которого были выше у всех групп, которым дополнительно вводили дипептид от 9 до 40% (табл. 2). Установлено, что регуляторный индекс был наиболее сниженным на 21-е сутки исследований, особенно для IIIа и IVa групп цыплят, где снижение составило 39,21% и 29,11% по сравнению с III и IV группами цыплят (табл. 3). Увеличение количества СD4+ Т-клеток в опытных группах свидетельствует о повышении реактивности лимфоцитов и доминировании Т-хелперов, в то время как увеличение СD8+ Т-клеток свидетельствует о понижении лимфоцитарной активности клеток. Полученные данные, по снижению количеству Т-лимфоцитов и регуляторному индексу в IIIa и IVa дополнительных группах цыплят, свидетельствуют о наличии иммунодефицитного состояния у птиц, проявившемуся на 21-26-е сутки исследований, что согласуется с данные других исследователей, которые указывают на данный период как возрастной физиологический иммунодефицит (Барабина М.Т., 1996; Карпуть И.М., 2005; Mazurkiewicz M., 2005). Таблица 2 – Определение соотношения регуляторного индекса (CD4+/CD8+) в периферической крови цыплят Время исследований , сут. На 15-е На 26-е На 35-е Группы Опытная группа (тимоген) Контрольные Группы 5 – 14-е сут. II 2,52±0,5 3,15±0,2 3,70±0,5 IIa 2,09±0,1 – – Iк 2,52±0,4 2,81±0,9 3,24±0,2 Опытные группы (тимоген) 15 – 24 сут. III 2,48±0,5 2,32±0,3 4,29±0,6 IV 2,40±0,3 2,97±0,3 3,14±0,5 Контрольные группы IIIa 2,49±0,4 2,13±0,4 – Таблица 3 – Содержание cубпопуляций Т-лимфоцитов, IVa 2,32±0,4 2,28±0,6 – 11 на 21-е сутки исследований, в периферической крови цыплят Группы, n=3 Группа III Группа IIIа Группа IV Группа IVa СD4+ СD8+ 21,40±1,64* 8,56±0,51 (64,49% от IIIa) (17,74% от IIIa) 13,01±3,06 (39,21% от III) 25,39±2,42* (41,06% от IVa) 18,0±2,28 (29,11 % от IV) 7,27±1,79 (15,07% от III) 11,92±2,0 (21,26% от Iva) 9,83±1,78 (17,53% от IV) СD4+/CD8+ 2,50±0,21 1,79±0,33 2,13±0,51 1,83±0,27 Количество лимфоцитов периферической крови, экспрессирующей на своей поверхности рецептор TCR, у исследуемых опытных групп цыплят в разные периоды онтогенеза был выше, на 42-е сутки разница между опытными группами цыплят – II, III, IV и контрольной группой (Iк) составила – 47,5%; 45,26 и 41,09%. Приведенные данные подтверждают иммуномодулирующее действие тимогена на организм цыплят-бройлеров, у которых уровень Т- клеточного звена выражен активнее, а уровень естественных киллерных клеток выше, представленных рецепторами γδ цепи ТСR, обеспечивающих первую линию защиты против основных бактерий и выполняя важную роль в защите слизистых оболочек от инфекции. 3.1.3. Морфофункциональное развитие иммунокомпетентных органов цыплят Известно, что нормальный рост и развитие бурсы и тимуса – центральных органов иммунитета, – их функциональная активность в процессе постнатального онтогенеза, могут служить критерием оценки обмена веществ организма птиц и оптимальности течения биохимических процессов (Болотников И.А., 1987). Так, на 15 сутки исследований, масса центральных и периферических органов иммунитета была выше во II опытной группе, где применяли внутримышечно тимоген в дозе 0,1 мл/кг массы тела, по сравнению как с дополнительным контролем, так и с основным. На 26 сутки, через 10 дней после введения тимогена, лучшие показатели были в IV группе цыплят, которым препарат вводили энтерально с 15-х суток. На 42 сутки, в конце выращивания птицы, лучшие значения наблюдались в III и IV группах, где препарат применяли с 15-х суток откорма. Сопоставляя данные по функциональному состоянию иммунной системы птиц и массе иммунокомпетентных органов можно сделать вывод, что вес тимуса коррелирует с содержанием Тлимфоцитов в крови, а масса бурсы с количеством В-лимфоцитов, так как при увеличении у опытных цыплят массы данных органов, отмечается увеличение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови. 3.2. Иммунно-биохимические показатели адаптации птицы Для оценки биохимических показателей крови, характеризующих уровень обменных процессов и адаптационно-метаболический гомеостаз после применения биокорректора тимогена, определяли содержание глюкозы в плазме крови, уровень 12 общего белка и белковых фракций, количество иммуноглобулинов в сыворотке крови подопытных цыплят-бройлеров. Для всех исследуемых групп отмечено, что концентрация глюкозы во время роста и развития организма достоверно снижается к 35-м суткам – от 10 до 20% – (12 ммоль/л) и вновь повышается – на 10% – к 42-м суткам исследований (13-14 ммоль/л). Достоверных различий по содержанию глюкозы в крови цыплят между исследуемыми группами – Iк, II, IIa, III, IIIa, IV и IVa – не выявлено. Изменения в динамике белковых фракций, выявленных у птицы, показало, что уровень общего белка не отражает картину белкового обмена цыплят в разные периоды онтогенеза. Динамика белкового обмена в I серии опыта свидетельствовала о том, что в Iк группе цыплят количество общего белка имело тенденцию к достоверному увеличению с 5-х по 26-е сутки: с 17 г/л до 34 г/л, после чего его концентрация в крови оставалась неизменной – 33,22 и 33,65 г/л. У опытных групп (II, III и IV) наблюдалась иная закономерность: достоверное увеличение концентрации белка прослеживалась до конца откорма, что подтверждает более динамичное развитие птицы в этих группах. К 42 суткам выращивания разница между контрольной Iк группой цыплят (33,65±2,26 г⁄л) и опытными группами имела следующие значения: для II группы была выше на 14% (38,52±3,16 г⁄л); III – 20% при р<0,05 (40,23±2,09 г⁄л) и IV – 11% (37,47±5,60 г⁄л). Изучение белковых фракций показало наличие диспротеинемии, проявляющейся в увеличении количества альбуминов и снижении фракции глобулинов, в дополнительных контрольных группах, на 26-е сутки выращивания, что может свидетельствовать об иммунодефицитном состоянии организма птицы. В фракциях белка выявлено достоверное повышение α-глобулиной фракции, на 42-е сутки, в Iк группе цыплят по сравнению с опытными – II, III и IV, что может свидетельствовать о скрыто протекающих воспалительных процессах в организме и увеличении количества С-реактивного белка, церулоплазмина, α1-антитрипсина, α2макроглобин – ингибитора протеиназ, приводящих к снижению резистентности и, как следствие, сохранности птицы. Альбумины в I серии опыта были выше в опытных группах (II, III, IV) по отношению к общему контролю (Iк), на 42 сутки, соответственно на 17 и 28%, а во II серии – выше в V опытной группе на 26-е и 42-е сутки откорма на 11% по сравнению с VIк контрольной группой. По фракции γ-глобулинов, можно судить о морфологической зрелости и функциональной полноценности иммунореактивной ткани. Уровень γ-глобулинов, включающий в себя различные антитела сывороточных иммуноглобулинов (М, G, А) был снижен в дополнительных контрольных группах цыплят (IIa, IIIa и IVa) в I серии опыта, а во II серии опыта – на 26-е и 42-е сутки имел тенденцию к снижению в V опытной группе по сравнению с VIк группой цыплят на 17,36% и на 14,43%. Концентрация γ-глобулинов в VIк группе достоверно увеличилась с 15-х суток к 42-м суткам. Наблюдаемые изменения в контрольной VIк группе на 42-е сутки откорма – снижение количества альбуминов в сыворотке крови и увеличение γ-глобулинов свидетельствует о скрыто протекающих воспалительных процессах в организме птицы и нарушении работы внутренних органов. Данное предположение подтверждает и повышенный уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови, 13 указывая на повышенный синтез антител плазматическими клетками в ответ на присутствующий в организме антигенный раздражитель (табл. 4). Уровень β-глобулинов имел тенденцию к снижению в опытной V группе в течение всего периода наблюдений, максимально снижаясь на 26-е сутки по сравнению с контролем на 20,27% (р<0,05). Данное снижение фракции β-глобулинов после введения 0,01% раствора тимогена, свидетельствует об участии их в процессах по обезвреживанию токсинов, а также осуществлении транспорта биологически активных веществ (витаминов, ферментов), в том числе и трансферрина, основного белка транспортирующего железо и необходимого для нормальной фагоцитарной активности сыворотки крови, компонентов комплемента и иммуноглобулинов. Таблица 4 – Иммунно-биохимические показатели цыплят (II cерия опытов) ИммуноГлобулины, % Группы Общий глобулины Альбумины, , белок, , % α β n=10 г/л ед. 15-е сутки исследований (до введения тимогена) V 0,70±0,07 23,1±0,07 0 VIк 0,82±0,10 25,2±0,12 γ А/Г 0,9 49,34±1,23 14,39±0,86 12,09±0,31 24,18±1,04 48,84±1,37 14,80±1,16 11,07±1,03 25,29±0,85 7 0,9 5 21-е сутки исследований (6 дней от начала введения тимогена) V 2,58±0,31* * 29,3±0,21 * 42,54±1,14* * 16,81±0,61 * 13,77±0,76* 26,88±0,9 2 VIк 2,91±0,19* * 30,2±0,10 * 42,82±1,43* 18,32±1,02 * 13,78±1,04 25,08±1,1 7 0,7 4 0,7 5 26-е сутки исследований (11 дней от начала введения) V VIк 2,80±0,23 3,34±0,27 33,2±0,08 32,8±0,18 47,87±1,33 43,24±1,10 16,76±0,75 16,93±1,12 9,44±0,41** 25,93±0,7 2 11,84±0,68 27,99±1,2 3 0,9 2 0,7 6 42-е сутки исследований (27 дней от начала введения) V 4,50±0,35* * VIк 5,84±0,53* * 45,7±0,25** 43,16±1,55 * 4,74±0,26** 38,70±1,30 * 0,7 17,32±0,78 11,59±0,58 * 27,93±1,9 16,39±1,04 12,28±0,99 32,63±2,2 6 0,6 ______________________ – *р<0,05;**р<0,01 (внутри группы по отношению к предыдущему дню); – *р<0,05 (между изучаемыми группами по дням исследований). 3 14 Количество псевдоэозинофилов, участвующих в процессе фагоцитоза, по мере морфофункционального развития организма увеличивается, а, следовательно, достоверно повышается фагоцитарная активность, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число к третьей недели жизни цыплят, что отображают данные, представленные в таблице 5. Таблица 5 – Фагоцитарная активность крови цыплят-бройлеров Группы, n=10 ПФ, % ФИ ФЧ На 15-е сутки исследований (до введения тимогена) 42,09±2,82 1,97±0,41 2,59±0,27 40,97±2,31 2,0±0,61 2,74±0,60 На 26-е сутки исследований (11 дней от начала введения тимогена) Группа V 69,67±3,16*** 4,61±0,44** 6,55±0,37*** Группа VIк 68,0±3,31*** 3,56±0,51 5,13±0,55 На 35-е сутки исследований (20 дней от начала введения) Группа V 73,33±2,82 4,59±0,41 6,24±0,07 Группа VIк 70,0±2,31 3,43±0,54 4,73±0,63 На 42-е сутки исследований (27 дней от начала введения) Группа V 77,17±3,43 4,52±0,53 5,74±0,46 Группа VIк 67,0±1,61 3,51±0,29 5,21±0,34 ________________________ –**р<0,01; ***р<0,001 (внутри группы по отношению к предыдущему дню); –*р<0,05 (между изучаемыми группами по дням исследований). Группа V Группа VIк В результате активации ферментных процессов в фагоцитах опытной группы, происходит повышение фагоцитарной активности псевдоэозинофилов крови цыплят на 42-е сутки исследований. Фагоцитарная активность псевдоэозинофилов достоверно была выше в V группе на 15,18% по сравнению с VIк группой. Фагоцитарный индекс не выявил достоверных различий по исследуемым группам цыплят, но наблюдалась тенденция достоверного повышения фагоцитарного числа в V опытной группе цыплят по отношению к VIк контрольной: на 28% (26-е сутки), на 32% (35-е сутки) и 10,17% (42-е сутки). Полученные данные по функциональному состоянию фагоцитарной активности организма цыплят свидетельствует о том, что как агрессивность псевдоэозинофилов, так и их активность была выше в группе, где применяли тимоген. 3.4. Гистоморфологические изменения в центральных и периферических органах иммуногенеза цыплят-бройлеров Выявленные иммуноморфологические изменения в первичных и вторичных лимфоидных органах цыплят-бройлеров в контрольной группе и общая гистологическая характеристика их, позволили установить у цыплят патологическое состояние соответствующее иммунодефицитному состоянию третьей степени. По сравнению с контрольной группой (VIк) в фабрициевой сумке опытной группы (V) цыплят патологических изменений не наблюдали, на что указывала хорошо выраженная зональность фолликулов, наблюдаемая при морфофункциональной зрелости органа и активизация коркового вещества фолликулов. 15 Таким образом, цыплята, которым применяли 0,01%-ный р-р тимогена методом выпаивания в дозе 0,1 мл/гол/сут., с 15-х по 21-е сутки выращивания, имели нормальное морфофункциональное развитие органов иммуногенеза. 3.5. Химический состав, качество мяса и продуктивные показатели цыплят-бройлеров Установлено, что в обеих группах цыплят (V и VIк во II серии опыта) статистически выше было содержание сухого вещества и БКП в грудных мышцах в отличие от ножных, а содержание жира и оксипролина преобладало в последних, что подтверждает диетические свойства белого мяса птицы. Химический состав мяса бройлеров показал, что различий по содержанию влаги и сухого вещества между сравниваемыми группами цыплят не наблюдалось. Количество триптофана достоверно (р<0,05) было выше в V (опытной) группе, как в грудных, так и в ножных мышцах – 1,07±0,01% и 1,09±0,02% по сравнению с VIк группой (контрольной) – 0,98±0,01% и 0,98±0,02%, превышая ее соответственно на 9,18% и на 11,22%. По количеству оксипролина достоверных различий не обнаружено: в I группе было 0,24±0,01% в грудных мышцах и 0,48±0,03% в ножных, а в VIк группе – 0,23±0,03% и 0,45±0,03%. Таким образом, химический состав мяса цыплят-бройлеров, показал, что биологическая полноценность мяса птицы, выраженная белковым качественным показателем, была выше в опытной группе, где применяли 0,01% р-р тимогена, как в грудных, так и в ножных мышцах соответственно на 3,94 и 2,77%. Полученные результаты (табл. 6) по изучению влияния биокорректора тимогена на продуктивные показатели цыплят кросса Хаббард во II серии опыта показали, что до начала введения 0,01%-ного р-ра тимогена, птица в обеих группах развивалась примерно одинаково: средняя живая масса на 15-е сутки составила 400 г, а сохранность 98,49%. С возрастом статистически достоверно увеличиваются среднесуточные приросты цыплят, а, следовательно, и живая масса тела также пропорционально возрастает. Так, в V опытной группе цыплят повысилась сохранность на 4,3% по сравнению с VIк контрольной группой и живая масса на 8690 г к концу периода откорма. На 42-е сутки выращивания, живая масса цыплят в V опытной группе составила 2080 г и 95,3% сохранность. Для VIк контрольной группы живая масса составила 1994 г и 91% сохранность (рис. 2, 3). 2500 Живая масса, г V(опыт) 2000 1500 VIк (контроль) 1000 Норматив 500 0 1 5 10 15 20 25 30 35 42 сут. Рис. 2 – Динамика массы тела за период выращивания Сохранность, % 100 98 96 94 92 V (опыт) VIк (контроль) 16 Рис. 3 – Сохранность цыплят за период выращивания Таблица 6 – Продуктивные показатели цыплят бройлеров за период откорма Группы ПОКАЗАТЕЛИ V (опытная) VIк (контрольная) Посажено, гол. 29200 29000 Срок выращивания, дн. (с учетом спецубоя) 40 40 Падеж, гол. 1384 2630 Сохранность, % 95,3 91,0 Средняя живая масса, г 2080 1994 Среднесуточный прирост, г 51,0 48,9 Конверсия корма, к.ед. 1,78 1,81 Индекс продуктивности, % 278 251 Результаты производственных опытов показали, что увеличение сохранности на 4,3 % и прироста живой массы тела на 86-90 грамм в V группе цыплят, позволили повысить рентабельность производства мяса птицы: индекс продуктивности в V группе цыплят составил 278 против 251% в VIк группе. Экономическая эффективность применения биокорректора тимогена при промышленном выращивании цыплят-бройлеров составила 5,08 руб. на 1 рубль затрат. ВЫВОДЫ 1. Дипептидный комплекс (глутамил-триптофан) препарата Тимоген, следует рассматривать в качестве регуляторного пептида сложной адаптивной системы организма, определяющего реализацию приспособительных реакций на всех уровнях ее интеграции (от клеточного до организменного). 2. Иммуномодулятор тимоген, применяемый в физиологические периоды иммунодефицита у цыплят – на 5-е и 15-е сутки выращивания, в течение 10 и 7 дней, как парентерально в дозе 0,1 мл/кг массы тела, так и энтерально, в дозе 0,1 мл/гол/сут., показал биокорригирующее влияние на становление обменных процессов и функциональную активность иммунной системы. 3. Морфологические исследования крови цыплят свидетельствуют об активизации гемопоэза в кроветворных органах опытных групп за счет лимфопоэза, 17 достоверно отличаясь от контроля и нормальной реактивности организма цыплят. Показатели лейкограмм крови цыплят и соотношение гетерофилов к лимфоцитам (Г/Л) на 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42-е сутки исследований, свидетельствуют о наличии у цыплят, которым применяли синтетический дипептид тимоген, признаков устойчивости по отношению к адрено-гипофизарно-надпочечниковой системе организма и проявлении антистрессового действия препарата: а). при введении 0,1 мл/кг массы тела, с 5-х суток выращивания, парентерально, в течение 10 дней – Г/Л: 0,23; 0,25; 0,34 и 0,45 – до 35 дня откорма; б). при введении 0,1 мл/кг массы тела, с 15-х суток выращивания, парентерально, в течение 10 дней – Г/Л: 0,22; 0,27; 0,31 и 0,35 – до 42 дня откорма; в). при введении 0,1 мл/гол/сут., с 15-х суток, энтерально, в течение 10 дней – Г/Л: 0,28; 0,26; 0,28 и 0,39 – до 42 дня выращивания. 4. Проведенные иммунологические исследования подтверждают влияние тимогена на функциональную активность лимфоцитов периферической крови цыплят и возможность его использования в качестве модулятора функциональной активности клеточного иммунитета после парентерального и энтерального введения тимогена в дозе 0,1 мл/кг массы тела птицы и 0,1 мл/гол/сут., в течение 10 дней, с 5-х и 15-х суток выращивания цыплят, что сопровождалось в опытных группах: а). активацией дифференцировки Т-лимфоцитов от 13,70% до 100%; б). восстановлением соотношения регуляторного индекса (CD4/CD8): выше на 9-40% на 15-е, 21-е, 26-е и 35-е сут. – по сравнению с контролем; в). повышением уровня рецептора ТСR – на 20-50%. 5. Тимоген, применяемый в дозе 0,1 мл/гол/сут., в течение 7 дней, с 15-х суток выращивания цыплят, способствовал повышению неспецифических клеточных факторов защиты организма. Через 11 дней от начала его введения достоверно повышался процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число соответственно на 61,56, 78,0 и 87,23%. На 42-е сутки выращивания уровень фагоцитоза псевдоэозинофилов достоверно был выше на 15,18% по отношению к контрольной группе птиц. 6. Морфофункциональное состояние тимуса, бурсы и селезенки, после применения тимогена характеризовалось повышением абсолютной массы органов и активизацией в них лимфоцитов на разных этапах постнатального развития, что характеризует биокорригирующие свойства тимогена. 7. Биохимические исследования подтверждают нормализующее влияние дипептида на уровень протеинового питания: а). сохранялось альбумино-глобулиновое соотношение на протяжении всего периода выращивания; б). процессы ассимиляции белка протекали интенсивней у цыплят, которым применяли тимоген, особенно на финишном периоде развития, коррелируя с массой тела птицы: – при введении 0,1 мл/кг массы тела с 5-х суток выращивания, парентерально, в течение 10 суток – выше на 2,83%; – при введении 0,1 мл/кг массы тела с 15-х суток выращивания, парентерально, в течение 10 дней – выше на 4,43%; – при введении 0,1 мл/гол/сут. с 15-х суток, энтерально, в течение 10 дней – выше на 3,98%, а в течение 7 дней – выше на 4,3%. 8. Гистоморфологическая картина первичных (тимус, бурса) и вторичных иммунокомпетентных (селезенка) органов цыплят после введения биокорректора 18 тимогена имела соответствующее возрасту морфофункциональное развитие. В фабрициевой сумке цыплят наблюдалась выраженная зональность фолликулов с процессами активизации пролиферирующих клеток эпителиального слоя. Фолликулы были заполнены лимфоцитами, находящимися на разных стадиях дифференциации, макрофагами и плазмоцитами. 9. Химический состав мяса цыплят-бройлеров показал, что биологическая полноценность мяса птицы, выраженная белковым качественным показателем, была выше в группе, где применяли тимоген в дозе 0,1 мл/гол/сут., методом выпаивания, как в грудных, так и в ножных мышцах на 3,94 и на 2,77%, по отношению к контрольной группе. При этом отмечено достоверное повышение содержания количества триптофана в грудных и ножных мышцах соответственно на 9,18 и на 11,22%. 10. Применение глутамил-триптофанового комплекса тимогена цыплятамбройлерам кросса «Hubbard F-15» в дозе 0,1 мл/гол/сут., методом выпаивания, в течение 7 дней, позволило повысить продуктивность птицы к концу периода откорма: а). увеличился прирост массы тела на 86-90 г или 4,5-5,0%; б). повысилась сохранность на 4,3%; в). повысился индекс продуктивности на 9,7%. 11. Серологические исследования в РТГА по напряженности иммунитета к ньюкаслской болезни у цыплят-бройлеров кросса «Hubbard F-15» на птицефабрике подтвердили биокорригирующее влияние тимогена на формирование адекватного антителогенеза вакцинированной птицы – 85% групповой иммунитет цыплят, который обеспечивает защиту привитой птицы от развития симптомов болезни. 12. Экономическая эффективность применения биокорректора тимогена в птицеводческих хозяйствах, составила 5,08 руб. на 1 рубль затрат. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ В целях профилактики иммунодефицитных состояний, повышения прироста живой массы и сохранности цыплят-бройлеров при промышленном выращивании, рекомендуется применять биокорректор тимоген в дозе 0,1 мл/гол/сут. 0,01% раствора, методом выпаивания, в течение 7 суток, с 15-го дня выращивания. Список опубликованных работ 1. Беляева С.Н. Влияние биокорректора тимогена на организм цыплят-бройлеров в процессе выращивания / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Достижения науки и техники АПК. – 2008. – № 9. – С. 32-34. Рец. ВАК. 2. Беляева С.Н. Адаптационно-иммунологические процессы в организме цыплят бройлеров после применения иммуномодулятора тимогена / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Птица и птицепродукты. – 2009. – № 3. – С. 14-20. 3. Беляева С.Н. Коррекция иммунобиохимического статуса сельскохозяйственной птицы / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Научные труды II съезда физиологов СНГ: «Физиология и здоровье человека». – Москва – Кишинэу: Медицина – Здоровье, 2008. – С. 296. 19 4. Беляева С.Н. Содержание глюкозы после применения тимогена при выращивании цыплят-бройлеров / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Материалы XII междунар. науч.-произв. конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». – Белгород : Изд-во БелГСХА, 2008. – С. 84. 5. Беляева С.Н. Влияние тимогена на гематологические показатели цыплятбройлеров / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Материалы XII междунар. науч.-произв. конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». – Белгород : Изд-во БелГСХА, 2008. – С. 85. 6. Беляева С.Н. Физиологическая оценка некоторых биохимических показателей у цыплят-бройлеров после применения иммуномодулятора тимогена / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Молекулярные механизмы адаптаций: сб. ст. междунар. конф. – Махачкала: ИПЦ ДГУ, 2008. – С. 87-90. 7. Беляева С.Н. Влияние тимогена на качественный состав мяса птицы / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Материалы XIII междунар. науч.-произв. конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». – Белгород : Изд-во БелГСХА, 2009. – С. 91. 8. Беляева С.Н. Оценка фагоцитарной активности крови цыплят после применения синтетического иммуномодулятора / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов, Н.В. Позднякова // Материалы XIII междунар. науч.-произв. конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». – Белгород: Изд-во БелГСХА, 2009. – С. 92. 9. Беляева С.Н. Профилактика стресса и иммунодефицитных состояний в промышленном птицеводстве биокорректором тимоген / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Ветеринарный вестник. – 2009. – № 10 (89). – С. 3-5. Список сокращений: А/Г– альбумины/глобулины; CD8+ – цитотоксические / супрессорные Т-лимфоциты; Г/Л – гетерофилы/лимфоциты; CD4/CD8 – регуляторный индекс; ПФ – процент фагоцитоза; ТСR – Т-клеточный антигенраспознающий рецептор; РТГА – реакция торможения гемагглютинации; ФИ – фагоцитарный индекс; CD3 – (thymocytes, mature T-cells) зрелые Т-лимфоциты; ФЧ – фагоцитарное число. CD19 – (Pan B-cell) зрелые В-лимфоциты; CD4+ – (T-helper/Inducer cells) субпопуляция T-хелперов; Формат 60х84, 1/16. Усл. печ. л. 1,0. Заказ № 3792. Тираж 100 экз. Типография БВЦ
