На правах рукописи ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ИММУННО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ

На правах рукописи
БЕЛЯЕВА Светлана Николаевна
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ИММУННО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ
У ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ
БИОКОРРЕКТОРА ТИМОГЕНА
Специальность: 03.00.13 – физиология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Белгород 2009
2
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная
сельскохозяйственная академия»
Научный руководитель:
Заслуженный ветеринарный врач РФ,
доктор биологических наук, профессор
Безбородов Николай Васильевич
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор
Семенютин Владимир Владимирович
кандидат биологических наук
Амельченко Ирина Анатольевна
Ведущая организация:
ФГОУ ВПО «Московская государственная
академия ветеринарной медицины и
биотехнологии им. К.И. Скрябина»
Защита состоится «____» _________ 2009 г., в ____ часов на заседании
диссертационного совета Д
220.004.01
в ФГОУ ВПО «Белгородская
государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Россия,
Белгородский р-н, пос. Майский, ул. Вавилова 1; тел. /факс (4722) 39-22-62.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белгородской
государственной сельскохозяйственной академии.
Автореферат разослан «____» __________ 2009 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
кандидат биологических наук
Ю.Н. Литвинов
3
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Из всех отраслей животноводства, птицеводство
наиболее рентабельно и высокопродуктивно, а Белгородская область – одна из
лидирующих областей РФ по объему производства птицеводческой продукции
(Огурцов А., 2007; Родионов В., 2008; Фисинин В.И., 2008; Шапочкин В., 2009).
Несмотря на достигнутые высокие показатели, в промышленном птицеводстве
остается много нерешенных проблем. Важнейшие из них – снижение стрессфакторов, вызывающих иммунодепрессивное состояние птицы, и производство
экологически чистой продукции, решение которых позволит получить качественную
продукцию и одновременно повысит экономическую эффективность отрасли. Как
известно, в промышленном птицеводстве при выращивании цыплят-бройлеров
проявляется высокая частота вторичных иммунодефицитных нарушений, которые
осложняются возрастными (физиологическими) иммунодефицитами (Болотников
И.А., 1983; Барабина М.Т., 1996; Джавадов Э.Д., 2003; Карпуть И.М., 2005; Mazurkiewicz M., 2005 и др.).
В последние годы эффективно ведется поиск профилактических мероприятий,
направленных
на
повышение
продуктивности
и
резистентности
сельскохозяйственной птицы. Сохранить и даже повысить ее можно, проводя
коррекцию иммунодефицитных состояний организма птицы, за счет применения
препаратов из группы биокорректоров, способных за короткое время активизировать
неспецифическую резистентность организма и оптимизировать обменные процессы.
К числу таких средств относится биокорректор Тимоген®, состоящий из глутаминовой
кислоты и триптофана.
Цель и задачи исследований. Целью исследований было изучение механизма
действия и определение эффективности применения глутамил-триптофанового
комплекса при активизации функциональных связей иммунной системы и
адаптационно-метаболических
процессов
у цыплят-бройлеров
в
период
выращивания, направленных на повышение их сохранности и продуктивности.
Для достижения данной цели были поставлены на разрешение следующие задачи:
 исследовать иммунологическую реактивность цыплят-бройлеров в процессе
роста и развития, до и после введения тимогена;
 исследовать морфологические и биохимические показатели крови цыплят,
характеризующие уровень обменных процессов и адаптационнометаболический гомеостаз, до и после применения тимогена;
 выявить характер гистоморфологических изменений в иммунокомпетентных
органах цыплят – тимусе, бурсе и селезенке, отражающих их функциональное
состояние после применения тимогена;
 определить рациональный способ применения тимогена в промышленном птицеводстве для повышения сохранности и продуктивности цыплят-бройлеров.
Научная новизна. Результаты исследований дополняют и расширяют
имеющиеся представления о механизмах развития функциональной системы
иммунитета и гемодинамики цыплят-бройлеров, что дает возможность выявления
дополнительных критериев, характеризующих состояние птицы. Впервые
комплексными исследованиями изучены иммунно-биохимические изменения,
характеризующие процессы адаптации у клинически здоровых цыплят-бройлеров
после внутримышечного и перорального введения синтетического биокорректора
тимогена. Результаты проведенных исследований значительно расширяют
4
существующие представления о механизмах пептидной регуляции и становлении
гомеостаза у цыплят-бройлеров в период их промышленного выращивания.
Теоретическая и практическая значимость. На основании результатов
исследований дано научное и практическое обоснование по применению
синтетического тимогена в промышленном птицеводстве для профилактики и
снижения иммунодефицитного состояния цыплят-бройлеров, повышения их
сохранности и продуктивности в процессе выращивания.
Разработан доступный групповой метод обработки птицы, повышающий
устойчивость организма к неблагоприятным факторам внешней среды – выпаивание
0,01% р-ра тимогена в критические периоды развития цыплят, что обеспечивает
повышение резистентности организма. Установлены ростостимулирующая и
профилактическая эффективность тимогена в процессе выращивания цыплятбройлеров.
Положения, выносимые на защиту
1.
Глутамил-триптофановый
комплекс
(тимоген)
активизирует
функциональную активность клеточного иммунитета (неспецифического и
специфического) в процессе постнатального роста и развития цыплят-бройлеров.
2. Коррекция адаптационно-метаболических процессов у клинически здоровых
цыплят, после воздействия синтетического тимогена, способствует повышению
уровня естественной резистентности организма.
3. Картина морфологических и гистоструктурных изменений в центральных
(тимус и бурса) и периферических (селезенка) иммунокомпетентных органах
подтверждает биокорригирующее влияние тимогена на морфофункциональное
развитие органов иммуногенеза.
4. Разработанный новый доступный групповой метод повышения устойчивости
организма птиц к неблагоприятным факторам внешней среды, путем выпаивания
0,01% р-ра тимогена в критические периоды развития цыплят-бройлеров,
обеспечивает повышение сохранности и продуктивности птицы.
Апробация работы
Материалы и результаты полученных исследований представлены на XII и XIII
междунар.
научно-производственных
конференциях
«Проблемы
сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», г.
Белгород, 2008, 2009 гг.; на междунар. научной конференции «Молекулярные
механизмы адаптации», г. Махачкала, 2008 г.; на II Съезде физиологов СНГ
«Физиология и здоровье человека», г. Кишинев, 2008 г.; во II и III этапе
Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди аспирантов и молодых
ученых ВУЗ Минсельхоза РФ, г. Белгород, 2008, 2009 гг.; г. Москва, 2009 г.; на
конференции молодых ученых ЦФО, г. Калуга, 2009 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 статей.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах
печатного текста. Список литературы включает 271 отечественных и 88 зарубежных
источников. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 16 рисунками.
1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса «Росс-508» и
«Хаббард F-15» в течение всего цикла выращивания (42 дня), подобранные по
принципу пар-аналогов в группы.
5
Всего в опытах было использовано около 60 тыс. клинически здоровых цыплятбройлеров. Исследования проходили в два этапа: в лабораторных – первая серия и
производственных условиях – вторая серия опытов, алгоритм которых представлен на рис.
1.
Основные лабораторные исследования проведены на факультете ветеринарной
медицины во Вроцлавском университете наук о жизни и окружающей среде, Польша
(Wroclaw University of Environmental and Life Sciences); на факультете ветеринарной
медицины в Белгородской государственной сельскохозяйственной академии; в
аккредитованной испытательной лаборатории ФГОУ ВПО БелГСХА; в ФГУ
«Белгородской Межобластной ветеринарной лаборатории» (вирусологический и
гистологический отделы).
В качества средства активизирующего адаптационно-иммунологические
процессы в организме цыплят-бройлеров использовали биокорректор тимоген (ТУ
10.07.169-91),
который
представляет
собой
синтетический
дипептид,
иммуномодулирующей направленности действия (С12H2N3O5Na).
В первой серии опытов (виварий Вроцлавского университета наук о жизни и
окружающей среде) объектом исследования служили цыплята-бройлеры кросса
«Росс-508» с суточного до 42 дня жизни, которые в 5-ти суточном возрасте по
принципу пар-аналогов были разделены на опытные – II, III, IV и контрольные – Iк,
IIa, IIIa, IVa группы цыплят. Условия содержания, кормления и поения (свободный
доступ) соответствовали общепринятым зоогигиеническим стандартам технологии.
Целью лабораторного опыта было изучение становления иммунно-биохимического гомеостаза у птиц и сравнение разных способов применения 0,01% р-ра
тимогена. Для этого препарат вводили птице различными методами (парентерально,
внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела птицы и перорально в дозе 0,1 мл/голову)
и в разные периоды онтогенеза c учетом возрастных (физиологических)
иммунодефицитов на 5-е и 15-е сутки выращивания, в течение 10 дней.
Цыплята «Iк» группы (n=25) служили общим контролем для всех групп. Цыплятам
«II» (n=25) группы вводили 0,01%-ный раствор тимогена внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг
массы тела с 5-го по 14-й день жизни в течение 10 дней; «III» (n=20) – внутримышечно с
15-го по 24-й день жизни; «IV» (n=20) – перорально с 15-го по 24-й день жизни в дозе 0,1
мл/гол. Кроме того, для экспериментальных групп были созданы дополнительные группы
контроля – IIa (n=12), IIIa (n=12) и IVa (n=12), цыплятам которых вводили 0,9%-ный
физиологический раствор, в той же дозе и тем же способом, что и 0,01%-ный р-р тимогена
для опытных групп. Для исследований у птицы (n=6) брали кровь из подкрыльцовой вены
(v. cutanea ulnaris) на 5-е; 11-е; 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42 сутки эксперимента, а так же
тимус, бурсу и селезенку после декапитации птицы.
Количество Т-лимфоцитов с фенотипами TCR, CD3, CD4 и СD8 и В-лимфоцитов – СD19 определяли методом проточной цитофлюориметрии на цитометре
FACSCalibur фирмы «Веcton Dickinson», США, c программным обеспечением
CellQuest при помощью моноклональных антител к маркерам клеточной поверхности,
меченных флуорохромами – флуоресцеин изотиоционатом (FITС) и фикоэритрином
(PE) (Воронин Е.С., 2002; Zeromski J., 1996).
Количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобин определяли на
гематологическом автоанализаторе с программным обеспечением (Vet 2.3) для
животных Cell-Dyn 3500 и ABC PACK LMGE for animal blood, а гематокрит – микрокапиллярным методом. Содержание отдельных видов лейкоцитов путем подсчета
лейкограмм маз-
6
ков крови. Исследование окрашенных по Паппенгейму мазков крови цыплят проводили черырехпольным методом при подсчете 100 лейкоцитов на микроскопе Микмед-1
ОАО «Ломо», используя объектив с масляной иммерсией (Симонян Г.А.,
Хисамутдинов Ф.Ф., 1995; Campbell T. W., 1988). Уровень глюкозы в плазме крови
птицы определяли на автоматическом биохимическом анализаторе МAXMAT
унифицированным тестом. Общий белок определяли на универсальном
спектрофотометре ВioTek с помощью набора реактивов фирмы Sigma-Aldrich;
белковые фракции – в сыворотке крови методом электрофореза на бумаге (Кондрахин
И.П., 2004).
Функциональные и иммунно-биохимичекие изменения
у цыплят-бройлеров после применения
биокорректора тимогена
I СЕРИЯ ОПЫТА
ТИМОГЕН
II СЕРИЯ ОПЫТА
(5–14-е сут.)
II
IIa
Внутримышечно
0,1мл/кг массы
птицы
Контроль –
в/м 0,9%
р-р NaCI
III
(15–24-е сут.)
IIIa
Внутримышечно
0,1мл/кг массы
птицы
IV
Энтерально
0,1мл/гол птицы
Контроль –
в/м р-р NaCI
(15–21-е сут.)
V
Энтерально
0,1мл/гол. птицы
NaCI
IVa
Контроль –
энтерально р-р NaCI
р-р NaCI
Iк
VIк
Контроль –
интактное поголовье
птицы
Контроль –
интактное поголовье
птицы
Изучаемые показатели
Оценка иммунного статуса организма птицы
Морфологические показатели крови цыплят
Биохимические исследования крови цыплят
Показатели естественной резистентности птицы
Гистоморфологические изменения
в иммунокомпетентных органах цыплят
7
Продуктивные показатели цыплят-бройлеров
в период выращивания
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ
Рис. 1 – Алгоритм исследований
Сохранность поголовья учитывали путем ежедневной оценки клинического
состояния птицы. Живую массу тела и среднесуточные приросты цыплят определяли
путем индивидуального взвешивания, используя весы AXIS B 15W (max=15 kg,
min=20 g, e=5 g), в суточном возрасте и далее на 5-е, 10-е, 15-е, 20-е, 25-е, 30-е, 35-е и
42-е сутки выращивания; а массу иммунокомпетентных органов птицы –
взвешиванием на электронных весах Wag I Elektroniczne 53-143 RAR Wag-Dolnyśląsk
(max=36 g, min=2mg, e=1 mg) на 5-е, 15-е, 26-е и 42-е сутки исследований. Индексы
тимуса, бурсы и селезенки определяли по отношению массы органа к массе тела
умноженное на 1000 (Апатенко В.М., 1988).
Во второй серии опытов, проходивших в производственных условиях
птицефабрики ООО «Лопанское» Белгородского агрохолдинга «БЭЗРК-Белгранкорм»
Белгородской области, объектом исследования были цыплята-бройлеры кросса
«Нubbard F-15», из которых были сформированы две группы по принципу параналогов, из суточных цыплят одной партии, вывода и кросса: V – опытная группа
(n=29200 гол.) и VIк – контрольная группа (n=29000 гол.). Условия содержания –
напольное выращивание и кормление полноценным комбикормом по периодам
выращивания (ГОСТ Р 51851-2001) были идентичными. В опытной группе цыплятамбройлерам применяли методом выпойки 0,01%-ный р-р тимогена в дозе 0,1
мл/гол/сут., в течение 7 дней, с 15-х по 21-е сутки откорма, дополнительно к
основным лечебно-профилактическим мероприятиям, проводимых в хозяйстве. В
контрольной группе тимоген не применяли. Учетный период наблюдений за
цыплятами-бройлерами продолжался с суточного возраста до конца откорма (42-го
дня).
Целью второй серии опыта было определение эффективности применения и
изучение биокорригирующих свойств тимогена в промышленном птицеводстве.
Для исследований у птицы (n=6-10) брали кровь из подкрыльцовой вены (v. cutanea ulnaris) на 5-е; 11-е; 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42 сутки эксперимента; тимус, бурсу
и селезенку после декапитации птицы на 42-е сутки опыта, которые фиксировали в
10%-ном нейтральном растворе формалина; грудные и ножные мышцы в конце
откорма, на 42-е сутки.
Форменные элементы (количество лейкоцитов и эритроцитов) определяли по
стандартной методике, подсчитывая их в камере Горяева; гемоглобин крови –
гемиглобинцианидным
методом;
количество
иммуноглобулинов
–
нефелометрическим методом на фотоэлектроколориметре (цинк-сульфатный тест).
Общий белок определяли в сыворотке крови по биуретовой реакции; белковые
фракции сыворотки крови – методом электрофоретического фракционирования на
бумаге (Кондрахин И.П., 2004). Фагоцитарную активность псевдоэозинофилов в
крови цыплят определяли постановкой опсоно-фагоцитарной реакции в условиях in
vitro по следующим показателям: процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс и
фагоцитарное число, используя отправные критерии по оценке естественной
8
резистентности с.-х. животных (Новосибирск, 2003). В качестве тест культуры для
ОФР использовали E. coli. Гистологические препараты приготавливали по
общепринятым методикам (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996), окрашивая их
гематоксилин-эозином, и анализировали под сканирующим микроскопом «Микмед2»
установки
«Видео-тест.
При
гистоморфологических
описаниях
иммунокомпетентных органов у птицы учитывали отправные критерии,
разработанные для определения иммуносупрессии и иммунодефицитов у птицы
(Колоусова Н.Г., 1988). Серологические исследования на напряженность иммунитета
цыплят (к болезни Ньюкасла) проводили на 15-е, 26-е, 35-е и 42-е сутки опыта: по 20
проб сыворотки крови цыплят-бройлеров из группы в РТГА (согласно утвержденным
методическим указаниям по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в
реакции торможения гемагглютинации от 23 июня 1988г. № 988 Минсельхозпрод России).
Сохранность поголовья учитывали путем ежедневной оценки клинического
состояния птицы. Живую массу и среднесуточные приросты определяли при
групповом взвешивании птицы по 100-300 голов на 1-е; 5-е; 10-е; 15-е; 20-е; 25-е; 30е; 35-е и 42 сутки выращивания цыплят-бройлеров. В конце откорма цыплят
рассчитывали конверсию корма и индекс продуктивности (Тучемский Л.И., 2004).
Качество полученной мясной продукции учитывали по химическому составу тушки
(грудные и ножные мышцы) и белково-качественному показателю, используя
методические рекомендации по определению качества мяса сельскохозяйственных
животных и птицы (1982). Оксипролин в мясе определяли по Ньюмену и Логану с
применением методики кислотного гидролиза мяса по Вербицкому. Триптофан в мясе
определяли по методу Спайза и Чемберза в модификации Геллера (1958).
Полученный цифровой материал обрабатывали статистически на ПЭВМ с
использованием пакета программ Microsoft Office 2003. Достоверность полученных
результатов исследований определяли методом вариационной статистики с
использованием критерия Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990). Разницу в значениях
считали статистически достоверной при *р<0,05 и менее.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Морфологические и иммунно-биохимические показатели
крови цыплят после применения тимогена
3.1.1. Морфологические показатели крови
Результаты исследований, в I и во II серии опытов, при изучении
морфологического анализа крови показали, что наблюдается возрастная тенденция
изменчивости показателей крови во всех группах: количество лейкоцитов,
эритроцитов и гемоглобина изменяется закономерно: максимально возрастая к 26-35
суткам и понижаясь к 42-у дню исследований. Так, на 42-е сутки исследований
количество лейкоцитов в опытных группах – II; III и IV – было достоверно выше по
сравнению с Iк группой соответственно на 26,69%; на 30,27% и на 30,88%, а
количество лимфоцитов – на 4%; 8,0 и 6,0%.
Учитывая то, что в качестве гематологического показателя, характеризующего
степень напряжения организма при выращивании, важно использовать отношение
гетерофилов (псевдоэозинофилов) к лимфоцитам (Г/Л) как наиболее информативный
и доступный показатель, позволяющий выявить зависимость антистрессовых реакций
от силы раздражителя, представленные ниже данные (табл. 1) показывают, как
меняется соотношение гетерофилов к лимфоцитам в процессе откорма, отражая
9
динамику адаптации (приспособления) птицы к окружающей среде содержания
(Gross W.B., Siegel H.S., 1983; Graczyk S., 1999; 2005; Бусловская Л.К. с соавт., 2008;
Ковалева О.Л., 2008; Ковтуненко А.Ю., 2008; 2009).
Так, на 15-е сутки исследований, во IIa группе цыплят выявлено достоверное
повышение данного показателя по отношению к остальным группам почти в 2 раза.
На 21-е сутки исследований выявлено достоверное повышение соотношения Г/Л в
IIIa и повышение в IVa группах цыплят.
Таблица 1 – Соотношение Г/Л в периферической крови цыплят
Группы
,
n=6
На
5-е
сут.
0,19±0,0
1
0,19±0,0
8
0,20±0,0
7
0,23±0,
1
0,29±0,
2
II
–
–
IIIa
–
–
IV
–
–
IVa
–
–
Iк
II
IIa
На
11-е
сут.
–
Время исследований
На
На
На
15-е
21-е
26-е
сут.
сут.
сут.
0,25±0,0
0,31±0,1
–
6
8
0,23±0,0
0,25±0,0
–
3
6
На
35-е
сут.
0,38±0,1
0
0,34±0,0
5
На
42-е
сут.
0,45±0,0
4
0,45±0,0
7
–
–
–
–
0,27±0,0
4
0,37±0,2
4
0,26±0,0
4
0,32±0,0
6
0,31±0,1
2
0,35±0,0
8
–
–
0,28±0,0
4
0,39±0,0
9
–
–
0,45±0,1
0,22±0,1
5
0,24±0,0
2
0,28±0,2
6
0,23±0,0
9
0,21±0,07
0,43±0,09
*
0,25±0,10
0,31±0,11
_____________________________
Здесь и далее:
–*р<0,05 (внутри группы по отношению к предыдущему дню);
–*р<0,05 (между изучаемыми группами по дням исследований).
По-видимому, эффект воздействия тимогена на организм цыплят-бройлеров
имеет «временной» характер, который определяет его действие: во II группе цыплят,
которой применяли тимоген с 5-х по 14-е сутки выращивания, эффект сохраняется до
35-х суток (снижение с 0,34±0,05 до 0,45±0,07 при р<0,05), т.е. около 20 дней; в то
время как во второй части I серии опыта, когда тимоген применяли как
парентерально, так и энтерально, (с 15-х суток) действие препарата проявляется до
конца периода откорма.
Таким образом, проведенные морфологические исследования крови цыплят,
получавших пептидный иммуномодулятор тимоген парентерально (0,1 мл/кг массы
тела) и энтерально (0,1 мл/гол) в течение 10 дней в критические периоды развития (на
5-е и 15-е сутки развития) выявили положительное влияние тимогена на
физиологическое состояние птицы.
3.1.2. Активизация специфических факторов клеточного иммунитета
Проведенные
исследования
по
иммунофенотипированию
клеток
периферической крови показали, что процентное соотношение Т- к В- лимфоцитам в
10
разные дни жизни цыплят оставалось постоянным в периферической крови и
составило 65-85% по Т-лимфоцитам и 15-35% – В-лимфоцитам.
Количество Т-лимфоцитов в разные периоды онтогенеза (на 15-е, 21-е и 26-е
сутки исследований) было выше у опытных групп цыплят в отличие от их
дополнительных контрольных групп от 14% до 100%, а по отношению к общему
контролю от 2% до 17%. Повышение В-лимфоцитов наблюдали на 21-е и 26-е сутки
исследований. По количеству Т- и В-лимфоцитов на 35-е сутки исследований между
изучаемыми группами достоверных различий не выявлено. Незначительное
понижение количества В-лимфоцитов наблюдаемое во второй группе цыплят, на 15-е
сутки, можно, по-видимому, объяснить тем, что Т-клеточные цитокины, особенно те,
которые стимулируют макрофаги, подавляют функции В-клеток.
Количество цитотоксических или супрессорных клеток с фенотипом СD8+ на
15-е, 21-е, 26-е и 35-е сутки исследований во всех группах цыплят изменялись
незначительно, имея тенденцию к снижению, в то время как хелперные клетки с
фенотипом СD4+ достоверно увеличивались с 15-х к 35-м суткам исследований. Это
подтверждает тот факт, что у молодых цыплят более выражены супрессорные
функции лимфоцитов, а с возрастом возрастает их хелперная функция.
Объективным тестом, позволяющим оценить функцию лимфоцитов, служит
регуляторный
индекс,
определяемый
как
соотношение
СD4/СD8
или
хелперов/супрессорам, значения которого были выше у всех групп, которым
дополнительно вводили дипептид от 9 до 40% (табл. 2).
Установлено, что регуляторный индекс был наиболее сниженным на 21-е сутки
исследований, особенно для IIIа и IVa групп цыплят, где снижение составило 39,21%
и 29,11% по сравнению с III и IV группами цыплят (табл. 3).
Увеличение количества СD4+ Т-клеток в опытных группах свидетельствует о
повышении реактивности лимфоцитов и доминировании Т-хелперов, в то время как
увеличение СD8+ Т-клеток свидетельствует о понижении лимфоцитарной активности
клеток. Полученные данные, по снижению количеству Т-лимфоцитов и
регуляторному индексу в IIIa и IVa дополнительных группах цыплят,
свидетельствуют о наличии иммунодефицитного состояния у птиц, проявившемуся
на 21-26-е сутки исследований, что согласуется с данные других исследователей,
которые указывают на данный период как возрастной физиологический
иммунодефицит (Барабина М.Т., 1996; Карпуть И.М., 2005; Mazurkiewicz M., 2005).
Таблица 2 – Определение соотношения регуляторного индекса (CD4+/CD8+)
в периферической крови цыплят
Время
исследований
,
сут.
На 15-е
На 26-е
На 35-е
Группы
Опытная
группа
(тимоген)
Контрольные
Группы
5 – 14-е сут.
II
2,52±0,5
3,15±0,2
3,70±0,5
IIa
2,09±0,1
–
–
Iк
2,52±0,4
2,81±0,9
3,24±0,2
Опытные группы
(тимоген)
15 – 24 сут.
III
2,48±0,5
2,32±0,3
4,29±0,6
IV
2,40±0,3
2,97±0,3
3,14±0,5
Контрольные
группы
IIIa
2,49±0,4
2,13±0,4
–
Таблица 3 – Содержание cубпопуляций Т-лимфоцитов,
IVa
2,32±0,4
2,28±0,6
–
11
на 21-е сутки исследований,
в периферической крови цыплят
Группы, n=3
Группа III
Группа IIIа
Группа IV
Группа IVa
СD4+
СD8+
21,40±1,64*
8,56±0,51
(64,49% от IIIa)
(17,74% от IIIa)
13,01±3,06
(39,21% от III)
25,39±2,42*
(41,06% от IVa)
18,0±2,28
(29,11 % от IV)
7,27±1,79
(15,07% от III)
11,92±2,0
(21,26% от Iva)
9,83±1,78
(17,53% от IV)
СD4+/CD8+
2,50±0,21
1,79±0,33
2,13±0,51
1,83±0,27
Количество лимфоцитов периферической крови, экспрессирующей на своей
поверхности рецептор TCR, у исследуемых опытных групп цыплят в разные периоды
онтогенеза был выше, на 42-е сутки разница между опытными группами цыплят – II,
III, IV и контрольной группой (Iк) составила – 47,5%; 45,26 и 41,09%.
Приведенные данные подтверждают иммуномодулирующее действие тимогена
на организм цыплят-бройлеров, у которых уровень Т- клеточного звена выражен
активнее, а уровень естественных киллерных клеток выше, представленных
рецепторами γδ цепи ТСR, обеспечивающих первую линию защиты против основных
бактерий и выполняя важную роль в защите слизистых оболочек от инфекции.
3.1.3. Морфофункциональное развитие
иммунокомпетентных органов цыплят
Известно, что нормальный рост и развитие бурсы и тимуса – центральных
органов иммунитета, – их функциональная активность в процессе постнатального
онтогенеза, могут служить критерием оценки обмена веществ организма птиц и
оптимальности течения биохимических процессов (Болотников И.А., 1987).
Так, на 15 сутки исследований, масса центральных и периферических органов
иммунитета была выше во II опытной группе, где применяли внутримышечно
тимоген в дозе 0,1 мл/кг массы тела, по сравнению как с дополнительным контролем,
так и с основным. На 26 сутки, через 10 дней после введения тимогена, лучшие
показатели были в IV группе цыплят, которым препарат вводили энтерально с 15-х
суток. На 42 сутки, в конце выращивания птицы, лучшие значения наблюдались в III
и IV группах, где препарат применяли с 15-х суток откорма. Сопоставляя данные по
функциональному состоянию иммунной системы птиц и массе иммунокомпетентных
органов можно сделать вывод, что вес тимуса коррелирует с содержанием Тлимфоцитов в крови, а масса бурсы с количеством В-лимфоцитов, так как при
увеличении у опытных цыплят массы данных органов, отмечается увеличение
количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови.
3.2. Иммунно-биохимические показатели адаптации птицы
Для оценки биохимических показателей крови, характеризующих уровень
обменных процессов и адаптационно-метаболический гомеостаз после применения
биокорректора тимогена, определяли содержание глюкозы в плазме крови, уровень
12
общего белка и белковых фракций, количество иммуноглобулинов в сыворотке крови
подопытных цыплят-бройлеров.
Для всех исследуемых групп отмечено, что концентрация глюкозы во время
роста и развития организма достоверно снижается к 35-м суткам – от 10 до 20% – (12
ммоль/л) и вновь повышается – на 10% – к 42-м суткам исследований (13-14
ммоль/л). Достоверных различий по содержанию глюкозы в крови цыплят между
исследуемыми группами – Iк, II, IIa, III, IIIa, IV и IVa – не выявлено.
Изменения в динамике белковых фракций, выявленных у птицы, показало, что
уровень общего белка не отражает картину белкового обмена цыплят в разные
периоды онтогенеза.
Динамика белкового обмена в I серии опыта свидетельствовала о том, что в Iк
группе цыплят количество общего белка имело тенденцию к достоверному
увеличению с 5-х по 26-е сутки: с 17 г/л до 34 г/л, после чего его концентрация в
крови оставалась неизменной – 33,22 и 33,65 г/л. У опытных групп (II, III и IV)
наблюдалась иная закономерность: достоверное увеличение концентрации белка
прослеживалась до конца откорма, что подтверждает более динамичное развитие
птицы в этих группах. К 42 суткам выращивания разница между контрольной Iк
группой цыплят (33,65±2,26 г⁄л) и опытными группами имела следующие значения:
для II группы была выше на 14% (38,52±3,16 г⁄л); III – 20% при р<0,05 (40,23±2,09 г⁄л)
и IV – 11% (37,47±5,60 г⁄л).
Изучение
белковых
фракций
показало
наличие
диспротеинемии,
проявляющейся в увеличении количества альбуминов и снижении фракции
глобулинов, в дополнительных контрольных группах, на 26-е сутки выращивания,
что может свидетельствовать об иммунодефицитном состоянии организма птицы.
В фракциях белка выявлено достоверное повышение α-глобулиной фракции, на
42-е сутки, в Iк группе цыплят по сравнению с опытными – II, III и IV, что может
свидетельствовать о скрыто протекающих воспалительных процессах в организме и
увеличении количества С-реактивного белка, церулоплазмина, α1-антитрипсина, α2макроглобин – ингибитора протеиназ, приводящих к снижению резистентности и, как
следствие, сохранности птицы.
Альбумины в I серии опыта были выше в опытных группах (II, III, IV) по
отношению к общему контролю (Iк), на 42 сутки, соответственно на 17 и 28%, а во II
серии – выше в V опытной группе на 26-е и 42-е сутки откорма на 11% по сравнению
с VIк контрольной группой.
По фракции γ-глобулинов, можно судить о морфологической зрелости и
функциональной полноценности иммунореактивной ткани. Уровень γ-глобулинов,
включающий в себя различные антитела сывороточных иммуноглобулинов (М, G, А)
был снижен в дополнительных контрольных группах цыплят (IIa, IIIa и IVa) в I серии
опыта, а во II серии опыта – на 26-е и 42-е сутки имел тенденцию к снижению в V
опытной группе по сравнению с VIк группой цыплят на 17,36% и на 14,43%.
Концентрация γ-глобулинов в VIк группе достоверно увеличилась с 15-х суток к 42-м
суткам. Наблюдаемые изменения в контрольной VIк группе на 42-е сутки откорма –
снижение количества альбуминов в сыворотке крови и увеличение γ-глобулинов
свидетельствует о скрыто протекающих воспалительных процессах в организме
птицы и нарушении работы внутренних органов. Данное предположение
подтверждает и повышенный уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови,
13
указывая на повышенный синтез антител плазматическими клетками в ответ на
присутствующий в организме антигенный раздражитель (табл. 4).
Уровень β-глобулинов имел тенденцию к снижению в опытной V группе в
течение всего периода наблюдений, максимально снижаясь на 26-е сутки по
сравнению с контролем на 20,27% (р<0,05). Данное снижение фракции β-глобулинов
после введения 0,01% раствора тимогена, свидетельствует об участии их в процессах
по обезвреживанию токсинов, а также осуществлении транспорта биологически
активных веществ (витаминов, ферментов), в том числе и трансферрина, основного
белка транспортирующего железо и необходимого для нормальной фагоцитарной
активности сыворотки крови, компонентов комплемента и иммуноглобулинов.
Таблица 4 – Иммунно-биохимические показатели цыплят (II cерия опытов)
ИммуноГлобулины, %
Группы
Общий
глобулины
Альбумины,
,
белок,
,
%
α
β
n=10
г/л
ед.
15-е сутки исследований (до введения тимогена)
V
0,70±0,07
23,1±0,07
0
VIк
0,82±0,10
25,2±0,12
γ
А/Г
0,9
49,34±1,23
14,39±0,86
12,09±0,31
24,18±1,04
48,84±1,37
14,80±1,16
11,07±1,03
25,29±0,85
7
0,9
5
21-е сутки исследований (6 дней от начала введения тимогена)
V
2,58±0,31*
*
29,3±0,21
*
42,54±1,14*
*
16,81±0,61
*
13,77±0,76*
26,88±0,9
2
VIк
2,91±0,19*
*
30,2±0,10
*
42,82±1,43*
18,32±1,02
*
13,78±1,04
25,08±1,1
7
0,7
4
0,7
5
26-е сутки исследований (11 дней от начала введения)
V
VIк
2,80±0,23
3,34±0,27
33,2±0,08
32,8±0,18
47,87±1,33
43,24±1,10
16,76±0,75
16,93±1,12
9,44±0,41**
25,93±0,7
2
11,84±0,68
27,99±1,2
3
0,9
2
0,7
6
42-е сутки исследований (27 дней от начала введения)
V
4,50±0,35*
*
VIк
5,84±0,53*
*
45,7±0,25**
43,16±1,55
*
4,74±0,26**
38,70±1,30
*
0,7
17,32±0,78
11,59±0,58
*
27,93±1,9
16,39±1,04
12,28±0,99
32,63±2,2
6
0,6
______________________
– *р<0,05;**р<0,01 (внутри группы по отношению к предыдущему дню);
– *р<0,05 (между изучаемыми группами по дням исследований).
3
14
Количество псевдоэозинофилов, участвующих в процессе фагоцитоза, по мере
морфофункционального развития организма увеличивается, а, следовательно,
достоверно повышается фагоцитарная активность, фагоцитарный индекс и
фагоцитарное число к третьей недели жизни цыплят, что отображают данные,
представленные в таблице 5.
Таблица 5 – Фагоцитарная активность крови цыплят-бройлеров
Группы,
n=10
ПФ, %
ФИ
ФЧ
На 15-е сутки исследований (до введения тимогена)
42,09±2,82
1,97±0,41
2,59±0,27
40,97±2,31
2,0±0,61
2,74±0,60
На 26-е сутки исследований (11 дней от начала введения тимогена)
Группа V
69,67±3,16***
4,61±0,44**
6,55±0,37***
Группа VIк
68,0±3,31***
3,56±0,51
5,13±0,55
На 35-е сутки исследований (20 дней от начала введения)
Группа V
73,33±2,82
4,59±0,41
6,24±0,07
Группа VIк
70,0±2,31
3,43±0,54
4,73±0,63
На 42-е сутки исследований (27 дней от начала введения)
Группа V
77,17±3,43
4,52±0,53
5,74±0,46
Группа VIк
67,0±1,61
3,51±0,29
5,21±0,34
________________________
–**р<0,01; ***р<0,001 (внутри группы по отношению к предыдущему дню);
–*р<0,05 (между изучаемыми группами по дням исследований).
Группа V
Группа VIк
В результате активации ферментных процессов в фагоцитах опытной группы,
происходит повышение фагоцитарной активности псевдоэозинофилов крови цыплят
на 42-е сутки исследований. Фагоцитарная активность псевдоэозинофилов
достоверно была выше в V группе на 15,18% по сравнению с VIк группой.
Фагоцитарный индекс не выявил достоверных различий по исследуемым группам
цыплят, но наблюдалась тенденция достоверного повышения фагоцитарного числа в
V опытной группе цыплят по отношению к VIк контрольной: на 28% (26-е сутки), на
32% (35-е сутки) и 10,17% (42-е сутки).
Полученные данные по функциональному состоянию фагоцитарной активности
организма цыплят свидетельствует о том, что как агрессивность псевдоэозинофилов,
так и их активность была выше в группе, где применяли тимоген.
3.4. Гистоморфологические изменения в центральных и
периферических органах иммуногенеза цыплят-бройлеров
Выявленные иммуноморфологические изменения в первичных и вторичных
лимфоидных органах цыплят-бройлеров в контрольной группе и общая
гистологическая характеристика их, позволили установить у цыплят патологическое
состояние соответствующее иммунодефицитному состоянию третьей степени. По
сравнению с контрольной группой (VIк) в фабрициевой сумке опытной группы (V)
цыплят патологических изменений не наблюдали, на что указывала хорошо
выраженная зональность фолликулов, наблюдаемая при морфофункциональной
зрелости органа и активизация коркового вещества фолликулов.
15
Таким образом, цыплята, которым применяли 0,01%-ный р-р тимогена методом
выпаивания в дозе 0,1 мл/гол/сут., с 15-х по 21-е сутки выращивания, имели
нормальное морфофункциональное развитие органов иммуногенеза.
3.5. Химический состав, качество мяса и продуктивные
показатели цыплят-бройлеров
Установлено, что в обеих группах цыплят (V и VIк во II серии опыта)
статистически выше было содержание сухого вещества и БКП в грудных мышцах в
отличие от ножных, а содержание жира и оксипролина преобладало в последних, что
подтверждает диетические свойства белого мяса птицы.
Химический состав мяса бройлеров показал, что различий по содержанию
влаги и сухого вещества между сравниваемыми группами цыплят не наблюдалось.
Количество триптофана достоверно (р<0,05) было выше в V (опытной) группе, как в
грудных, так и в ножных мышцах – 1,07±0,01% и 1,09±0,02% по сравнению с VIк
группой (контрольной) – 0,98±0,01% и 0,98±0,02%, превышая ее соответственно на
9,18% и на 11,22%. По количеству оксипролина достоверных различий не
обнаружено: в I группе было 0,24±0,01% в грудных мышцах и 0,48±0,03% в ножных,
а в VIк группе – 0,23±0,03% и 0,45±0,03%.
Таким образом, химический состав мяса цыплят-бройлеров, показал, что
биологическая полноценность мяса птицы, выраженная белковым качественным
показателем, была выше в опытной группе, где применяли 0,01% р-р тимогена, как в
грудных, так и в ножных мышцах соответственно на 3,94 и 2,77%.
Полученные результаты (табл. 6) по изучению влияния биокорректора
тимогена на продуктивные показатели цыплят кросса Хаббард во II серии опыта
показали, что до начала введения 0,01%-ного р-ра тимогена, птица в обеих группах
развивалась примерно одинаково: средняя живая масса на 15-е сутки составила 400 г,
а сохранность 98,49%. С возрастом статистически достоверно увеличиваются
среднесуточные приросты цыплят, а, следовательно, и живая масса тела также
пропорционально возрастает. Так, в V опытной группе цыплят повысилась
сохранность на 4,3% по сравнению с VIк контрольной группой и живая масса на 8690 г к концу периода откорма.
На 42-е сутки выращивания, живая масса цыплят в V опытной группе
составила 2080 г и 95,3% сохранность. Для VIк контрольной группы живая масса
составила 1994 г и 91% сохранность (рис. 2, 3).
2500
Живая масса, г
V(опыт)
2000
1500
VIк
(контроль)
1000
Норматив
500
0
1
5
10
15
20
25
30
35
42 сут.
Рис. 2 – Динамика массы тела за период выращивания
Сохранность, %
100
98
96
94
92
V (опыт)
VIк
(контроль)
16
Рис. 3 – Сохранность цыплят за период выращивания
Таблица 6 – Продуктивные показатели цыплят бройлеров за период откорма
Группы
ПОКАЗАТЕЛИ
V (опытная)
VIк (контрольная)
Посажено, гол.
29200
29000
Срок выращивания, дн.
(с учетом спецубоя)
40
40
Падеж, гол.
1384
2630
Сохранность, %
95,3
91,0
Средняя живая масса, г
2080
1994
Среднесуточный прирост, г
51,0
48,9
Конверсия корма, к.ед.
1,78
1,81
Индекс продуктивности, %
278
251
Результаты производственных опытов показали, что увеличение сохранности
на 4,3 % и прироста живой массы тела на 86-90 грамм в V группе цыплят, позволили
повысить рентабельность производства мяса птицы: индекс продуктивности в V
группе цыплят составил 278 против 251% в VIк группе.
Экономическая эффективность применения биокорректора тимогена при
промышленном выращивании цыплят-бройлеров составила 5,08 руб. на 1 рубль
затрат.
ВЫВОДЫ
1. Дипептидный комплекс (глутамил-триптофан) препарата Тимоген, следует
рассматривать в качестве регуляторного пептида сложной адаптивной системы
организма, определяющего реализацию приспособительных реакций на всех уровнях
ее интеграции (от клеточного до организменного).
2. Иммуномодулятор тимоген, применяемый в физиологические периоды
иммунодефицита у цыплят – на 5-е и 15-е сутки выращивания, в течение 10 и 7 дней,
как парентерально в дозе 0,1 мл/кг массы тела, так и энтерально, в дозе 0,1
мл/гол/сут., показал биокорригирующее влияние на становление обменных процессов
и функциональную активность иммунной системы.
3. Морфологические исследования крови цыплят свидетельствуют об
активизации гемопоэза в кроветворных органах опытных групп за счет лимфопоэза,
17
достоверно отличаясь от контроля и нормальной реактивности организма цыплят.
Показатели лейкограмм крови цыплят и соотношение гетерофилов к лимфоцитам
(Г/Л) на 15-е; 21-е; 26-е; 35-е и 42-е сутки исследований, свидетельствуют о наличии
у цыплят, которым применяли синтетический дипептид тимоген, признаков
устойчивости по отношению к адрено-гипофизарно-надпочечниковой системе
организма и проявлении антистрессового действия препарата:
а). при введении 0,1 мл/кг массы тела, с 5-х суток выращивания, парентерально,
в течение 10 дней – Г/Л: 0,23; 0,25; 0,34 и 0,45 – до 35 дня откорма;
б). при введении 0,1 мл/кг массы тела, с 15-х суток выращивания,
парентерально, в течение 10 дней – Г/Л: 0,22; 0,27; 0,31 и 0,35 – до 42 дня откорма;
в). при введении 0,1 мл/гол/сут., с 15-х суток, энтерально, в течение 10 дней
– Г/Л: 0,28; 0,26; 0,28 и 0,39 – до 42 дня выращивания.
4. Проведенные иммунологические исследования подтверждают влияние
тимогена на функциональную активность лимфоцитов периферической крови цыплят
и возможность его использования в качестве модулятора функциональной активности
клеточного иммунитета после парентерального и энтерального введения тимогена в
дозе 0,1 мл/кг массы тела птицы и 0,1 мл/гол/сут., в течение 10 дней, с 5-х и 15-х
суток выращивания цыплят, что сопровождалось в опытных группах:
а). активацией дифференцировки Т-лимфоцитов от 13,70% до 100%;
б). восстановлением соотношения регуляторного индекса (CD4/CD8):
выше на 9-40% на 15-е, 21-е, 26-е и 35-е сут. – по сравнению с контролем;
в). повышением уровня рецептора ТСR – на 20-50%.
5. Тимоген, применяемый в дозе 0,1 мл/гол/сут., в течение 7 дней, с 15-х суток
выращивания цыплят, способствовал повышению неспецифических клеточных
факторов защиты организма. Через 11 дней от начала его введения достоверно
повышался процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число
соответственно на 61,56, 78,0 и 87,23%. На 42-е сутки выращивания уровень
фагоцитоза псевдоэозинофилов достоверно был выше на 15,18% по отношению к
контрольной группе птиц.
6. Морфофункциональное состояние тимуса, бурсы и селезенки, после
применения тимогена характеризовалось повышением абсолютной массы органов и
активизацией в них лимфоцитов на разных этапах постнатального развития, что
характеризует биокорригирующие свойства тимогена.
7. Биохимические исследования подтверждают нормализующее влияние
дипептида на уровень протеинового питания:
а). сохранялось альбумино-глобулиновое соотношение на протяжении всего
периода выращивания;
б). процессы ассимиляции белка протекали интенсивней у цыплят, которым
применяли тимоген, особенно на финишном периоде развития, коррелируя с массой
тела птицы:
– при введении 0,1 мл/кг массы тела с 5-х суток выращивания, парентерально, в
течение 10 суток – выше на 2,83%;
– при введении 0,1 мл/кг массы тела с 15-х суток выращивания,
парентерально, в течение 10 дней – выше на 4,43%;
– при введении 0,1 мл/гол/сут. с 15-х суток, энтерально, в течение 10 дней –
выше на 3,98%, а в течение 7 дней – выше на 4,3%.
8. Гистоморфологическая картина первичных (тимус, бурса) и вторичных
иммунокомпетентных (селезенка) органов цыплят после введения биокорректора
18
тимогена имела соответствующее возрасту морфофункциональное развитие. В
фабрициевой сумке цыплят наблюдалась выраженная зональность фолликулов с
процессами активизации пролиферирующих клеток эпителиального слоя. Фолликулы
были заполнены лимфоцитами, находящимися на разных стадиях дифференциации,
макрофагами и плазмоцитами.
9. Химический состав мяса цыплят-бройлеров показал, что биологическая
полноценность мяса птицы, выраженная белковым качественным показателем, была
выше в группе, где применяли тимоген в дозе 0,1 мл/гол/сут., методом выпаивания,
как в грудных, так и в ножных мышцах на 3,94 и на 2,77%, по отношению к
контрольной группе. При этом отмечено достоверное повышение содержания
количества триптофана в грудных и ножных мышцах соответственно на 9,18 и на
11,22%.
10. Применение глутамил-триптофанового комплекса тимогена цыплятамбройлерам кросса «Hubbard F-15» в дозе 0,1 мл/гол/сут., методом выпаивания, в
течение 7 дней, позволило повысить продуктивность птицы к концу периода откорма:
а). увеличился прирост массы тела на 86-90 г или 4,5-5,0%;
б). повысилась сохранность на 4,3%;
в). повысился индекс продуктивности на 9,7%.
11. Серологические исследования в РТГА по напряженности иммунитета к
ньюкаслской болезни у цыплят-бройлеров кросса «Hubbard F-15» на птицефабрике
подтвердили биокорригирующее влияние тимогена на формирование адекватного
антителогенеза вакцинированной птицы – 85% групповой иммунитет цыплят,
который обеспечивает защиту привитой птицы от развития симптомов болезни.
12. Экономическая эффективность применения биокорректора тимогена в
птицеводческих хозяйствах, составила 5,08 руб. на 1 рубль затрат.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
В целях профилактики иммунодефицитных состояний, повышения прироста
живой массы и сохранности цыплят-бройлеров при промышленном выращивании,
рекомендуется применять биокорректор тимоген в дозе 0,1 мл/гол/сут. 0,01%
раствора, методом выпаивания, в течение 7 суток, с 15-го дня выращивания.
Список опубликованных работ
1. Беляева С.Н. Влияние биокорректора тимогена на организм цыплят-бройлеров в процессе выращивания / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Достижения науки и
техники АПК. – 2008. – № 9. – С. 32-34. Рец. ВАК.
2. Беляева С.Н. Адаптационно-иммунологические процессы в организме
цыплят бройлеров после применения иммуномодулятора тимогена / С.Н. Беляева,
Н.В. Безбородов // Птица и птицепродукты. – 2009. – № 3. – С. 14-20.
3.
Беляева
С.Н.
Коррекция
иммунобиохимического
статуса
сельскохозяйственной птицы / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Научные труды II
съезда физиологов СНГ: «Физиология и здоровье человека». – Москва – Кишинэу:
Медицина – Здоровье, 2008. – С. 296.
19
4. Беляева С.Н. Содержание глюкозы после применения тимогена при
выращивании цыплят-бройлеров / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Материалы XII
междунар. науч.-произв. конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на
современном этапе и пути их решения». – Белгород : Изд-во БелГСХА, 2008. – С. 84.
5. Беляева С.Н. Влияние тимогена на гематологические показатели цыплятбройлеров / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Материалы XII междунар. науч.-произв.
конф.: «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути
их решения». – Белгород : Изд-во БелГСХА, 2008. – С. 85.
6. Беляева С.Н. Физиологическая оценка некоторых биохимических
показателей у цыплят-бройлеров после применения иммуномодулятора тимогена /
С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Молекулярные механизмы адаптаций: сб. ст.
междунар. конф. – Махачкала: ИПЦ ДГУ, 2008. – С. 87-90.
7. Беляева С.Н. Влияние тимогена на качественный состав мяса птицы /
С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов // Материалы XIII междунар. науч.-произв. конф.:
«Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их
решения». – Белгород : Изд-во БелГСХА, 2009. – С. 91.
8. Беляева С.Н. Оценка фагоцитарной активности крови цыплят после
применения синтетического иммуномодулятора / С.Н. Беляева, Н.В. Безбородов,
Н.В. Позднякова // Материалы XIII междунар. науч.-произв. конф.: «Проблемы
сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». –
Белгород: Изд-во БелГСХА, 2009. – С. 92.
9. Беляева С.Н. Профилактика стресса и иммунодефицитных состояний в
промышленном птицеводстве биокорректором тимоген / С.Н. Беляева, Н.В.
Безбородов // Ветеринарный вестник. – 2009. – № 10 (89). – С. 3-5.
Список сокращений:
А/Г– альбумины/глобулины;
CD8+ – цитотоксические / супрессорные Т-лимфоциты;
Г/Л – гетерофилы/лимфоциты;
CD4/CD8 – регуляторный индекс;
ПФ – процент фагоцитоза;
ТСR – Т-клеточный антигенраспознающий рецептор;
РТГА – реакция торможения гемагглютинации;
ФИ – фагоцитарный индекс;
CD3 – (thymocytes, mature T-cells) зрелые Т-лимфоциты; ФЧ – фагоцитарное число.
CD19 – (Pan B-cell) зрелые В-лимфоциты;
CD4+ – (T-helper/Inducer cells) субпопуляция T-хелперов;
Формат 60х84, 1/16. Усл. печ. л. 1,0.
Заказ № 3792. Тираж 100 экз.
Типография БВЦ