Лабораторное дело Специальность 111201 «Ветеринария» Специализация «Биотехнология производства биопрепаратов» Пояснительная записка «Лабораторное дело» - учебная дисциплина, относящаяся к циклу ДС (дисциплины специализации. Функциональное назначение учебной дисциплины - дать студентам факультета ветеринарной медицины теоретические знания и практические навыки по основным методам лабораторной диагностики бактериальных и вирусных болезней сельскохозяйственных животных, методам бактериологических, серологических и вирусологических исследований. ГОСВПО по специальности 111201 «Ветеринария», учебный план КГСХА по специальности 111201 «Ветеринария». Цель курса - изучение студентами программы курса по лабораторному делу Задачи курса - получение фундаментальных знаний в области методов прикладной бактериологии, вирусологии, серологической лабораторной диагностики. Согласно требованиям квалификационной характеристики студенты должны иметь представление: - о нормативных распорядительных документах, определяющих структуру и организацию работы лабораторий; - о Правилах ветеринарно-санитарного режима; - об основах техники безопасности при работе в бактериологической и вирусологической лабораториях; - о перечне микробиологических, иммунологических, серологических и других видов исследований, проводимых в лабораториях; - о методах приготовления мазков для исследования морфологических и тинкториальных свойств выделенных культур, приготовления реактивов и окраски мазков; - о классификации культур по морфологическим и тинкториальным свойствам; - о правилах выполнения смывов и посевов при проведении санитарно-бактериологических исследований и исследований на стерильность; - о правила работы с инфекционным материалом; - методы обеззараживания инфекционного материала; - методы стерилизации посуды и питательных сред; - методы приготовления питательных сред для первичного посева материала и идентификации выделенных бактерий; - методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам с помощью бумажных дисков и методами серийных разведений в плотной и жидкой питательной средах; правила техники безопасности, производственной санитарии при работе в микробиологической лаборатории. Студенты должны знать: порядок регистрации образцов для исследования и результатов анализа; - использование нормативно-справочной литературы по соответствующим разделам гигиены и санитарии; - приготовление и стерилизация питательных сред для первичного посева проб и идентификации выделенных культур; - посев материала, поступившего на исследование; - подготовка и окрашивание мазков для бактериоскопии, прямой и непрямой иммунофлуоресценции, для исследований с помощью иммуноферментного анализа; - посев чистой культуры и раскладывание бумажных дисков на плотные питательные среды для определения отношения микроорганизмов к антибактериальным препаратам; - санитарно-бактериологические исследования объектов внешней среды (окружающей); - работа с лабораторными животными; - приготовление дезрастворов и правильность их применения; - обеззараживание отработанного материала; Студенты должны владеть: - бактериологическими методами диагностики инфекционных заболеваний; - вирусологическими методами диагностики инфекционных заболеваний; - серологическими методами диагностики инфекционных заболеваний; - основами лабораторной техники (работа с лабораторной посудой, методы осаждения, фильтрации, центрифугирования и др.); - методиками дезинфекции лабораторных помещений, стерилизации материалов и оборудования; - методиками приготовления и контроля питательных сред; - методиками культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях; - методами подготовки вируссодержащего материала, заражения культуры цитопатогенного действия вируса. клеток, оценки При освоении дисциплины студенты ознакомятся с лабораторными методами непосредственно в профильных лабораториях. Студенты должны иметь практические навыки: - проведения стерилизации материалов и оборудования, обезвреживания производственных отходов; - посевов и культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях; подготовка и окрашивание мазков для бактериоскопии; - постановки серологических реакций (ИФА, РА, РГА, РИГА, РТГА, РИД, РСК). Объем дисциплины и виды учебной работы Вид учебной работы Общая трудоемкость Вид итогового контроля: зачет № Всего часов 174 8 семестр Тематический план Очная форма обучения Наименование разделов и Всего В том числе аудиторных тем часов трудоемкос всего лекции лаборати торные занятия Самостоятельная работа 1 модуль Раздел «Прикладная бактериология» 1. 2. 3. Ознакомление с вивариями чистых и зараженных животных, рационами кормления и содержания животных, соблюдением ветсанправил. Помещение вскрывочной трупосжигательной печи. Баккухня. Правила работы и поведение в лаборатории. Порядок приема патологического материала, транспортировки, сохранения и доставки в лабораторию. Порядок вскрытия, проведение высевов на питательные среды. Микроскопические методы исследования, изготовление мазков, их окрашивание и просмотр. Рост культур микроорганизмов на плотных и в жидких питательных средах. Перечень характерных для Е. coli колоний на МПА, изготовление мазков и их просмотр. Ознакомление с техникой отдела. 11 3 2 1 8 8 3 1 2 5 8 3 1 2 5 4. 5. 6. Понятие о чистых культурах. Изготовление антигенов из чистых культур. Стандарт мутности. Оценка биохимических свойств выделенной культуры. Цветной ряд для определения биохимических свойств и высевы культур. Порядок оформления документации. Работа с определителем бактерий. 10 3 1 2 7 9 3 1 2 6 9 3 1 2 6 2 модуль Раздел «Прикладная вирусология» 7. Вирусологический отдел и правила работы с вирусными культурами. Ознакомление с помещениями и оборудованием вирусологического отдела. Диагностика бешенства методом иммунофлуоресценции и обнаружение телец Бабеше-Негри. 10 3 1 2 7 8. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). Определение уровня антител к вирусу Ньюкаслской болезни в РТГА. 13 5 1 4 8 9. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Постановка РНГА на трансмиссивный гастроэнтерит свиней (ТГС). 9 3 1 2 6 10. Иммуноферментный анализ. Постановка и учет ИФА при лабораторной диагностике ретровирусной инфекции. 10 3 1 2 7 Использование культур лееток в вирусологии. Получение культуры клеток, подсчет клеток, посадка на матрикс, культивирование, постановка РДП на 11. ИББ. 12. Использование развивающихся куриных эмбрионов (РЭК) в вирусологии. Выделение вирусов на РЭК. 10 3 1 2 7 12 4 2 2 8 Раздел «Серологическая лабораторная диагностика» 13. Ознакомление с помещениями и оборудованием серологического отдела, правила работы в отделе. Реакция агглютинации (РА), постановка РА (пластинчатой, пробирочной). 14. Реакция связывания комплемента. Постановка РСК. 15. Твердофазный иммуноферментный анализ. Постановка ИФА для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур. 9 3 1 2 6 16 9 2 7 7 10 3 1 2 7 7 16. Реакция по Асколи. Постановка реакции по Асколи. 10 3 1 2 17. Реакция микроагглютинации лизиса (РМАЛ). Исследование на лептоспироз. 10 3 1 2 ИТОГО Форма итогового контроля 174 60 20 40 Зачет 7 114 Список рекомендуемой литературы 1. ГОСТ 28085-89. Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности– М., Стандартинформ, переиздание, 2007. – 7 с. 2. Гордон Ада, Алистер Рамсей. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ. (перевод с английского) – М.: Медицина, 2000. – 344 с. 3. Животная клетка в культуре: методы и применение в биотехнологии / Г.Т. Акиншина, В.С. Белоконь, Н.М. Билько и др.; Под ред. Л.П. Дьяконова. – М.: Компания Спутник+, 2009. – 652 с. 4. Иммунология. Учебное пособие для проведения лабораторных работ и самостоятельной работы студентов» / В.Е. Козлов, В.М. Безгин, Н.Н. Быкова и др. – Курск: Изд-во КГСХА, 2009. – 56 с. 5. Кисленко В.Н. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М. КолосС, 2005. – 232 с 6. Корнев И.И. Стерилизация изделий медицинского назначения – М.: Человек, 2003. – 156 с. 7. Лабораторное дело. Учебно-методическое пособие для проведения лабораторных работ и самостоятельной работы студентов» / В.Е. Козлов, В.М. Безгин, А.В. Сверчков и др. – Курск: Изд-во КГСХА, 2009. – 88 с. 8. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для вузов / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук и др.; Под ред. А.И. Нетрусова – М.: Издательский центр «Академия», 2005. – 603 с. 9. Практикум по основам биотехнологии: Учебно-методическое пособие для студентов, обучающихся по специализации «Биотехнология производства биопрепаратов» / В.М. Безгин, В.Е. Козлов, А.В. Сверчков и др. – Курск: Изд-во КГСХА, 2009. – 52 с. 10. Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов / А.А. Нежута, Э.Ф. Токарик, А.Я. Самуйленко и др. – Курск: Издательство КГСХА, 2002. – 239 с. Интернет-ресурсы 1. “All Virology on the WWW”: www.virology.net 2. http://www.biomednet.com/ 3. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/ 4. http://microbiol.org/vlmicro/index.htm 5. http://www.freemedicaljournals.com/htm/index.htm 6. http://golgi.harvard.edu/biopages/biochem.html 7. http://www.rusmedserv.com/