Лабораторная диагностика

Министерство образования и науки Российской Федерации
ПРИМЕРНАЯ ПРОГРАММА
Рекомендуется для направления подготовки (специальности)
111801 «Ветеринария»
Квалификация (степень) выпускника – «специалист»
Наименование специализации
«Лабораторная диагностика»
Москва 2013
1. Цель и задачи специализации «Лабораторная диагностика»:
Цель: ознакомление студентов с современными методами
лабораторной диагностики и путями повышения качества исследований на
базе внедрения новой лабораторной техники и диагностических систем.
Задачи:

ознакомить студентов с автоматизированными, выполняемыми на
биохимических,
гематологических,
бактериологических
и
других
типах
иммунологических,
анализаторов
методами
исследований. Методами всесторонней информатизации и интеграции
на основе развития компьютерных технологий;
 ознакомить с необходимостью перехода диагностических технологий
на объективные количественные методы исследований, внедрение
протоколов и стандартов диагностики;
 освоить
методы
использованием
контроля
за
лабораторных
профилактикой
данных,
болезней
внедрение
с
технологий
эпизоотологического мониторинга и скрининговых иммунологических
программ;
 ознакомить с применением молекулярно-генетических методов;
 изучить пути улучшения знаний ветеринарных врачей в области
лабораторной диагностики;
 ознакомить
с
необходимостью
использования
лабораторного
заключения в качестве окончательного диагноза все большего числа
нозологических заболеваний (цитологическое заключение в онкологии,
гематологическое
иммуногенетические,
заключение
в
серологическое
онкогематологии
и
(лейкоз),
иммунохимическое
исследования на вирусные и бактериальные инфекции и др.) .
2. Место специализации в структуре ООП:
Лабораторная диагностика (ЛД) представляет собой ветеринарную
диагностическую специализацию, состоящую из совокупности исследований
in vitro биологического материала животного организма, основанных на
использовании
гематологических,
иммунологических,
паразитарных,
серологических,
биохимических,
молекулярно-биологических,
бактериологических, генетических, цитологических, токсикологических,
вирусологических и др. методов, сопоставления результатов этих методов с
клиническими
и
эпизоотологическими
данными
и
формулирования
лабораторного заключения.
Важным
аспектом
обучения
является
преемственность
образовательной программы. ЛД является своеобразным объединяющим
началом многих дисциплин (биохимии; физиологии животных; цитологии,
гистологии и
эмбриологии; клинической диагностики;
иммунологии;
ветеринарной микробиологии и микологии; паразитологии и инвазионных
болезней; вирусологии и биотехнологии; токсикологии, эпизоотологии и
инфекционных болезней, внутренних незаразных болезней, хирургии и т.д.),
когда в качестве основного носителя информации выступает биоматериал
животного,
исследуемого
in
vitro
в
лабораторных
условиях,
и
самостоятельность развития научных знаний сочетается с общностью и
взаимодополняющим
началом
этих
дисциплин
при
практическом
исследовании одного и того же биоматериала.
3. Требования к результатам освоения специализации:
Специализирующиеся в этом направлении должны
Знать:
 методы
определения
качественных
и
количественных
характеристик морфологических, физико-химических и других параметров
биологических материалов для оценки функционального состояния тканей и
систем организма;
 методы
выявления
физиологического
напряжения,
ранних
продромальных отклонений, нарушений при патологических состояниях
(инфекционных, воспалительных, некротических, опухолевых, иммунных и
др.).
Уметь:
 реализовать на практике технологии лабораторной диагностики,
которая осуществляется в рамках единой лабораторной службы: в
ветеринарных диагностических лабораториях (ВДЛ) районов, лабораториях
при крупных животноводческих комплексах и птицефабриках интенсивного
выращивания и откорма животных и птицы, а также в специализированных,
областных, межрегиональных и центральных лабораториях.
Владеть:
 методами оценки клинических, биохимических показателей
крови и других биологических жидкостей организма;
 методами оценки иммунного статуса, показателей клеточных и
гуморальных факторов.
4. Выпускник должен обладать следующими профессиональными
компетенциями:
 способен устанавливать взаимосвязь структуры и функции клеток и
тканей, их связи с клиническими симптомами;
способен оценивать физиологические параметры организма и состава
биожидкостей,
влияния
различных
факторов
(антропогенных,
биологических, механических, химических, физических) на возникновение и
характер патологического процесса;
способен
исследований
разрабатывать
теоретическую
на
основании
базу
для
клинико-лабораторных
лечебно-профилактических
мероприятий;
умеет
проводить
биохимические
исследования
биологических
жидкостей. Среди них эндогенные вещества: субстраты, метаболиты
химических процессов в организме, ферменты и их кофакторы, гуморальные
агенты, биологически активные вещества, витамины, факторы системы
гемостаза и др. Экзогенные вещества и их производные в организме:
инфекционные
и
токсические
вещества
(микроорганизмы,
токсины,
металлы), лекарственные соединения.
способен определять лабораторные показатели, их соотношение при
различных заболеваниях и зависимость от степени поражения органов,
систем и клеток, течения патологического процесса. Изучать закономерности
внутри- и межиндивидуальных колебаний химического и клеточного состава
биоматериалов;
умеет проводить морфологические (цитологические) исследования
биоматериала. Цитологические (гематологические) исследования клеточного
состава крови, костного мозга, тканей и органов, секретов и экскретов
организма, транссудатов и экссудатов. Цитохимические маркеры клеток, их
особенности. Морфологические и цитохимические изменения клеток
пунктатов органов, отпечатков тканей, соскобов, отсосов, биожидкостей при
инфекционных, аллергических, гематологических заболеваниях, иммунных,
воспалительных, некротических, опухолевых и других патологических
процессах;
умеет
проводить
иммунологические
исследования.
Индикацию
антигенов эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, белков плазмы, ГКС,
иммунокомпетентных клеток. Оценку уровней антител: естественных,
специфических и аутоиммунных, иммунных комплексов; оценку количества
медиаторов иммунитета – цитокинов; оценку иммунного статуса животных.
Диагностику
аутоиммунных
и
аллергических
заболеваний,
иммунодефицитных состояний;
способен
проводить
(бактериологические,
микробиологические
вирусологические
и
др.).
исследования
Индикацию
и
идентификацию бактерий, вирусов, простейших, гельминтов, грибов и
других возбудителей различных инфекционных заболеваний. Владеть
методами
оценки
чувствительности
микрофлоры
к
лекарственным
препаратам;
способен проводить иммунологические исследования. Определение
антигенов эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, белков плазмы, ГКС;
иммунокомпетентных клеток; антител: естественных, специфических и
аутоиммунных, а также иммунных комплексов; медиаторов иммунитета.
Давать оценку иммунному статусу организма, патогенезу возникновения и
развития аутоиммунных и аллергических заболеваний, иммунодефицитных
состояний;
освоил молекулярно-биологические методы для анализа генома
возбудителей: цитогенетические и молекулярно-генетические методы
исследований структуры хромосом. Выявление вариаций в структуре
участков ДНК (ПЦР, ДНК, РНК-зонды ).
5. Объем специализации и виды учебной работы
Общая трудоемкость специализации «Лабораторная диагностика»
составляет 12 зачетных единиц (432 часа).
Лабораторная диагностика
Вид учебной работы
Всего часов /
Семестры
зачетных
9
10
единиц
Лабораторное Клиническая
дело
лабораторная
диагностика
Аудиторные
занятия
216/6
108
108
(всего)
В том числе:
Лекции
84
42
42
Практические
занятия
68
34
34
(ПЗ)
Семинары (С)
Лабораторные
работы
64
32
32
(ЛР)
Самостоятельная
216/6
108
108
работа (всего)
В том числе:
Курсовой проект (работа)
Расчетно-графические
работы
Другие
виды
самостоятельной
работы
Реферат
Отчет по практике
Вид
промежуточной
Зачет
Зачет
аттестации
(зачет,
экзамен)
Общая
трудоемкость:
часы
432
216
216
зачетные единицы
12
6
6
6. Содержание специализации «Лабораторная диагностика»
6.1. Раздел ЛАБОРАТОРНОЕ ДЕЛО
Понятие о лабораторных методах.
Основу лабораторной диагностики составляют лабораторные методы и
технологии, каждая из которых, пройдя научную апробацию и процедуру
разрешения на применение, требует специфических методических
рекомендаций, рабочего места, санитарных правил, технического контроля,
подготовки персонала, экономического обоснования и пр.
Реализация технологий лабораторной диагностики осуществляется в
рамках единой лабораторной службы, включающей подразделения
гематологической, паразитарной, биохимической, иммунологической,
вирусологической, бактериологической, генетической, цитологической,
токсикологической диагностики. Диагностика по этим направлениям
проводится в ветеринарных диагностических лабораториях (ВДЛ) районов,
лабораториях при крупных животноводческих комплексах и птицефабриках
интенсивного выращивания и откорма животных и птицы, а также в
специализированных, областных, межрегиональных и центральных
лабораториях.
В настоящее время деятельность службы ветеринарной лабораторной
диагностики регламентируется приказом Минсельхоза России от 5 ноября
2008 г. № 490. В ветеринарных диагностических лабораториях
предусмотрены специалисты с высшим ветеринарным или ветеринарнобиологическим образованием: ветеринарный врач-токсиколог, ветеринарный
врач-бактериолог, ветеринарный врач-паразитолог, ветеринарный врачвирусолог, ветеринарный врач-биохимик.
Современные тенденции развития лабораторного дела
В течение последних лет наблюдается бурное развитие методов и
технологий лабораторного дела. Это развитие обусловлено общими
тенденциями в биологии, медицине, ветеринарии и технологическими
факторами. В нем можно выделить некоторые стратегические
направления:
1.
Совершенствование методов лабораторного дела и повышение
качества исследований на базе внедрения новой лабораторной техники и
диагностических систем.
2.
Замена трудоемких ручных методов на автоматизированные,
выполняемые на биохимических, гематологических, иммунологических,
бактериологических и других типах анализаторов, всесторонняя
информатизация и интеграция на основе развития компьютерных
технологий.
3.
Переход
диагностических
технологий
на
объективные
количественные методы исследований, внедрение протоколов и стандартов
диагностики.
4.
Контроль за эпизоотическим состоянием с использованием
лабораторных данных, внедрение технологий мониторинга патогенов и
скрининговых иммунологических программ.
5.
Улучшение знаний ветеринарных врачей в области лабораторной
диагностики.
6.
Использование
лабораторного
заключения
в
качестве
окончательного диагноза все большего числа нозологических форм.
Особенности отдельных видов лабораторного дела на современном
этапе.
1. Общеклинические и гематологические методы диагностики
традиционно являются самыми массовыми видами исследования,
основанными на микроскопии. Микроскопическая техника требует с одной
стороны индивидуальных навыков, с другой значимым является
субъективный фактор. В последнее время эти виды исследования получили
мощное техническое подкрепление в виде компьютеризированных
анализаторов изображения на основе цифровых видеокамер и программ
обработки изображений.
Принципиально новым направлением является внедрение и широкое
использование жидкостных гематологических анализаторов, выполняющий
частичный или практически полный анализ клеток крови и определяющих
показатели красной крови, в том числе гемоглобин, гематокрит и
эритроцитарные индексы. Для подсчета и анализа клеток крови используют
гематологические анализаторы разного уровня сложности. Преимуществом
современных технологий подсчета и оценки форменных элементов крови
является: высокая производительность (до 100-120 проб в час), небольшой
объем крови для анализа (12-150 мкл), анализ большого массива (десятки
тысяч) клеток, определение с высокой точностью и воспроизводимостью 20 и
более параметров анализа крови одновременно, графическое представление
результатов исследований (гистограммы, скетограммы). По сравнению с
визуальной техникой автоматический подсчет - более точный метод оценки
концентрации клеток. Автоматизированный анализ крови открыл много
новых диагностических возможностей, но одновременно он располагает и
некоторыми ограничениями, особенно касающихся морфологических
исследований клеток. Несмотря на все достоинства, даже самые современные
анализаторы не в состоянии полностью заменить метод микроскопической
оценки клеток.
Для исследования мочи современными являются технологии,
основанные на использовании моно- и полифункциональных тест-полосок
“сухая химия” с последующим полуколичественным определением
параметров мочи на отражательных фотометрах. В последнее время
появились анализаторы осадков мочи, основанные на анализе
видеоизображений.
Как
показывает
практика
автоматизированные
анализаторы
существенно помогают при скрининге общеклинических и гематологических
анализов, значительно расширяя диапазоны исследований и вводя
количественные показатели оценки результатов.
Отдельным направлением является онкогематология, которая развивает
исследования по определению маркеров дифференцировки. Диагностика и
лечение лимфопролиферативных заболеваний невозможна без постановки
точного диагноза с использованием фенотипирования клеточных клонов
направленной терапии.
2. Биохимические технологии обогатились новыми методами
кинетических измерений не только активности ферментов, но и
концентрации субстратов. Повышение чувствительности и специфичности
методов способствует расширению объектов биохимического анализа,
помимо традиционного анализа сыворотки и мочи все шире в
диагностических целях используется конденсат выдыхаемого воздуха,
выпотная, слезная жидкость, ликвор, клеточные элементы и др. Широкое
внедрение биохимических анализаторов позволяет проводить комплексный
анализ с использованием все меньшего объема биологической пробы.
Современный уровень биохимических исследований требует внедрения
калибраторов для определения активности ферментов, стандартных образцов
для исследования крови, мочи, других биожидкостей.
Перспективным направлением биохимических исследований является
анализ специфических белков, гормонов, биологически активных
метаболитов, витаминов, изоферментов и изоформ и т.д.
3. Иммунологические исследования в лабораторной диагностике
приобретают все больший удельный вес. Лабораторная иммунология имеет
собственный предмет исследования, связанный с оценкой иммунного
статуса, включая определение параметров клеточного и гуморального
иммунитета, диагностику и характеристику аутоиммунных заболеваний,
иммунный компонент широко распространенной патологии. Патогенез таких
болезней как диабет, диффузный токсический зоб, ревматизм связывают в
первую очередь с иммунными нарушениями. Без иммунологического
исследования
невозможно
диагностировать
коллагенозы,
ряд
злокачественных заболеваний, лимфопролиферативную патологию и т.д.
Инфекционная
иммунология
становится
отдельным
современным
направлением лабораторной диагностики, позволяющим не только
идентифицировать вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции, но и
определить титры антител, оценить иммунитет к отдельным видам
инфекционных заболеваний, на базе определения вирусной нагрузки
прогнозировать переход инфицирования в клинические формы заболевания.
Иммунологические методы исследования широко внедрились в
смежные виды лабораторной диагностики: цитологию (иммуноцитохимия),
биохимию
(иммуноферментный
анализ,
иммунотурбидиметрия,
нефелометрия,
радиоиммунный,
иммунохимический
анализ),
микробиологию, гематологию и др. Высокая специфичность и
чувствительность делает эти подходы наиболее перспективными при
разработке новых диагностических методов и тестов. Широкое внедрение
рутинных
иммунологических
методов
сдерживается
отсутствием
отечественных панелей поликлональных и моноклональных антител;
создание на их основе широкого спектра диагностических тест-систем –
актуальная задача научных коллективов, тесно взаимодействующих с
лабораторной службой.
4.
Цитологические
исследования
являются
высокоспециализированным видом лабораторного анализа. Цитологическое
исследование является одним из основных методов морфологического
анализа клеточного и неклеточного биологического материала. В цитологии,
как ни одном другом виде лабораторных исследований, доминирует
субъективный фактор и в тоже время заключение цитолога зачастую носит
окончательным характер постановки диагноза.
Современные тенденции цитологической диагностики, улучшение ее
происходит за счет использования высокотехнологических микроскопов или
автоматических аппаратов, стандартизации подготовки препаратов для
исследования на базе использования современных цитоцентрифуг,
правильного выполнения процедур приготовления препарата, качественных
применяемых для фиксации и окраски реагентов.
5. Микробиологические исследования должны иметь приоритетное
развитие среди других видов лабораторной диагностики. Это обусловлено
массовым распространением инфекционных заболеваний, поражающих все
виды животных и человека. С бесконтрольностью применения антибиотиков
и антисептиков, востребованность этого вида лабораторной диагностики
возрастает.
В России уровень автоматизации микробиологических исследований
остается на одном из самых низких среди европейских стран. Результаты
выдаются с большой задержкой, не соответствуют запросам ветеринарных
врачей хозяйств.
В то же время в ряде стран Европейского союза бактериологические
исследования составляют до половины всех лабораторных исследований,
проводятся
с
использованием
бактериологических
анализаторов,
коммерческих готовых питательных сред, систем экспресс-диагностики,
экспертных систем, приборов для культивирования культур клеток и др.
6. Молекулярно-биологические исследования являются новым
чрезвычайно перспективным видом лабораторных исследований. С
развитием иммуногенетики связывают существенный прорыв в диагностике
и лечении наследственных, инфекционных, онкологических и других видов
заболеваний. В тоже время высочайшая чувствительность делает этот метод
подверженным необъективным заключениям при непрофессиональном
подходе. В настоящее время имеет место период наработки данных о
диагностических возможностях этого подхода, поэтому поспешное
внедрение его в широкую лабораторную практику взамен традиционных
микробиологических, цитологических и других видов исследования, может
дискредитировать методологию молекулярно-биологических исследований.
Актуальным представляет поэтапное, сочетающееся с другими видами
лабораторных исследований, внедрение таких технологий как полимеразная
цепная реакция (ПЦР), другие методы молекулярной диагностики для
идентификации вирусов и т.д.
7. Токсикологические исследования – также получают все большее
распространение среди видов лабораторных подходов. Это в первую очередь
объясняется широким распространением токсических продуктов, в том числе
лекарственных препаратов, оказывающих токсический эффект.
8. Вирусологические исследования.
9. Лабораторные животные и модельные системы.
Лабораторные животные: белые мыши (беспородные), белые крысы,
морские свинки, кролики, восприимчивые животные (овцы, козы, птица
и.т.д.). Характеристика, требования к содержанию, кормлению. Ветеринарносанитарные правила. Болезни лабораторных животных, диагностика, лечение
и профилактика. Чистолинейные животные, получение, характеристика.
Мыши с врожденными (Nude, NOD, SCID, NZB и др.) и индуцированными
иммунодефицитами. Гнотобионты. Трансгенные животные и животные с
генетическим нокаутом. Требования к содержанию, особенности
использование для решения практически значимых проблем диагностики.
Культура клеток in vitro и in vivo. Использование модельных систем для
изучения механизмов действия лекарственных и
иммунотропных
препаратов.
6.1.1. Тематика практических занятий по разделу
лабораторное дело
№
№
п/п
Содержание занятий
Часы
1.
Ветеринарная
диагностическая
лаборатория.
Структура.
Оборудование. Санитарные требования к помещениям.
2
2.
Определение солей тяжелых металлов в биологических жидкостях
и тканях, растительном сырье.
1
3.
Определение токсинов и микотоксинов в биожидкостях, кормах и
кормовых добавках. Выдача заключения.
1
4.
Микробиологические исследования. Бактерии патогенные для
животных. Требования к взятию и транспортировке биоматериала
для бактериологических исследований.
1
5.
Бактериологическая лаборатория. Требования, правила работы,
техника безопасности.
1
6.
Приготовление питательных сред для бактериологических
исследований.
2
7.
Приготовление бактериологических красок (Романовского-Гимза,
по Грамму, Цель-Нильсону и т.д.). Окраска мазков-отпечатков.
1
8.
Биохимические тесты в бактериологии
2
9.
Выделение и идентификация микобактерий, микоплазм, хламидий.
1
10.
Выделение и идентификация возбудителей риккетсий, микозов.
1
11.
Вирусологические исследования. Вирусы патогенные для
животных. Требования к взятию и транспортировке биоматериала
для вирусологических исследований.
2
12.
Вирусологическая лаборатория. Требования, правила работы,
техника безопасности.
1
13.
Методы вирусологических исследований биоматериала. Первичная
культура клеток. Перевиваемые линии животных клеток.
2
14.
Получение клеточной суспензии. Культивирование клеток.
1
15.
Реакция нейтрализации вируса.
2
16.
Цитологические методы индикации вируса в биоматериале
2
17.
Серологические реакции: реакция агглютинация, характеристика,
компоненты, постановка, учет.
2
18.
Реакция преципитации (иммунодиффузии), характеристика,
компоненты, постановка, учет.
1
19.
Реакция связывания комплемента (РСК), характеристика,
компоненты, постановка, учет.
2
20.
Иммунохимические реакции: реакция иммунофлуоресценции
(РИФ), характеристика, компоненты, постановка, учет.
2
21.
Молекулярно-биологические: полимеразная цепная реакция
(ПЦР). Требования в лаборатории, оборудование. Характеристика,
компоненты, постановка, учет.
4
Итого
34
6.1.2.Тематика лабораторных занятий по разделу лабораторное
дело
№№
п/п
Содержание занятий
часы
1.
Дезинфекционные и обеззараживающие средства, используемые в
лабораторной работе. Подготовка рабочих растворов.
Определение концентрации растворов.
2
2.
Лабораторные животные и модельные системы в ЛД. Правила
безопасности работы с экспериментальными животными.
Различные способы введения антигенов животным.
Прижизненное взятие крови у мышей, морских свинок, кроликов.
2
Выделение клеток крови, получение плазмы, сыворотки.
Приготовление клеточных суспензий, определенной
концентрации и жизнеспособности.
3.
Гематологические исследования разных видов животных:
Клинический анализ крови; СОЭ, гематокрита. Лейкограмма.
Использование автоматических анализаторов в исследовании
крови. Выдача заключения.
2
4.
Анализ мочи по Нечипоренко. Физико-химическое исследование
мочи с микроскопией. Выдача заключения
2
5.
Биохимический анализ сыворотки крови: белок общий, макро- и
микроэлементы. (Биохимический анализатор, Спектрофотометр).
Выдача заключения
2
6.
Приготовление питательных сред для бактериологических
исследований
2
7.
Биохимические тесты в бактериологии
2
8.
Выделение и идентификация аэробных микроорганизмов
2
9.
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
2
10.
Получение клеточной суспензии. Культивирование клеток
2
11.
Реакция гемагглютиции (РГА), реакция прямой и непрямой
агглютинации (РПГА, РНГА), характеристика, компоненты,
постановка, учет.
2
12.
Иммунохимические реакции: Реакция иммунофлуоресценции
(РИФ), характеристика, компоненты, постановка, учет.
2
13.
Иммуноферментный анализ (ИФА) и его модификации.
Характеристика, компоненты, постановка, учет.
2
14.
Молекулярно-биологические: Полимеразная цепная реакция
(ПЦР). Требования в лаборатории, оборудование. Характеристика,
компоненты, постановка, учет.
6
Итого
32
6.2. Раздел КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА.
Важное место среди диагностических служб занимает клиническая
лабораторная диагностика, поставляющая практической ветеринарии около
80% объема объективной диагностической информации, необходимой для
своевременного принятия правильного клинического решения и контроля за
эффективностью проводимых ветеринарных мероприятий.
Несмотря на сложную экономическую ситуацию в сельском хозяйстве,
лабораторная служба устойчиво функционирует, обеспечивая возложенные
на нее задачи. Структура ветеринарных лабораторий в основном
соответствует потребностям хозяйств в лабораторной диагностике и
мониторинге за эпизоотическим процессом, обеспечивая повседневные
запросы ветеринарных врачей в наиболее распространенных исследованиях.
Для интенсификации диагностического процесса в лабораторной практике
широко используются готовые формы диагностических наборов, реактивов и
тест-систем, а также автоматизированные средства анализа и компьютерные
системы управления, включая обработку результатов исследований.
В первую очередь необходимо отметить комплексность современной
лабораторной диагностики. Сегодня вряд ли можно говорить о том, что
какой-то из методов, применяемый изолированно, способен дать
объективные и достоверные результаты. Как правило, уже на начальном
этапе принятия решения о подборе необходимого комплекса
диагностических мер требуется поставить вопрос о разумном сочетании
различных - как новейших, так и хорошо зарекомендовавших себя
традиционных - методов исследования с целью верификации присутствия
инфекционного агента у пациента. Исключительную важность имеет также
доказательность участия инфекционного агента именно в том
патологическом процессе, который наблюдают практикующие ветеринарные
врачи. Для того чтобы назначать этиологическое, а не посиндромное
лечение, необходимо проводить мультифакторное исследование, стремясь
точно определить роль того или иного патогена в конкретной клинической
картине.
Современный арсенал диагностических методов, используемый
сегодня лабораторной службой для решения поставленных задач достаточно
широк. Многое диктуется модой, многое определяется экономическими
условиями существования конкретной диагностической лабораторией.
Условно все методы диагностики инфекций можно разделить на две большие
группы: прямые методы выявления патогена, когда лаборатория стремится
выделить фрагмент возбудителя (наследственный материал или антигены)
или с помощью культурального посева обнаружить патогены на
искусственных питательных средах, и непрямые. К прямым методам
диагностики следует отнести бактериологический и вирусологический
анализ, микроскопию и иммунофлюоресценцию и различные методы ДНКдиагностики (в первую очередь - амплификационные и гибридизационные
технологии). К непрямым методам относятся гистология, инструментальный
анализ и, конечно, серологические методы, то есть анализ гуморального
ответа организма на присутствие патогена.
ОЦЕНКА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА
Основные понятия. Задачи клинических исследований крови.
Морфологические показатели крови, показания и принципы его оценки.
Влияние на функционирование системы гемопоэза физических, химических
и биологических факторов окружающей среды, климатогеографические
особенности, экологические факторы, санитарно-гигиенические условия
содержания животных, кормления, стресс, и др. Тесты оценки
гематологических показателей животных: ориентирующие (1 уровень),
аналитические (2 уровень), видовые и возрастные особенности,
интерпретация результатов. Принципы массовых гематологических
исследований.
Болезнь – это какое-либо отклонение или нарушение нормальной
структуры или функции клеток, органов, систем органов организма или их
комбинации, которые проявляются характерными симптомами и признаками
в их этиологии, патологии и прогноза, которой может быть известен только
на основании лабораторных исследований.
Изучение патологического состояния животных лабораторными
тестами делится на две большие части:
1. Общая. Изучает ответ клеток и тканей на какое-либо воздействие
или повреждение независимо от того, какие органы или системы у животных
вовлечены в процесс. Эта область одна из наиболее комплексных и
доступных областей лабораторной диагностики в большей степени
вследствие новых достижений в технике исследований и дает представление
об общих принципах патологических процессов, с которыми студенты
встретятся неоднократно при изучении болезней систем органов.
2. Патология систем органов (специальная часть) изучает, каким
образом каждая система органов реагирует на повреждение, вызванное
специфической причиной.
В связи с этим и диагностика патологий носит общий и частный
характер.
Диагностика общей патологии.
1.
Цитологические исследования. Этиология нарушения
морфологии и функции клеток.
Причины: недостаток кислорода (гипоксия); физическое воздействие
(травма, тепло, холод, радиация и т.д.); несбалансированность и дефицит
кормления;
генетические
перестройки
(мутации
–
гемофилия,
комбинированный иммунодефицит Арабских жеребят, дефекты в синтезе
коллагена,
генетические
предрасположенности);
дисбаланс
в
функциональной нагрузке клеток; повреждение инфекционными агентами;
влияние химических агентов, лекарств, токсинов; иммунологические
дисфункции, старение.
Адаптация, дегенерация или смерть клеток. Повреждение
цитоплазматической мембраны; проникновение кальция внутрь клетки;
набухание митохондрий и их вакуолизация; дегрануляция лизосом и
ферментативное разрушение компонентов клетки; потеря энергозависимых
клеточных функций.
Обратимые и необратимые повреждения клеток. Острое набухание
клеток. Механизмы, морфологические проявления.
Гибель клеток. Последовательность ультраструктурных изменений при
некрозе и апоптозе клеток, онкозис (онкотический некроз), его
морфологические проявления и типы; повреждения клеточной мембраны,
ведущие к гибели клетки, повреждения свободными радикалами; жировой
некроз. Морфологические проявления посмертных изменений.
Механизмы апоптоза. Морфологические проявления апоптоза.
Хроническое повреждение клеток, адаптация клеток. Сублетальные
повреждения и субклеточные изменения (аутофагоцитоз, изменения размера
клеток, их числа – гиперплазия, гипертрофия, метаплазия, дисплазия,
атрофия).
Накопления внутриклеточных включений: жиров, гликогена,
протеинов и других включений. Внеклеточные включения гиалиновые
субстанции, фибриноидный некроз, кристаллы урата натрия, пирофосфата
кальция.
Патологическая
кальцификация
тканей
(дистрофическая,
метастатическая). Пигменты экзогенные и эндогенные, гематогенные
(гемоглобин,
оксигемоглобин,
неоксигенированный
гемоглобин,
метгемоглобин, карбоксигемоглобин, гемосидерин, билирубин, гематин) их
роль в патогенезе болезней разной этиологии.
Структурные и биохимические изменения при старении клеток.
Морфогистологическая диагностика злокачественных опухолей.
2. Диагностика нарушений в системе циркуляции крови, лимфы.
Причины нарушения распределения жидкости в организме - отеки.
Этиология нарушения гемостаза (геморрагии и тромбозы) - травма, эрозия
сосудов при воспалении или опухолях, микозах, эндотоксемия, роль
инфекционных агентов (аденовирус-1 собак), химикалии, болезни иммунных
комплексов, аллергические реакции и т.д., иммуноопосредованная
гемолитическая анемия.
Диагностика причин тромбозов. Повреждение эндотелия: вирусами
аденовирус -1 собак, морбиливирус, герпесвирус и артеривирус, орбивирус
овец, пестивирус КРС и свиней); бактериями (S. typhimurium, Р. hemolytica,
E. rhusiopathiae, H. Somnus), грибы (Aspergillus, Mucor, Absidia, Rhizopus)
нематоды ( Strongylus vulgaris larvae,Dirofilariae,Spirocerca, Aelurostrongylus,
angyostrongylos); токсинами (эндотоксин, токсины патогенных грибовClaviceps); дефицит витамина Е и селена; локальная инфекция – абсцессы
печени, метриты и т.д.); диссеминированная интраваскулярная коагуляция;
неудачные интравенозные инъекции; иммуноопосредованные васкулиты
(геморрагическая пурпура, инфекционный перитонит кошек) и др.
Изменения в скорости кровотока: локальный стаз, болезни сердца,
аневризм, гиповолемия.
Повышенная свертываемость крови: повышенная активность
тромбоцитов, повышение активности факторов свертывания крови, дефицит
антитромбина 111, нарушения в обмене веществ, гломерулопатии.
3. Диагностика патологии иммунной системы – иммунного
повреждения тканей.
Острое воспаление. Этиология и морфологическая классификация
экссудатов при остром воспалении (морфологический диагноз).
Хроническое воспаление. Диагностика наиболее часто встречающихся
причин хронического воспаления: инфекционные агенты – бактерии Brucella
spp, Micobacteria spp, Rhodococcus equi; вирусы – цирковирус поросят; грибы
– трихофитон, микроспорум, аспергиллюм; простейшие-паразиты –
лейшмании, трипаносомы, Drashia spp. Habronema spp. Токсины Vicia villosa;
аутоиммунные болезни красная волчанка, аллергический контактный
дерматит, ревматоидный артрит и т.д.; инородные тела и др. причины.
Гранулематозное воспаление и образование гранулем различной этиологии.
Лабораторная диагностика болезней в основе которых лежит иммунное
воспаление:
- гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) 1 - реагиновый
тип - анафилактический шок, аллергическая крапивница, ангиоэдема,
аллергический ринит или риноконъюктивит, поллиноз, бронхиальная астма,
пищевая аллергия.
- ГНТ 2 - цитотоксический тип – аутоиммунная гемолитическая
анемия,
гемолитическая
болезнь
новорожденных,
аутоиммунная
тромбоцитопеническая микроангиопатия, пузырчатка (пемфигус), васкулит,
вызванный антителами против антигенов нейтрофилов, злокачественная
миастения, злокачественная анемия, буллезный пемфингоид.
- ГНТ 3 - иммунокомплексный тип – системная красная волчанка.
«синий глаз» у собак. Инфекционная анемия лошадей, постстафилококковая
и постстрептококковая гиперчувствительности, кожный васкулит, острый
гломерулонефрит, реактивный артрит, сывороточная болезнь, хроническая
обструктивная пневмония, ревматоидный артрит, Алеутская болезнь норок.
- Гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) - туберкулез,
болезнь Джона (хронический энтерит у КРС и овец), бруцеллез, сап,
аллергический контактный дерматит, рецидивирующий увеит лошадей,
отторжение аллотрансплантата.
Диагностика иммунодефицитов.
Диагностика первичных иммунодефицитов: адаптивного иммунитета
- тяжелый комбинированный иммунодефицит, общий вариабельный
иммунодефицит,
агаммаглобулинемия,
селективный
дефицит
иммуноглобулинов, гипоплазия тимуса, аплазия тимуса, дефицит Т-л,
дефицит В-л, неклассифицированные иммунодефициты.
Врожденный иммунитет - дефицит системы комплемента, синдром
Чедиак-Хигаши, дефицит адгезивной активности лейкоцитов у собак и КРС,
циклическая нейтропения у собак и др.
Диагностика генерализованных амилоидозов.
Иммунологическая молекулярная диагностика злокачественных
опухолей (молекулярно-генетические методы, тестирование онкомаркеров).
Диагностика патологий систем органов.
1.Пищеварительная система.
Ротовая полость. Дфференциальная диагностика стоматитов,
гингвинитов,
вызванных
микроорганизмами,
особенно
вирусами,
химикалиями, травмой, интоксикацией, авитаминозом витамина С,
аутоиммунными болезнями или системными заболеваниями.
-Везикулярный стоматит жвачных, свиней, лошадей (ящур,
везикулярная болезнь свиней, везикулярный стоматит, везикулярная
экзантема свиней и т.д.), вызванный пикорнавирусом, рабдовирусом,
калицивирусом, энтеровирусом.
-Папулезный стоматит (парапоксвирус) КРС, овец и коз.
-Некротизирущий стоматит телят, овец и свиней (F.necrophorum,
Borrelia vincentii).
-Эозинофильный стоматит ( иммуноопосредованный механизм).
-Лимфоплазмоцитарный стоматит (калицивирус, вирус лейкемии
кошек и/или вирус иммунодефицита кошек.
Морфогистологическая диагностика
новообразований ротовой
полости. Дифференциальная диагностика патологии миндалин, слюнных
желез, зубов инфекционной природы (рабдовирус, коронавирус, S. typhisuis),
языка (астинобациллы, кандиды, BDV, Sarcocystis spp., Trichinella spiralis,
Gongylonema spp) и неинфекционной природы.
Диагностика
болезней
пищевода
инфекционной
природы
(Gongylonema spp, Gasterophilus spp., Hypoderma lineatum ,Spirocerca lupi и
др., папиломавирус) и неинфекционной природы.
Желудок и его отделы. Дифференциальная диагностика патологий
неинфекционной и инфекционной природы, новообразований.
Методы индикации и идентификации возбудителей воспалительных
процессов: Actinomyces pyogenes, Fusobacterium necrophorum,C. Perfringens,
C.septicum, Sarcina-подобных микроорганизмов, сальмонелл, патогенных
эшерихий, M. tuberculosis; нерациональная антибиотикотерапия и
дисбактериоз, диагностика дисбактериозов; развитие микозов на фоне
антибиотикотерапии. Индикация: Aspergillus, Mucor, Absidia, Mortierella spp.,
Rhizopus, Histoplasma capsulatum и др.
Вирусиндуцированные папиломы. Роль трематод в развитии патологии
желудка, их индикация: Paramphistomatum, Calicophoron, Cotylophoron и
немотод, особенно у собак, а также Gasterophilus intestinalis, Gasterophilus
nasalis, Draschia megastoma и многие другие.
Дифференциальная диагностика язв и эрозий различной этиологии.
Индикация Helicobacter spp.
Кишечник. Методы диагностики патологий инфекционной и
неинфекционной природы.
Дифференциальная диагностика диареи различной этиологии.
Методы индикации и идентификации этиологически значимых агентов
инфекционной природы:
вирусов - ротавирусов, коронавирусов, аденовирусов и др.;
бактерий – патогенных эшерихий, сальмонелл, клостридий,
кампилобактерий, микобактерий.
Обратить внимание на этиологию патологий у разных видов животных
и подчеркнуть необходимость индикации следующих инфекционных
агентов:
у лошадей – бактерии Rodococcus eque, Neorickettsia risticii, M. avium,
колит Х, возможно клостридиальной природы;
иммунной этиологии - методы дифференциальной диагностики
хронического эозинофильного гастроэнтерита и
мультисистемной
эозинофильной эпителиотропной болезни, которые ассоциированы с
дисфункцией иммунной системой (Т-х 2 и повышенной регуляции ИЛ-5).
Диагностика анафилактоидной пурпуры.
У жвачных – вирусы BVD, морбилливирусы, коронавирусы,
торовирусы (Во ТV) и их бактериальные ассоцианты.
Бактерии –M. paratuberculosis.
У свиней – вирусы трансмиссивного гастроэнтерита.
Бактерии – Brachyspira hyodysenteriae и ее синергисты F.necrophorum
или B. vulgaris, кампилобактеры, гемофилы, микоплазмы.
У мелких домашних животны: вирусы - парвовирусы, коронавирусы.
Бактерии – патогенные эшерихии, цитробактер, риккетсии.
Грибы – гистоплазмы.
Дифференциальная диагностика энтеритов, вызванных паразитами:
Amebiasis, Trichomoniasis, Coccidiosis, Cryptosporidiosis, Giardiasis, Ascariasis,
Strongyloidosis, Gestodes и др.
Диагностика неоплазий кишечника.
Печень и билиарная система. Гематологическая, цитологическая,
биохимическая манифестация печеночной недостаточности. Ультразвуковые
обследования. Дифференциальная диагностика болезней печени и билиарной
системы инфекционной и неинфекционной природы.Нарушения крово- и
лимфотоков, нарушение метаболизма и отложения в печени. Диагностика
инфекционных болезней печени: инфекционного гепатита собак;
герпесвирусных инфекций; бактериальных абсцессов и гранулем,
вызванныех йерсиниями, нокардиями, актиномицетами, фузобактериями,
микобактериями; некротического гепатита клостридиальной природы.
Лабораторная диагностика лептоспироза, сальмонеллеза, пастереллеза,
бруцеллеза и др. инфекций. Диагностика протозойных инфекций,
паразитозов. Печень как орган–мишень при гиперчувствительности у собак.
Воспалительные процессы билиарного тракта.
Нейтрофильный и лимфоцитарный и др. холангиты. Диетологические
(пищевые) болезни печени, особенно вызванные токсинами растений, синезеленными водорослями, микотоксинами, химикалиями, потенциально
токсичными лекарствами.
Морфогистологическая диагностика новообразований в печени.
Диагностика патологий при поражении желчного пузыря и
поджелудочной железы разной этиологии. Ультразвуковые обследования.
2. Дыхательная система.
Материал для исследования респираторного тракта: патологический
материал и биопсии, бронхоальвеолярный лаваж и трахеальный аспират.
Методы лабораторной
диагностики болезней респираторного тракта,
особенно инфекционной природы и при иммунопатологиях.
Назальная полость и слизистая синусов. Методы диагностики
патологий. Особое внимание на специфические болезни этих отделов у
разных видов животных: вирусные инфекции лошадей (ринопневмония,
инфлюенца и др.), бактериальные болезни (мыт и сап, мелиоидоз и др.).
У КРС: инфекционный ринотрахеит.
У свиней(поросят) - цитомегаловирусная инфекция, атрофический
ринит.
Диагностика ринитов собак, вирусного ринотрахеита кошек,
калицивирусная инфекция кошек, хламидиоз, микоплазмоз, микоз кошек.
Диагностика
опухолей.
Методы
лабораторной
диагностики
фарингитов, ларингитов и трахеитов различной этиологии. Индикация B.
bronchiseptica, CAV-1 у собак. Диагностика паразитарных болезней.
6.2.1.Тематика практических занятий по разделу клиническая
лабораторная диагностика.
№№
п/п
1
2
3
4
Содержание занятий
часы
Серологические и иммунохимические методы
диагностики инфекционных болезней
желудочно-кишечного тракта
Бактериологические методы исследования
при диагностике инфекционных болезнях
желудочно-кишечного тракта
Вирусологические методы исследования при
диагностике инфекционных болезней
желудочно-кишечного тракта.
Серологические и иммунохимические методы
исследования при диагностике инфекционных
6
8
6
6
5
Итого:
болезней респираторного тракта.
Бактериологические и вирусологические
методы исследования при диагностике
инфекционных болезней респираторного
тракта.
8
34
6.2.2. Тематика лабораторных занятий по разделу клиническая
лабораторная диагностика
№№
Содержание занятий
часы
п/п
Серологические и иммунохимические методы
6
1
диагностики инфекционных болезней
желудочно-кишечного тракта
Бактериологические методы исследования
6
2
при диагностике инфекционных болезнях
желудочно-кишечного тракта
Вирусологические методы исследования при
6
3
диагностике инфекционных болезней
желудочно-кишечного тракта.
Серологические и иммунохимические методы
6
4
исследования при диагностике инфекционных
болезней респираторного тракта.
Бактериологические и вирусологические
8
5
методы исследования при диагностике
инфекционных болезней респираторного
тракта.
Итого:
32
7.
8.
Дисциплины специализации «Лабораторная диагностика»
и междисциплинарные связи с обеспечиваемыми (последующими)
дисциплинами
Наименование дисциплины
Наименование
специализации
№ обеспечиваемых
Лабораторное дело
Клиническая
п/п (последующих)
лабораторная
дисциплин
диагностика
1.
Внутренние
незаразные
*
*
болезни
2.
Оперативная
хирургия
с
*
*
топографической
анатомией
3.
4.
5.
Общая и частная
хирургия
Эпизоотология и
инфекционные
болезни животных
Паразитология и
инвазионные
болезни
*
*
*
*
*
*
9. Список рекомендуемой литературы.
Основная литература.
1. Баркаган З. С., Момот А. П. Диагностика и контролируемая терапия
нарушений гомеостаза. – М.: Ньюдиамед, 2001. - 286 с.
2. Жуков В. И., Завгородний И. В., Мясоедов В.В., Цыганенко А. И.
Клиническая биохимия. - М., 2002. - 504 с.
3. Кишкун. А. А., Назаренко Г.И. Клиническая оценка результатов
лабораторных исследований. – М.: Медицина, 2002. – 544 с.
Дополнительная литература.
1. Адрианова Н. В., Артомасова А. В., Пыцкий В. И. Аллергические
заболевания. - М.: Триада-Х, 1999.-470 с.
2. Арки Р. А., Кэттайл В. М., Патофизиология эндокринной системы. - СПб.:
Невский диалект, 2001. - 336 с.
3.Беломестнов С. Р. Показатели гормональной регуляции половой системы
мужчин с доказанной фертильностью. - Проблемы репродукции.
Специальный выпуск, 2006. - 283 с.
4. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных
инфекций. – М.: 2003. Инфекционные болезни у детей. / Под ред. Д. Мари. –
М.: Практика, 2006. – 928 с.
5. Клиническая лабораторная аналитика. / Под ред. Меньшикова В.В. Т.1. –
М., Агат-Мед, 2002. - 275 с. Т.2. – М.: Лабинформ – РАМЛД, 1999. - 352 с.
Т.3. – М.: Лабпресс, 2000. - 384 с. – М., Агат-Мед, 2003. - 815 с.
6. Лифшиц В. М., Сидельникова В. И. Медицинские лабораторные анализы. М.: Триада-Х, 2002. - 312 с.
7. Шиффман Ф.Д. Патофизиология крови / Пер. с англ. – М.: BINOM, СПб.:
Невский диалект, 2000. – 446 с.
8. Петрова А.С. Цитологическая диагностика опухолей и предопухолевых
процессов. – М.: Медицина, 1985. – 296 с.
9. Григорьев П.Я., Яковенко Э.П. Нарушение нормального состава кишечной
микрофлоры, клиническое значение и вопросы терапии. Методическое
пособие. – М., 2000. – 15 с.
10. Методы микробиологического анализа неспорообразующих анаэробных
бактерий / Под рук. Кочеровец В.И., Михайлова В.С. –М.: ТОО
«Лабинформ», 1996.-231с.
11. Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. –
Медицинское издательство, т.2. 2003. - 576 с.
12. Cinical review 167 / Becker K. et.al. – J. Clin: Endocin. Meb, 2004, №89 (4),
p.1512-4858.
13. Dufour D.R. Cinical use oflaboratory data: a practical guide. – Williams &
Wilkins, 1998, 606 p.
СПИСОК ИСПОЛНИТЕЛЕЙ
Научный руководитель:
Председатель совета УМО вузов
РФ по образованию в области
зоотехнии и ветеринарии, ректор
ФГБОУ ВПО МГАВМиБ,
академик РАСХН, профессор
Ф.И.Василевич
Группа управления проектом:
Заместитель председателя совета
УМО вузов РФ по образованию в
области зоотехнии и ветеринарии, проректор ФГБОУ ВПО
МГАВМиБ, доктор биологических наук, профессор
Председатель УМС по направлению подготовки (специальности)
111801 «Ветеринария», декан
факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО МГАВМиБ,
доктор биологических наук,
профессор
В.И.Максимов
Н.А.Слесаренко
Помощник проректора УМО
вузов РФ по образованию в
области зоотехнии и
ветеринарии, доктор
ветеринарных наук, профессор
Д.Н. Уразаев
Составители:
ФГБОУ ВПО МГАВМиБ:
Зав. кафедрой иммунологии,
член-корреспондент
РАСХН,
профессор
Д.А. Девришов
Профессор кафедры
иммунологии,
кандидат ветеринарных наук
В.Е. Брылина
Старший преподаватель
кафедры иммунологии
К.Ю. Пермякова
ФГУ ВГНКИ:
Зам.директора, доктор
биологических наук, профессор
И.Л.Обухов