ИНСТРУКЦИЯ по применению изделия медицинского назначения «Набора реагентов «Трипсина раствор для культур клеток»» 1. Назначение 1.1. «Трипсина раствор» (Регистрационный номер _____, дата регистрации «____»__________200__г.) предназначен для диспергирования тканей и органов человека и животных, для отделения клеток от субстрата. 1.2.«Трипсина раствор» может быть использован для культур клеток в санитарно-профилактических, лечебно-профилактических и научно-исследовательских учреждениях при диагностике in vitro вирусных инфекций и в вирусологических исследованиях. 2. Характеристика «Трипсина раствора» 2.1.«Трипсина раствор» разрушает связи между клетками при дезагрегации тканей и органов млекопитающих, а также при диспергировании монослойных культур клеток. Основным действующим веществом «Трипсина раствора» является протеолитический фермент трипсин. 2.2. «Трипсина раствор» представляет собой смесь трипсина и неорганических солей, растворенную в воде очищенной или в воде для инъекций, стерилизованную методом мембранной фильтрации с использованием фильтров с конечным размером пор 0,22 мкм. Состав. В 1 л раствора трипсина содержатся следующие ингредиенты: № п/п 1 Наименование ингредиента Натрий хлористый Кол-во вг 8,0 2 Калий хлористый 0,2 3 1,45 4 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный Калий фосфорнокислый однозамещенный 5 Трипсин 2,5 6 Вода очищенная или вода для иньекций 0,2 до 1 л 3. Аналитические характеристики «Трипсина раствор» должен иметь буферную емкость не менее 1,5 мл. Содержание хлор-иона – от 4,53 до 5,53 г/л. Раствор должен быть не токсичным для клеток, обладать протеолитической активностью – не менее 96 ЕД/мл, обеспечивать полное отделение клеток от субстрата и выход из 1 г ткани не менее 30 млн жизнеспособных клеток. 4.Меры предосторожности При работе с набором не требуется соблюдение специальных мер по технике безопасности. 5.Оборудование и материалы «Трипсина раствор» выпускают в бутылках стеклянных по 450 мл, которые герметически укупорены резиновыми пробками и завальцованы алюминиевыми колпачками. Для работы с набором реагентов необходимы асептические условия и стерильные материалы (культуральная посуда, пипетки, пробки и др.) 6. Способ применения Перед использованием раствор трипсина (0,25%) необходимо подогреть на водяной бане до 37 0С. Его добавляют в трипсинизационную колбу к измельченной и отмытой от форменных элементов крови ткани. Диспергирование производят на магнитной мешалке в течение нескольких циклов по 15-20 мин до полного истощения ткани. После каждого цикла трипсинизации надосадочную жидкость фильтруют через двойной слой стерильной марли и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. Полученный осадок ресуспендируют в питательной среде, в камере Горяева определяют концентрацию и жизнеспособность клеток. Для отделения клеток от субстрата из флакона с монослойной культурой клеток удаляют питательную среду, во флакон добавляют раствор трипсина подогретый до 37 0С в объеме, обеспечивающем полное покрытие монослоя. Флаконы выдерживают в термостате при температуре от 35 0С до 37 0С в течение 2-5 мин. Затем раствор трипсина осторожно удаляют, а флакон встряхивают. 7. Условия хранения и транспортирования Набор хранят при температуре от 2 до 8 0С в защищенном от прямых солнечных лучей месте в течение всего срока годности (6 месяцев). Транспортируют при температуре от 2 до 8 0С всеми видами крытого транспорта. Рекламации направлять на предприятие-изготовитель ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН», 142782, Московская обл., Ленинский р-н, поселок сельского типа Институт Полиомиелита, 27 км.Киевского шоссе, тел. (495) 439-90-02, факс (495) 439-93-21.