1. Капсула - Вінницький національний медичний університет

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ’Я УКРАЇНИ
Вінницький національний медичний університет
імені М.І.Пирогова
ЗАТВЕРДЖЕНО
на методичній нараді кафедри
____мікробіології___
(назва кафедри)
Завідувач кафедри
проф. Г.К.Палій
«_____»____________2015 р.
МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ ДЛЯ САМОСТІЙНОЇ РОБОТИ СТУДЕНТІВ ПРИ
ПІДГОТОВЦІ ДО ПРАКТИЧНОГО ЗАНЯТТЯ
З_мікробіології з основами імунології_
(назва навчальної дисципліни)
____фармацевтичного_____факультету
(назва факультету)
Вінниця – 2015
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов фармацевтического факультета
по подготовке к практическому занятию №16
1.Тема: Патогенные коки. Стафилококк. Стрептококк. Менингококк. Гонококк.
Морфология, биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
Этиотропная терапия.
2. Цель занятия.
2а. Общая: Знать основные биологические свойства патогенных кокков; овладеть
основными методами микробиологической диагностики, лечения, специфической
профилактики заболеваний, вызываемых патогенными кокками.
2.б.Конкретная.
1. Уметь распознать патогенные кокки по морфологическим признакам в препаратах,
изготовленных из патологического материала.
2. Уметь выбрать метод лабораторной диагностики заболеваний, вызванных патогенными
кокками.
3. Уметь обосновать принципы этиотропной терапии стрептококковых, стафилококковых
инфекций; гонореи, эпидемического цереброспинального менингита.
4. Предложить мероприятия по профилактике инфекций, вызванных патогенными
кокками.
3.Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
1. Морфологические особенности стафилококков, стрептококков, диплококков.
2. Ферменты патогенности бактерий.
3. Бактериальная капсула, функции.
4. Этапы бактериологического метода исследования.
5. Методы определения чувствительности к антибиотикам.
4.Основные теоретические вопросы, которые подлежат изучению.
4.1. Биологические свойства стафилококков.
4.2. Значение стафилококков в возникновении инфекций и внутрибольничных заболеваний.
Стафилококковое носительство.
4.3. Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.
4.4. Биологические свойства стрептококков.
4.5. Роль стрептококков в возникновении гнойно-воспалительных процессов, скарлатине и
ревматизме.
4.6. Методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций.
4.7. Специфическая профилактика и лечение заболеваний, вызванных пиогенными кокками.
4.8. Биологические свойства нейссерий.
4.9. Эпидемиология и лабораторная диагностика менингококковых инфекций.
4.10. Эпидемиология, лабораторная диагностика острой и хронической гонореи.
4.11. Профилактика и лечение заболеваний, вызванных патогенными нейссериями.
5. Содержание темы занятия.
Стафилококки(Staphylococcus). Морфология. Стафилококки имеют правильную круглую
форму размером 0,5 - 1,5 мкм. В мазках размещаются в виде неправильных скоплений, которые
напоминают гроздья винограда. Стафилококки грамм - позитивные бактерии, неподвижные, не
образуют споры, отдельные виды в организме имеют нежную капсулу.
Физиология. Стафилококки – факультативные анаэробы, лучше растут в аэробных условиях. На
МПА колонии правильной круглой формы, выпуклые, непрозрачные, с гладкой, блестящей
поверхностью, окрашенные в золотистый, палевый, белый, лимонно-желтый цвет в
зависимости от цвета пигмента. На кровяном агаре колонии окружены зоной гемолиза. В МПБ
вызывают помутнение и осадок на дне. Стафилококки культивируют на питательных средах с
7-10 % хлорида натрия. Стафилококки выделяют протеолитические и сахаролитические
ферменты. Они разрежают желатин, вызывают створаживание молока, ферментируют ряд
углеводов с выделением кислоты.
Токсинообразование. Стафилококки, особенно Staphylococcus aureus, выделяют экзотоксины и
много «ферментов агрессии», которые имеют важное значение в развитии стафилококковых
инфекций. Описывают много вариантов гемотоксинов, лейкоцидинов, некротоксинов,
летальный токсин. Лейкоцидины разрушают лейкоциты, макрофаги и др.клетки, а в небольших
концентрациях угнетают фагоцитоз. Некротоксин вызывает некроз кожи, а летальный токсин
при внутривенном введении вызывает практически моментальную смерть. Золотистые
стафилококки продуцируют эксфолиатины, которые вызывают импетиго детей и пузырчатку
новорожденных. Отдельные виды способны выделять энтеротоксины, которые специфически
действуют на энтероциты кишечника, что приводит к возникновению пищевых
токсикоинфекций и энтероколитов. В патогенном действии стафилококков важное значение
отводится также ферментам агрессии: плазмокоагулазе, лецитиназе, фибриназе, ДНКазе,
гиалуронидазе, протеиназе, липазе, желатиназе, фосфатазе и др. Их наличие является
стабильным признаком отдельных видов, поэтому их определение имеет важное значение при
дифференциации стафилококков. Важное значение в проявлении патогенности играет белок А,
который способен реагировать с IgG. Комплекс белок А+IgG инактивирует комплемент,
ухудшает фагоцитоз, вызывает повреждение фагоцитов.
Род Staphylococcus включает 29 видов, но далеко не все они вызывают заболевания у человека.
Основными видами являются S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus.
Экология. Главными биотопами стафилококков в организме хазяина являются кожа, слизистые
оболочки, кишечник. Они входят в состав нормальной микрофлоры тела человека. При
возникновении стафилококковых инфекций могут поражаться различные органы и системы
организма человека. При контакте с больными может формироваться резидентное
стафилококковое бактерионосительство, когда постоянным их местом жительства становится
слизистая оболочка полости носа. Такое носительство особенно опасно среди медицинского
персонала больниц, поскольку носители могут стать источником внутригоспитальных
инфекций. Стафилококки достаточно устойчивы в окружающей среде. При комнатной
температуре они выживают на предметах ухода за больными в течение 1-2 месяцев. При
кипячении погибают моментально, при 70-80 °С - через 30 мин. Раствор хлорамина (1 %)
вызывает их гибель через 2-5 мин.
Заболевания человека. Стафилококки чаще всего поражают кожу, подкожную клетчатку. Они
вызывают фурункулы, карбункулы, панариции, абсцессы, флегмоны, маститы, лимфадениты,
нагноение ран. Их также выделяют при пневмониях, бронхитах, плевритах. Также могут
вызывать синуситы, гаймориты, конъюнктивиты, отиты; стафилококки вызывают инфекции
ЦНС: менингиты, абсцессы мозга; сердечно-сосудистой системы (миокардиты, эндокардиты).
При проникновении в кровь способны вызывать сепсис.
Иммунитет. Врожденной невосприимчивости к стафилококкам у людей нет, однако
резистентность к ним довольно высокая. В результате перенесенной инфекции развивается
антибактериальный и антитоксический иммунитет, но он кратковременный.
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования является кровь, гной, слизь, моча,
промывные воды желудка, фекалии, остатки пищевых продуктов. Гной исследуют
бактериоскопическим
и
бактериологическим
методами,
остальной
материал
–
бактериологическим. Для определения источника инфекции,при вспышках стафилококковых
инфекций в родильных домах и хирургических стационарах проводят фаготипирование
выделенных штаммов с помощью стандартного международного набора стафилококковых
бактериофагов. Обязательно определяют чувствительность выделенной культуры к
антибиотикам с целью назначения рационального антибактериального лечения.
Профилактика и лечение. Предупреждение возникновения и распространения стафилококковых
инфекций направлено на обнаружение и лечение носителей золотистого стафилококка
особенно среди персонала родильных домов, хирургических и детских отделений больниц.
Необходимо четко придерживаться санитарного режима работы, стерилизации, систематически
проводить дезинфекцию. При лечении острых стафилококковых инфекций назначают
антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны, местно используют антисептики (мирамистин,
декасан). Выбор препарата зависит от результатов определения чувствительности выделенной
культуры к антибиотикам. Для лечения тяжелых стафилококковых инфекций используют
иммунологические препараты: стафилококковый иммуноглобулин, гипериммунную плазму.
Для лечения хронических инфекций используют аутовакцины.
Стрептококки относятся к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus. Основные виды,
которые вызывают заболевания человека S.pyogenes, S.pneumoniae, S.mitis, S.agalactiae.
Семейство также включает род Enterococcus, к которому относятся условно-патогенные виды,
населяющие ЖКТ, и при определенных условиях вызывают гнойно-воспалительные процессы
в органах брюшной полости, как правило, в ассоциации с другими микроорганизмами.
Наиболее распространённые виды: E.faecalis, E.faecium, E.durans.
Морфология стрептококков: Грамм (+) кокки сферической, овальной или ланцетовидной
формы (S.pneumoniae), размерами 0,5-2 мкм, неподвижные, не образуют спор. Патогенные
представители образуют капсулу (S.pneumoniae, S.pyogenes) в организме человека и животных.
В мазках-препаратах располагаются попарно, в виде коротких или длинных цепочек.
Культуральные
свойства:
факультативные
анаэробы,
оптимальная
температура
0
культивирования 37 C, требовательны к составу питательных сред. Культивируют в бульоне с
глюкозой (S.pyogenes образует придонно-пристеночный рост), на кровяном агаре. В
зависимости от типа гемолизинов, которые синтезируются стрептококками различают альфагемолиттические (неполный гемолиз), бета-гемолитические (полный гемолиз), гаммагемолитические (отсутствие гемолиза при аэробных условиях). Для дифференциации альфагемолитических стрептококков и энтерококков используют желчный бульон, в котором
культивируются только представители рода Enterococcus. На плотных питательных средах
стрептококки образуют, как правило, S – формы колоний. Кроме классификации по
гемолитическим свойствам стрептококки также классифицируют по антигенному строению (по
Ленсфилд). В зависимости от строения С-полисахарида стрептококки делят на серогруппы (АV); внутри группы различают серотипы на основании строения типоспецифических антигенов
(М, T,R,Р). S.pyogenes содержит в составе клеточной стенки перекрестно-реагирующие
антигены, которые сходны по строению с тканями щитовидной железы, кожи, почек,
соединительной тканью сердечных клапанов.
Резистентность: стрептококки малочувствительны к низким температурам, высушиванию,
чувствительные к высоким температурам, большинству дезинфектантов
в рабочих
концентрациях.
Факторами патогенности бета-гемолитического стрептококка являются поверхностный
протективный белок М, капсула, ферменты патогенности ( С5а-пептидаза, гиалуронидаза,
стрептокиназа (фибринолизин), ДНК-аза (стрептодорназа), аминопептидаза) и экзотоксины (0 и
S – стрептолизины, эритрогенин (скарлатинозный токсин), кардиогепатотоксин). Большое
значение в патогенезе стрептококковых инфекций играют перекрестно-реагирующие антигены,
суперантигены, аллергены.
Эпидемиология и патогенез: источником инфекции является больной человек и
бактерионоситель. Пути заражения – контактный и аэрогенный. Стрептококки вызывают
гнойно-воспалительные заболевания различной локализации, скарлатину, рожу, ревматизм.
Иммунитет: нестойкий, типоспецифический – для большинства стрептококковых инфекций;
стойкий, антитоксический – после перенесенной скарлатины.
Лабораторная диагностика. Материалом для исследования являются гной, раневое содержимое,
экссудат, слизь из носоглотки, налет с миндалин, кровь, ликвор, мокрота. Используют
бактериоскопический и бактериологический методы. Для диагностики хронических и
аутоиммунных инфекций для исследования берут кровь с целью обнаружения
антистрептококковых антител.
Профилактика и лечение: профилактику проводят неспецифическими методами; для
профилактики пневмококковой инфекции используют пневмококковую вакцину, содержащую
капсульный полисахарид. Для лечения назначают антибиотики согласно результатам
антибитикограммы. Для профилактики ревматизма при частых ангинах профилактически
назначают бета-лактамные антибиотики (пенициллины).
Нейссерии. Таксономия нейссерий. Семья Neisseriaceae, род Neisseria, основные
представители: N.meningitidis (менингококк), N.gonorrhoeae (гонококк).
Менингококк. Менингококки представлены грам отрицательными единичными кокками или
диплококками, что повёрнуты друг к другу вогнутой поверхностью. Форма возбудителя
напоминает кофейные зерна. Спор не образуют, большинство имеет капсулу, неподвижные.
Менингококки требовательны к питательным средам и условиям культивирования. Они хорошо
растут на средах, содержащих кровь, сыворотку или асцитическую жидкость, быстро
размножаются при температуре 35-37оС в атмосфере с пониженным содержанием кислорода и в
присутствии 5-10% углекислого газа. Оптимум рН среды 7,2-7,4. На сывороточном агаре
образуют круглые бесцветные нежные колонии маслянистой консистенции диаметром от 0,5 до
1,5 мм. На кровяном и "шоколадном" агаре образуют нежные круглые колонии слегка
сероватого цвета с блестящей поверхностью. Биохимическая активность низкая. Строгий аэроб,
капнофил. Разлагает глюкозу и мальтозу до кислоты, не разжижает желатин, не образует индол
и сероводород, не восстанавливает нитраты. Менингококки имеют белковый видовой антиген
общий для всего вида N.meningitidis и полисахаридний группоспецифический, по которому
разделяются на 12 серогрупп. Наиболее патогенны для людей А, В, С группы. К основным
факторам патогенности относятся: эндотоксин, который проявляет токсическое, пирогенное,
некротические действие; капсула, защищает менингококк от завершенного фагоцитоза;
фимбрии которые адгезируют бактерии к слизистым оболочкам. К другим факторам относятся:
гиалуронидаза, протеазы, фибринолизин, нейраминидаза. Возбудители не устойчивы к
внешним факторам. При температуре 100С погибает через два часа, а температура 500С убивает
их через 5 мин. Чувствительны к воздействию УФ, антисептиков и дезинфектантов.
Эпидемиология. Источник инфекции - больные люди, бактерионосители. Механизм передачи аэрогенный, путь - воздушно-капельный. Заболевание носит сезонный характер, увеличиваясь в
осенне-зимний период. Менингококковая инфекция клинически протекает в локализованной
форме (менингококконоситель, острый назофарингит) или в генерализованной форме
(менингококцемия, менингит, менингоэнцефалит). Эпидемический цереброспинальный
менингит характеризуется высокой температурой, головной болью, рвотой, судорогами,
ригидностью мышц затылка. Без специфического лечения летальность до 85%.
Постинфекционный иммунитет стойкий, длительный, напряженный.
Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции. Материал для исследования спинномозговая жидкость, слизь из носоглотки, кровь. Проводят бактериоскопическое
исследование спинномозговой жидкости, бактериологическое исследование с последующей
идентификацией выделенной чистой культуры менингококка. Выявление в сыворотке больного
специфических антител в реакциях РНГА, ИФА проводят с целью диагностики носительства
патогенного менингококка.
Используют также молекулярно-генетические исследования в ПЦР для выявления
менингококковой ДНК в ликворе. Профилактируются заболевания введением вакцины
"Меннинго-А+С" по эпидпоказаниям. Лечение проводят антибиотиками пенициллинового ряда
(бензилпенициллин, ампициллин, оксациллин) или рифампицином.
Гононкокк. Гонококки - неподвижные аспорогенные грамотрицательные диплококки
размером 1,0-1,25 мкм, образующие капсулу. Клетки гонококка имеют несколько
удлиняющуюся форму, которая напоминает форму боба или кофейного зерна. Хорошо
окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зеленым и
др.). В гнойном экссудате при гонорее расположены преимущественно в цитоплазме
нейтрофилов - явление незавершенного фагоцитоза. Под действием пенициллина образуются Lформы. Культивируются на кровяном, сывороточном, асцитном агаре и среде КДС-1
(казеиново-дрожжевое сывороточное). Колонии или мутные бесцветные, или прозрачные в
виде капель росы. Расщепляют только глюкозу до кислоты. Содержат соматический и
капсульный антигены. Выделяют 16 серотипов. К факторам патогенности относятся: пили,
капсула, эндотоксин, белки поверхностной мембраны. Малоустойчивы во внешней среде.
Чувствительны к действию антисептиков и дезинфектантов. Источник инфекции - больной
человек. Механизм передачи - контактный, путь - половой. К гонококкам очень высокая
восприимчивость. Проявляется гонококковая инфекция в виде воспаления слизистой оболочки
мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивит глаз (бленнорея). Характеризуется заболевание
выделением гноя из уретры, резью при мочеиспускании. Нелеченная гонорея переходит в
хроническую бессимптомную форму. Нелеченная бленнорея ведет к слепоте. Иммунитет
отсутствует, регистрируются повторные заболевания (реинфекция).
Лабораторная диагностика острой гонореи состоит в бактериоскопическом
бактериологическом исследовании гнойных выделений из уретры, определение
чувствительности выделенной культуры к антибиотикам. Диагностика хронической гонореи
осуществляется серологическим методом (выявление антител в сыворотке крови в реакциях
РСК (Борде-Жангу), РНГА, ИФА).
Профилактика неспецифическая: выявление источника инфекции, лечение больных,
санитарно-просветительная работа, направленная на пропоганду здорового образа жизни. Для
профилактики бленнореи новорожденным в глаза капают нитрат серебра или препарат
изготовленный на основе отечественного антисептика декаметоксина. Лечение проводят
антибиотиками пенициллинового ряда (острая форма) или применяют иммунотерапию
(хроническая форма).
6. Практическая работа, которая выполняется на занятии.
6.1. Изучить морфологию стафилококка, стрептококка и менингококка в демонстрационных
препаратах. Определить типичные морфологические признаки в демонстрационных
препаратах, окрашенных по Грамму.
6.2. Промикроскопировать мазки гнойных выделений из уретры больного острой гонореей,
определить микроскопические признаки незавершенного фагоцитоза.
6.3. Ознакомится с характером роста золотистого стафилококка на кровяном агаре,
желтлочно-солевом агаре Чистовича:
- на агаре Чистовича колонии S.aureus окружены зоной помутнения с радужным венчиком
вследствие расщепления лецитина ферментом лецитевителазой;
- на кровяном агаре колонии окружены прозрачной зоной гемолиза.
6.4. Изучить рост стрептококков на питательных средах (кровяной агар, глюкозный МПБ) и
выявить тип гемолиза стрептококковой культуры.
6.5. Учесть результаты опыта фаготипирования культуры стафилококка, определить фаготип.
Результат оценивают по наличию пятна лизиса (негативные колонии фага) в определенном
секторе с номером соответствующего фага.
6.6 Определить чувствительность клинического штамма стафилококка к антибиотикам методом
стандартных дисков. Результаты антибиотикограммы внести в протокол. Критерии
чувствительности: зона задержки роста 20 мм и больше – культура чувствительна к
антибиотику; умеренно-чувствительна – диаметр зоны – 15-20 мм; устойчива – диаметр зоны до
15 мм.
6.7. Провести учет РСК с сывороткой крови больного гонореей. Результаты внести в
протокол.
Серологическую диагностику гонореи осуществляют, в основном, при ее хроническом
течении. РСК Борде-Жангу имеет важное значение при особо осложненных формах гонореи
(гоносепсис, метрит, артрит и т.д.).
РСК оценивают по четырехплюсовой системе: резко положительная, полная задержка гемолиза
(++++); положительная - надосадочная жидкость бледно-розового цвета, незначительный
осадок эритроцитов (+++); реакция на два и один плюс - переставляется; полный гемолиз,
жидкость красная и прозрачная "лаковая кровь" - РСК отрицательная (-).
7.Рекомендованная литература.
7а. Основная:
В.Д. Тимаков, В.С. Левашов. – Микробиология. – М. 1983 (рус.). – с.253 – 266.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев – Медицинская микробиология и вирусология. – Санкт-Петербург,
2002 (рус.). – с. 330-341.
И. Л. Дикий, И.Д. Холупяк. – Микробиология. – Харьков, 1999 (рус.). – с. 214-220.
В.И. Покровский. – Медицинская микробиология._М., 1998 (рус.). – с. 183-206.
Л.П. Борисов. – Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М. 1984 (рус.). – с.
131-141, 152-153.
М.Н Лебедева. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М.
1973 (рус.). с. 158-176.
Ю.С. Кривошеин. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. –
М. 1986 (рус.). – с. 86-92.
7б.Дополнительная:
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под
ред. проф.. Г.К. Палий, К. 2004. с. 7-146.
8.Материалы для самоконтроля.
Тесты лицензионного экзамена Крок-1
1. Больному поставлен диагноз "гонорея" на основании изучения окрашенных мазков из гноя
уретры. Как называется использованный метод диагностики?
A Бактериоскопический
B Бактериологический
C Аллергический
D Биологический
E Серологический
2. В окрашенных мазках, приготовленных из гноя, обнаружены грамположительные кокки,
расположенные в виде неправильных скоплений: "Гроздьев винограда". С чем связано такое
расположение стафилококков?
A С техникой окрашивания
B С техникой приготовления мазка
C С делением бактерий в разных плоскостях
D С влиянием на бактерии красителей
E Локализацией гнойного процесса
3. В мазке, приготовленном из гноя больного с гнойно- воспалительным процессом костей
выявлены грамположительные шаровидной формы бактерии, которые расположены в виде
цепочек. Какие бактерии можно считать возбудителем заболевания?
A Сарцины
B Гонококки
C Менингококки
D Микрококки
E Стрептококки
4. Работников аптеки необходимо проверить на носительство золотистого стафилококка. С
этой целью были взяты мазки из носоглотки для бактериологического исследования. Какую
питательную среду целесообразно использовать для его выделения?
A Мясо- пептонный агар
B Казеиново- угольный агар
C Желточно-солевой агар
D Сахарный бульон
E Селенитовый бульон
5. В бактериологической лаборатории при микроскопии гнойного отделяемого из
фурункула в окрашенных по Грамму мазках обнаружены грамположительные, шаровидной
формы микроорганизмы в виде виноградной грозди. Какие это микроорганизмы?
A Гонококки
B Стрептококки
C Микрококки
D Стафилококки
E Менингококки
6. При изучении мазков, приготовленных из гноя уретры больного, обнаружены
грамотрицательные диплококки бобовидной формы, расположенные внутри лейкоцитов.
Поставлен диагноз "острая гонорея". Какой метод лабораторной диагностики был
использован?
A Бактериоскопический
B Бактериологический
C Биологический
D Серологический
E Аллергический
7. У больного остеомиелитом в мазках из гноя выявили грамположительные микроорганизмы
шаровидной
формы, которые расположены в виде неправильных скоплений. Какие
микроорганизмы могли вызывать это заболевание?
A Staphylococcus aureus
B Serratia marcescens
C Salmonella typhimurium
D Escherichia coli
E Pseudomonas aeruginosa
8. У женщины после родов выделен патогенный стафилококк и определена его
чувствительность к антибиотикам. Какой метод использован для этой цели?
A Бактериоскопический метод
B Метод "бумажных" дисков
C Серологический метод
D Биологический метод
E Серологический метод
9. В инфекционную клинику повторно поступил больной с диагнозом "гонорея", недавно уже
перенесший эту инфекцию и выписанный с диагнозом "практически здоров".
Какая форма инфекционного процесса наблюдается у него?
A смешанная инфекция
B рецидив
C суперинфекция
D реинфекция
E моноинфекция
10. Для диагностики менингита исследуют мазки из осадка спинномозговой жидкости,
окрашенные по методу Грамма. Какие из обнаруженных признаков подтверждают диагноз
менингококковой инфекции?
A Грамотрицательные диплококки, размещенные в лейкоцитах и за их пределами
B Грамположительные диплококки, размещенные в лейкоцитах
C Грамотрицательные коккобактерии, размещенные в лейкоцитах
D Ланцетовидные грамположительные диплококки
E Диплококки, окруженные капсулой
11. При исследовании микропрепарата, изготовленного из мокроты больного пневмонией,
выявлены грамположительные капсульные диплококки ланцетовидной формы. Какой это
микроорганизм?
A Стафилококк
B Менингококк
C Пневмококк
D Гонококк
E Энтерококк
12. В детском саду выявлена вспышка пищевой токсикоинфекции после употребления детьми
кондитерских изделий. Среди большинства заболевших было выделено патогенные
стафилококки. Каким методом можно выявить источник инфекции при стафилококковой
пищевой токсикоинфекции?
A Фаготипирование выделенной культуры
B Реакция связывания комплемента (РЗК)
C Реакция нейтрализации (РН)
D Реакция иммунофлуоресценсии (РІФ)
E Реакция преципитации (РП)
13. Младенцу через несколько дней после рождения поставлен диагноз "бленнорея". Какой
препарат надо было использовать после рождения для профилактики данного
заболевание?
A Сесктаанатоксин
B Гонококовая вакцина
C Стафилококковый анатоксин
D Стафилококковая вакцина
E 2% раствор нитрата серебра
14. Из рвотных масс ребенка с симптомами пищевого отравления, связанного с употреблением
пирожных, выделен стафилококк. Какой фактор патогенности стафилококков вызывает
синдром токсикоинфекции?
A Энтеротоксин
B Гемолизин
C Ексфолиативный токсин
D Гиалуронидаза
E Протеин А
15. Работников аптеки необходимо проверить на носительство золотистого стафилококка. С
этой целью были взяты мазки из носоглотки для бактериологического исследования. Какую
питательную среду целесообразно использовать для его выделения?
A Сахарный бульон
B Казеиново- угольный агар
C Мясо- пептонный агар
D Желточно-солевой агар
E Селенитовый бульон
Автор
доцент Вовк И.Н.
Методическая разработка
по подготовке к лабораторному занятию №17
для студентов фармацевтического факультета
(клиническая фармация)
Тема: Патогенные энтеробактерии. Эшерихии. Морфология и биологические свойства.
Микробиологическая характеристика коли-энтеритов.
Актуальность темы. Escherichia coli (кишечная палочка) была выделена 1885 детским врачом
профессором К. эшерихий сначала из испражнений грудных детей, потом от взрослых. Это
нормальный житель кишечнике человека, животных, рыб, насекомых, распространенный во
внешней среде. После открытия кишечной палочки началось ее изучения в различных аспектах.
Сначала E. coli рассматривали как сапрофит, что засименяе кишечник взрослых и детей. Затем
было установлено, что она способна проникать в ткани и размножаться там, вызывая
интоксикацию вплоть до летального исхода. В связи с этим впоследствии кишечную палочку
стали считать условно-патогенным микробом. Затем стало возможным отделить банальную
(обычную) кишечную палочку от патогенной. В наше время различают кишечные палочки:
непатогенные, энтеропатогенную (ЭПКП), энтероинвазивные (ЭИКП), энтеротоксигенные
(ЭТКП),енетерогеморагичну(ЭГКП).
1.Цель.
1.1.Общая: изу.ить основные биологические свойства кишечной пало.к и, ее роль в развитии
патологических состояний взрослых и детей, лабораторную диагностику и профилактику.
1.2.Конкретная
1. изучить морфологию, культуральные и биохимические свойства кишечной палочки.
2. знать дифференциально-диагности.еские признаки энтеробактерий группы кишечной пало.ки
3. знать главные биохимические признаки, служащие для определения вида энтеробактерий (их
способность ферментировать различные сахара до образования кислоты или газа, образование
индола
сероводорода,
утилизировать
цитраты)
4.Различать основные типы антигенов
6.
Освоить
методы
профилактики
и
лечения
кишечных
инфекций
2.Основные теоретические вопросы подлежащих изучению.
1.Общая характеристика семейства энтеробактерий.
2.Морфология,
культуральные
и
биохимические
свойства
эшерихий.
3.Антигенна структура эшерихий.
4.Факторы патогенности эшерихий.
5.Диференциация условно-патогенных и патогенных эшерихий.
6.Значение кишечной палочки в патологии человека
7.Микробиологична диагностика эшерихиозов
8.Методы
неспецифической
и
специфической
профилактики
3. Содержание темы. Представители этого рода - обширная группа микроорганизмов,
состоящие из близких по биологическим свойствам микроорганизмов. Объединяет
лактозоположительные и лактозоотрицательные разновидности, в том числе и безгазовые.
Природная среда обитания - толстый кишечник людей, млекопитающих, большинства птиц,
многих пресмыкающихся, рыб, насекомых. С испражнениями они попадают в окружающую
среду (почву, вода, овощи, фрукты), где легко приспосабливаются к новым условиям
существования. Эшерихиозная инфекция характеризуется полиморфизмом клинической
картины, связано не только с особенностями организма больного, но биологическими
свойствами возбудителя. В этом плане особый интерес представляют генетические
детерминанты - плазмиды, обладающие передача не только в пределах одного вида, но и среди
других родов бактерий. Морфология. Эшерихии - мелкие и средние, подвижные и
неподвижные, грамотрицательные, неспороносные палочки, порой имеют капсулу, хорошо
растут на простых твердых и жидких питательных средах. Культуральные свойства. На
твердой среде образуют выпуклые, средней величины, блестящие, круглые, прозрачные и
непрозрачные колонии с ровными краями (S-, гладкая форма). В жидких средах растут
диффузно или дают осадок или пленку на поверхности, кольцо на стене. На селективно-
дифференциальных средах типа Эндо - красные с металлическим блеском, Левина - синие
Плоскирева - красные. E. coli ферментируют углеводы с газообразованием, а не ферментируют
адонит, инозит, не образуют сероводород на средах с FeCl3, а не утилизують цитирует, не
имеют фенилаланиндезаминазнои активности, не продуцирующие уреазы, желатиназы,
негативные
в
реакции
Фогес-Проскауера,
производят
лизиндекарбоксилазу.
Антигены. Антигенная структура кишечных палочек очень сложная. Описаны антигены В, R,
K, (L, B, A), H, M, CFA / 1, f +, ,  и другие. Некоторые антигены - общие для эшерихий и
сальмонелл (1-8, Х-ХIII), клебсиелл, шигелл, другие - специфические. По морфологическим,
ферментными, культуральным свойствам патогенные и непатогенные эшерихии не
дифференцируются. Поэтому чрезвычайно актуальным является поиск в материале патогенных
эшерихий. Для этого используются ориентировочная реакция агглютинации. При
ешерихиозний инфекции, наверное, больше патогенентичне значение имеет система защиты,
связанная с К-антигенами и колицинами; факторы колонизации (адгезии), обусловленные
фимбриями; наличие в эшерихий собственных агрессивных веществ - токсинов, гемолизинов,
которые контролируются плазмиды Ent, Hly; факторы активной защиты, детерминированы Rплазмиды. Все детерминанты, которые контролируют определенные свойства эшерихий и их
способность к внутриэпителиальному размножению, коррелируют с вирулентностью E. Coli и
определенным патогенезом заболевания, поэтому их считают и факторами патогенности.
Энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП), которые вызывают диарейные заболевания у
взрослых и детей (холероподобные заболевания, «диарею путешественников»), при которой
обезвоживание выраженное больше, чем при холере. Эти формы эшерихиоза чрезвычайно
контагиозные, особенно распространенные в летний период. Пути передачи - вода, пищевые
продукты. Распространение бактерий ограничено поверхностью слизистой оболочки тонкого
кишечника, энтероциты НЕ инвазируются и структурно не поражаются. Об этом
свидетельствует отсутствие воспалительной реакции в стенке кишечника и водянистый стул без
примесей слизи и крови. Такой тип называется секреторным, в противовес инвазионному типу,
при котором наблюдается деструкция кишечного эпителия. Cекреторная диарея возникает
вследствие гиперсекреции Na и Cl и воды каемчатыми клетками крипт при ослаблении
альтернативной функции тонкого кишечника - всасывание электролитов и воды реснитчатыми
клетками слизистой оболочки. Ентеротоксигенность связана с 2 токсинами, неодинаковыми по
своей устойчивостью к нагреванию - стабильный токсин (ST), низкомолекулярный, не имеет
антигенных свойств и лабильный (LT), который по токсичными и антигенными свойствам
близок к холерогену. Диареегенный эффект связан с повышением внутриклеточного уровня
циклического аденозинмонофосфата. ST токсин не проникает в клетку, только действует на
рецепторы енетероцитив, связанных с мембранной гуанилатциклазы. Усиление синтеза
циклического гуанозинмонофосфата провоцирует гиперсекрецию воды и электролитов. Синтез
его закодированный на плазмиде. Не выявлено биохимических различий между токсигенными
и нетоксигенные штаммами. К этой группе относятся кишечные палочки О-8, В-15, В-25, В-73,
В-115
В-128,
В-138,
В-139,
В-142,
В-148.
Ентероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) вызывают эпителиальную инвазию, имеют
антигенные связи с шигеллами. Они считаются возбудителями дизентериеподобные
заболеваний. Подобно шигеллы ЭИКП проникают и размножаются в эпителиоцитах толстого
кишечника, повреждают их и индуцируют воспаление и изъязвление слизистой оболочки.
Инвазия начинается с пенетрации клеток кишечного эпителия. Внутри клеток бактерии
продуцируют ферменты, которые лизируют стенку фагосом, вызывая повреждения
эпителиоцитов и распространение инфекции. Наиболее известные кишечные палочки
серотипов
О-124:
К-72,
В-144.
Энтеропатогенные кишечные палочки (ЭПКП) способны вызвать колиэнтерит у детей до 12-х лет. Поражают тонкий кишечник. В основе диарейного синдрома лежит сглаживания
эпителиальных микроворсинок на фоне адгезии между бактериями и плазматической
мембраной. Потеря адсорбирующих ворсинок в зоне адгезии приводит к диарее за счет
нарушения электролитного баланса и мальабсорбции. Это микроорганизмы серотипов В-26, В55, В-111.
Лабораторная диагностика. Взятие материала для исследования. К началу этиотропного
лечения у больных берут испражнения, рвотные массы, дуоденальное содержимое, кровь, мочу,
навоз, спинномозговую жидкость, от трупов - кровь из сердца, содержание кишечника, кусочки
легких, печени, селезенки, почек. При необходимости исследуют промывные воды желудка,
остатки пищи, смывы с рук обслуживающего персонала, воздуха палат тощо.В отдельных
случаях делают первичную микроскопию крови, мочи, ликвора, гнойных выделений, секретов
слизистых оболочек в мазках, окрашенных по Граму. Выявление грамотрицательных палочек
помогает бактериолог выбрать соответствующие питательные среды и следующие этапы
лабораторной
диагностики.
Начальная
бактериоскопия
стула
не
производится. Бактериологическое исследование. Из последних порций испражнений
тампоном берут часть фекалий в пробирку с транспортной средой (30% глицерина и 70%
фосфатного буфера) или непосредственно у постели больного сеют на среду Эндо (Левина,
Плоскирева, Асель-Либермана). При этом небольшое количество фекалий эмульгируют в 0,85%
растворе хлорида натрия в соотношении 1: 10. Через несколько минут после оседания грубых
остатков 1-2 капли жидкости вносят на поверхность среды и стеклянным шпателем растирают
ее на небольшом участке. Оторвав шпатель от агара делают посев на остальную поверхность
среды. Если возникает потребность посеять на вторую и третью чашки, материал наносят
повторно. Кровь (10 мл) засевают во флакон с МПБ. Посев других материалов делают так же,
как и испражнений. После инкубации в термостате при 37 0С в течение суток изучают характер
роста на элективные-дифференциальных средах. На агаре Эндо колонии имеют дисковидные
форму слегка выпуклые с ровными краями, малиново-красного цвета. На среде Левина они
окрашены в темно-синий цвет, а на средах Плоскирева и Асель-Либермана - в розовый. В
состав последнего среды входит агар, лактоза (или сахароза) и индикатор Конго-красный.
Среда с сахарозой используют для индикации тех энтеропатогенные эшерихий, которые
ферментируют этот углевод. В связи с тем, что колонии патогенных и непатогенных кишечных
палочек на указанных средах не отличаются, принадлежность выделенных культкр патогенных
серогруппы определяют с помощью слайд-агглютинации с диагностическими поливалентными
ОК-сыворотками, или адсорбированными О-сыворотками, содержащие антитела к
определенным В-антигенов. Микробиологическая промышленность выпускает 5 наборов
диагностических ОК-сывороток: ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД и ОКЕ. Основная поливалентная
сыворотка ОКА содержит антитела к О- и К-антигенов более 20 главных серологических групп.
Смесь ОК-сывороток готовят так, чтобы конечное разведение каждой из них было 1: 10.
агглютинирует 10 лактозоположительных колоний. Материал из каждой колонии берут петлей
так, чтобы часть ее осталась для дальнейшего пересиву.кщо одна из колоний дала
положительную слайд-агглютинацию, ее остаток пересевают на среду Олькеницкого. Через 1820 ч учитывают ферментацию лактозы и глюкозы (пожелтение и разрыв столбика и скошенной
части агара), выделение Н2S (образование черного кольца на грани столбика и скошенной
части). Выделенную культуру ориентировочно относят к определенной серогруппы.
Для окончательной идентификации возбудителя необходимо поставить развернутую
реакцию агглютинацию в пробирках для отдельного выявления его О- и К-антигенов.
Диагностические агглютинирующие сыворотки разводят в двух рядах пробирок (в первом - Осыворотку, во втором - К-сыворотку) до титра, указанного на этикетках ампул. Для
определения О-антигена в каждую пробирку первого ряда вносят по 2 капли 2-х млрд
суспензии выделенной культуры, прогретой в течение 2 ч при 100 0С. При кипячении
иннактивируется К-антиген, локализуется поверхностно и задерживает агглютинацию Оантигена. Последний при прогреве не разрушается. Для выявления К-антигена в каждую
пробирку второго ряда с разведенной в титра сывороткой вносят по 2 капли супсензии живой
(не кипяченой культуры). Пробирку помещают в термостат при 37 0С на 18-20 ч. При
положительной реакции развернутой агглютинации к титра (или, по крайней мере, до половины
титра) делают окончательный вывод о выделении соответствующего серовару патогенных
эшерихий. Отрицательная слайд-агглютинация 10 лактозоположительных колоний эшерихий
дает право дать ответ об отсутствии энтеропатогенные кишечных палочек. Выделенную на
среде Олькеницкого культуру, какая дала положительную развернутую реакцию агглютинации,
сеют на среды Гисса для изучения ее сахаролитических, пептолитичних свойств и
подвижности. После инкубации посевов в течение суток учитывают результаты. Патогенные
эшерихии ферментируют лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит, сахарозу (отдельные штаммы),
арабинозы, ксилозу, трегалозу, образуют индол, не выделяют H2S (некоторые штаммы
образуют сероводород), не разлагаются инозит и мочевину, а не дезаминують фенилаланин,
дают отрицательную реакцию Фогеса -Проскауера и не синтезируют ДНК-азу. Для выявления
источника инфекции проводят фаго-и кальцинотипування выделенных культур.
Идентификация диареегенних серотипов возможна также на основе выявления специфических
маркеров. Культуры типа ЭТКП производят два вида токсинов: термостабильный
обнаруживают на мышат-сосунков, термолабильный - на культурах Y1 надпочечников. Для
быстрой идентификации ЭПКП используют реакцию коаглютинации на стекле выявления
белка внешней мембраны. Адгезивные свойства эшерихий (ЕАКП) обнаруживают на культурах
Hela и Hep-2. Самым быстрым и высокоспецифичным методом диагностики заболеваний,
вызванных энтеропатогенными эшерихиями, является использование специфических ДНКзондов. Они позволяют выявить гены плазмид, кодирующих патогенность кишечных палочек
или синтез их цитотоксинах. Метод основан на том, что одноцепная молекула ДНК может
гибридизироваться с комплементарной к ней второй ниткой ДНК. В большинстве патогенных
эшерихий гены вирулентности локализованы в плазмидах. Итак зондом для выявления этих
бактерий могут быть меченые последовательности, клонированные из таких плазмид.
Серологическое исследование. Для серологической диагностики коли-инфекций более
чувствительной и специфической является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).
Специфический антиген для этой реакции изготавливают путем сенсибилизации эритроцитов
барана суспензией 48 ч агаровой культуры эшерихий, прогретой 2 часа при 100 0С.
Достоверность серологической диагностики эшерихиоза возрастает при выявлении отдельных
классов имуноглобулинов. Изменение повышенной концентрации IgM на IgG обусловлена
острым инфекционным процессом. Обнаружение в сыворотке крови антител только класса IgG
свидетельствует о бактерионосительстве. Лабораторная диагностика эшерихиоза основана на
выделении возбудителя заболевания и последующей идентификации патогенных и
непатогенных штаммов кишечной палочки с помощью диагностических ОК-сывороток в
ориентированной
и
развернутой
реакциях
агглютинации.
4. Базовые навыки необходимые для усвоения темы.
4. 1. Морфология и тинкториальные свойства палочковидных бактерий.
4.2.Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий.
4.3.Дифференциально-диагностические среды
Алгоритм навыков.
1.Материал для исследования: испражнения больного ребенка.
2.Посев на среду Эндо.
3.Характер и цвет колоний.
4.Мазок, окраска по Граму.
5.Реакция агглютинации на стекле с ОВ-сыворотками.
6.Пересев
аглютинабельных
колоний
на
скошенный
МПА.
7.Реакция агглютинации с типоспецифическими сыворотками.
8.Развернутая реакция агглютинации.
9.Посев на "пестрый" ряд Гисса.
5.
Практические
работы,
которые
выполняются
на
занятии.
5.1. Изготовление мазков из культуры кишечной палочки, окраска по Граму, микроскопия.
5.2.
Изучение
состава
и
назначения
дифференциально-диагностических
сред.
5.3. Изучение колоний эшерихий визуально и под стереомикроскопом на средах Эндо,
Плоскирева, Левина.
Рекомендуемая литература
Основные источники.
2. К.Д. Пяткина, Ю.С. Кривошеин Микробиология, М. 1980 (рус) 255-259,270-273
3.
В.Д.
Тимаков
Микробиология.
М.
1983
г.
(рус)
273-279,286-288
4. А.И. Коротяев С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология
Санкт-Петерб. 2 002 (рус), 373-377,389-384
5. И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю. Стегний, Микробиология. Харк.224227,232-236.
6. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харк +2002
7. А.И. Климнюк, И.А., Сытник, М.С. Творк, В.П. Широбоков Практическая микробиология,
Терн, в 2004 190-194,209-212
8. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. +1984
рус),
176-181
9. М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии /
тысяча девятьсот семьдесят три (рус) 182-186,195-200
10. Ю.С. Кривошеин, Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии.
М.
1986.
(рус),
97-98,107-109
Дополнительные источники
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным
заболеваниям. Общ. ред, проф. К. Палий, К, 2004,7-146
Автор:доц.СтуканО.К.
Приложение1.
При посеве испражнений больного брюшным тифом на среде Эндо выросли колонии,
которые имеют разную окраску и размеры: одни - красные, крупные; другие бесцветные, средних размеров. К каким по назначению питательных сред относится
указанное в условии питательная среда?
A Дифференциально – диагностическое
B элективных
C Специальное
D Выборочное
E Обогащение
К инфекционной больницы поступил ребенок с подозрением на колiентерит. С
испражнений выделено кишечную палочку. Как установить принадлежность палочки
патогенных вариантов?
A В реакции аглютинацiи с В сыворотками
B На основании биохимических свойств
C Путем фаготипирования
D Микроскопию окрашенных мазков
E По характеру роста на среде Эндо
С испражнений больного ребенка 6-месячного возраста, которая находилась на
искусственном кормлении, выделена культура кишечной палочки с антигенной
структуре 0-111. Какой диагноз можно поставить?
A Коли-энтерит
B Гастро-энтерит
C Холероподобные заболевания
D Пищевое отравление
E дизентериеподобные заболевания
При бактериологическом исследовании испражнений четырехмесячного ребенка с
симптомами острой кишечной инфекции на среде Эндо выросли в большом количестве
красные колонии. Какие это могут быть микроорганизмы?
A Эшерихии
B Сальмонеллы
C Стафилококки
D Стрептококки
E Шигеллы
У мальчика 7 лет - холероподобный заболевания (рвота, профузное диарея). При
посеве фекалий больного на среду Эндо выросли однотипные колонии: малинового цвета,
с металлическим блеском. Микроорганизм является наиболее вероятным возбудителем
заболевания?
A энтеротоксигенные Escherichia coli
B Salmonella enteritidis
C Yersinia enterocolitica
D Shigella sonnei
E НАГ-вибрион
У ребенка с острой кишечной инфекцией быстро развились признаки
обезвоживания,появилась кровь в испражнениях. Педиатром был заподозрен кругу
энтерит. Каким методом необходимо воспользоваться для диагностики энтерального
эшерихиозу?
A Бактериологическим
B Серологическим
C Биологическим
D Аллергическим
E Микроскопическим
Врач-бактериолог выделил у больного ребенка возбудителя дизентерии Флекснера
- тип 2, Зонне - тип I и этеропатогенную кишечную палочку - 055 / В5. Как называется
такой тип инфекции у данного ребенка?
A Смешанная инфекция
B Вторичная инфекция
C Носительство патогенных бактерий
D суперинфекции
E реинфекцию
В клинику поступил ребенок с жалобами на боли в животе, стул жидкий с
примесью крови. При посева испражнений на среду Эндо выросли малиново-красные с
металлическим блеском колонии. Какие свойства нужно изучить для доказательства
энтеропатогенносты кишечной палочки?
A антигенный
B морфологические
C культуральные
D биохимические
E тинкториальные
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов фармацевтического факультета
по подготовке к практическому занятию №18
Тема: Возбудители особо-опасных инфекций: чумы, сибирской язвы, холеры. Морфология,
биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний. Этиотропная
терапия.
2. Цель изучения темы.
2а. Общая: знать биологические свойства возбудителей особо-опасных инфекций, уметь
выбрать и обосновать методы лабораторной диагностики чумы, сибирской язвы, предложить
основне противоэпидемические мероприятия в очаге возникновения особо-опасных инфекций.
2б. Конкретная:
1.Уметь распознавать возбудителя чумы, сибирской язвы, холеры по морфологическим
признакам.
2. Уметь правильно выбрать метод для предварительной и окончательной лабораторной
диагностики особо-опасных зоонозов и холеры.
3. Предложить основные профилактические мероприятия в очаге чумы, сибирской язвы,
холеры, знать показания к их внедрению; выбрать специфические и неспецифичные
профилактические препараты, которые применяют при вспышке инфекции.
4. Уметь поставить реакцию термопреципитации по Асколи для проверки животноводческого
сырья на предмет контаминации спорами возбудителя сибирской язвы.
3. Базовые знания и навыки, необходимые для изучения темы.
3.1. Значение спорообразования у бактерий, методы окраски спор, чувствительность спор к
действию неблагоприятных физико-химических факторов.
3.2. Методы изучения монотрихиальной подвижности бактерий.
3.3. Методы определения соматических антигенов бактерий.
3.4. Факторы вирулентности бактерий.
3.5. Этапы бактериологического метода диагностики.
3.6. Сравнительная характеристика экзотоксинов и эндотоксинов бактерий.
3.7. Механизмы и пути передачи возбудителей инфекционных заболеваний.
3.8. Реакция кольцепреципитации, методика постановки, применение в диагностике
инфекционных заболеваний.
4. Основные теоретические вопросы, которые подлежат изучению.
4.1. Общие понятия об особо-опасных инфекциях, особенности забора материала и
лабораторной диагностики.
4.2. Биологическая характеристика возбудителя чумы.
4.3. Эпидемиология, патогенез и иммунитет при чуме.
4.4. Методы микробиологической диагностики чумы.
4.5. Специфическая профилактика и основные противоэпидемические мероприятия в очаге
возникновения чумы.
4.6. Морфология и биологические свойства возбудителя сибирской язвы.
4.7. Эпидемиология и патогенез сибирской язвы. Особенности иммунитета.
4.8. Микробиологическая диагностика сибирской язвы: предварительная, основная,
ретроспективная. Методы определения загрязненности животноводческого сырья спорами
сибирской язвы (РИФ, реакция кольцепреципитации).
4.9. Специфическая профилактика и лечение сибирской язвы.
4.10. Морфология и биологические свойства возбудителя холеры.
4.11. Эпидемиология, патогенез и иммунитет при холере.
4.12. Микробиологическая диагностика холеры. Этапы бактериологического исследования.
4.13. Методы ускоренной диагностики особо-опасных инфекций: чумы, сибирской язвы,
холеры.
5. Содержание темы занятия.
Граф логической структуры содержания:
Таксономия патогенных для человека вибрионов
1.
Возбудитель чумы
Семейство :
Enterobacteriaceae
Род: Yersinia
Вид: Y.pestis
Возбудитель сибирской
язвы
Семейство : Bacillaceae
Род: Bacillus
Вид: B. anthracis
Возбудитель холеры
Семейство : Vibrionaceae
Род: Vibrio
Вид: V.cholerae
Общая характеристика возбудителя чумы
Морфология:
Условия культивирования:
Грам (–) полиморфные палочки
Факультативные анаэробы;
овоидной формы, окрашиваются
Оптимальная температура 18-370С;
биполярно.
Оптимальная температура для культивирования
Неподвижные, не образуют спор,
других йерсиний- 22-280С
бразуют капсулу (в организме
Нетребовательны к составу питательной среды;
человека и животных)
Для быстрого роста культивируют на
специальных или селективных средах
Методы изучения морфологии:
Препараты, окрашенные по Граму,
Леффлеру (биполярность окраски
лучше определяется при окраске
метиленовым синим)
Факторы вирулентности
Среды для культивирования:
Адгезины - капсула, пили
МПА, МПБ;
2.Ферменты патогенности- гемолизы,
2. Среда Туманского, цистеиновий агар
фибриноли-зин, плазмокоагулаза
(специальные)
3. Перекрестно-реагирующие антигены Характеристика роста:
4. Аллергены (формируют ГЧЗТ)
Образуют R-формы колоний на МПА:
5. Экзотоксин -“мышиный токсин”
через 10-12 ч - “юная колония” - стадия “битого
6. Эндотоксин
стекла”;
7. Антифагоцитарные факторы:
через 18-24 ч - “зрелая колония” - “смятый
капсула, протективные антигены,
кружевной платок” - бледно-серый
аденилатциклаза
уплотненный центр, прозрачный нежный
край;
через 48 ч - “старая колония” («ромашка») центр коричневого цвета, края бледно-серые,
кружевные
2. На МПБ - R- форма
а) белые хлопья на дне пробирки
б) пленка на поверхности, от которой вниз
опускаются нитевидные отростки
(“сталактиты”)
Краткая характеристика чумы
Чума – особо-опасная зоонозная инфекция диких грызунов и их эктопаразитов, которая
передается человеку множественными путями, характеризуется тяжелым течением и высокой
смертностью.
Источник инфекции
Пути передачи
заболевания
Инкубационный
период
Формы заболевания
Дикие, синантропные грызуны; человек с легочной формой чумы
1.трансмиссивный; 2.воздушно-пылевой; 3.воздушно-капельный;
4.контактный; 5.алиментарный . Переносчик - блоха
1-3 суток
1.Бубонная; 2. Кожно-бубонная; 3. Кожная; 4. Кишечная ; 5. Легочная
6.Первично-септическая;7. Вторично-септическая
Основные
-выраженная интоксикация;
клинические признаки -специфическое воспаление реґионарных лимфатических узлов
(бубон);
- геморрагический понос (кишечная форма);
- кашель, виделение більшого количества мокроты, быстрое развитие
отека легких;
Иммунитет
Стойкий, длительный. Антибактериальный,антитоксический
Клеточный (ГЗТ)
Лабораторная
Ускоренная:1.Микроскопия ( окрашенных препаратов,
диагностика
иммунофлюоресцентная)
Основная: 1.Бактериологический; 2.Биологический
Вспомогательная (ретроспективная): 1.Серологический;
2.Аллергический
Профилактика
Неспецифическая: конвенционная и этиотропная антибактериальная
(стрептомицин)
Специфическая: живая аттенуированная EV вакцина;
Лечение
Стрептомицин, окситетрациклин
Схема микробиологической диагностики чумы (проводят в специализированных
лабораториях)
Материал для исследования: выделения из язвы, пунктат из бубона, кровь, фекалии, мокрота
(зависит от формы инфекции); секционный материал
1. Бактериоскопический метод: (предварительная диагностика)
- мазок, окраска по Грамму
-мазок, окраска по Леффлеру
- прямая РИФ
2. Бактериологический метод:
-посев материала в флаконы с 50-100 мл МПБ, на МПА, на среду Туманского, цитратный
дезоксихолевый агар
-исследование колоний через 10-12 ч., через 18-20ч. учет типичного роста в МПБ (мазок,
окраска по Грамму, Леффлеру)
-пересев изолированных колоний на скошенный агар
-через 24 ч. идентификация чистой культуры:
-РА с диагностической О-сывороткой
- РП с диагностической К-сывороткой
- проба на фаголизабельность чумным бактериофагом (метод стекающей капли)
- определение сахаролитических свойств на средах Гисса
3. Биологический метод
- заражение морских свинок или белых мышей (подкожно, внутрибрюшинно, накожно)
- исследование животных погибших через 2-3 дня (зараженные внутрибрюшинно) или
через 5-7 дней:
-мазки из внутренних органов;
- высев крови на питательные среды, выделение чистой культуры, идентификация
4. Серологический метод (ретроспективная диагностика)
Материал для исследования: сыворотка крови
-РНГА; диагностический титр 1:40
5. Аллергическая проба с пестином (определение поствакцинального иммунитета,
ретроспективная диагностика)
Ускоренные методы диагностики ( базируются на определении антигенов возбудителя в
материале): -РИФ;
-РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом;
- реакция кольцепреципитации по типу Асколи;
- определение фаголизиса культуры противочумным бактериофагом.
Общая характеристика возбудителя сибирской язвы
Морфология:
Грам (+) стрептобациллы с
обрубленными концами
Неподвижные
Образуют капсулу (только в организме
человека или животных)
В окружающей среде образуют спору,
центрально расположенную
Методы изучения морфологии:
Мазки, окрашенные по Граму, Ожешко,
Романовскому_Гимзе, Бурри-Гинсу
Условия культивирования:
Факультативные анаэробы;
Оптимальная температура 370С;
Неприхотливы, культивируются на МПА, МПБ
Факторы вирулентности
1. Капсула
2. Экзотоксин.
Состоит из 3 фракций:
1) Протективный антиген
2) Летальный фактор
3) Отечный фактор
Среды для культивирования:
МПА, МПБ, кровяной агар, середа с
пенициллином
На МПА - образуют R-формы колоний
(“львиная грива”, “голова Медузы”)
На МПБ - образуют осадок в виде хлопьев или
кусочков ваты, бульон прозрачный.
В столбике желатина - рост, который
напоминает “перевернутую” елку
Краткая характеристика сибирской язвы
Сибирская язва – острая особо-опасная зоонозная инфекция крупного и мелкого рогатого скота,
которая передается человеку множественными путями, характеризуется тяжелым течением и
высокой смертностью среди животных и человека.
Источник инфекции
Механизмы передачи
заболевания
Крупный рогатый скот; мелкий рогатый скот; свиньи
1.Контактный; 2. Аэрогенный 3.Фекально-оральный;
4. Трансмиссивный Факторы передачи: Животноводческое сырье
(кожа, мех ); Продукты животноводства (молоко, мясо)
2-3 дня.; до 8 дней
Инкубационный
период
Формы заболевания
1.Кожная; 2. Кишечная ; 3. Легочная ; 4. Септическая;
Основные
Кожная: карбункул с черным струпом; лимфаденит
клинические признаки Легочная: пневмония с быстрым развитием отека легких
Кишечная: геморрагический колит
Септическая: вираження интоксикация, симптомы ИТШ
Иммунитет
Стойкий, длительный. Антибактериальный,антитоксический
Клеточный (ГЗТ)
Лабораторная
Ускоренная: Микроскопия ( окрашенных препаратов,
диагностика
иммунофлюоресцентная)
Основная: Бактериологический;
Дополнительная: Биологический
Вспомогательная (ретроспективная): 1.Серологический;
2.Аллергический
Профилактика
Неспецифическая: ликвидация заболевания среди животных,
ветеринарный контроль, проверка животноводческого сырья
Специфическая: живая вакцина СТИ (безкапсульный штамм
B.anthracis)
Лечение
Пенициллин, окситетрациклин, противосибиреязвенный
иммуноглобулин
Схема микробиологической диагностики сибирской язвы
Материал для исследования зависит от формы инфекции: содержимое карбункула, везикул
(кожная форма); мокрота (легочная форма); испражнения (кишечная форма); кровь
(септическая форма).
1. Бактериоскопический метод (предварительная диагностика)
a. мазки по Грамму,
b. мазки по Романовському-Гимзе.
c. РИФ.
2. Бактериологический метод (окончательная диагностика)
-посев материала на МПА, кровяной агар, в МПБ;
-через 18-20 ч. подозрительные колонии пересевают на скошенный агар;
-идентификацию чистой культуры проводят на основании результатов :
1. биологической пробы (заражение белых мышей, определение в мазках-отпечатках
капсулированных бацилл)
2. теста «жемчужного ожерелья» (высев в среду с пенициллином, где возбудитель
сибирской язвы образует L-формы);
3. фаголизабельность сибиреязвенным бактериофагом;
4. способности образовывать капсулу на средах с добавлением природного белка
(сывороточный агар)
5. отсутствия гемолитической активности;
6. отсутствия подвижности
3.Биологический метод – материалом от больного подкожно заражают белых мышей;
животные гибнут через 1-2 дня после введения материала; во внутренних органах
обнаруживают возбудители с типичной морфологией
Методы для ретроспективной диагностики или определения поствакцинального
иммунитета:
1. Аллергический метод – постановка внутрикожной пробы с антраксином
2.Серологический метод:
Материал для исследования: сыворотка крови
РСК, РНГА, ИФА , реакция коагглютинации с сибиреязвенным антигеном
Методы для определения антигенов сибиреязвенных бацилл в материале,
животноводческом сырье, и т.п..
Серологическая диагностика: Реакция термокольцепреципитации по Асколи
Общая характеристика возбудителя холеры
Морфология:
Условия культивирования:
Грам-отрицательные, слегка изогнутые
Факультативные анаэробы или аэробы;
палочки в виде запятой
Адаптированные к щелочной среде
0,5 - 1,5-3 мкм, спор и капсул не
(оптимальное рн 7,6-8,2);
образуют, подвижные (монотрихи)
Оптимальная температура 18-370С;
Не требовательны к питательным средам и
Методы изучения морфологии:
Мазки, окрашенные по Граму; нативная условиям культивирования;
микроскопия мазков «висячей капли»
Для быстрого роста культивируют на
для обнаружения подвижности
специальных или селективных средах:
Щелочной агар, щелочная пептонна вода
Дифференциально-диагностические: TCBSагар, среда Монсура
Факторы вирулентности
1. Жгутик
2. Пили (адгезины)
3. Ферменты патогенности:
плазмокоагулаза, лецитиназа,
фибринолизин, нейраминидаза,
протеазы
4. Эндотоксин
5. Экзотоксин (холероген)
Характеристика роста:
1. На пептонной воде образуют голубую
пленку через 4-6 ч.
2. на щелочном агаре образуют
дисковидные прозрачные S-колонии
3. на TCBS-агаре образуют желтые
колонии (ферментируют сахарозу)
4. на среде Монстра образуют колонии с
темно-серым центром
Краткая характеристика холеры
Холера - особо-опасная кишечная инфекция человека, которая сопровождается водянистой
диареей, выраженной дегидратацией и характеризуется быстрым эпидемическим
распространением
Источник инфекции
Больной человек, вибрионоситель
Механизмы передачи Фекально-оральный; Пути: Водный, алиментарный, бытовой
заболевания
Факторы передачи: вода, пищевые продукты
Инкубационный
1-3 дня.; до 6 дней
период
Формы заболевания
Холерный ентерит; Холерный гастроентерит; Холерный алгид; Кома
Основные
-выраженная интоксикация;-профузный водянистый понос;
клинические признаки -рвота;-симптомы обезвоживания (сухость кожи, уменьшение
тургора; падение давления; тромбозы)
Иммунитет
Стойкий, длительный. Антибактериальный, антитоксический
Лабораторная
Ускоренная: Микроскопия ( окрашенных препаратов,
диагностика
иммунофлюоресцентная)
Основная: Бактериологический;
Вспомогательная (ретроспективная): Серологический;
Профилактика
Неспецифическая: конвенционная и этиотропная антибактериальная
Специфическая: (только в постоянных очагах холеры):
Инактивированная холерная вакцина; Холероген-анатоксин
Лечение
Эритромицин, доксациклин, тетрациклин, хлорамфеникол
Схема микробиологической диагностики холеры
Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, секционный материал (сегменты
тонкого кишечника), вода, пищевые продукты
Ускоренная диагностика:
- РИФ;
- Реакция иммобилизации вибрионов О-1 сывороткой
Бактериологический метод:
Первый этап:
- микроскопия нативних мазков для определения подвижности;
- микроскопия окрашенных по Грамму мазков испражнений;
- посев исследуемого материала в щелочную ПВ, на щелочной агар, среду ТЦБС;
Второй этап (через 4-6 часов):
- микроскопическое исследование пленки со щелочной ПВ (нативная микроскопия);
- мазок, окраска по Грамму;
- постановка ориентировочной РА с О-1 сывороткой;
- при необходимости (отсутствие видимых признаков роста) пересев в другую ПВ и на
плотные среды;
Третий этап (через 14-16 часов):
- изучение колоний, которые образовались на плотных средах: мазок по Грамму,
ориентировочная РА с О-1 сывороткой;
- пересев подозрительных колоний на щелочную ПВ.
Четвертый этап (через 20-24 часа):
- идентификация чистых культур:
o определение сахаролитических свойств (триада Хейберга);
o определение серотипа в ориентировочной и развернутой РА;
o постановка биологических тестов для определения биовара;
Пятый этап (через 24-36 часов):
- учет результатов;
- выдача окончательного микробиологического диагноза.
Серологический метод (вспомогательный, ретроспективная диагностика, выявление
носителей, оценка напряженности иммунитета):
- определение вибриоцидов в сыворотке больных в реакции лизиса (с 3-го дня);
диагностический титр 1:1000
- определение агглютининов в развернутой РА; диагностический титр 1:80;
- определение антитоксинов с помощью РНГА; диагностический титр 1:160.
6.Практическая работа, которая выполняется на занятии.
6.1. Промикроскопировать демонстрационные препараты йерсиний, бацил, вибрионов,
окрашенных по Грамму. Микроскопическую картину зарисовать.
Возбудитель чумы (Y.pestis) - грамм-отрицательные полиморфные палочки овоидной формы;
при окрашивании метиленовим синим болем інтенсивно прокрашиваютсяч на полюсах клетки
(биполярно); в мазках-отпечатках паренхиматозных органов можна обнаружить капсулу вокруг
бактериальной клетки.
Возбудитель сибирской язвы (B. anthracis) – грамм-положительные стрептобациллы с
обрубленными концами «бамбуковые палки»)
Холерный вибрион является грамм-отрицательным, слегка изогнутым в виде запятой
микроорганизмом, длиной 1,5-3 мкм.
6.2. Провести учет демонстрационного опыта фаголизиса методом «стекающей капли»,
который используется для ускоренной диагностики чумы.
Определение фаголизабельности проводят с целью ускоренной диагностики чумы. Для этого на
питательную среду, засеянную исследуемым материалом, наносят 1 каплю специфического
чумного фага, поворачивают чашку вертикально для того, чтобы капля стекла по поверхности
засеянной среды; после этого посев инкубируют в термостате 5-6 часов и учитывают результат:
при наличии возбудителя чумы в материале в месте контакта фага и газонной культуры будет
отсутствовать рост в виде прозрачной дорожки фаголизиса.
6.3. Провести визуальное и стереомикроскопическое
исследование R-форм колоний
антракоидов на кровяном агаре.
R-форм колонии антракоидов напоминают колонии возбудителя сибирской язвы: край колонии
при увеличении напоминает курчавые локоны («львиная грива»)
6.4. Изучить характер роста холерного вибриона на 1% пептонной воде. Данные внесите в
протокол.
На щелочной пептонной воде возбудитель холеры через 5-6 часов образует нежную пленку с
голубым оттенком.
6.5. Поставить реакцию кольцепреципитации по типу Асколи , учесть результаты, внести в
протокол сведения о цели применения реакции.
Цель постановки реакции: определение термостабильного сибиреязвенного антигена в
продуктах животноводства (кожа, шерсть, мясо и др.)
Для постановки реакции
необходимы: преципитирующая диагностическая сыворотка,
нормальная сыворотка, фильтрат жидкости, в которую экстрагировали антиген путем
кипячения образцов исследуемого материала, узкие преципитационные пробирки.
Методика:В пробирку 1 (контроль) наливают нормальную сыворотку в количестве 0,3-0,5 мл,
затем медленно наслаивают исследуемый материал ( 0,2-0,3 мл), удерживая пробирку под
наклоном, после этого пробирку ставят вертикально и наблюдают за границей раздела
компонентов реакции. Если кольцо преципитации не образуется (отрицательный результат),
проводять опытную реакцию в пробирке 2 по той же методике только с использованием
преципитирующей сыворотки. При положительной реакции в течении 2-3 минут образуется
кольцо преципитации на границе разделения жидкостей. Появление кольца преципитации
свидетельствует о наличии антигенов возбудителя в исследуемом материале.
6.6. Изучить иммунобиологические препараты для диагностики и профилактики чумы,
сибирской язвы, холеры.
Набор препаратов: диагностические – чумной бактериофаг, противочумная люминесцентная
сыворотка для постановки РИФ, преципитирующая сибиреязвенная сыворотка для постановки
реакции термопреципитации, сибиреязвенный бактериофаг, сибиреязвенная люминесцентная
сыворотка для РИФ; антраксин (белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный
путем гидролиза B.anthracis) для постановки кожно-аллергической пробы; диагностические Осыворотки группо- и типоспецифические, бактериофаги el-tor, C IV Мукерджи.
профилактические препараты – чумная живая сухая вакцина EV для накожного введення,
сибиреязвенная вакцина СТИ (споры авирулентного безкапсульного штамма B.anthracis),
инактивированная холерная вакцина, холероген-анатоксин.
6.7. Лечебные препараты: противосибиреязвенный лошадиный иммуноглобулин,
антибиотики: пенициллины, цефалоспорины – для лечения сибирской язвы, тетрациклины,
аминогликозиды, фторхинолоны – для лечения чумы, сибирской язвы, тетрациклін,
доксициклин, хлорамфеникол – для лечения холеры.
7.Рекомендованная литература.
7а. Основная:
1. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 279-307, 308-316.
2. В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 293, 296-302, 307-313, 318-322.
3. А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология,
Санкт-Петерб.,2002. Стр. 355-364, 364-370,394-401.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков,
1999. Стр. 242-263.
5. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков,
1999. Стр. 280-286, 294-307.
6. Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 188193, 198-204, 204-211.
7. Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр.
409-413, 423-428, 446-448.
8. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр.
125-132, 143-147, 200-208.
7б. Дополнительная
2. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
3. Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 35-50.
4. Лекционный материал.
8.Материалы для самоконтроля
1. В мазке из испражнений больного выявлены грамотрицательные бактерии в виде запятой.
Какие свойства следует в первую очередь изучить с помощью микроскопа для получения
дополнительной информации о выявленных микробах?
A Наличие цист.
B Наличие спор.
C Наличие капсул.
D Подвижность.
E Наличие гранул волютина.
2. Существуют территории, пребывание на которых людей или животных связано с
постоянным риском заражения определенными видами бактерий. Какая особенность этих
бактерий предопределяет их длительное пребывание в почве?
A Капсулообразование
B Спорообразование
C Способность размножаться в остатках растений
D Наличие плотной клеточной стенки
E Наличие плазмид
3. В эпидемиологии некоторых заболеваний большое значение имеют переносчики - блохи.
Выберите из приведенных заболеваний то, в распространении которого в природе решающую
роль играют блохи:
A Чума
B Сибирская язва
C Сыпной тиф
D Возвратный тиф
E Лептоспироз
4. У больного во время осмотра карбункула врач отметил: в центре черный струп, отек
подкожной клетчатки, при прикосновении - безболезненность. При микроскопии
выявлены грамположительные стрептобациллы, образующие капсулу. Укажите
наиболее вероятное заболевание.
A Чума
B Столбняк
C Сибирская язва
D Холера
E Сифилис
5. У больного из рвотных масс с подозрением на холеру выделены грамотрицательные
подвижные вибрионы. Какие диагностические препараты следует применить для определения
серовара выделенной культуры?
A Нормальные сыворотки
B Люминесцентная сыворотка
C Поливалентный бактериофаг
D Типовые бактериофаги
E Типовые агглютинирующие сыворотки Инаба и Огава
6.Рабочему цеха по переработке кожевенного сырья поставлен предварительный диагноз
"сибирская язва". Какую реакцию используют для установления факта заражения кожевенного
сырья?
A Реакцию связывания комплемента
B Реакцию агглютинации
C Реакцию термопреципитации
D Реакцию нейтрализации
E Реакцию непрямой гемагглютинации
7. У фермера после контакта с кожей и мясом погибшей коровы на коже возникли карбункулы с
почернением в центре, гиперемией, повышением температуры. После госпитализации был
поставлен диагноз – сибирская язва. Что срочно необходимо ввести
больному для
лечения?
A Противосибиреязвенный глобулин
B Вакцина СТИ
C Вакцина БЦЖ
D Тулярин
E Антраксин
8. При микроскопическом исследовании препарата, изготовленного из увеличенного пахового
лимфоузла больного, окрашенного по Лефлеру (метиленовым синим), было выявлено
бактерии овоидной формы, интенсивнее окрашенные по полюсам, расположены хаотически.
Какому из перечисленных микроорганизмов присущи эти свойства?
A L.interrogans
B N.gonorrhoae
C T.pallidum
D Y.pestis
E M.tuberculosis
Автор:
доцент Вовк И. Н.
Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов
при подготовке к практическому занятию №19
для студентов фармацевтического факультета
(специальность - фармация)
1.Тема занятия: Патогенные клостридии. Возбудители анаэробных инфекций - ботулизма,
столбняка, анаэробной газовой инфекции. Морфология, биологические свойства.
Микробиологическая диагностика заболеваний.
2. Цель занятия.
2.1. Цель общая. Уметь объяснить биологические свойства возбудителей ботулизма,
столбняка, газовой анаэробной инфекции; принципы лабораторной диагностики,
специфической профилактики, лечения инфекций.
2.2. Цель конкретная. Уметь правильно выбрать метод лабораторной диагностики ботулизма,
столбняка, газовой анаэробной инфекции; назначать препараты для профилактики заболеваний.
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
3.1. Морфологические группы бактерий.
3.2. Споры бактерий, их значение, методы выявления.
3.3. Понятие «асептика», «антисептика», «антисептические средства».
3.4. Токсины микроорганизмов.
3.5. Иммунобиологические препараты для специфической профилактики и лечения
заболеваний.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
4.1 Морфологическая, биологическая характеристика патогенных клостридий, значение в
возникновении заболеваний.
4. 2. Характеристика ботулотоксина, экзотоксинов возбудителей столбняка, газовой анаэробной
инфекции, механизм их действия.
4.3. Микробиологическая диагностика ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции
Реакция нейтрализации, методика определения экзотоксинов патогенных клостридий.
4.4. Профилактика, терапия ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции.
Характеристика иммунобиологических препаратов.
5. Содержание темы.
Возбудитель ботулизма Clostridium.botulinum) - короткая грамм-положительная
палочка, образует овальную субтерминально расположенную спора («теннисная ракетка»).
Культивируют на специальных средах для анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный
агар Цейсслера, среда Вильсон-Блэра. Екзотоксин- ботулотоксин (нейротоксин), который
связывает ацетилхолин в нервно-мышечных синапсах центральной, вегетативной и
периферической нервной системах. Экзотоксин накапливается в основном в консервированных
продуктах, при попадании в желудок может активироваться протеолитическими ферментами.
Инкубационный период - от 2 часов до 10 суток. Формы заболевания - гастроинтестинальная,
раневой ботулизм, ботулизм новорожденных. Иммунитет - антитоксический слаб напряжений.
Методы диагностики - биологическая проба, бактериологический, серологический метод для
выявления ботулотоксина в пищевых продуктах, материале от больного (ИФА, РНГА с
антительным диагностикумом). Профилактика - неспецифическая (контроль за изготовлением
консервированных продуктов), специфическая экстренная пассивная (поливалентная
антитоксическая вакцина).
Возбудитель столбняка (C.tetani). Грамположительная спорообразующая палочка
(«барабанная палочка"), не образуют капсулу, перитрих. Облигатный анаэроб. Культивируют
на специальных средах для анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера,
среда Вильсон-Блэра. Экзотоксин имеет 2 фракции: тетаноспазмин (нейротоксин) и
тетанолизин (мембранотоксины, гемолизинов). Механизм действия нейротоксина: угнетение
выделения тормозных нейромедиаторов в синапсах вставочных нейронов ЦНС. Столбняк острая токсическая раневая инфекция, которую вызывает нейротоксин C. tetani, и проявляется
судорогами скелетных мышц и периодическими генерализованными судорогами. Механизм и
пути передачи заболевания - контактный. Факторы передачи - инородные тела в ране,
нестерильный инструмент и т.д. Источник инфекции - животные, человек (клостридии постоянные комменсалы ЖКТ людей и животных). Патогенез - попадание спор в рану,
прорастание спор в анаэробных условиях, фиксация экзотоксина в мышечно-нейронных
синапсах, ретроградный аксональный транспорт токсина в ЦНС, фиксация в синапсах
тормозных нейронов, связывание медиаторов. Инкубационный период - от 2 до 14 суток.
Формы заболевания - раневой столбняк, столбняк новорожденных, послеродовой столбняк,
криптогенный столбняк. Иммунитет - постинфекционный, антитоксический, слабо напряжений,
непродолжительный. Методы диагностики - бактериоскопический, биологическая проба
(реакция нейтрализации на белых мышах), бактериологический, серологический (определение
тетеноспазмина в материале с помощью ИФА. Профилактика - неспецифическая
(хирургическая обработка раны, удаление инородных тел, сгустков крови, соблюдение
асептики при хирургических вмешательствах) специфическая плановая (иммунизация детей
АКДС, АДС), экстренная - активная (анатоксин), активно-пассивная (анатоксин + сыворотка,
пассивная (антитоксическая сыворотка).
Классификация патогенных для человека анаэробов - возбудителей газовой раневой
инфекции и гнойно-воспалительных осложнений
Название рода
Патогенные виды
Неспорообразующие анаэробы
Bacteroides
B. fragilis, B.melaninogenicus
Fusobacterium
F.nucleatum, F.necroforum
Propionobacterium
P. acnes, P.avidus
Peptococcus
P. niger
Peptostreptococcus
P. anaerobius
Veilonella
V.atipica, V.dispar
Спорообразующие анаэробы
C. perfringens
Clostridium
C. novi
C. septicum
C. hystolyticum
C. difficile
C. sporogenes
Неспорообразующие анаэробы вызывают эндогенные гнойно-воспалительные инфекции в
ассоциациях с факультативными анаэробами или аэробами: мягких тканей (флегмоны,
абсцессы, нагноение трофических язв, раневые инфекции), дыхательной системы (абсцессы
легких, эмпиема плевры и др.), опорно-двигательной системы (остеомиелит), мочеполовой
системы, стоматологические заболевания (глубокий кариес, периодонтит, периостит,
пародонтит, хелитозис и др.). Условия развития заболеваний: нарушения тканевых барьеров
кожи и слизистой оболочки; снижение уровня кислорода и окислительно-восстановительного
потенциала в тканях вследствие травм, спазмов или нарушение проницаемости сосудов;
хирургические вмешательства (операции на кишечнике, в челюстно-лицевой области);
сахарный диабет, онкозаболевания, лейкозы, артериосклероз, эндартериит, алкоголизм;
длительное применение препаратов с иммуносупрессивной действием (кортикостероиды,
иммунодепрессанты, антибиотики рентгеновское и гамма-излучения.
Спорообразующие возбудители газовой анаэробной инфекции. Грам-положительные
спорообразующие палочки, которые во время споруляции приобретают веретенообразную
форму; не образуют капсулу (кроме C. perfringens) малоподвижные перитрихи (кроме C.
perfringens). Облигатные анаэробы. Культивируют на специальных средах для анаэробов: среда
Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блэра, среда Виллиса-Хобса.
C. perfringens, C. septicum имеют преимущественно сахаролитические свойства, C. novyi, C.
hystoliticum - протеолитические свойства. Факторы вирулентности - многофракционное
экзотоксины, капсула. Действие экзотоксинов - гемолитическое, дермонекротическое,
летальное, энтеротоксигенное, нейротоксическое, кардиотоксическое, нефротоксическое.
Клинические формы газовой анаэробной инфекции - эмфизематозная, отечная, смешанная.
Характерно отсутствие ярких признаков воспаления в ране, быстро прогрессирующий некроз
тканей и наличие выраженной интоксикации. Методы диагностики - бактериоскопический
(предварительная
диагностика),
бактериологический
(основной),
биологический,
иммунохимический. Профилактика - неспецифическая (ПХО раны), специфическая
(поливалентная противогангренозная гетерологическая сыворотка). Лечение - неспецифическое
- антибиотики (цефалоспорины или пенициллины), специфическое (видоспецифическим
антитоксические сыворотки).
Серологические варианты C. perfringens A и C выделяют энтеротоксины, накопление
которых в пищевых продуктах приводит к развитию пищевых токсикоинфекций. C. perfringens
тип A вызывает токсикоинфекцию легкой и средней тяжести с коротким инкубационным
периодом и непродолжительным течением. Основные симптомы (диарея, рвота) исчезают в
течение суток. Тяжелое течение имеет некротический энтерит, вызванный C. perfringens типа С.
Возбудитель псевдомембранозного колита (C. difficile) - грамположительная
спорообразующая палочка. На средах для культивирования анаэробов образует белые плотные
колонии со специфическим запахом крезола. Возбудитель продуцирует два экзотоксина А и В.
Токсин А (энтеротоксин) имеет летальное действие, вызывает диарею. Токсин В (цитотоксин)
повреждает клетки слизистой кишечника, подавляет синтез белка и нарушает функцию
мембран с потерей ионов К +. C. difficile входит в состав микрофлоры кишечника у 3%
здоровых взрослых и 30-50% детей. Носительство распространено у госпитализированных
больных. Возбудитель иногда вызывает внутрибольничные вспышки заболевания. Поражение
чаще всего возникает при антибиотикотерапии. В результате подавляется нормальная
микрофлора (анаэробные неспорообразующие бактерии), которая является основой
колонизационной резистентности толстого кишечника. C. difficile выживает благодаря
образованию спор. Отмена антибиотиков способствует прорастанию спор и выделению
экзотоксина вегетативными клетками. Для исследования используют бактериологический
метод, определение цитотоксинах с помощью ИФА. Лечение - ванкомицин, метронидазол,
эубиотики.
Граф логической структуры микробиологической диагностики энтеральных
клостридиозов
Материал для исследования: промывные воды желудка, рвотные массы, кровь, остатки
пищевых продуктов, стул
Бактериологическое метод
1. Материал прогревают при 80 0С в течение 20 мин;
2. Посев материала на среду Китта-Тароцци; инкубация 48-72 ч.,
3. Пересев на кровяной агар Цейсслера; инкубация 24-48 ч.
4. Изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци; инкубация 24-48 ч.
Идентификация чистой культуры на основании: морфологии, культуральных, биохимических
свойств, результатах биологической пробы (реакция нейтрализации) для определения серотипа
токсина.
Серологический метод: определение ботулотоксина с помощью РНГА с антительным
эритроцитарных диагностикумом; выявление токсина с помощью ИФА.
Граф логической структуры микробиологической диагностики раневой анаэробной
инфекции
Материал для исследования: раневой содержание, экссудат, некротизированные ткани,
тампоны из раны, при родильном столбняке - отделение и биоптаты из матки, влагалища; при
столбняке новорожденных - выделение из пупка.
Бактериоскопический метод (предварительная диагностика):
Мазок, окраска по Граму
Иммунофлюоресцентная микроскопия
Бактериологическоий метод
1) Материал прогревают при 800С в течение 20 мин;
2) Посев материала на среду Китта-Тароцци, в конденсационную воду скошенного кровяного
агара по Филдсу;
3) Инкубация 48-72 ч., пересев на кровяной агар Цейсслера;
4) Инкубация 24-48 ч, изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци;
5) Инкубация 24-48 ч.
Идентификация чистой культуры на основании морфологии, культуральных свойств;
ферментативных признаков, результатов биологической пробы (реакция нейтрализации).
Методы для определения нейротоксина клостридий в исследуемом материале
Биологический метод (реакция нейтрализации) - введение смеси фильтрата материала (или
жидкой культуры) и антитоксической сыворотки, предварительно выдержанной в термостате
30-40мин. (контрольная мышь); введение фильтрата материала без антитоксической сыворотки
(опытная мышь) учет результатов биологической пробы через 4-5 суток.
Серологический метод: определение тетаноспазмин с помощью РНГА с антительным
эритроцитарных диагностикикумом; выявление токсина с помощью ИФА.
Ускоренный метод выявления токсина перфрингенс
Лецитиназная проба для выявления токсина перфрингенс в исследуемом материале с помощью
диагностической сыворотки анти-perfringens.
6. Практические работы, выполняемые на занятиях.
6.1. Изучить морфологию возбудителя ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции в
демонстрационных препаратах, окрашенных по Граму. Микроскопическую картину зарисовать
в протокол, обращая внимание на форму, размер и расположение спор.
6.2. Изучить характер роста клостридий в среде Китта-Тароцци, лакмусовой молоке.
Ознакомиться с питательными средами, которые используют для выделения патогенных
клостридий из исследуемого материала и накопления чистой культуры (кровяно-сахарный агар
Цейсслера, среда Вильсон-Блэра, среда Китта-Тароцци, скошенный кровяно-сахарный агар по
Филдсу).
6.3. Учесть результаты демонстрационной РПГА, поставленной с целью выявления
ботулотоксина в разных образцах пищевых продуктов.
Возбудитель ботулизма выделяет токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G), однако чаще
других встречаются серовары А, В, Е. Все токсины отличаются по антигенным свойствам и
могут быть дифференцированы в реакциях с типоспецифическими сыворотками. Для этой цели
используют реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с сывороткой больного, в
которой предполагается наличие токсина, и эритроцитами, нагруженными антителами
антитоксических противоботулинических сывороток типов А, В, Е. Контролем служит
нормальная сыворотка. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде
ровного слоя клеток с складчатым или зазубренным краем («перевернутая зонтик»), в
отрицательном - оседают в виде «пуговицы».
6.4. Осуществить учет результатов опыта выявления токсина клостридий перфрингенс в
раневом отделяемом по его лецитиназной активностью с целью ускоренной диагностики
клостридиоза. Для этого в трех пробирки вносят по 0,3 мл исследуемого материала, в две из них
- по 0,1 мл лецитина, дальше в первую добавляют 0,1 мл сыворотки антиперфрингенс, во
вторую - 0,1 мл, а в третью - 0 2 мл физиологического раствора. Учет результатов
осуществляют через 40 минут инкубации в термостате. В первой пробирке раствор остается
прозрачным (нейтрализация токсина антитоксином), во второй - положительный результат в
виде помутнения (расщепление лецитина), в третий - содержимое остается прозрачным
(контроль).
6.5. Ознакомиться с лечебно диагностическими препаратами, которые применяют при раневых
анаэробных инфекциях.
1) Антитоксическая поливалентная противогангренозная сыворотка. Выпускают в жидком
виде, получают путем гипериммунизации лошадей анатоксинами. Используют для
специфической профилактики и лечения газовой анаэробной инфекции.
2) Адсорбированный столбнячный анатоксин (АС). Получают путем обеззараживания
столбнячного экзотоксина 0,4% формалином при 40 0С в течение 4 недель, концентрируют,
адсорбируют на гидроокиси алюминия. Используют для активной иммунизации против
столбняка.
3) Ассоциированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС) содержит
столбнячный анатоксин. Используют для активной иммунизации новорожденных против
столбняка, коклюша, дифтерии.
4) Адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС, АДС-М). Используют для
активной иммунизации против столбняка, дифтерии.
5) Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получают из гамма-глобулиновой
фракции сыворотки крови людей, ревакцинированных очищенным сорбированным
анатоксином. Используют для пассивной экстренной профилактики столбняка в сочетании со
столбнячным анатоксином при травмах, лечении столбняка (преимущественно детей).
6) Противостолбнячная сыворотка. Получают из крови гипериммунизированных
столбнячным анатоксином лошадей. Активность измеряют в международных единицах (МЕ),
используют для профилактики и лечения столбняка.
7) Противоботулинические сыворотки. Получают из крови лошадей, которые были
гипериммунизированы ботулиническими анатоксинами. Для лечебно-профилктических
мероприятий готовят противоботулинические поливалентные и моновалентные сыворотки
типов А, В, Е, F. Моновалентные сыворотки используют для определения серотипа токсина в
исследуемом материале в реакции нейтрализации на белых мышах.
7. Рекомендованная литература.
7.1. Литература основная.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк и др. Микробиология, 2004. - С. 430-445.
И.Л.Дикий, И.И.Сидорчук и др. Микробиология: Руководство к лабораторным занятиям, 2004.
С. 407-421.
7.2. Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь / Под ред.
Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2 004.
8. Материалы для самоконтроля.
8.1. Тестовые задания для проверки исходного уровня знаний.
1) Выживанию микробов в объектах внешней среды способствует спорообразование.
Микроорганизмы какого рода с являются спорообразующими?
A. Bacteroides
B. Clostridium
C. Peptococcus
D. Peptostreptococcus
E. Staphylococcus
2) У больного была выделена культура бактерий, которые не растут в присутствии кислорода.
Как обеспечить условия роста для этой культуры?
A. Использование анаэростатов
B. Использование аппарата Кротова
C. Использование печи Пастера
D. Использование сывороточных сред
E. Средами с окислительным редокс потенциалом
3) Патогенные микробы и их токсины, попав в макроорганизм, могут распространяться в нем
разными путями. Какой путь характерен для токсинемия?
A. Возбудители из крови поступают во внутренние органы
B. Микробы с места попадания поступают в кровь, но не размножаются
C. Микробы из крови поступают во внутренние органы, где образуют гнойные очаги
D. Микробы находятся в лимфоузлах
E. В кровь попадают микробные токсины
4) После получения антитоксической сыворотки необходимо определить ее активность. С этой
целью используют реакцию, которая основана на соединении равных доз иммунной сыворотки
и анатоксина. Как называется эта реакция?
A. Гемагглютинация
B. Гемадсорбции
C. Связывание комплемента
D. Преципитации
E. Флокуляция
5) Для серопрофилактики и серотерапии инфекций используют иммунные сыворотки и
иммуноглобулины. Какой вид иммунитета формируется с их помощью?
A. Видовой наследственный
B. Приобретенный активный
C. Приобретенный пассивный
D. Искусственный активный
Е. Искусственный пассивный
8.2. Контрольные вопросы для проверки исходного уровня знаний.
Ситуационная задача 1. В бактериологической лаборатории исследовали вяленую рыбу
домашнего изготовления, которая стала причиной тяжелого пищевого отравления. При
микроскопии выделенной на среде Китта-Тароцци культуры обнаружены микроорганизмы,
похожие на теннисную ракетку.
Вопросы.
1. Какой диагноз установил врач?
2. Укажите видовое название возбудителя (лат.)
3. Опишите патогенез болезни.
4. Назовите материалы от больного, подлежащих исследованию для установления диагноза,
методы их исследования.
5. Профилактика заболевания.
Ситуационная задача 2. Из организма больного пищевым отравлением выделили чистую
культуру анаэробных грамположительных спорообразующих палочек.
Вопросы.
1. Какие виды клостридий могут вызывать пищевые токсикоинфекции?
2. Дайте их морфологическую характеристику.
3. Опишите этапы бактериологического метода исследования при диагностике заболевания.
4. Какую еще инфекцию могут вызвать эти возбудители?
5. Профилактика заболеваний, вызванных данным микроорганизмами.
Ситуационная задача 3. Пострадавшему в автомобильной катастрофе (перелом нижней
конечности) оказали неотложную помощь и ввели противостолбнячную сыворотку. Но через
два месяца пациента госпитализировали в инфекционное отделение с симптомами позднего
столбняка.
Вопросы.
1. Как правильно нужно было бы провести профилактику столбняка, чтобы предотвратить
подобное осложнение?
2. Опишите морфологические свойства возбудителя.
3. Назовите питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя, условия его
культивирования.
4. Перечислите методы микробиологической диагностики столбняка.
5. Профилактика столбняка.
Автор - доцент А.В.Крижановская
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов медицинского факультета
при подготовке к практическому занятию № 20
Тема: Коринебактерии дифтерии. Бордетеллы коклюша. Микобактерии туберкулеза.
Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
2. Цель занятия:
2а. Среднее: усвоить основные биологические свойства патогенных для человека
коринебактерий, бордетелл, микобактерий. Ориентироваться в выборе методов лабораторной
диагностики этих заболеваний, знать основные методы специфической профилактики и
лечения.
2б. Конкретная:
1). Распознавать морфологию и дифференциюваты биологические свойства возбудителей
дифтерии, коклюша, туберкулеза.
2). Овладеть методиками микробиологической диагностики заболеваний.
3). Предложить методы специфической терапии и профилактики дифтерии, коклюша,
туберкулеза.
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
3.1. Определение понятий "патогенность" и "вирулентность".
3.2. Факторы вирулентности бактерий.
3.3. Характеристика токсинов бактерий.
3.4. Периоды развития инфекционных болезней.
3.5. Определение факторов вирулентности бактерий.
3.6. Выявление включений (зерен волютина) с помощью микроскопических методов
исследования (Нейссера, Леффлера).
3.7. Микроскопический метод выявления кислотоустойчивых микроорганизмов (метод
Циля-Нильсена).
3.8. Источники, механизмы и пути передачи инфекции.
3.9. Роль факторов внешней среды и социальных условий в возникновении болезни.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
4.1.Таксономическое положения коринебактерий.
4.2.Морфология, тинкториальные и культуральные особенности возбудителя дифтерии.
4.3.Биовары и их биологические свойства.
4.4.Епидемиология и патогенез дифтерии. Факторы патогенности дифтерийных палочек.
Значение в развитии заболевания.
4.5.Противодифтерийний иммунитет. Значение вакцинации в профилактике болезни.
4.6.Методы лабораторной диагностики дифтерии. Значение проб на токсигенность возбудителя
дифтерии.
4.7. Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии.
4.8.Таксономическое положения бордетелл.
4.9. Биологические свойства возбудителя коклюша.
5.0.Епидемиология и патогенез коклюша. Особенности течения болезни.
5.1.Методы микробиологической диагностики и профилактики коклюша.
5.2. Таксономическое положение коринебактерий.
5.3.Морфологични и биологические свойства возбудителя туберкулеза.
5.4.Лабораторные методы диагностики туберкулеза.
5.5.Препараты для лечения и специфической профилактики туберкулеза.
5. Содержание темы.
Граф логической структуры содержания:
Дифтерия Острое инфекционное заболевание, вызываемое токсигенными коринебактертями
дифтерии, передается воздушно-капельно путем; характеризуется местным фибринозным
воспалением преимущественно слизистых оболочек рото- и носоглотки, а также явлениями
общей интоксикации, поражением сердечно-сосудистой, нервной и выделительной системы.
Биологические особенности возбудителей дифтерии Морфология: Гр. + Палочки.
Используют сложный метод окраски по Нейссеру и простой по Леффлеру. Характерно
наличие на концах зерен волютина, которые окрашиваются более интенсивно или в другой
цвет (явление метахромазией). Возбудители расположены под углом друг к другу.
Характерно,
явление
полиморфизма.
Растет в аэробных условиях на сывороточных средах Ру (свернута лошадиная сыворотка),
Леффлера (сыворотка с 1/3 сахарного бульона), используются сывороточный и кровянй
телуритовий
агар,
среда
Клауберга
и
др.
По культуральным и биохимическим свойствам выделяют 4 биовара: gravis, mitis,
intermedius,
belfanti.
Токсигенность
связанная
с
продукцией
экзотоксина
Явление ,, фаговой конверсии "Попадание в бактериальную клетку умеренного бактериофага,
который привносит в геном" tox + ген. "Клетка начинает продуцировать экзотоксин.
Определение токсигенности дифтерийной палочки в опытах ,, in vitro "Используются реакции
прецепитации в геле. Антитоксин способен диффундировать в гель, при наличии в геле
дифтерийного экзотоксина, который производится при росте бактерий, образуется линия
преципитации.
Иммунитет. После болезни возникает антитоксическое иммунитет, хотя возможны повторные
случаи
заболевания.
Микробиологическая диагностика дифтерии имеет решающее значение, при этом особое
внимание уделяется изучению морфологических, культуральных, биохимических свойств,
определению биоваров и токсигенности дифтерийной палочки. Особенно важное значение
приобретает дифференциация дифтерийной палочки от непатогенных коринебактерий.
Специфическая профилактика Используют дифтерийный анатоксин при введении, которого
формируется
антитоксическое
иммунитет.
Экстренная
профилактика
и
лечение
противодифтерийной
сывороткой
Коклюш (син .: коклюш) - острая инфекционная болезнь, характеризующаяся катаральным
воспалением
дыхательных
путей
и
приступами
спазматического
кашля.
Биологические особенности возбудителя коклюша . Возбудитель коклюша- небольшие ГРовоидной формы палочки. Спор не образуют, капсулы есть только у B. pertussis, а жгутики только в B. bronchiseptica.
Бордетеллы - суровые аэробы, требовательны к условиям выращивания. Культивируют их на
среде Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар с кровью) или на казеино-угольном агаре
(КУА). Колонии всех видов гладкие, напоминающие капельки ртути. На кровяном агаре
колонии
окружены
зонами
гемолиза.
Биохимические свойства бордетелл очень слабы. Они не разлагаются белки и углеводы, не
восстанавливают
нитраты,
но
выделяют
каталазу.
Токсигенность.
Выделяет
термолабильный
белковый
токсин
Экология. Источником инфекции - больной человек, который выделяет возбудитель в
течение 25-45 дней болезни. Наиболее опасны больные стертыми и субклиническими формами
и неопознанные бактерионосители.
Механизм
передачи
воздушно-капельный.
Резистентность Попадая в окружающую среду, бордетеллы быстро погибают от воздействия
прямых солнечных лучей и высушивания. Кипячения вызывает их гибель в первые секунды.
Низкие температуры они также переносят плохо. Дезинфицирующие растворы достаточно
быстро
инактивируют
их.
Заболевания у человека. Инкубационный период длится 5-9 дней. Течение болезни делят на
три периода: катаральный (2 недели), спазматический или судорожный (4-6 недель) и
завершения
(2-3
недели).
Иммунитет. После перенесения болезни возникает стойкий и длительный иммунитет.
Профилактика и лечение применяют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную
(АКДС) вакцину. Первая прививка делается в возрасте 3 месяцев, ревакцинацию - через 1,5-2
года.
Лечение проводят протикоклюшним иммуноглобулином и антибиотиками, из которых
наиболее эффективны левомицитин, эритромицин, ампициллин и тетрациклин.
Туберкулез - инфекционное заболевание, вызванное микобактериями туберкулеза и
характеризующееся развитием гранулем в пораженных тканях, полиморфизмом клинических
признаков - интоксикационным и / или локальными синдромами. В зависимости от
локализации поражений выделяют туберкулез легких, кожи, лимфатических узлов, мозговых
оболочек, костей и суставов, органов мочеполовой системы и брюшной полости.
Туберкулин Р. Кох в 1890. достал из туберкулезных микобактерий туберкулин. Есть несколько
препаратов туберкулина. Старый туберкулин Коха - АТК (Alttuberculin Koch) это фильтрат 5-6
недельной культуры микобактерий в глицериновом бульоне, сгущенном до 1/10
первоначального объема. Новый туберкулин Коха - высушенные микобактерии туберкулеза,
растертые в 50% глицерине до образования гомогенной массы. Туберкулин с микобактерий
бычьего вида содержит протеины, жирные кислоты, липиды, нейтральные жиры,
кристаллический алкоголь. Кроме того, есть препараты туберкулина, свободного от балластных
веществ, - PPD (Purified Protein Derivative) и PT (Purificatum Tuberculinum). ППД выпускают в
двух формах: сухой очищенный туберкулин по 50000 ТО в ампуле и ППД в стандартном
разведении в ампулах по 3 мл. В 0,1 мл раствора содержится одна доза (2 ТО).
БЦЖ, полученная А. Кальмет и Герена из ослабленного многолетним пересевом штамма M.
bovis.
Применяется
для
активной
иммунизации
против
туберкулеза.
Проба Манту. Туберкулиновой пробы Манту является специфическим диагностическим
тестом. Его используют для определения инфицированности населения туберкулезом,
массового обследования на туберкулез детей и подростков, отбора лиц, которым нужно
проводить ревакцинацию, проверить ее эффективность, а также с целью диагностики
туберкулеза и определения активности процесса. Для постановки пробы используют
туберкулин.
Возбудитель туберкулеза
Micibacterium tuberculosis
Micobacterium bovis
Морфология Форма Гр + палочки
По Цилю-Нильсену - рубиново-красные (кислото-, щелоче-, спиртоустойчивые) на голубом
фоне
Спора Капсула Подвижность КУЛЬТИВИРОВАНИЕ Питательные среды Картофельно-глицериновое среду
Среды Петрова, Петраньяни, Левенштейна-Йенсена, Школьникова, Сотона
Условия Растут медленно - 30 суток
Аэробные
Культуральные свойства Жидкая среда - образуют толстую морщинистую пленку
На плотной среде - R-формы колоний
РЕЗИСТЕНТНОСТЬ Устойчивые во внешней среде, в молочных продуктах.
Погибают при автоклавировании и под действием УФ-лучей.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Открытая форма туберкулеза:
Микроскопический (окраска по Цилю-Нильсену, метод флотации для большей вероятности
обнаружения)
Бактериологический
Биологический (заражение морских свинок при туберкулезе мочеполовой системы)
Закрытая форма туберкулеза:
Аллергические пробы с туберкулином (Коха, Кальметта, Пирке, Манту)
Серологический (РСК)
Метод окраски по Цилю-Нильсену.
1. На фиксированный мазок над пламенем горелки накладывают фильтровальную бумажку,
наливают на него фуксин Циля и красят трижды подогревая к появлению паров (но не доводя до
кипения) после чего препарат с красителем оставляют на 1-2 минуты для охлаждения, сливают
краску, снимают бумажку. Промывают водой.
2. Препарат обесцвечивают 5% серной или соляной кислотой до появления желтоватого оттенка (1030 сек) и несколько раз промывают водой.
3. Дополнительно красят мазок метиленовой синькой Леффлера, промывают водой, высушивают и
исследуют под микроскопом.
Микроскопическая картина: на общем синем (голубом) фоне кислотоустойчивые бактерии выглядят
рубиново-красными.
Структура микробиологической диагностики коклюша:
- Материал для исследования: слизь из носоглотки и гортани, яки получают метод: «кашлевых
пластинок», мокроту, кровь.
- Бактериоскопическое исследование: приготовление мазков - препаратов, окраска по методу Грама.
- Бактериологическое исследование: посев материала на одну из элективных питательных сред (КУА,
Борде-Жангу, кровяной МПА) - изучение подозрительных колоний; мазок, окраска по Грамму;
пересев на скошенный агар; посев на углеводный ряд Гисса, среду с тирозином, среду с мочевиной;
одновременно проводят РА на стекле со специфической сывороткой.
- Серологическое исследование:
-РПГА, РСК, РА с сывороткой больного,
Структура лабораторной диагностики дифтерии
- Материал для исследования: выделение слизистой оболочки зева, носа, конъюнктивы глаза,
наружных половых органов;
- Бактериоскопическое исследование - приготовление мазков, окраска по Леффлеру, Нейссеру.
- Бактериологическое исследование: посев материала на одну из элективных сред (среды Ру, среда
Леффлера, среда Клауберга)
- Через 8-12 часов инкубации готовят мазки, при отрицательном результате микроскопическое
исследование повторяют через 18-24 часа;
- Через 24-48 часов изучают колонии, выросшие и подозрительные пересевают на сывороточные
среды;
- Чистые культуры засевают на «пестрый ряд» Гиса, среду с цистеином и мочевиной;
- Биологический метод исследования.
-внутрикожное или подкожное введение материала морским свинкам.
- Серологическое исследование. - РА или РНГА
- Одновременно проводят реакцию РА на стекле со специфической противодифтерийной
сывороткой;
Методы микробиологической диагностики туберкулеза.
Бактериоскопический
Бактериологический
Биологический
Серологический
Аллергические пробы
а) Материал
мокроты,
экссудат
↓
Методы обогащения
(флотации, гомогенизации
↓
микроскопия (окраска по Цилю-Нильсену)
б) Люминесцентная
микроскопия (покраска аурамин-родамином)
а) Предпосевная
обработка материала
↓
посев на
картофельно-глицерин среды; среды Левенштейна-Йенсена
б) Метод микрокультур
Посев на цитратной-кровь, на 3-7дней.
↓
Микроскопия
(окраска по
Цилю-Нильсену) После предыдущей
обработки Н2SО4
и отмывания физ. раствором
заражают морскую свинку
↓
Макро- и микроскопия органов животного. Материал:
сыворотка больного
а) РСК
б) Реакция
непрямой гемагглютинации(РНГА)
а) Реакция Моро;
б) Реакция Пирке;
в) РеакцияМанту.
Перечень профилактических и лечебных средств.
АД-м-анатоксин (токсин дифтерийный очищенный, адсорбированный с уменьшенным содержанием
антигена, жидкий)
АДС-анатоксин (токсин дифтерийно-столбнячный очищенный, адсорбированный жидкий)
АДС-м анатоксин (токсин дифтерийно-столбнячный очищенный, адсорбированный с уменьшенным
содержанием антигенов, жидкий)
АКДС-адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина.
Тетракок (комбинированная вакцина для профилактики дифтерии коклюша, столбняка и
полиомиелита).
Сыворотка противодифтерийная, лошадиная, очищенная концентрированная, жидкая.
6. Практические работы, которые выполняются на занятии.
I этап. Промикроскопировать демонстрационные препараты из коринебактерий, бордетелл,
микобактерий окрашенных по методу Грама, Нейссера, Леффлера, Циля-Нильсена.
II этап. Ознакомиться с питательными средами, которые используют для культивирования
коринебактерий, микобактерий, бордетелл.
III этап. Ознакомиться с методом изучения токсигенности коринебактерий.
IV этап. Изучить биопрепараты, используемые для профилактики и специфического лечения
дифтерии, коклюша, туберкулеза.
V этап. Зарисовать возбудителей и записать методы диагностики, определения токсигенности,
микробиологическую диагностику дифтерии, коклюша, туберкулеза.
7. Рекомендованная литература.
Седьмой. Основная
В.П. Широбоков и пел. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, Новая Книга,
Винница, 2011. С. 441-452.
К.Д. Пяткина, Ю.С. Кривошиин. - Микробиология. - М., 1992 (рус.), С. 240-243, 286-292
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - М., 1980 (рус.), С. 301-305, 335-341
А.И. Коротяев, С.А. Бабич. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СанктПетербург. - 2002 (рус.), С. 406-412
И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.Е. Шевелева, - Практическая микробиология. - Харьков, 1999.
(рус.), С. 274-279
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям Под ред.И.Л.Дикого - Харьков, 2004
(рус.), С. 433-440
О.И.Климнюк, И.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоков. Практическая микробиология. Тернополь, 2004 (рус.), С. 257-264
Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рус.) С.171-175
М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед. микробиологии М., 1973 (рус.)
с.262-264, 276-283
Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1986. (рус.) С.154160
7б. Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред.
проф. К. Палий. - М., 2004. с. 64
8. Материалы для самоконтроля:
Тесты:
1. В мазках из материала, взятого от больного с подозрением на дифтерию обнаружены желтые
палочки с синими зернами на концах. Какой способ окрашивания использован в данном случае?
A Нейссера
B Леффлера
C Циля- Нильсена
D Козловского
E Романовского
2. У больного ребенка с подозрением на дифтерию было взято на исследование содержание
пораженной слизистой оболочки зева. Приготовленный и окрашенный мазок. При микроскопии
обнаружены желтые палочки с темно-синими утолщениями на концах. Структурный элемент
микробной клетки определяется в выявленных микроорганизмов?
A Зерна волютина
B Плазмиды
C Капсула
D Споры
E Жгутики
3. В мазке из налета на миндалинах больного с подозрением на дифтерию выявлено палочки синего
цвета с утолщениями на полюсах. Какой метод окраски мазков были использованы?
A Леффлера.
B Бурри.
C Гинса.
D Грама.
E Нейссера.
4. В связи со случаем дифтерии возникла необходимость провести профилактические прививки в
студенческой группе. Препарат следует использовать для создания искусственного активного
иммунитета?
A дифтерийный анатоксин
B антидифтерийную сыворотку
C Специфический иммуноглобулин
D Вакцина АКДС
E Вакцина с убитых бактерий
5. В закрытом коллективе возникла необходимость проверить состояние иммунитета против
дифтерии, чтобы обосновать необходимость вакцинации. Какие исследования следует провести с
этой целью?
A Установить титр антитоксина в РНГА
B Проверить членов коллектива на носительство палочки дифтерии
C Установить уровень антител против дифтерийной палочки
D Проверить медицинскую документацию по вакцинации
E Проверить состояние иммунитета от дифтерийной палочки
6. От больного ребенка с подозрением на дифтерию выделено Коринебактерии дифтерии. Какое
исследование необходимо провести, чтобы убедиться, что данный микроб является возбудителем
дифтерии у этого ребенка?
A Проверить токсигенность микроба
B Провести окрашивание по методу Бурри - Гинса
C Выполнить посев на кровяной агар
D Заразить кролика
E Провести реакцию агглютинации
7. При обследовании больного ребенка, в которой отмечалось повышение температуры до 38 ° С,
боль при глотании, отек лица, адинамия, серо-белые пленки на миндалинах, врач заподозрил
дифтерию. Какими микробиологическими методами можно подтвердить диагноз?
A Микроскопическим + бактериологическим.
B Микроскопическим + аллергологическим
C Микроскопическим + серологическим
D Аллергологическим + серологическим
E Биологическим + серологическим
8. У больного в течении 10 дней имеет место повышенная температура, приступы
характерного кашля. Врач назначил посев слизи из носоглотки на среду КУА. Какой
микроорганизмы предполагается обнаружить?
A Палочку коклюша
B палочки iнфлюенцы
C Лiстерiю
D стафилококки
E Клебсiелу
10. Для профилактики детских инфекций у детей используют ассоциированную вакцину
АКДС. Укажите тип протикоклюшной вакцины, которая входит в ее состав.
A Убитая
B атенуированная
C Химическая
D анатоксин
E Генно-инженерная
11. В детскую поликлинику обратилась мать с больным ребенком, у которого наблюдался
«Лающий» кашель. Инфекционист поставил диагноз "коклюш". Какой материал для
исследования надо взять у ребенка для подтверждения диагноза?
A Слизь с задней стенки горла
B Кровь
C Мочу
D Фекалии
E Рвотные массы
12. При изучении мокроты, взятой от больного с подозрением на туберкулез, изготовили мазокпрепарат и покрасили его по Цилю-Нильсену. Какая микроскопическая картина подтверждает
диагноз?
A Тонкие бактерии красного цвета
B Микроорганизмы с ядром рубиново-красного цвета и голубой цитоплазмой
C Красного цвета микроорганизмы с биполярным закраской
D Палочковидные микроорганизмы в виде цепочек, фиолетового цвета
E Коковидные микроорганизмы красного цвета
13. Больному туберкулезом, в анамнезе которого была открыта легочная форма заболевания,
проведения микроскопическое исследование мокроты с целью выявления возбудителя. Какой метод
окраски целесообразно использовать при этом?
A Метод Циля-Нильсена
B Метод Грама
C Метод Бурри-Гинса
D Метод Романовского-Гимза
E Метод Нейссера
13. После введения вакцины БЦЖ младенцам иммунитет к туберкулезу длится до тех пор, пока в
организме есть живые бактерии вакцинного штамма. Как наиболее правильно назвать такой вид
иммунитета?
A Нестерильный
B Гуморальный
C Типоспецифический
D Врожденный
E Перекрестный
Автор: доцент Кордон Ю.В
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов фармацевтического факультета
(специальность - фармация)
при подготовке к практическому занятию № 21
1. Тема занятия: Патогенные спирохеты. Трепонемы. Боррелии и лептоспир. Морфология и
биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
2. Цель занятия:
2а. Общая: Освоить методы лабораторной диагностики сифилиса, лептоспироза и борелиозив.
2б. Конкретная: изучить морфологию и биологические свойства трепонем, лептоспир и
боррелий, изучить методы микробиологической диагностики сифилиса, лептоспироза и
возвратного тифа, разобрать вопросы специфической и неспецифической профилактики
заболеваний.
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
3.1. Знать таксономическое положение и особенности ультраструктуры спирохет.
3.2. Знать методы окраски спирохет.
3.3. Знать принципы постановки и учета результатов РСК, РНГА.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
1. Морфология, культуральные свойства и антигенная структура трепонем.
2. Особенности патогенеза сифилиса.
3. Микробиологическая диагностика сифилиса.
4. Морфология и биологические свойства лептоспир.
5. Патогенез лептоспироза
6. Лабораторная диагностика и профилактика лептоспироза.
7. Морфология и биологические свойства боррелий.
8. Патогенез эпидемического возвратного тифа.
9. Лабораторная диагностика и профилактика эпидемического возвратного тифа.
10. Возбудитель эндемического возвратного тифа, патогенез, лабораторная диагностика,
профилактика заболевания.
5. Содержание темы.
Термин
Определение
Сифилис - это венерическое инфекционное заболевание, при котором
Сифилис
поражается кожа, слизистые оболочки, внутренние органы и
центральная нервная система.
Возбудитель сифилиса - это Treponema pallidum, которая относится к
роду Treponema Старое название возбудителя - бледная спирохета
обусловлена тем, что микроорганизм плохо окрашивается
Возбудитель
красителями вследствие низкого содержания нуклеопротеидов.
сифилиса
Treponema pallidum - тонкие клетки спиралевидной формы с 12-14
завитками.
Возвратные тифы - острые, кровяные трансмиссивные инфекции,
которые
вызывают
боррелии
и
характеризуются
общей
Возвратные тифы интоксикацией, повторными приступами лихорадок - лихорадок,
которые чередуются с без температурными периодами
Боррелии возвратного тифа - это возбудители борелиозов.
Эпидемический (вшивый) возвратный тиф вызывает Borrelia
Возбудители
recurrentis, а эндемический - В.persica, B.duttoni, B.caucasica.
возвратного тифа Возбудители возвратного тифа отличаются от трепонем наличием
больших пологих неравномерных завитков, количество которых
составляет от 3 до 10.
Лептоспироз - это острое инфекционное зоонозное заболевание,
характеризующееся лептоспиремией, лихорадкой, интоксикацией,
Лептоспироз
поражением почек, капилляров печени, мышц, сердечно-сосудистой и
центральной нервной систем.
Возбудители
лептоспироза
Лептоспиры - возбудители острых инфекционных заболеваний
лептоспирозов, которые поражают человека, грызунов, крупный
рогатый скот, овец, свиней, собак и других животных. Вызывается
лептоспироз возбудителем Leptospira interrogans (греч. Leptos длинный, тонкий). Возбудителями лептоспироза часто является
L.pomona, L.monijakov, L.grippotyphosa, L.tarassovi, L.canicola,
L.icterohaemorragiae. Лептоспиры - длинные, тонкие спиралевидные
микроорганизмы с 12-18 мелкими завитками. Концы их загнутые в
виде крючков.
Treponema pallidum - тонкие микроорганизмы спиралевидной формы с 12-14 равномерными
завитками. Характерны все виды движения, движения плавные, медленные ("висящая капля").
Под влиянием неблагоприятных факторов (антибиотикотерапия) в организме человека могут
образовывать цисты, зернистые формы и L-формы
Особенности культивирования. НЕ культивируются или плохо культивируются на
искусственных питательных средах. Растет очень медленно. При культивировании теряют
типичную АГ структуру и патогенность. Культивируют in vivo при экспериментальном
заражении кроликов в яичко (тканевые трепонемы - штамм Nicols). Используют для постановки
РИБТ и создание диагностикумов.
Факторы патогенности: Эндотоксин. Перекрестно-реагирующие антигены.
Источник инфекции - больной человек. Особенно заразны больные первичный и вторичный
сифилис (первые 3-5 лет после инфицирования)
Механизмы передачи: Контактный - половой контакт или реже непосредственный контакт
(сифилис акушеров). Парентерально. Вертикальный (инфицирование плода через плаценту врожденный сифилис)
Инкубационный период при половом контакте 2-10 недель (в среднем 3-4 недели)
Патогенез сифилиса
Первичный сифилис
Триада: шанкр, лимфангит, лимфаденит - первичный сифилис (продолжительность 1,5-2 мес)
Вторичный сифилис - генерализация процесса. Клинически - кожная сыпь, поражение
внутренних органов и периферической нервной системы. Рецидивирующее течение.
Продолжительность до 2-4 лет.
Третичный сифилис (поздний) наступает после длительного бессимптомного течения.
Появление очагов специфического продуктивного воспаления во внутренних органах
(сифилитические гуммы). Поражается аорта, печень, ЦНС, кости, хрящевые ткани
Врожденный сифилис - нет проявлений первичного сифилиса; поражаются внутренние органы
и кости
Иммунитет. Нестерильный. Напряженный. Преимущественно клеточный.
Возможны случаи суперинфекции (при повторном заражении фоне заболевания не образуется
шанкр, но более ярко проявляются клинические симптомы той стадии, на которой произошло
заражение)
Лабораторная диагностика зависит от стадии заболевания:
При раннем серонегативном сифилисе (первые 2 недели заболевания) - микроскопический
метод
Все остальные стадии - серологический метод
Микроскопический метод
Материал для исследования: соскоб с шанкра, пунктат лимфатических узлов, жидкость из
элементов сыпи.
- Нативная микроскопия
- РИФ
- Окраска по Романовскому-Гимзе, контрастности по Бури, серебрения Морозовым
Серологический метод
Осадочные неспецифические серореакции (микропреципитации) для выявления реагинов с
помощью кардиолипинового Ач - реакции Кана, Закса-Витебского, цитохолева,
Реакция Вассермана (RW) - специфическая - РСК с тремя антигенами: кардиолипиновым Аг, Аг
культуральных трепонем и Аг тканевых трепонем
РНИФ, РИБТ - высокоспецифичны (положительные даже в первые недели заболевания) используют для диагностики врожденного сифилиса, поздних стадий и скрытых форм
Лептоспироз вызывается Leptospira interrogans. Морфология. Лептоспиры - микроорганизмы с
12-18 мелкими первичными завитками, которые плотно прилегают друг к другу. Напоминают
пружину с загнутыми и утолщенными концами. На концах лептоспир являются вторичные
завитки, придающие им 5- или С-образной формы. Они подвижны. Лептоспиры
грамотрицательные, по Романовскому - Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет.
Культивирование. Лептоспиры - хемоорганотрофы, облигатные аэробы, растут при температуре
28-29 ° С в жидких и полужидких питательных средах. Рост обнаруживают при просмотре
капли среды в темном поле: среда не мутнеет.
Антигенная структура. Патогенных лептоспир входят 19 серогруппы и более 200 сероваров.
Токсинообразование. Лептоспиры не продуцирующие экзотоксин. Токсичные вещества есть
только у живых лептоспир, которые паразитируют в организме человека и животных.
Резистентность. В воде лептоспир выживают 5-10 суток, в почве -2 суток. В пищевых
продуктах (молоко, сливочное масло, хлеб и др.) Жизнеспособность лептоспир не превышает
нескольких часов. Лептоспиры долго хранятся при низкой температуре, очень чувствительны к
высыханию, действию кислот, при температуре 56ºС погибают через 30 мин.
Патогенность для животных. В очагах лептоспироза наибольшее эпидемиологическое значение
имеют хомяки, мыши, крысы и др., которые выделяют лептоспир во внешнюю среду с мочой и
испражнениями.
Патогенез. Лептоспирозом человек заражается через воду, инфицированную больными
животными или носителями лептоспир (купание, питье воды, выполнения различных работ в
водоемах), при уходе за больным скотом. Инкубационный период - 5-6 суток. Желтуха бывает
примерно у 10% больных. Большое значение в патогенезе лептоспироза имеет состояние
бактериемии, которая развивается с первых дней заболевания. Под воздействием токсических
веществ, образующихся в результате распада лептоспир, развиваются паренхиматозное и
жировое перерождение печени, возникают очаговые кровоизлияния в селезенке и явления
геморрагического нефрита.
Иммунитет. После перенесенного заболевания возникает стойкий специфический иммунитет,
механизм которого связан с наличием антител.
Лабораторная диагностика включает прямую бактериоскопию в темном поле раздавленной
капли цитратной крови, спинномозговой жидкости, мочи, взвеси органов трупов и выделения
гемо- и уринокультуры. Следующим этапом исследования является проведение реакции
микроагглютинации с сывороткой крови больного или выздоравливающего и живой культурой
эталонных штаммов лептоспир различных серогрупп. Применяют РСК и биологическую пробу
- заражение молодой морских свинок кровью больного (3-5 мл внутрибрюшинно). Через 2-3
суток после заражения исследуют экссудат брюшной полости морской свинки на наличие
лептоспир (микроскопия в темном поле и посева на питательные среды). Биологическая проба
является самым ранним методом лабораторной диагностики лептоспироза.
Лечение.
Больным
лептоспирозом
назначают
пенициллин,
тетрациклин,
противолептоспирозный глобулин и дезинтоксикационные средства (глюкоза, препараты
крови).
Профилактика. Следует не допускать контактов людей с зараженной водой (запрет купания,
использование для питья и бытовых нужд некипяченой воды и др.). Для ликвидации природных
очагов лептоспироза применяют осушения болот и другие мелиоративные мероприятия. В
сельских очагах лептоспироза осуществляющих оздоровление животных. Среди населения
ведут санитарно-просветительную работу, упорядочивают места для забора воды, купание
людей и животных и тому подобное. Лептоспирозная вакцина - взвесью убитых нагреванием
лептоспир нескольких серологических групп.
Выделяют эпидемический возвратный тиф, передаваемой вшами, и эндемический, при котором
переносчиками являются клещи. Возбудители возвратного тифа - боррелии (Воrrelia)
отличаются от трепонем наличием крупных пологих неравномерных завитков, количество
которых колеблется от 6 до 10. Эпидемический возвратный тиф вызывается В. recurrentis.
Возбудителем эндемического (клещевого) возвратного тифа могут быть различные виды
патогенных боррелий - В. duttoni, В. persica, В. саucasica и др.
Морфология. Боррелии эпидемического возвратного тифа - тонкие спиралевидные
микроорганизмы длиной 8-18 мкм и шириной 0,3-0,6 мкм, имеют 3-8 завитков; конце боррелий
заостренные. Боррелии эпидемического возвратного тифа подвижные, грамотрицательные,
окрашиваются по методу Романовского - Гимза в сине-фиолетовый цвет.
Культивирования. Возбудитель выращивают в анаэробных условиях на питательных средах с
рН 7,2-7,4, содержащих сыворотку крови, кусочки тканей или органов, и в куриных эмбрионах.
Резистентность. При комнатной температуре в жидких средах (в запаянных стеклянных
трубках) возбудитель возвратного тифа хранится 14 суток, при замораживании - 8, при
температуре 0 ° С - 3 суток. От действия температуры 45-48 ° С возбудитель погибает в течение
30 мин.
Патогенность для животных. В естественных условиях животные на возвратный тиф не болеют.
Патогенез. Источник инфекции - больной эпидемическим возвратным тифом человек,
переносчик платяная вошь. При кровососании боррелии попадают в кишечник вши,
размножаются они в гемолимфе. Через 5-12 суток вошь при укусе может инфицировать
человека. В организм человека боррелии проникают в результате втирания гемолимфы
раздавленных вшей. Эпидемический возвратный тиф чаще всего возникает в зимнее время года.
Возбудитель возвратного тифа размножается в тканях лимфоидно-макрофагальной системы. К
концу инкубационного периода он проникает в большом количестве в кровь, где под влиянием
ее бактерицидных веществ частично погибает. Эндотоксина, образующегося обусловливает
поражение центральной нервной системы, развитие токсикоза, лихорадки, функциональных
нарушений, дистрофии органов и тканей. Эндотоксина поражает кровеносную систему,
способствует развитию инфарктов и некрозов в селезенке и печени. Размножение новой
разновидности боррелий приводит очередные приступы заболевания, количество которых
колеблется от 3 до 5.
Иммунитет нестойкий и непродолжителен.
Лабораторная диагностика. Для выявления возбудителя заболевания исследуют толстую каплю
и мазки крови, взятые во время приступа (окраска по методу Романовского - Гимза, фуксином,
по Бурри). Капли крови изучают в темном поле для определения подвижности боррелий. В
период апирексии боррелий определяют методом обогащения крови больного. В период
апирексии можно ставить серологическую пробу. Для дифференциации эпидемического и
эндемического возвратного тифа используют биологический метод: морской свинке вводят 3-5
мл крови больного; при наличии эпидемического возвратного тифа животное не заболеет.
Лечение заключается в назначении антибиотиков - пенициллина, левомицетина, эритромицина,
полусинтетических препаратов тетрациклина.
Профилактика. Повышение материального и культурного уровня жизни населения,
своевременная диагностика заболевания, госпитализация больных, медицинское наблюдение за
очагами.
Возбудитель эндемического возвратного тифа. Морфология. Боррелии эндемического
возвратного тифа похожи на возбудителей эпидемического возвратного тифа. Культивирование
проводят в среде, состоит из нагретой до 56-58 ° С сыворотки крови кролика и одинакового
объема изотонического раствора натрия хлорида с кусочками свернувшегося белка куриного
яйца.
Антигенная структура. Известно несколько вариантов боррелий, патогенных для человека и
животных. Дифференциация их по серологическими свойствами и морфологическими
признаками невозможна; более результативный в этом отношении биологический метод.
Резистентность. В возбудителей эндемического возвратного тифа резистентность почти такая
же, как и в боррелий эпидемического возвратного.
Патогенность для животных. В природных условиях, возбудители эндемического возвратного
тифа паразитируют в организме диких грызунов и насекомоядных, от которых они попадают в
организм клещей.
Патогенез заболевания у человека. По патогенезу и клинической картиной заболевания похоже
на эпидемический возвратный тиф. Случается заболеваемость эндемический возвратный тиф в
Средней Азии, Закавказье, на Северном Кавказе, в Казахстане, Херсонской области. Чаще всего
возникает в теплое время года, преимущественно весной. Клещи паразитируют на грызунах,
которые становятся источником инфекции. Проникновение боррелий в яйцеводы и яйца клещей
предопределяет возможность трансовариальной передачи возбудителя. Зараженность клеща
сохраняется в течение всей его жизни (более 10 лет). Человек заражается при укусе клеща. На
месте укуса образуется папула (первичный аффект). Заболевание характеризуется приступами
лихорадки продолжительностью 1-2 суток; количество приступов может быть 5-7-9 и более,
продолжительность ремиссий - от нескольких часов до 6-8 суток.
Иммунитет. У населения эндемичных районов иммунитет возникает в раннем детстве, о чем
свидетельствует обнаружение антител в сыворотке крови местных жителей. Болеют главным
образом приезжие.
Лабораторная диагностика. Делают бактериоскопию толстой капли и мазков крови для
выявления боррелий.
Лечение. Больным назначают ампициллин, левомицетин, полусинтетические препараты
тетдациклину.
Профилактика заключается в осуществлении мер по уничтожению клещей и грызунов, ранней
диагностике заболевания, госпитализации больных и соблюдении личной профилактики
(защита людей от нападения клещей).
Таблица. Дифференциация эпидемического и эндемического возвратного тифа
Признаки
Эпидемический возвратный Эндемический (клещевой)
тиф
возвратный тиф
Возбудитель
B.recurrentis
B.persica, B.caucasica
Переносчик
Pediculus vestimenti і рідше Alectorobius Alectorobius
P.capitis
papillipes verrucosus
Патогенность для морской
Заболевание наступает через
свинки
Не болеет
5-7 суток ( введение 0,5 см 3
( біологічний метод)
крови подкожно или 1-2
капли в конъюнктиву глаза).
Наличие
возбудителя
в Определяется
большое Единичные спирохеты, но
“толстой” капли крови во количество спирохет
их выявление возможно как
время
лихорадочного
во время приступа, так и в
периода
период между ними.
При осмотре в темном поле Наличие одного контрура в Наличие двух контуров в
зрения микроскопа
спирохете
спирохете
Центральная, Середняя Азия
Распространение
Практически отсутствует
и
Середиземное
море
(B.persica); Кавказ, Украина
(B.caucasica).
Граф логической структуры микробиологической диагностики сифилиса.
1. Микроскопия (нативный и фиксированный материал)
- Нативная микроскопия
- РИФ
- Окраска по Романовскому-Гимзе, контрастности по Бури, серебрения Морозовым
2. Серологическая диагностика
- Иммуноферментный анализ (ИФА)
- Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
- Реакция Вассермана
- Осадочные реакции (Кана и Закса-Витебского)
- Реакции иммобилизации бледной трепонемы (РИБТ)
- Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Граф логической структуры микробиологической диагностики лептоспироза.
Материал для исследования: спинномозговая жидкость. Кровь. Моча. Вода.
Первый этап - микроскопическое исследование (нативный препарат для микроскопии в темном
поле)
Предварительный ответ.
- Посев материала на водно-сывороточную питательную среду.
- Заражение кроликов или морских свинок.
- Реакция агглютинации - лизиса с сывороткой крови.
- Второй этап. - Изготовление препаратов из посевов на питательной среде для микроскопии в
темном поле
- Реакция агглютинации - лизиса выделенной культуры с диагностическими сыворотками.
- Микроскопическое и бактериологическое исследование материала от зараженных
лабораторных животных.
- Заключительный ответ.
Граф логической структуры микробиологической диагностики возвратного тифа.
- Материал для исследования: кровь.
- 1 этап - мазок; окрашенный фуксином.
- Препарат "толстая капля" окрашен по Романовскому - Гимзе
- Биопроба - заражение морских свинок.
- 2 этап - мазок из крови морской свинки окрашенный фуксином
- Препарат "толстая капля" окрашен по Романовскому - Гимзе
- Заключительный ответ
6. Практические работы, которые выполняются на занятии
1. Изучить морфологию трепонем в демонстрационных препаратах окрашенных по
Романовскому-Гимза, Бурри и Морозову.
2. Учесть результаты реакции Вассермана с исследуемой сывороткой.
Для выполнения реакции Вассермана получают сыворотку крови, инактивируют на водяной
нагреватели при 56ºС 30 мин и разливают в 4 пробирки.
Используется в реакции Вассермана: 1) специфический антиген, который содержит антигены
возбудителя - разрушены ультразвуком трепонемы; 2) неспецифический антиген - липоидный
экстракт из бычьего сердца с лецитином и холестерином - кардиолипидний антиген; 3)
неспецифический антиген - спиртовой экстракт липоидов с мышц сердца быка с холестерином.
Схема выполнения основного опыта реакции Вассермана
Ингедиенты
Пробирка №1 Пробирка №2 Пробирка №3 Пробирка №4
Сыворотка
крови
больного,
Инактивированная и 0,5см3
0,5 см3
0,5 см3
0,5 см3
разведенная 1:5
Антиген
№1(специфический)
Антиген
№2(неспецифічний)
Антиген
№3(неспецифический)
Комплемент (робочая
доза)
0,5 см3
-
-
-
-
0,5 см3
-
-
-
-
0,5 см3
-
0,5 см3
0,5 см3
0,5 см3
0,5 см3
-
-
0,5 см3
Изотонический
раствор NaCl (натрия
хлорид)
1)
Термостат при температуре 370 С - 45 мин.
Гемолитическая
1,0 см3
1,0 см3
1,0 см3
1,0 см3
система
сенсибилизированная
2)
Термостат при температуре 370 С - 1 час.
Результат:
Пробирка №1
Пробирка №2
Пробирка №3
Пробирка №4
С сывороткой -Г
-Г
-Г
+Г
больного
сифилисом
С нормальной +Г
+Г
+Г
+Г
сывороткой
Примечание: Г гемолиза не существует; + Г гемолиз; + Положительный результат; Отрицательный результат. Учет результатов проводится после наступления гемолиза во всех
контролях.
У 50% больных реакция становится + после появления твердого шанкра. Во втором и третьем
периодах сифилиса 75-90% положительных реакций. После лечения реакция Вассермана
отрицательная.
3. Изучить морфологию лептоспир в демонстрационных препаратах, окрашенных серебрением
по Морозову.
В поле зрения видно: темно-коричневые нитевидные микроорганизмы в виде букв S или C, с
вторичными завитками на желтом фоне.
Нарисовать препарат.
На рисунке обозначить: лептоспир.
4. Изучить морфологию боррелий в препаратах «толстая капля» окрашенных по Романовскому
- Гимзе.
В поле зрения видно: боррелии - тонкие, длинные, извилистые нити с неравномерными
завитками и заостренными концами, окрашенные в сине-фиолетовый цвет, расположены
внеклеточно. Величина их в несколько раз превышает диаметр лейкоцитов.
Нарисовать: эритроциты, лейкоциты и боррелии.
На рисунке обозначить: боррелии.
5. Поставить реакцию коагглютинации на стекле с материалом от больного лептоспирозом и
антителами, которые адсорбированные на стафилококковые.
На предметное стекло пипеткой наносят каплю исследуемого материала и каплю Содиагностикума. Бактериологической петлей смешивают компоненты реакции. Через три
минуты учитывают результат. Положительный результат - просветления жидкости с
образованием белых хлопьев. Учет проводят на темном фоне.
6. Учесть результаты РСК с целью выявления специфических антител к лептоспир в сыворотке
больного.
Разведение сыворотки
1:50
1:100
1:200
1:400
1:800
1:1600
Начало заболевания
Через 7 дней
7. Ознакомиться с биопрепаратами, которые применяют для профилактики лептоспироза.
Убитая поливалентная вакцина, которую вводят двукратно с интервалом в 7 дней.
Ревакцинация проводится через год – однократно.
7. Рекомендованная литература.
7а. Основная
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. М. 1980 (рос) с.358-363
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Мед.микробиология, иммунология и вирусология. С-П.2002 (рос)
с.483-485.488-490.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, Практическая микробиология Харьков. 1999 (рос)
с.297-309
Микробиология.Руководство к лабораторним занятиям Под ред. И.Л.Дикого Харьков 2004
(рос) с.446-455
Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М.1984 (рос) с.224-229
М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед.микробиологии. М.1973 (рос)
с.249-298
Ю.С.Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии.М.1986 (рос) с.171177
7б. Додаткова
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням / Заг. ред. проф.
Г.К.Палія К., 2004.
Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену з природничо-наукових дисциплін
«Крок-1. Загальна лікарська підготовка» /Кол.авторів; За ред. В.Ф.Москаленка та співавт. –
К.:Медицина, 2004.
8. Материалы для самоконтроля:
1. Что можно сказать о специфической профилактике сифилиса?
А. Не разработана.
В. Живая вакцина.
С. Убитая вакцина.
Д. Химиопрофилактика.
Е. Иммунная сыворотка
2. В каком периоде заболевания человек болен сифилисом наиболее опасен для окружающих?
А. В первый (первичная сифилома).
В. В инкубационный.
С. Во второй (генерализованный).
Д. В третий (Гуммозный)
Е. В четвертый (нейросифилис)
3. Возвратный тиф характеризуется периодическими приступами и периодами ремиссии. Какой
материал надо брать от больного для диагностики во время ремиссии?
А. Мочу.
В. Кровь.
С. Сыворотку крови.
Д. Стул.
Е. Мазок из зева
4. Лептоспиры достаточно требовательны относительно культивирования. Они аэробные и
требуют специальных питательных сред. Какие вещества необходимы для их роста и
размножения?
А. Углеводы.
В. Спирты.
С. Сыворотка крови.
Д. Крохмал.
Е. Кровь.
5. Во время приступа возвратного тифа у больного повышается температура до 40° С. Чем
обусловлена такая реакция организма?
А. Действием экзотоксина.
В. Действием эндотоксина.
С. Действием антигенов.
Д. Продуктами разрушения клеток.
Е. воспалительной реакции.
Автор: ассистент Гончар О.О.
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов фармацевтического факультета
(специальность – фармация)
при подготовке к практическому занятию №22
1.Тема занятия: Грибы рода Candida, плесневые грибы, дерматомицеты. Морфология,
биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
2. Цель занятия:
2а. Общая: Усвоить морфологические особенности условно-патогенных грибов.
2б. Конкретная: Уметь промикроскопировать патологический материал и оценить результаты
серологических реакций с целью диагностики заболеваний вызванных кандидами, плесневыми
грибами и дерматомицетами.
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
1. Особенности токсономического положение грибов.
2. Особенности строения грибов.
3. Методы исследования морфологии грибов.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
1. Морфология, тинкториальные особенности грибов рода Candida
2. Микробиологическая диагностика кандидозов.
3. Профилактика и принципы лечения заболеваний, вызванных кандидами.
4. Биологические свойства возбудителей трихофитии
5. Биологические свойства возбудителей микроспории
6. Биологические свойства возбудителей епидермофитии.
7. Общая характеристика инфекционного процесса вызванного патогенными дерматомицетами.
8. Биологические свойства грибов рода Mucor.
9. Биологические свойства грибов рода Penicillum.
10. Биологические свойства грибов рода Aspergillus.
11. Методы микробиологической диагностики заболеваний, вызванных грибами.
5. Содержание темы
Кандидоз - оппортунистическое инфекционное заболевание кожи, слизистых оболочек и
внутренних органов. Встречается повсеместно, чаще всего, как осложнение после многих
инфекционных заболеваний, при иммунодефицитных состояниях.
Грибы рода Candida (кандида) вызывают поверхностный, инвазивный и другие формы
кандидоза (кандидомикоза). Насчитывается около 200 видов грибов рода Candida.
Ведущее значение в развитии кандидоза имеет С. albicans, затем следуют С. glabrata, С. tropicali
и С. parapsilosis.
Морфология и физиология кандид
Грибы рода Candida состоят из овальных почкующихся дрожжевых клеток (4-8 мкм) псевдогиф
и септированных гиф. Для Candida albicans характерно образование ростовой трубки из
бластоспоры (почки) при помещении их в сыворотку. Кроме этого Candida albicans образует
хламидоспоры - толстостенные двухконтурные крупные овальные споры. На простых
питательных средах при 25-27 °С они образуют дрожжевые и псевдогифальные клетки.
Колонии выпуклые, блестящие, сметанообразные, непрозрачные с различными опенками. В
тканях кандиды растут в виде дрожжей и псевдогиф.
Эпидемиология кандидоза
Кандиды являются частью нормальной микрофлоры млекопитающих и человека. Они обитают
на растениях, плодах, являясь частью нормальной микрофлоры, они могут вторгаться в ткань
(эндогенная инфекция) и вызывать кандидоз у людей с ослабленной иммунной зашитой. Реже
возбудитель передается детям при рождении, при кормлении грудью. При передаче половым
путем возможно развитие урогенитального кандидоза.
Патогенез
Развитию кандидоза способствуют неправильное назначение антибиотиков, обменные и
гормональные нарушения, иммунодефициты, повышенная влажность кожи, повреждения кожи
и слизистых оболочек. Чаще кандидоз вызывается Candida albicans, которая продуцирует
протеазы и молекулы для адгезии к экстрацеллюлярным белкам и другие факторы
вирулентности. Кандиды могут вызывать висцеральный кандидоз различных органов,
системный кандидоз, поверхностный кандидоз слизистых оболочек, кожи и ногтей,
хронический (гранулематозный) кандидоз, аллергию на антигены кандид.
При кандидозе рта на слизистых оболочках развивается острая форма болезни (так называемая
молочница) с появлением белого творожистого налета, возможно развитие атрофия или
гипертрофии, гиперкератоза сосочков языка. При кандидозе влагалища (вульвовагинит)
появляются белые творожистые выделения, отек и эритема слизистых оболочек. Поражение
кожи чаше развивается у новорожденных; на туловище и ягодицах наблюдаются мелкие узелки,
папулы и пустулы. Возможны кандидная аллергия ЖКТ, аллергическое поражение органов
зрения с развитием зуда век, блефароконьюнктивита.
Иммунитет
Преобладает клеточный иммунитет. В защите организма от кандид участвуют фагоцитымононуклеары, нейтрофилы, захватывающие элементы грибов. Развивается ГЗТ, формируются
гранулемы с эпитедиоидными и гигантскими клетками.
Лечение кандидоза
Лечение кандидоза основано на применении таких лекарств, как: нистатин, леворин (для
лечения местных поверхностных микозов, например орофарингеального), клотримазол,
кетоконазол, каспофунгин, итраконазол, флуконазол (не действует на С. krusei многие штаммы
С. glabrata).
Граф логической структуры микробиологической диагностики кандидоза.
Материал для исследования: кожные и ногтевие чешуйки, отделяемое пораженных участков
слизистых оболочек, гной, испражнения, спинномозговая жидкость, биоптаты тканей.

Микроскопическое исследование. Готовят мазки, окрашивают по Грамму.


Микологическое исследование: высевают исследуемый материал на питательные среды:
среда Сабуро,
сусло-агар,
кандида-агар
Серологическое исследование: РА, РП, РНГА, РСК, ЦПР.
Окончательный ответ
Возбудители эпидермомикозов являются 40 близкородственных видов из трех родов:
Epidermophyton (2 вида), Microsporum (16 видов), Trichophyton (24 вида). Дерматомицеты не
относятся к диморфным грибам. Их дифференциация основывается преимущественно на
морфологических и культуральных признаках.
Морфологические и культуральные свойства
Дерматомицеты образуют септированный мицелий со спиралями, ракетовидными вздутиями,
артроспорами, хламидоспорами, макро- и микроконидиями. Они подвергаются плеоморфным
изменениям в лабораторных условиях, когда теряют способность к пигментообразованию и
формированию конидий. Виды различают по пигментации и форме колоний. Дерматомицеты
хорошо растут на глюкозном агаре Сабуро.
Для трихофитонов характерны зернистые или мучнистые колонии с обильными
микроконидиями, располагающимися гроздьями на терминальных гифах.
Микроспорумы образуют толстостенные или тонкостенные макроконидии, состоящие из 8-15
(М. canis) или 4-6 (М. gypseum) клеток. Их колонии окрашены в желто-оранжевый цвет. При
ультрафиолетовом
облучении
пораженных
микроспорумами
волос
наблюдается
флюоресценция светло-зеленым цветом.
Эпидермофитонам присущи 1-5-клеточные булавовидные конидии.
Антигены
Все дерматомицеты - слабые антигены. Гликопротеины клеточных стенок этих грибов
являются аллергенами, причем углеводная часть аллергена обусловливает развитие ГНТ, а
белковая часть - ГЗТ.
Патогенез и иммунитет
Возбудители эпидермомикозов поражают эпидермис, волосы, ногти вследствие прямого
контакта здорового человека с зараженными чешуйками или волосами больного. Гифы грибов
затем прорастают в роговой слой, вызывая разнообразные по клиническому проявлению и
локализации заболевания. Отдельные случаи заболеваний связаны с контактом людей
(особенно детей) с больными собаками и кошками. В редких случаях могут развиваться
генерализованные формы эпидермомикозов с поражением обширных областей кожи туловища
и головы, с вовлечением лимфатических узлов.
При эпидермомикозах наблюдается развитие гиперчувствительности немедленного (ГНТ) и
замедленного типов (ГЗТ). Экология и эпидемиология. Большинство дерматомицетов широко
распространено в природе. Одни виды обнаруживаются в почве и никогда не вызывают
заболеваний у человека, другие патогенны для людей. Более десятка видов антропофильных
дерматомицетов (Т. rubrum, Т. tonsurans и др.) передаются от человека к человеку; другие зоофильные дерматомицеты (М. canis, Т. verrucocum), патогенные для домашних и диких
животных, передаются человеку; третьи - геофильные дерматомицеты (М. gypseum, M. fulvum),
обитают в почве, но также способны поражать человека.
Дерматомицеты достаточно устойчивы к воздействию факторов окружающей среды.
Некоторые виды встречаются главным образом в определенных географических регионах.
Возбудители трихофитии, или стригущего лишая, относятся к роду Trichophyton. У человека
заболевание вызывает главным образом Trichophyton violaceum (фиолетовый трихофитон),
образующий морщинистые, кожистые колонии от бледно-сиреневого до темно-фиолетового
цвета. Он поражает кожу, волосы, ногти (поверхностная трихофития). Внутри пораженного
волоса обнаруживаются цепочки спор размером 3—4 мкм. Иногда они располагаются
беспорядочно («мешок с орехами»). В коже и ногтях обнаруживаются септированные и
несептированные нити мицелия со спорами. Фиолетовый трихофитон вызывает заболевание
только у человека.
Возбудители эпидермофитии относятся к роду Epidermophyton и поражают роговой слой
эпидермиса, реже ногти и никогда не поражают волосы. В чешуйках кожи и ногтей
обнаруживаются нити мицелия, вилообразно ветвящиеся. Иногда они распадаются на
продолговатые клетки. Среди нитей — цепочки спор. На питательных средах образуют
пушистые белые колонии с гладкой куполообразной поверхностью. Различают эпидермофитию
паховую и эпидермофитию стоп.
Возбудители микроспории относятся к роду Microsporum и обычно поражают кожу, волосы,
очень редко ногти. У человека заболевание вызывают М. аиdounii и М. ferrugineum, у животных
— М. lanosum, который может поражать и человека. В пораженном волосе обнаруживают
ветвящиеся нити мицелия с огромным количеством мелких спор, особенно в периферической
части. Вокруг волоса образуется как бы чехол из мелких, мозаично расположенных спор. В
чешуйках кожи обнаруживают извитые нити мицелия, распадающиеся на споры.
Лабораторная диагностика
Патологический материал (чешуйки кожи, ногтей, волосы, извлеченные из пораженных мест)
микроскопируют, предварительно размягчив их в 10-20% растворе КОН. Microsporum образует
тесные пласты спор в мозаичном порядке вокруг волос, тогда как Trichophyton - параллельные
ряды спор, снаружи (эктотрикс) и внутри (эндотрикс) пораженных волос.
К дерматомицетам группы эктотрикс относят Microsporum audouinii, M.canis, M.gypseum и др.;
к группе эндотрикс - Т. gourvilii, Т. tonsurans и др. Одни из них не образуют конидий в волосе,
другие редко проникают в волосы, третьи волосы не инвазируют. Волосы, инфицированные
Microsporum,
флюоресцируют
при
ультрафиолетовом
облучении.
Окончательная
идентификация дерматомицетов проводится на основании изучения культур, выращенных в
течение 1-3 недель на среде Сабуро при 20°С, по морфологическим особенностям мицелия и
спор. Для идентификации дерматомицетов с освобождением их от контаминирующих грибов и
бактерий используют специальную питательную среду - DTM, которая нашла широкое
применение в клинических лабораториях.
Специфическая профилактика отсутствует
Из химиотерапевтических средств рекомендуют гризеофульвин, некоторые производные азолов
(амиказол, клотримазол и др.), ламизил, нитрофунгин, октацил, микосептин, аморолфин
(производное морфолина) и др.
Граф логической структуры микробиологической диагностики заболеваний вызванных
патогенными грибами.
Материал для исследования: волосы, ногти, чешуйки кожи пораженные дерматофитами,
крышечки пузырьков, промывные воды бронхов, сыворотка крови больного.

Микроскопическое исследование. Для микроскопического исследования
патологический материал измельчают, вносят в каплю 10% раствора КОН или NаОН на
предметном стекле, подогревают до появления паров и оставляют на 15 минут, а соскобы из
ногтей на 1-2 часа. При микроскопии «раздавленной капли» обнаруживают короткий (2-4 мкм)
переплетенный разветвленный мицелий и артроспоры прямоугольной формы, которые
расположены в виде цепочек.

Микологическое исследование: дает возможность выделить чистую культуру и
определить род и вид возбудителей на плотных средах Сабуро, сусло-агар, Чапека, с
тетрациклином, твином-80 и липидными компонентами. После посева добавляют несколько
капель оливкового масла.
 Серологическое исследование: РПГА, РСК, ИФА, ЛПР, РИФ.
 Аллергический метод: пробы с аллергенами выделенными из грибов
 Биологическая проба: (морские свинки, мыши) заражают кожу, когти, волосяной покров.
Окончательный ответ
Плесневые грибы, или плесени, как их принято называть, распространены повсеместно. Они
относятся к различным классам грибов. Все они являются гетеротрофами и, развиваясь на
пищевых продуктах (фруктах, овощах и других материалах растительного или животного
происхождения), вызывают их порчу. На поврежденной поверхности появляется пушистый
налет, первоначально белого цвета. Это – мицелий гриба. Вскоре налет окрашивается в
различные цвета от светлого до темного оттенков. Эта окраска образуется массой спор и
помогает распознавать плесени. Из плесеней чаще всего встречаются Мuсоr (мукор), Penicillium
(пенициллиум) и Aspergillus (аспергиллус).
Оппортунистические микозы - группа микозов, которые вызываются условнопатогенными
грибами из родов Aspergillus, Candida, Mucor, Penicillium и др. у иммунодефицитных лиц.
Грибы рода Aspergillus вызывают тяжёлое заболевание – аспергиллёз. При этом локализация
патологического процесса может быть весьма разнообразна. В первую очередь аспергилл
поражает бронхолёгочную систему, это самый распространённый вариант микоза лёгких.
Аспергиллы продуцируют ферменты (протеолитический, сахаролитический, липолитический и
др.) и эндотоксины. Выделение различных типов токсинов (альфа-токсина, глиотоксина и др.) в
окружающую среду и в организм человека при прогрессировании заболевания также является
характерной чертой Aspergillus fumigatus.
Соединения, синтезируемые аспергиллом (в том числе сериновые и аспарагиновые протеазы,
металлопротеиназы, дипептидилпептидазы и фосфолипазы и др.), являются сильными
аллергенами. В результате аллергической реакции на них или при развитии инфекционного
процесса могут поражаться и другие органы – придаточные пазухи носа, гортань, трахея и
бронхи – с возможным распространением инфекции в кожу, в желудочно-кишечный тракт,
головной мозг, сердце. Известно, что аспергиллы являются причиной аллергического
бронхолёгочного аспергиллёза, хронического некротического лёгочного аспергиллёза, могут
вызывать бронхиальную астму, экзогенный аллергический альвеолит.
Заразиться можно, употребив пищу, поражённую аспергиллами, при вдыхании грибковых спор,
а также при их попадании на поверхность раны. Способствуют заражению болезни,
ослабляющие иммунитет, а также определённая сфера деятельности человека, например работа
с голубями, которые являются переносчиком заболевания.
При инфицировании в организме запускаются защитные механизмы – иммунный ответ, – и в
результате происходит выработка специфических антител, чьё действие направлено на
обезвреживание и гибель возбудителя. В силу особенностей Aspergillus fumigatus устранить
патоген за счёт собственных ресурсов организму не удаётся, поэтому чаще всего требуется
серьёзное и длительное лечение.
Антитела IgG могут быть обнаружены уже в раннюю фазу заражения. Они присутствуют у
человека значительно дольше, чем антитела других классов (IgА и IgЕ), и могут выявляться в
сыворотке через 12 месяцев и более после первого контакта с антигенами возбудителя. Для
острого периода характерны нарастающие или высокие титры антител IgG. При хронических
формах заболевания IgG могут обнаруживаться в течение более длительного периода.
Подтверждением диагноза служит выявление самого возбудителя из различных биоматериалов
(из мокроты, материала, взятого из бронхов, биоптатов поражённых органов). По клиническим
и рентгенологическим данным аспергиллёз дифференцируют с другими микозами
(нокардиозом, гистоплазмозом, кандидозом), а также с туберкулёзом лёгких, абсцессами
лёгких, новообразованиями, хроническим бронхитом.
Известен редко встречающийся пенициллиоз (вызывающийся Penicillium marneffei). Это
эндемическое заболевание, распространенное в Юго-Восточной Азии и на Дальнем Востоке,
вызывает кожные и подкожные поражения у людей, особенно на поздних стадиях ВИЧинфекции,
а
также
у
домашних
животных,
бамбуковых
крыс,
мышей.
Другие виды Penicillium, относящиеся к плесневым микромицетам, могут быть причиной
оппортунистической инфекции у лиц с нарушениями иммунитета. Грибы рода Penicillium
обильно присутствуют во внешней среде, внутренних помещениях и являются одним из
наиболее частых лабораторных контаминантов, поэтому диагноз пенициллиоза у больных
может быть подтвержден только путем исследования ткани на наличие грибов.
Грибы этого рода часто ассоциируются с аллергическими заболеваниями и могут вызывать
клиническую симптоматику у сенсибилизированных лиц.
Этиология
Penicillium marneffei – диморфный гриб, дающий мицелиальные и дрожжевые колонии при
различных условиях развития. При микроскопии обнаруживаются округлые и овальные
(эллиптические)
дрожжевые
клетки
около
3
мкм
в
диаметре.
Помимо P. marneffei, патология человека может быть обусловлена P. crustareum, P. glaucum, P.
bertai, P. bicolor, P. spinulosum, P. citrinum, P. notatum, P. citrinum и другими видами.
Патогенез
Заражение происходит при ингалировании спор. Поражение ткани характеризуется профузным
ростом,
сосудистой
инвазией,
тромбозом
и
инфарктами.
Факторы риска: ВИЧ-инфицированность, иммуносупрессия в связи с цитостатической и
кортикостероидной терапией по поводу коллагенозов, гематологических нарушений, при
трансплантации почек, при миелогрануломатозе, остром лейкозе, эндокардит на
протезированном
клапане,
посттравматический
эндофтальмит
и
др.
Встречаемость сенсибилизации к Penicillium у больных бронхиальной астмой приближается к
25%.
Клиническая картина
Нахождение в организме животного P. marneffei может не сопровождаться большими
поражениями, однако могут наблюдаться поражение печени и генерализованные поражения
ретикуло-эндотелиальной системы. У иммунокомпетентных лиц (чаще фермеров)
эндемических районов возможны случаи кожных и подкожных поражений с вовлечением
региональных лимфатических узлов, вплоть до развития диссеминированного пенициллоза. Для
лимфаденита характерны множественность поражения с изъязвлением, нагноением и
формированием свищей; для кожных поражений также характерны множественность,
эритематозность,
иногда
–
глубокие
подкожные
абсцессы.
Тяжелые оппортунистические микозы с развитием генерализованных форм более характерны
для иммунокомпроментированных больных. Клиническими проявлениями пенициллоза
являются лихорадка, потеря веса, анемия, фунгемия, что, при отсутствии терапии, может
приводить к смерти. В процесс наиболее часто вовлекаются кожа (в 80% поражения кожи
напоминают контагиозный моллюск), лимфатические узлы, легкие, печень, селезенка. При
гепатоспленомегалии желтуха не характерна. Возможно также поражение костей и костного
мозга, кишечника, перикарда, почек, мозга, микотический кератит. Остеомиелитические
поражения (единичные, множественные, включающие различные кости) определяются в виде
холодных абсцессов. При вовлечении в процесс кишечника возможен перфоративный
перитонит.
При поражении легких может возникать единичная или множественная инфильтрация.
Диагностика
Для
постановки
достоверного
диагноза
микотической
пневмонии
необходимо
микроскопическое
исследование
гистопатологического
материала
с
выявлением
дрожжеподобных клеток с продольной перегородкой (Penicillium marneffei) в тканях, и
плесневых форм – в культуре. При росте на агаре под колониями определяется красный
пигмент. Но, даже при повторном получении Penicillium из мокроты больных с легочной
патологией, диагноз представляет сомнение.
• Микроскопия окрашенных по Райту, GSM или PAS-методом (клетки Penicillium marneffei не
красят гематоксилином-эозином) мазков гноя, мокроты, бронхоальвеолярного смыва, мочи,
костного мозга, материала из очагов поражения кожи, биоптатов лимфатических узлов.
• Посев на среде Сабуро с антибактериальными антибиотиками гноя, содержимого легочных
абсцессов, мокроты, бронхоальвеолярного смыва, крови, костного мозга, биопсийного
материала кожи, костей или печени при 25о С и 37о С с демонстрацией теплового диморфизма
для
выявления
Penicillium
marneffei.
• Определение антител к Penicillium marneffei сыворотке крови ELISA-тестом.
• Гистологическое исследование биопсийного материала из очагов поражения.
Гриб мукор относится к роду низших плесневых грибов, класс Зигомицеты. Это аэробный гриб,
то есть для жизни и размножения ему необходим кислород. Его мицелий не разделен на клетки,
но имеет много ядер. Этот класс включает в себя более шестидесяти видов. Все разновидности
грибов этого вида, обитают в верхних слоях почвы, продуктах питания, конском навозе,
органических остатках. Плесневый гриб мукор является паразитом. Тело его напоминает
тонкие бесцветные волоски или паутинки – это грибница. Несмотря на то что тело грибницы
сильно разросшееся, по сути, это одна клетка, которая содержит много ядер. На тонких
отростках грибницы (гифах) образуются головки черного цвета (спорангии). В них находятся
споры.Мукороз, фикомикоз — хронический глубокий микоз, обусловленный различными видами
грибов из семейства Mucoraceae.
Этиология. Возбудителями микоза являются различные виды грибов Absidia, Mucor и Rhizopus.
Патогенез. В организм человека споры грибов семейства мукоровых попадают
преимущественно аэрогенным путем из воздуха, с пылью, с гниющих частей растений.
Развитию микоза способствуют тяжелые, истощающие заболевания, сахарный диабет, болезни
крови, злокачественные опухоли, терапия антибиотиками, кортикостероидами.
Клиника. Пульмональный мукоромикоз типичной симптоматики не имеет. Возможны очаговые
пневмонии, инфаркт легких с выделением геморрагической мокроты, повышением
температуры тела и лейкоцитозом. Рентгенологически выявляются пятнистые тени.
Диагностика и дифференциальная диагностика. Мукоромикоз дифференцируют от других
микозов — на основании повторного выделения культуры гриба из мокроты, промывных вод
бронхов; серологическая диагностика микоза не разработана.
Лечение. Проводится антифунгальная терапия ингаляциями амфотерицина В 10-14 дней,
амфоглюкамином или микогептином в течение 10 дней. При тяжелых формах течения вводят
амфотерицин В внутривенно капельно.
Профилактика. Борьба с запыленностью помещения.
7. Рекомендованная литература.
7а. Основная
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 354-357.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 447-480, 509.
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология под ред. А. А. Воробьева. - Г.:
Медицинское информативное агентство, 2004 - С. 469-470, 634-636.
7б. Дополнительная
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред
Г.К.Палия, В.И.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.
Сборник задач для подготовки к тестовому экзамену «Крок-1. Общая врачебная подготовка»
/Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленко и соавт. - К.:Медицина, 2004.
Сборник тестов кожных и венерологических болезней для студентов стоматологического
факультета. Винница, 2005 - 108 с.
Методические рекомендации кожных и венерических болезней для самостоятельной
работы студентов стоматологического факультета. Винница, 2005 - 88 с.
6. Практические работы, которые выполняются на занятии
1. Приготовление мазков из исследуемого материала больного на кандидоз. Окрасить простым
методом, промикроскопировать, зарисовать.
Микроскопически: овальные почкующиеся дрожжевые клеки (4-8 мкм), псевдомицелий (клетки
соединены перетяжками), мицелий с перегородками и почкующиеся бластоспоры. Candida
albicans образует хламидоспоры - толстостенные двухконтурные крупные овальные споры.
2. Выучить культуральные свойства кандид на среде Сабуро.
Колонии выпуклые, блестящие, сметанообразные, непрозрачные с различными оттенками.
3. Рассмотреть демонстрационные препараты дерматомицетов, микроскопическую картину
зарисовать.
Trichophyton. Внутри пораженного волоса обнаруживаются цепочки спор размером 3—4 мкм.
Иногда они располагаются беспорядочно («мешок с орехами»).
Microsporum. В пораженном волосе обнаруживают ветвящиеся нити мицелия с огромным
количеством мелких спор, особенно в периферической части. Вокруг волоса образуется как бы
чехол из мелких, мозаично расположенных спор.
Achorion. Элементы гриба располагаются внутри волоса свободно, в виде септированных нитей,
мицелия со спорами и полиморфных спор. На волосе и внутри него могут быть пузырьки
воздуха.
4. Рассмотреть демонстрационные препараты плесневых грибов, микроскопическую картину
зарисовать.
В Aspergillus - конидиеносець одноклеточный, с раздутой верхушкой, на поверхности которой
расположены радиально вытянутые клетки - стеригма с цепочками конидиоспор.
В Penicillium - конидиеносец многоклеточный, ветвистый, что имеет вид кисточек.
В Мuсоr - на тонких отростках грибницы (гифах) образуются головки черного цвета
(спорангии). В них находятся споры.
5. Обратить внимание на препараты и сроки лечения заболеваний вызванных патогенными
грибами.
8. Материалы для самоконтроля:
1. В клинику поступил ребенок, на слизистой оболочке щек, неба и языка которого выявлен
точечный налет белого и желтоватого цвета характерный для кандидоза. Какой материал
необходимо взять для исследования?
А. Пленочный налет из разных участков ротовой полости.
B. Волосы и ногти
C. Кровь
D. Слизь из носовой части глотки
E. Мочу
2. При изучении культуральных свойств возбудителя выявлен рост на плотной питательной
среде в виде S-форм колоний, матовых, с характерным запахом дрожжей. Какой возбудитель
имеет характерные свойства роста?
A. - Стафилококк
B. - Стрептококк
C. - Кишечная палочка
D. - Кандиды
3. Какие питательные среды используют для изучения культуральных свойств кандид?
A. - МПА
B. - *Сабуро
C. - КА
D. - ДДС
4. К врачу обратился пациент, у которого на коже волосистой части головы появились
пораженные участки с обломанными волосками возле поверхности кожи. В волосяных
фолликулах заметны остатки волос в виде черных пятнышек. При микроскопии пораженных
волос, как в середине так и снаружи, выявленные клетки гриба, расположены цепочками и
полностью заполняют корешки волос. Какой по Вашему мнению возбудитель вызвал
заболевание?
А. - Epydermophyton floccosum
В. - Microsporum canis
С. - Trichophyton schonleini
D. - Trichophyton violaceum
5. В отделение интенсивной терапии поступил ребенок с тяжелой формой пневмонии.
Антибактериальная терапия результатов не дала. При посеве мокроты на среду Сабуро при 20º
С образовались белые пушистые колонии. При микроскопии нативного препарата обнаружен
септированный мицелий. Органы спороношения состоят из терминального пузырька (головки)
с вырастающими из него равномерно расположенными бутылочковидными структурами –
стеригмами. Такую морфологию имеют грибы рода
A. Aspergillus
B. Fusarium
C. Pеnicillum
D. Mucor
E. Rhizopus
Автор: доцент, к.мед.н. Сорокоумова Л.К.
Методическая разработка
для подготовки и работы на лабораторном занятии № 23
для студентов фармацевтического факультета (специальность фармация)
1.Тема занятия: Общая характеристика клинической микробиологии. Микробиоценозы
здоровых и патологически измененных биотопов тела человека. Дисбактериоз. Коррекция
дисбактериоза эубиотиками.
2. Цель занятия:
2а. Цель общая: Определить роль нормальной микрофлоры в функционировании
организма человека. Познакомиться с понятием дисбактериоза и принципами его коррекции.
2б. Цель конкретная:
1. Уметь дать оценку микробиоценоза в каждой экосистеме тела человека.
2. Оценить роль нормальной микрофлоры в защите организма человека от патогенных
микроорганизмов.
3. Познакомиться с методами диагностики дисбактериоза.
4. Познакомиться с группами препаратов, которые используются для коррекции
дисбактериоза.
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
1. Знания главных морфологических групп бактерий.
2. Знания факторов патогенности микроорганизмов.
3. Владение бактериологическим методом исследования.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
1. Главные представители микрофлоры:
а) ротовой полости;
б) кожи;
в) дыхательных путей;
г) мочеполовой системы;
д) желудочно-кишечного тракта
2. Роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности организма.
3. Возрастные изменения микрофлоры полости рта.
4. Дисбиоз, факторы, которые его обуславливают (возникновение, диагностика).
5. Пробиотики. Использование.
5. Содержание темы:
Схема лабораторной диагностики дисбиоза на примере исследования кишечного
содержимого.
Материал
Кишечное содержимое
↓
Микроскопическое исследование
Посев 0,1мл в разведении
1 : 100; 1 : 1000; 1 : 10 000 на
Питательную среду (Эндо,
Плоскирева, Сабуро, тиогликолевую,
кровянный МПА, и др.)
↓
Подсчет колличества колоний на
питательной среде и
определение в 1мл (1г) материала
↓
Идентификация микроорганизмов по
морфологическим, культуральным
ферментативным признакам,
антигенному строению
↓
Определение характера дисбиоза
6. Практическая работа:
1. Провели исследование состава микрофлоры зубного налета. Приготовили микропрепарат и
окрасили по методу Грама. Необходимо обратить внимание на таксономическое разнообразие
представленной нормофлоры.
2. В готовых микропрепаратах, приготовленных с кишечного содержимого новорожденных,
взрослых определили наличие грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибов рода
Сandida.
3. Познакомились с основными группами современных медицинских препаратов, которые
используются для коррекции дисбиоза. Сейчас предлагается широкий выбор препаратов для
поддержки та восстановления состава и функциональной активности физиологических
микробных систем человека. Рациональное их использование является перспективным и
направлено на улучшение здоровья населения.
7. Рекомендованная литература.
7а. Основная:
И. Л. Дикий Микробиология / Дикий И. Л. и соавт. // К. 2007. – С. 236– 250.
В.П.Широбоков Мікробіологія, вірусологія, імунологія, В. 2010. – С. 807-837.
Практична мікробіологія.⁄ С.І.Климнюк та співавт. ⁄⁄ Тернопіль. Укрмедкнига, 2004.
– С.
807-834.
7б. Дополнительная:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, К., 1992. – С. 84-89.
О. К. Поздеев Медицинская микробиология //М. 2006. – С. 121-126, 551-561.
Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Словник/ За ред Г.К.Палія,
В.І.Палія. – Київ: Здоров'я, 2004.
Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену з природничо-наукових дисциплін
«Крок-1. Загальна лікарська підготовка» /Кол.авторів; За ред. В.Ф.Москаленка та співавт. –
К.:Медицина, 2004.
8. Материалы для самоконтроля:
Приложение 1:
1.Представители нормальной микрофлоры ротовой полости:
А. S. mitior
В. S. Saligarsius
С. S. Sangues
D. S. Mutans
E. все ответы правильные
2. Больному провели гастроскопию и в посеве желудочного сока
получили несколько
микроорганизмов. Какие из микроорганизмов не являются представителями
нормальной микрофлоры желудка?
а.Candida
в. кампилобактерии
г. стафилококки
д. фузобактерии
е. хеликобактер
3. С помощью длинного кишечного зонда провели исследование пристеночной флоры верхних
отделов тонкого кишечника. Изолировано несколько микроорганизмов. Какие из них не
являются представителями нормальной микрофлоры тонкого кишечника?
а. ентерококк
б. лактобактерии
в. бактероиды
г. Сandida
д. гарднерелла
4. Микроорганизмы толстого кишечника имеют антагонистические свойства против
патогенных или условно-патогенных микроорганизмов. Назовите их.
а. E. сoli
б. цитробактер
в. ентеробактер
г. протей
д. клебсиелла
5. Микрофлора толстого кишечника играет важную роль в жизнедеятельности человека,
потому что:
а. является антагонистом гнилостной микрофлоры
б. продуцирует молочную и уксусную кислоты
в. продуцирует коллицины
г. принимает участие в метаболизме белков
д. все вместе
Приложение 2:
1. Врач получил результаты бактериологического исследования, в котором найдены
клостридии, кишечная палочка, ентерококки. С какой части кишечника был взят материал для
исследования?
A. желудок
B. тонкий кишечник
C. толстый кишечник
D. двенадцатипалая кишка
E. еюнум
3. У больного, которому был проведен курс антибиотикотерапии, в связи с обострением
хронической пневмонии, появились диспептические явления, метеоризм, понос.
Бактериологическое исследование испражнений показало отсутствие E. coli, Уменьшение
количества лакто- и бифидобактерий. Какие препараты стоит назначить больному?
A Эубиотики и витамины
B Антибиотики и эубиотики
C Сульфаниламиды и эубиотики
D Антибиотики и витамины
E Сульфаниламиды и витамины
4. Больной, которая длительное время принимала противомикробные препараты, провели
бактериологическое исследование содержимого влагалища и определение рН. Было
диагностировано снижение количества лактобактерий и щелочная среда. Что необходимо
назначить больной для восстановления нормальной микрофлоры влагалища?
А. Молочно-кислые бактерии
В. Суппозитории с антибиотиками
С. Раствор перманганата калия
Д. Сульфаниламидные препараты
Е. Суппозитории с антисептиком
4. Больному на онкопатологию удалено практически весь толстый кишечник. Какие препараты
необходимо назначить больному для замещения функции микрофлоры толстого кишечника?
А. Витамины
В. Антистафилококковая плазма
С. Поливалентный бактериофаг
Д. Антибиотики
Е. Сульфаниламиды
5. У пациента после длительного применения антибиотиков развился дисбактериоз кишечника.
Какие препараты стоит назначить для восстановления нормальной микрофлоры?
А. Сульфаниламиды
В. Эубиотики
С. Интерферон
Д. Противогрибковые препараты
Е. Цефалоспорины
6. При дисбактериозах, которые сопровождаются развитием гнилосной флоры и повышением
рН фекалий, необходимо назначить биологические препараты, которые закисляют среду и
выявляют антагонистическое действие. Какие микроорганизмы для этого необходимы?
А. Азотобактерии
В. Клебсиеллы
С. Бифидумбактерии
Д. Энтеробактерии
Е. Сарцины
7. У ребенка 10 лет в продолжении 3-х месяцев наблюдается дисфункция кишечника.
Исследование фекалий на дисбактериоз дало такие результаты: бифидобактерии- 5х108,
лактобацилы-109; общее количество кишечной палочки –107; кишечная палочка с сниженными
ферментативными свойствами -8%; условно-патогенные энтеробактери -5x10; стафилококки104; гемолитический стафилококк не определен; грибы рода кандида-102. На какую степень
дисбактериоза указывают эти данные?
А. Норма
В. І степень
С. II степень
Д. ІII степень
Е. Полученных данных не достаточно для оценки дисбактериоза
8. Ребенку 5 мес., находится на исскуственном вскармливании, выздоравливает после
колиэнтерита. Перед выпиской из стационара было проведено исследование колличественного
и качественного состава микрофлоры кишечника. Получены такие результаты: бифидобактерии
-5х 107; лактобациллы–108; общее количество кишечной палочки-109; кишечная палочка с
сниженными ферментативными свойствами -10%; гемолизирующая кишечная палочка -5%;
условно-патогенные энтеробактерии –105; стафилококк –104; грибы рода кандида -103. Какие
методы наиболее необходимы для коррекции микробиоценоза кишечника у ребенка?
А. Антибиотики, избирательно угнетающие рост стафилококков и дрожжеподобных грибов
В. Включение молочнокислых продуктов в рацион питания
С. Бифидумбактерин
Д. Колибактерин
Е. Лактобактерин
9. У беременной женщины диагностировано бактериальный дисбактериоз влагалища. Какой
препарат стоит выбрать в данном случае?
А. Бактериофаг
В. Антибиотик
С. Интерферон
Д. Эубиотик
Е. Поливитамины
10. У больного 56 лет после длительного лечения антибиотиками развился дисбактериоз:
потеря массы тела, диарея, в фекалиях значительное количество гемолитических кишечных
палочек, протея, стафлококков. Какие с перечисленных мероприятий позволят ликвидировать
дисбаланс аутохтонной микрофлоры :
А. Заменить антибиотики и провести фаготерапию
В. Отменить антибиотики и назначить сульфаниламидные препараты
С. Отменить антибиотики и назначить эубиотики. Давать энтеросорбенты и иммуномодуляторы
Е. Давать нитрофурановые препараты и иммуностимуляторы.
Автор: доц., к.м.н. Жоряк Е. И.
Методические рекомендации для самостоятельной работы
студентов фармацевтического факультета
при подготовке к практическому занятию № 24
1. Тема занятия: Основы санитарной микробиологии. Санитарно-микробиологическое
исследование воды, почвы, воздуха. Фитопатогенные микроорганизмы. Микробная
контаминация лекарственного сырья, готовых лекарственных препаратов.
2. Цель занятия:
2а. Общая: уметь проводить бактериологическое и вирусологическое исследования
почвы, воды, воздуха; выучить биологические методы определения микробного загрязнения
готовых лекарственных форм; значение фитопатогенных микроорганизмов при производстве и
хранении лекарственного растительного сырья.
2б. Конкретная: знать санитарно-показательные микроорганизмы для воды, почвы и
воздуха; уметь определить общее микробное число, коли-титр и коли-индекс воды, общее
микробное число для почвы, ознакомиться с методами определения общего микробного числа
для воздуха, знать о следствиях микробной деградации лекарственных препаратов, уметь
определять стерильность готовых лекарственных препаратов, уметь определять микробное
загрязнение готовых лекарственных форм, знать требования к микробной чистоте готовых
лекарственных препаратов в зависимости от назначения и способа введения (категории).
3. Базовые знания, навыки, необходимые для изучения темы.
1. Возбудители инфекционных заболеваний, передающихся через воздух.
2. Возбудители инфекционных заболеваний, передающихся через воду.
3. Возбудители инфекционных заболеваний, передающихся через почву.
4. Бактериологический метод исследования.
5. Культуральные свойства кишечной палочки.
4. Основные теоретические вопросы, подлежащие изучению.
1. Определение, цель и задачи санитарной микробиологии. Санитарно-показательные
микроорганизмы.
2. Определение микробного числа воды, коли-титра, коли-индекса.
3. Постоянная микрофлора и патогенные микробы лечебного учреждения. Санитарнопоказательные микробы (патогенные стафилококки, стрептококки)
4. Патогенные микробы, которые находятся в почве. Определение микробного числа почвы.
5. Определение санитарного состояния почвы (коли-титр, коли-индекс, перфрингенс-титр)
6. Фитопатогенные микроорганизмы. Классификация заболеваний растений, вызванных
фитопатогенными микроорганизмами.
7.Значение фитопатогенов в производстве и хранении лекарственных растительных препаратов.
Понятие о микробной деградации лекарственных препаратов.
8.Меры по предупреждению заболеваний лекарственных растений при культивировании и
хранении лекарственного растительного сырья.
9.Микробное загрязнение готовых лекарственных форм. Источники загрязнения, признаки
микробной контаминации.
10.Требования к микробиологической чистоте готовых лекарственных форм в зависимости от
назначения и формы введения (категории).
11.Методы определения микробного загрязнения лекарственных препаратов (метод прямого
высевания, метод мембранной фильтрации).
12. Меры по предупреждению микробного загрязнения лекарственных препаратов. Санитарноэпидемический режим в аптеках.
5. Содержание темы.
Для определения санитарно-гигиенического состояния разных объектов окружающей
среды, воды, воздуха, почвы, продуктов питания и др. проводятся бактериологические
исследования, целью которых есть опредиление эпидемической безопасности.
Микробное загрязнение определяется микробным числом. Микробное число - это
количество микроорганизмов, которое находится в единице объема (1 мл воды, 1 г почвы, 1 м3
воздуха). Определение санитарно-показательных микроорганизмов проводится по двум
показателям: титру и индексу. Титром называется та минимальная масса или объем, в котором
есть данные бактерии; индексом - количество санитарно-показательных бактерий, которые
находятся в 1 л жидкости, 1 г плотного вещества,1 м3 воздуха.
Микрофлору окружающей среды изучает санитарная микробиология, задача которой это
разработка методов микробиологических и вирусологических исследований почвы, воды,
воздуха, предметов быта, пищевых продуктов и др.
Микрофлора почвы
В почве необходимы для развития бактерий питательные вещества и влага, в результате
чего их количество в 1 г почвы достигает огромных количеств: В 1 г почвы содержится 1-10
млрд бактерий.
Обсемененность почвы микроорганизмами зависит от степени загрязнения его
фекалиями и мочой, а также от характера обработки и удобрения.
Патогенные, которые не образуют спор, бактерии вследствие недостатка нужных
питательных веществ, а также в результате пагубного воздействия света, высыхания, бактерийантагонистов и фагов сохраняются в почве от нескольких суток до нескольких месяцев.
Конечно, почва есть неблагоприятной средой для большинства патогенных видов
бактерий, вирусов, грибов, простейших. Однако, как фактор передачи ряда возбудителей
инфекционных заболеваний она играет важную роль. В почве долго остаются
жизнеспособными споры бацилл сибирской язвы, клостридии столбняка, анаэробной инфекции,
ботулизма и многих других микроорганизмов. При благоприятных условиях споры
осуществляют полный цикл развития: летом они прорастают в вегетативные формы, а затем
снова образуют споры.
В почве живут различные грызуны, на которых паразитируют переносчики возбудителей
чумы, туляремии, геморрагической лихорадки, энцефалита, зоонозного кожного лейшманиоза и
т.д. В почве проходят определенную стадию цисты простейших (амеб, балантидия и др.).
Особенно велика роль почвы в распространении гельминтозов (аскаридоза, трихоцефалеза,
анкилостомидозу и др.). В почве живут грибы, вызывающие алиментарно-токсическую
алейкию, эрготизм, аспергиллез, пеницилиоз, гистоплазмоз, хромомикоз и др.
Выживание в почве энтеровирусов колеблется в широких пределах (15-90 суток), оно
зависит от вида грунта, его влажности, температуры. Энтеровирусы долго сохраняются на
овощах, выращенных на участках, орошаемых сточными водами. Сырые овощи с полей
орошения могут быть фактором заражения в результате попадания энтеровирусов на их
поверхность.
Важным показателем санитарного состояния является общее количество имеющихся в
нем сапрофитов, термофильных микроорганизмов, энтеробактерий (Е. соli, протей), анаэробов
(С. реfringens и др).
Грунт считают чистым, если его коли-титр * составляет 1,0 и выше, титр С. реfringens 0,01 и выше, а количество термофильных бактерий в 1 г достигает 100-1000. По
эпидемиологическим показаниям почву исследуют на наличие патогенных микроорганизмов
(сальмонеллы, шигеллы, энтеровирусы), спор клостридий столбняка, ботулизма, сибирской
язвы, гистоплазм и др.
В связи с определенной эпидемиологической ролью почвы как фактора распространения
некоторых инфекционных заболеваний животных и человека санитарно-противоэпидемическая
практика охватывает осуществление комплекса мероприятий, направленных на защиту почвы
от загрязнения и инфицирования его патогенными видами микроорганизмов.
МИКРОФЛОРА ВОДЫ
Микрофлора воды рек зависит от степени их биологического загрязнения и качества
очистки сточных вод, которые опускают в русла рек.
Степень обсемененности воды организмами принято выражать сапробность, под которой
понимают совокупность живых существ, обитающих в водах с большим скоплением животных
или растительных остатков. Различают четыре зоны сапробности.
П о л и с а п р о б н а я з о н а - очень загрязненная вода, бедная кислородом и богата
органическими соединениями. Количество бактерий в 1 мл достигает 1 млн и более,
преобладают Е. соli и анаэробные бактерии, которые вызывают процессы гниения и брожения.
Вмесос ап робн ой
з о н е (зона умеренного загрязнения) минерализуются
органические вещества с интенсивным окислением и выраженной нитрификации. Количество
бактерий в 1 мл составляет сотни тысяч.
О л и г о с а п р о б н а я з о н а характерная для чистой воды. Количество бактерий в
ней незначительно, в 1 мл насчитывается несколько десятков или сотен; Е. со1i в этой зоне нет.
К а т а р о б н а я з о н а - зона очень чистой воды (особенно в осенне-зимний период),
она расположена вдали от населенных пунктов и берегов.
В зависимости от интенсивности загрязнения водоемов в них могут быть и некоторое
время сохраняться жизнеспособными патогенные бактерии. Так, например, в водопроводной,
морской, речной и колодезной воде сальмонеллы могут быть от 2 суток до 3 месяцев, шигеллы 5-9 суток, лептоспиры - 7-150 суток. Холерный вибрион выживает в воде рек, морей течение
нескольких месяцев, возбудитель туляремии - от нескольких суток до 3 месяцев.
Водопроводную воду считают пригодной для употребления, если общее количество
бактерий в 1 мл составляет 100, условным - при 100-150, загрязненной - при 500 и более. В воде
колодцев и открытых водоемов количество бактерий в 1 мл не должно превышать 1000. Кроме
того, качество воды определяют по наличию в ней Е. со1i.
Показатель биологического загрязнения воды оценивают по коли-индексу и коли-титру.
Водопроводная вода должна иметь коли-индекс в пределах 2-3, а когда-титр - 300. Для воды
шахтных колодцев допустимы коли-индекс не более 10, а когда-титр не менее 100.
Поскольку Е. со1i постоянно живет в кишечнике человека и теплокровных животных и
имеет высокую устойчивость против температурных колебаний и других факторов
окружающей среды, количество ее вместе с коли-титром и коли-индексом является показателем
степени биологического загрязнения воды, сточных вод, почвы и других объектов.
Вода мощный фактор передачи возбудителей многих инфекционных заболеваний:
брюшного тифа, сальмонеллезного гастроэнтерита, холеры. дизентерии, лептоспироза,
туляремии, кампилобактериоза, амебиаза, энтеровирусных инфекций (полиомиелит, гепатит А
и др.).
Энтеровирусы зачастую выделяются из воды летом и осенью, когда количество
вирусоносительства увеличивается в 2-3 раза по сравнению с осенне-зимним периодом.
Пассивное и длительное выделение энтеровирусов из кишок больных и вирусоносителей
обусловливает значительное обсеменение хозяйственно-бытовых сточных вод (30-85%).
Энтеровирусы определали в водоемах, особенно при коли-титре 0,1 и ниже. Их находили и в
воде, которая прошла соответствующую очистку и обеззараживание.
Во время посещения бассейнов с нехлорированной водой возможно заражение людей
лептоспирозом, конъюнктивитом, вызываемых хламидиями, стафилодермии, эпидермии.
Обеззараживание воды, инфицированной патогенными бактериями и токсинами,
делается химическими методами с последующим кипячением.
МИКРОФЛОРА ВОЗДУХА И предметов обихода
Микрофлора воздуха очень разнообразна. Она состоит из самых разнообразных видов
микроорганизмов, поступающих в связи с почвы, растений и живых организмов. В воздухе
часто случаются пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, различные сарцины),
бациллы, актиномицеты, плесневые, дрожжевые грибы и др.
Количество бактерий в воздухе колеблется в больших диапазонах от нескольких особей
до многих десятков тысяч экземпляров в и м3; а в промышленных городах в 1 см с воздуха
оказывается огромное количество бактерий. В лесу, особенно хвойном, бактерий в воздухе
очень мало, потому что на них губительно действуют летучие вещества растений - фитонциды,
обладающие бактерицидными свойствами. Спороносные виды и плесневые грибы были
обнаружены на высоте 20 км. В 1 г пыли есть к 1 млн бактерий.
В зависимости от времени года качественный и количественный состав микрофлоры
воздуха меняется.
Для воздуха закрытых помещений санитарно-показательными микроорганизмами
являются стафилококки, Зеленя стрептококки, а о прямой эпидемиологическую опасность
заключают по количеству гемолитических стрептококков и стафилококков.
Общее количество бактерий в операционном отделении до начала операции не должна
превышать 500 в 1 м с воздуха, а после операции 1000; патогенных стафилококков и
стрептококков не должно проявляться в 250 л воздуха. В воздухе операционных роддомов
(отделений) до начала работы допускается не более 20 колоний сапрофитов, образовавшихся
при осадке бактерий воздуха на чашке с МПА в течение 30 мин.
Ультрафиолетовое облучение губительно действует на микроорганизмы, но если
последние адсорбированные на частицах пыли или других веществ, то бактерицидное действие
ультрафиолетового излучения неэффективна.
Количество микроорганизмов в рабочих и жилых помещениях тесно связана с
санитарно-гигиеническим режимом. При скоплении людей, плохой вентиляции, слабом
естественном освещении, неправильном уборке помещений количество микроорганизмов
значительно увеличивается. Сухая уборка, жидкое мытье полов, использование грязных тряпок
и щеток, сушки их в том же помещении создают благоприятные условия для накопления в
воздухе микроорганизмов.
Вирусы могут распространяться воздушно-пылевым и воздушно-капельным путем. При
чихании, кашле, разговоре больной человек выделяет в окружающую среду на расстояние 1-1,5
м и более вместе с капельками слизи, мокроты патогенные вирусы. Человек вдыхает в сутки в
среднем 12 000-14 000 л воздуха, причем 99,8% микроорганизмов, в нем, задерживаются в
дыхательных путях. Бактериальный аэрозоль (до 60000 капель разного размера), образующийся
естественным путем в пространстве носовой части глотки, при чихании и кашле выделяется в
воздух.
Больше всего бактерий выделяется при чихании, меньше - при кашле, еще меньше - при
разговоре. Характер бактериального аэрозоля - зависит от вязкости секрета, выделяемого из
дыхательных путей. У бактериовыделитель образуется наиболее концентрированный аэрозоль,
состоящий из бактериальных капель размером от 1 до 2000 мкм. Крупные капли величиной от
100 до 2000 мкм выделяются на расстояние 2-3 м и более и быстро оседают. Мелкие капельки
бактериального аэрозоля (1-10 мкм) могут долго (в течение нескольких часов и суток) быть во
взвешенном состоянии.
Воздух - неблагоприятная среда для бактерий и вирусов. Отсутствие питательных
веществ, влаги, оптимальной температуры, пагубное воздействие солнечных лучей и
высушивание не создают условий для их сохранения. Однако и сравнительно короткого
пребыванием микроорганизмов в воздухе вполне достаточно для того, чтобы вызвать передачу
патогенных видов микроорганизмов от больных лиц здоровым. Через воздух могут
передаваться вместе с каплями слизи и мокроты при чихании, кашле, разговоре возбудители
болезней - скарлатины, дифтерии, коклюша, стафилококковой, стрептококковой и
менингококковой инфекций, туберкулез, грипп, корь, натуральной и ветряной оспы, герпеса,
эпидемического паротита, краснухи , аденовирусной и других заболеваний. Воздушно-пылевым
путем распространяются споры сибирской язвы, столбняка, гистоплазмоза, грибов, возбудители
Ку-лихорадки, орнитоза и др.
Лабораторные исследования воздуха делают для определения количественного и
качественного состава его микрофлоры. Разработаны ускоренные методы обнаружения
(индикации) микроорганизмов в окружающей среде (почве, воздухе, воде).
Пробы для вирусологического исследования воздуха берут с помощью улавливая
жидкости (сахарный бульон или гидролизат лактоальбумин), которой заражают куриные
эмбрионы (для выделения вируса гриппа) или клетки культуры Неlа (для выявления
аденовирусов). Идентификацию выделенных вирусов делают по общепринятой методике.
Для обеззараживания воздуха закрытых помещений (больниц, детских садов), в которых
скученно много людей, используют ультрафиолетовое, кварцевое облучение, бактерицидное
пару и аэрозоли дезинфицирующих веществ, фильтрации воздуха через различные материалы,
интенсификацию процессов обмена воздуха в помещениях и другие способы, которые
обеспечивают устранение или уменьшения возможности распространения возбудителей
вирусных инфекций аэрогенным путем.
Бактерицидным действием обладают аэрозоли ряда химических веществ:
триетиленгликолю, молочной кислоты, гексилрезорцину, смеси эфирных масел, пероксида
водорода и др. Однако широкое использование этих средств ограничивается их побочным
действием на организм человека. Для обеззараживания воздуха боксов приемных отделений в
инфекционных
стационарах,
детских
лечебно-профилактических
учреждений,
бактериологических лабораторий и для дезинфекции воздуха санитарного транспорта может
быть использован перекись водорода.
Определенное значение в распространении возбудителей бактериальных и вирусных
инфекций, особенно в детских коллективах, имеют предметы потребления на поверхности
которых могут быть патогенные и условно-патогенные микроорганизмы. Не только бактерии,
но и вирусы сравнительно долго (от 1 до 80 суток) сохраняются на поверхности многих
предметов.
Исследование смывов или соскобов с предметов обихода (столы, игрушки, посуда,
столики для пеленания, обеденные столы, кухонный инвентарь и др.) Делают по
эпидемиологическим показаниям. Выявление в них санитарно-показательных и условнопатогенных микроорганизмов и минимальных количеств енгеровирусив и респираторных
вирусов свидетельствует о неблагополучном состоянии обследуемого учреждения.
Выделение энтеровирусов и респираторных вирусов из разных объектов окружающей
среды (почва, вода, воздух, предметы) делают с помощью заражения куриных эмбрионов и
первичных культур тканей; добытые культуры идентифицируют с помощью РГА, РН, РСК.
Предметы обихода обеззараживают физическими и химическими методами (кипячение,
мытья горячей водой, ультрафиолетовое облучение, обработка перекисью водорода, растворами
хлорамина, гексилрезорцину).
Существует большая группа микроорганизмов, способных контаминировать и вызывать
заболевания у растений. Такие микроорганизмы называются фитопатогенными. Они широко
распространены в природе, к фитопатогенам относят более 40 000 видов вирусов, грибов,
бактерий.
Среди них значительную часть составляют те, которые имеют признаки облигатных
паразитов (способны размножаться в организме растений и только, быстро погибают в почве).
Среди них значительную часть составляют те, которые имеют признаки облигатных паразитов
(способны размножаться в организме растений и только, быстро погибают в почве).
Примеры бактериозов растений: гниль корней женьшеня (Erwinia araliavora) - краснокоричневые пятна, на корнях листья растений приобретает желто-коричневой полосатости и
растение погибает. Бактерицидная пятнистость листьев и коробочек опийного мака
(ксантомонады).
Вирусные заболевания растений чаще всего распространяются насекомыми, которые
питаются соком растений; выявляются заболевания пятнистости или мозаичным окраской
листьев, связанным с разрушением возбудителей хлоропластов (мозаичная болезнь табака,
тюльпаны Рембрандта)
В распространении фитопатогенных микоплазм ведущую роль играют насекомые. Среди
растений, которые используются в медицине, микоплазмы могут поражать барвинок, черный
паслен, дурман, белизну. Среди других культурных растений следует назвать картофель,
томаты, виноград, пшеницу. Среди первых признаков заболевания - потеря зеленой окраски
сосудами инфицированного письма, растения. Постепенно приобретают карликовости и теряют
способность к плодоношению.
Большое значение для сохранения лечебных свойств растительного сырья играют
условия хранения. Большинство фитопатогенных микроорганизмов плохо выдерживают
высушивание. Поэтому ведущую роль в условиях хранения играют t и влажность воздуха.
Оптимальные условия: влажность 30-40 %%, t- 18-20 С.
При нарушении этих условий быстро портятся богатые сахаристыми веществами ягоды
и корневища. Установлено, что измельченные листья наперстянки в результате увлажнения и
действия микрофлоры быстро теряет более 50% своей специфической активности.
Выделяют несколько типов заболеваний растений, вызванных фитопатогенных
микроорганизмов:
1) увядания - поражение корневой и проводящей системы растений, при котором
возбудитель локализуется в сосудах и вызывает механическую закупорку;
2) гнили - размягчение и разрушение тканей растения под действием ферментов м / о
(целлюлозы, Пектиназа и др.);
3) пятнистости - отмирание четко отделенных от непораженных тканей частей листовых
пластинок;
4) поволоки - появление на листьях поверхностных разного цвета пленок, которые легко
стираются;
5) пустулы - выпуклые образования в тканях растений, которые несут в себе споры
фитогена, покрытые эпидермисом или перидермы;
6) опухоли - местное увеличение объема стволов, корней и корневищ, обусловленное
вызванной м / о гиперплазией тканей.
Наличие указанных выше перечисленных проявлений заболевания следует учитывать в
процессе заготовки лекарственного сырья, поскольку содержание действующего вещества в
пораженных растениях может изменяться, а наличие продуктов жизнедеятельности
фитопатогенных бактерий оказывать неблагоприятное воздействие на организм человека.
Среди возбудителей заболеваний растений наибольшую группу составляют грибы.
Фитопатогенные грибы обнаружены среди оомицетов, аскомицетов, зигомицеты,
базидиомицетив, дейтеромицетов.
Например, грибы рода Ramularia могут поражать насаждения лекарственных растений:
мяты, ромашки, валерианы и др.
Второй по численности группой фитопатогенов являются бактерии. Заболевания
растений, вызываемые бактериями, называются бактериозами. Бактериозы чаще проявляются в
виде гнили и увядания. Среди возбудителей бактериозов преобладают гр (-) аэробные
подвижные палочки из родов псевдомонад, ксантомонад, агробактериями и эрвиний.
Для готовых лекарственных средств из лекарственного растительного сырья
Государственной Фармакопее Украины установлены нормативы микробной загрязненности
(категория 4)
А. Растительные лекарственные средства, состоящие из цельных дробленых или
растертых в порошок растительных компонентов, в которых перед употреблением добавляют
кипящую воду могут содержать не более 107 КОЕ / г бактерий и не более 105КУО грибов / ч.
Не допускаются наличии не более 102 КОЕ E. coli / г или мл.
Б. Для лекарственных растительных средств, в которых перед употреблением не
добавляют кипящую воду:
не более 105 КОЕ бактерий / г
не более 104 КОЕ грибов / ч
Кроме того, не должно быть никакой E. coli в 1 г / мл препарата и не должно быть
никакой Salmonella в 10 г (мл) препарата.
Микробного загрязнения подвергаются также разнообразна химическое сырье, готовые
лекарственные формы. Например, спорообразующие м / о способны длительное время
сохранять жизнеспособность даже в чистом этаноле.
С сыпучих материалов, используемых в аптеках, всегда богаты м / о тальк, крахмал,
сахара, желатина. С мягких материалов значительную микробную загрязненность часто несут
ланолин, кондитерские Саломасы, вазелин. Благодаря высокой ферментативной активности м /
о способны изменять необходимые для изготовления лекарств свойства этих материалов и даже
образовывать токсичные продукты для организма человека (этот процесс носит название
микробной деградации).
Среди готовых аптечных лекарственных форм микробной порче зачастую подлежат
жидкие лекарственные формы, содержащий сахарный сироп.
Признаки порчи:
-изменение цвета
-помутнение
-образование пленок
-образование осадка
-появление кислотного запаха
Наиболее суровые требования, степени микробной чистоты оказываются к растворам
для парентерального ввода и глазных капель. Эти препараты должны быть стерильными. В
условиях промышленной фармации согласно международным требованиям надлежащей
производственной практике лекарственных средств технологический процесс изготовления
таких лекарственных средств подлежит валидации.
Валидация - моделирование технологического процесса изготовления лекарственного
средства с использованием промышленных помещений, серийного оборудования, постоянного
рабочего персонала с контролем качества готового продукта, которое гарантирует стабильное
получение в дальнейшем серийной качественной продукции.
Микробиологическая валидация технологического процесса получения стерильных
лекарств предусматривает имитацию изготовления лекарственного средства на
технологической линии с использованием вместо лекарственного сырья питательных сред от
стадии заполнения первичных емкостей до стадии получения конечной упаковки. В серии
изготовленной таким образом модели лекарственного средства допускается проростом не
больше 0,1% упаковок продукции.
Готовая продукция, к которой оказываются требования стерильности, подлежит
испытанию на стерильность.
Для испытания с каждой серии лекарственного средства, которая насчитывает 500 и
больше упаковок произвольно отбирается 2% флаконов и контейнеров. Содержание проверяют
на стерильность одним из следующих способов:
1) 1) метод прямого посева
2) метод мембранной фильтрации
1) - содержание вносят в жидкую тиогликолиевую среду для выявления бактерий и
жидкую среду Сабуро для выявления грибов.
Количество препарата не больше 10% объема среды.
Инкубация - 14 дней при t = 35C. Серия лекарственного средства считается выдерживает
испытания на стерильность, если в одной из проб при визуальном контроле не обнаруживается
признаков роста.
2) - используют целлюлозно-нитратные или целлюлозно-ацетатные мембранные
фильтры с размерами пор НЕ больше 0,45мкм и d = 50 мм.
В стерильную фильтрационную установку вносят лекарственный препарат и фильтруют.
Немедленно после фильтрации фильтр в асептических условиях разрезают пополам и вносят по
1 половине в тиогликол. б-н и жидкую среду Сабуро.
-н)
- "-" - "Если лекарственное средство обладает антимикробными свойствами, то фильтр перед
внесением в среду отливают путем фильтрации через него тройной (от количества объема
препарата) стерильной 0,9% NaCl или стерильного питательной среды.
Готовые лекарственные формы, не применяют парентерально, не является глазными
каплями и не предназначены для внесения в раны и полости тела, могут быть нестерильными.
Допустимые нормы микробного загрязнения для нестерильных лекарственных средств:
1) для местного применения и применения в респираторном тракте
- Не более 102 аэробных бактерий и грибов суммарно в 1 г (мл).
Не должно быть Ps. Aeruginosa, St aureus и не более 10 КОЕ Enterobacteriocea
2) для орального и рект. применения - не более 103 КОЕ анаэробных бактерий / г или мл;
не более 102 КОЕ грибов / г или мл.
Не допускается наличии E. coli.
Подробные требования к микробиологической чистоты субстанций и вспомогательных
веществ, а также бактериологические методы исследования микробиологического загрязнения
изложенные во II и В разделах Государственной Фармакопеи Украины.
С целью предотвращения микробной контаминации лекарств в аптечных условиях в
аптеках соблюдаются санитарно-эпидемиологического режима.
"Инструкцией по санитарно-эпидемиологическому режиму аптек" предусмотрены
жесткие требования к:
- Размещение и отделка аптечных помещений и оборудования
- Уборка и ухода за оборудованием аптек
- Личной гигиены персонала и порядка его периодического медицинского обследования
- Получение, транспортировка и хранение воды очищенной
- Технология изготовления лекарств.
В Инструкции подробно расписана система противомикробных мероприятий (способы
обеззараживания воздуха, дезинфекции помещений и оборудования, мойки и стерилизации
посуды, вспомогательных материалов контроля эффективности обеззараживания).
Контроль за соблюдением санитарно-эпидемиологического режима в аптеках
осуществляют бактериологические отделы Обл. СЭС путем бактериологического обследования
не реже 2 раз в квартал:
- Воды очищенной и воды для инъекций
- Лекарственных средств
- Аптечной посуды, пробок и других вспомогательных материалов
- Инвентаря и оборудования
- Рук и одежды персонала
- Воздух.
6. Практические работы, которые выполняются на занятии
6.1. Определить микробное число воды. Подсчитать количество выросших колоний при посеве
исследуемой воды на МПА с помощью счетной сетки и умножить на разведение воды (х10,
х100 и т.д.). Дать санитарно-гигиеническую оценку исследуемой воды.
6.2. Определение микробного числа воздуха по методу Коха. Как показали исследования
В.Л.Омельянського, на поверхности среды площадью 100 см2 оседает за 5 минут столько
микробов, сколько их находится в 10 л воздуха. Например, на чашке с МПА при 5 мин
экспозиции выросло 32 колонии, нужно определить количество микробов, находящихся в 1 м3
воздуха, применяя формулу Омельянського. Площадь чашки равна: 3,14 * 52 = 78, 5 см2. Зная
площадь чашки и количество выросших колоний, можно определить количество микробов (х),
которые выросли при данной экспозиции на поверхности среды площадью 100 см2:
32 * 100
х = ----------------- = 40
78,5
Это количество микробов находилась в 10 л воздуха, а в 1 м3 (1000 л) их будет: (40 * 1000): 10
= 4000.
Дать санитарно-гигиеническую оценку воздуха закрытых помещений для зимнего режима.
6.3. Определение микробного числа воздуха по методу Кротова. Чашку с МПА поместить в
аппарат Кротова и провести посев 10-20 л воздуха. После инкубации провести определение
микробного числа воздуха.
6.4. В демонстрационном опыте провести определение коли-титра и коли-индекса
водопроводной воды по методу мембранных фильтров.
6.5.Провести испытание на стерильность препарата для парентерального введения, который не
имеет антимикробного действия, методом прямого высевания.
 В асептических условиях открыть ампулу с препаратом (водой для инъекций).
 Стерильным шприцом отобрать 1 мл препарата.
 Высеять 0,5 мл препарата в пробирку с 5 мл жидкой тиогликолевой среды (для
выявления бактерий).
 Высеять 0,5 мл препарата в пробирку с 5 мл жидкой среды Сабуро (для выявления
грибов).
 Посевы поместить в термостат при температуре 35оСи 25оС.
6.6. Учесть результаты исследования на стерильность препарата для парентерального введения,
поставленного заранее. Лекарственный препарат отвечает требованиям стерильности, если на
протяжении 14 суток инкубирования не появилось признаков видимого роста.
6.7.Провести исследование микробиологической чистоты лекарственного средства для
перорального приема методом прямого высевания.
 Стерильной пипеткой отобрать 0,2 мл препарата.
 0,1 мл препарата высеять на поверхность пластинчатого агара в чашке Петре.
Равномерно распределить жидкость по поверхности с помощью стерильного шпателя.
 0,1 мл препарата высеять на поверхность плотной среды Сабуро. С помощью
стерильного шпателя равномерно распределить препарат по поверхности.
 Посевы поместить в термостат при t 350С для выявления бактерий и при 250С для
выявления грибов.
6.8.Учесть результаты определения общего микробного числа для нестерильных лечебных
средств для перорального применения в демонстрационном опыте. Сравнить с требованиями,
сделать выводы.
Требования: в 1 мл или 1 г - не больше 1000 аэробных бактерий; не больше 100 грибов.
7. Рекомендованная литература:
7а. Основная:
2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология М. 1980 (рос)
3. В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (рос) с. 124-134
4.А.И. Коротеєв С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология
Санкт - Петерб 2002 (рос) с. 107-118
5.И.Л. Дикий, И.Ю. Холуняк, Н.С. Шевелёва, М.Ю. Стегний, Микробиология Харк. 1999
(рос) с. 143-147
7.Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рос) с.
81-95
8.М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М.
1973 (рос) с. 107-115
7б. дополнительная:
Палий Г.К., Палий В.Г. Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные
болезни. Словарь. Здоров”я, 2007.- 292 с.
Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е. и др. Микробиология: Учебник для студентов
фармацевтических вузов и фармацевтических факультетов медицинских институтов, 1999. С. 159-165.
Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробиология: Учебник для
студентов фармацевтических ВУЗов и фармацевтических факультетов медицинских
институтов, 2004. - С. 250-259.
Дикий И.Л., Сидорчук И.И., Холупяк И.Ю., Микробиология: Руководство к лаборатор.
занятиям: Учебное пособие для студентов фармацевтических ВУЗов и фармацевтических
факультетов медицинских институтов, 2004. - С. 178-198.
8. Материалы для самоконтроля:
1. Укажите санитарно-показательные микроорганизмы воды:
а. стрептококк
b.кишечная палочка
c. золотистый стафилококк
d. спорообразующие анаэробы
e. дрожжи
2.Укажите микробное число водопроводной воды:
a.100
b.200
c.300
d.400
e.500
3.Укажите метод определения санитарно-показательных микроорганизмов воды:
a. микроскопический
b. седиментационый
c. аспирационый
d.метод мембранных фильтров
e. биологический
4.Микробиологический контроль качества выпускаемых таблеток для приема
внутрь позволил установить бактериальную обсемененность препарата – 85
КОЕ (колониеобразующих единиц) на 1 г вещества. Какой официально
регламентированный показатель качества санитарно-микробиологического
исследования препарата использован в данном случае?
A Общее микробное число
B Полный ГОСТ санитарно-микробиологического исследования.
C Подсчет разных видов микроорганизмов.
D Изучение коли-индекса в 1 г вещества.
E Определение перфрингенс-титра в 1 г вещества.
5.Ребенку шести месяцев врач назначил лекарственный препарат для приема
внутрь. Какое максимальное количество бактерий и грибов допустимо в 1г этого
препарата в соответствии с требованиями ВОЗ и фармакопеи ?
A Не более 50 бактерий и грибов суммарно
B Не более 500 бактерий и грибов суммарно
C Не более 1000 бактерий и грибов суммарно
D Не более 1000 бактерий и 100 грибов
E Не более 500 бактерий и грибов
Автор: доцент, к.м.н. Сорокоумова Л.К.