Инструкция к набору - Ольвекс Диагностикум

Инструкция по применению набора реагентов для качественного
и полуколичественного определения содержания С-реактивного
белка в сыворотке крови методом латекс-агглютинации
(СРБ-ОЛЬВЕКС)
СРБ-ОЛЬВЕКС
С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК ЛАТЕКС ТЕСТ
Кат.№ 051.011
2 мл СРБ латекс-суспензии
________________________________________________________________________
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор
реагентов
«СРБ-ОЛЬВЕКС»
предназначен
для
качественного и полуколичественного определения содержания
С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови методом латексагглютинации в клинической лабораторной диагностике.
СРБ, как белок острой фазы, не является специфичным для
какого-либо определенного заболевания, но характерен для
острого воспалительного процесса и может служить признаком
его активности. Обычно, в случае острых воспалительных
процессов, возникающих вследствие инфекции, инфаркта
миокарда или хирургического вмешательства, уровень СРБ
может увеличиваться существенно выше нормы в десятки раз.
Количество исследований определяется расходом Реагента 1
на один тест. Допускается пропорциональное изменение
объёмов реагентов и сыворотки, но не менее чем по 10 мкл.
Согласно стандартной процедуре анализа при расходе 20 мкл
Реагента 1 на один тест набор рассчитан на проведение 100
тестов.
ПРИНЦИП МЕТОДА
СРБ латекс-реагент представляет собой суспензию латексных
частиц, на поверхности которых иммобилизованы антитела
против СРБ человека. При смешивании данного реагента с
сывороткой крови человека, содержащей СРБ в концентрации,
превышающей 6,0 мг/л, в результате реакции между
антителами к СРБ и антигеном (СРБ) развивается агглютинация
латексных частиц. Агглютинация определяется визуально, что
свидетельствует о положительной реакции пробы.
Для полуколичественного определения СРБ анализируются
последовательные разведения исследуемого образца. Об
уровне СРБ судят по последнему разведению (титру), при
котором
была
выявлена
визуально
определяемая
агглютинация.
СОСТАВ НАБОРА
 Реагент 1; СРБ - латекс суспензия; готов к применению;
объём реагента 2,0 мл;
 Реагент 2; Буфер-разбавитель, рН 7,35; натрий хлористый
150 ммоль/л; калий фосфорнокислый однозамещенный 10
ммоль/л, готов к применению; объём реагента 10,0 мл;
 Реагент 3; Положительный контроль;
концентрация СРБ больше 6 мг/л; готов к применению; объём
реагента 0,1 мл;
 Реагент 4; Отрицательный контроль;
концентрация СРБ меньше 6 мг/л; готов к применению; объём
реагента 0,2 мл;
 Реагент 5; Слабоположительный контроль;
концентрация СРБ на уровне 6 мг/л; готов к применению;
объём реагента 0,2 мл;
 Пластины (слайды) на полимерной основе (многоразовые); по
10 лунок для проб на слайде; количество слайдов 1 штука.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
 Чувствительность определения 6,0 мг/л.
Оценка результатов анализа производится в течение времени
со 2-ой по 3-ю минуту после смешивания анализируемого
образца и реагентов.
Нормальные значения: взрослые до 6,0 мг/л,
дети до 10 мг/л,
новорожденные до 15 мг/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории определить диапазон
нормальных значений для обследуемого контингента.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Сыворотка крови человека.
Срок хранения при комнатной температуре +18-25С не более
3-х суток с момента забора;
при температуре +2-8С не более 6-ти суток;
при температуре -20С не более 3-х месяцев.
Использование гемолитических или липемичных образцов
сыворотки, а также плазмы крови недопустимо.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора – класс 2а.
Все компоненты набора в используемых концентрациях
являются нетоксичными.
Твердые и жидкие отходы, образующиеся в результате
использования набора реагентов, относятся к классу Б согласно
СанПиН
2.1.7.2790-10.
«Санитарно-эпидемиологические
требования к обращению с медицинскими отходами».
Для
обеззараживания
и/или
обезвреживания
отходов
использовать зарегистрированные в РФ дезсредства и
оборудование в соответствии с инструкциями по их применению
(МУ 287-113. «Методические указания по дезинфекции,
предстерилизационной очистке и стерилизации изделий
медицинского назначения»).
При работе с набором необходимо соблюдать "Правила
устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях
(отделениях,
отделах)
санитарноэпидемиологических учреждений системы Министерства
здравоохранения СССР", Москва, 1981 г.
При работе с сывороткой крови следует надевать одноразовые
резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови
человека являются потенциально инфицированным материалом,
способным длительное время сохранять или передавать ВИЧ,
вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной
инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ
 механическая орбитальная мешалка, скорость вращения 80100 об/мин;
 таймер;
 пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными
наконечниками, позволяющие отбирать объём жидкости
20 мкл;
 шпатели одноразовые (пластиковые или стеклянные);
 перчатки резиновые или пластиковые.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Перед постановкой теста реагенты и анализируемые образцы
сыворотки крови необходимо довести до комнатной
температуры +18 - 25°С.
Проведение анализа при температуре ниже +18°С недопустимо,
так как это может привести к ложноположительным результатам.
Реагент 1 перед использованием следует перемешать до
образования гомогенной суспензии осторожным встряхиванием.
1. КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Раскапать по 20 мкл в лунки тест-пластины исследуемые
образцы и реагенты, используя каждый раз одноразовые
наконечники пипеток, следующим образом:
 в лунки №№ 1–10 – исследуемые образцы сыворотки
 в лунку (+) – Реагент 3 (положительный контроль)
 в лунку (–) – Реагент 4 (отрицательный контроль)
 в лунку (+/−) – Реагент 5 (слабоположительный контроль)
Рядом с первой каплей во все лунки внести по 20 мкл реагента
1 (латекс суспензия). Смешать содержимое двух капель в лунке
до гомогенного состояния, охватывая всю поверхность лунки.
Для каждой лунки использовать одноразовый шпатель.
Вращать тест-пластину вручную или на механической мешалке
со скоростью 80-100 об/мин в течение 2-х минут. Развитие
процесса агглютинации необходимо наблюдать в промежутке со
2-ой по 3-ю минуту от момента начала вращения тест-пластины.
Затягивание процесса считывания результата может привести к
регистрации ложной агглютинации, возникающей в процессе
подсыхания реакционной смеси.
2. ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Приготовить разведения исследуемых проб с помощью буфераразбавителя (Реагент 2) в соответствии с таблицей №1
разведения исследуемого образца сыворотки крови.
Таблица №1
исследуемый
образец
сыворотки крови
мл
буферразбавитель
мл
Коэффициент
разведения
0,1
0,3
0,7
2
4
8
0,1
0,1
0,1
и т.д.
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ
Четко видимые агрегаты латексных частиц на прозрачном фоне
свидетельствуют о концентрации СРБ больше 6 мг/л; мелкие
агрегаты указывают на концентрацию близкую к 6 мг/л;
равномерно гомогенная молочная суспензия указывает на
концентрацию СРБ ниже 6 мг/л – результат отрицательный или
ниже предела обнаружения используемого метода.
Концентрацию СРБ в исследуемом образце в мг/л при
полуколичественном определении рассчитывать с учетом
последнего разведения, в котором обнаружен СРБ, согласно
таблицы №1 разведения исследуемого образца сыворотки
крови.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Хранение наборов должно производиться в упаковке
предприятия-изготовителя при температуре +2-8°С в течение
всего срока годности. Допускается хранение набора при
температуре до +25°С не более 6-ти дней.
Замораживание компонентов набора не допускается.
Реагенты 1, 2, 3, 4 и 5 после вскрытия флаконов можно хранить
при температуре +2-8°С в течение всего срока годности
наборов.
Срок годности набора 12 месяцев.
Для проведения анализа рекомендуется использовать
полуавтоматические одноканальные пипетки со сменными
наконечниками, аттестованные на точность по значению
средней дозы и сходимости результатов дозирования.
Для получения надежных результатов необходимо строгое
соблюдение инструкции по применению набора.
——————————————————————————————
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ПОТРЕБИТЕЛЯ
В качестве одноразового шпателя для перемешивания латексреагента и сыворотки допускается использование одноразовых
зубочисток.
Для удобства расчёта концентраций С-реактивного белка
рекомендуется постановка анализа с последовательными 2-х
кратными разведениями исследуемого образца согласно
таблице №2.
таблица №2
№
пробирки
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
реагент 2
200 200 200 200 200 200 200 200 200
200
мкл
–
–
–
–
–
–
–
–
–
сыворотка 200
мкл
200 200 200 200 200 200 200 200 200
начиная с 1-ой пробирки, перенесите по 200 мкл
в следующую пробирку
титр 1/х
1/2
1/4
1/8
≈ СРБ мг/л 12
24
48
1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024
96
192
384
768 1536 3072 6144
Последовательные разведения.
Раскапать по 200 мкл Реагента 2 (разбавитель) в пробирки
(эппиндорф) №№ 1-10. В первую пробирку внести 200 мкл
исследуемого образца и перемешать. Из каждой пробирки,
начиная с 1-ой, последовательно перенести по 200 мкл в
следующую пробирку.
С каждым разведением провести исследование в соответствие
с качественным анализом. О титре или количестве СРБ судят
по последнему разведению исследуемого образца, при котором
наблюдается агглютинация.
КОНТАКТЫ
По вопросам, касающимся качества набора «СРБ-ОЛЬВЕКС»,
обращайтесь в ООО «ОЛЬВЕКС ДИАГНОСТИКУМ»
по адресу:
Россия, 192029, г. Санкт-Петербург,
просп. Обуховской обороны, д.70, корп.2, а/я 3,
Тел: (812) 412-84-46, (812) 412-83-02
Факс: (812) 412-84-29.