ОПРЕДЕЛЕНИЕ КИНЕТИЧЕСКИХ КОНСТАНТ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ Фермент простагландин-H-синтаза (PGHS; К.Ф.1.14.99.1) осуществляет синтез

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КИНЕТИЧЕСКИХ КОНСТАНТ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ
АПОФОРМЫ ПРОСТАГЛАНДИН-H-СИНТАЗЫ С ГЕМОМ
Кривошей А.В., Вржещ П.В.
Международный учебно-научный биотехнологический центр МГУ имени
М.В.Ломоносова
Фермент простагландин-H-синтаза (PGHS; К.Ф.1.14.99.1) осуществляет синтез
простагландинов из арахидоновой кислоты. Простагландины являются медиаторами,
ответственными за важные физиологические процессы: свёртывание крови,
репродуктивные функции, работа желудочно-кишечного тракта, реакции иммунного
ответа и др.
PGHS катализирует две последовательные реакции: циклооксигеназную, в ходе
которой арахидоновая кислота окисляется двумя молекулами кислорода и превращается
в простагландин G2 (PGG2), и пероксидазную, в результате которой PGG2 преобразуется
в PGH2 в присутствии донора электронов. В ходе обеих реакций фермент подвергается
необратимой инактивации.
Катализ обеих реакций способна проводить только холоформа PGHS (комплекс
белка с кофактором гемом). В предыдущих работах определяли только равновесную
константу диссоциации комплекса, причём оценивали её значение только косвенным
путём, поэтому эти значения расходились на 1-2 порядка. Индивидуальные константы
скорости реакций процесса комплексообразования не определялись.
В настоящем исследовании кинетику ассоциации и диссоциации холоформы PGHS
изучали с использованием апоформы фермента, полученной методом восстановления
гемового железа дитионитом натрия в анаэробных условиях и дальнейшего окисления
системы кислородом. Концентрацию холоформы PGHS детектировали по скорости
циклооксигеназной реакции в различных условиях. Для простейшей модели найдены
значения константы скорости присоединения гема к апоферменту (3*105 М-1*сек-1) и
константы скорости отщепления гема от холофермента (3,9*10-3 сек-1). Соответственно,
равновесная константа диссоциации составляет 1,3*10-8 М при 25°C.