Изолированный протопласт- это вся клетка, за исключением

физиология растительной клетки

1
Задача 2. Выделение протопластов.

Цель задачи: выделить протопласты, изучить влияние среды на выделение протопластов.

Объект исследования:

Реактивы и оборудование. Калий-фосфатный буфер (рН 7.5), маннит две навески по 5г,
целлюлаза две навески по 1,0 г, цилиндры на 50 мл, 2 колбы по 100 мл, стаканчики,
стеклянные палочки, маленькие чашки Петри, препаровальные иглы, лезвие, микроскопы.
 Ход работы:
1. Приготовление растворов маннита (плазмолитик) на К-фосфатном буфере. Раствор №1 с=70
г/л, раствор №2 с=90г/л.
2. Приготовление на основе растворов №1 и №2 растворов 2,5% целлюлазы (сначала
растворяют целлюлазу (фермент) в небольшом объеме, затем после ее растворения
доливают оставшийся объем).
3. Наливают приготовленные растворы №1 и №2 в две маленькие чашки Петри (прикрыв
раствором дно).
4. Отрезают небольшой (4*4мм) кусочек листа у выбранного объекта (по кусочку для каждого
раствора).
5. Удаляют нижний эпидермис с кусочка ткани.
6. Сразу помещают кусочки в раствор фермента и плазмолитика.
7. Чашки Петри с кусочками ткани оставляют в термостате на 2,5 часа при 37 0С.
8. Через 2,5 часа вынимают чашки Петри из термостата и смотрят под микроскопом
изолированные протопласты, наводя на зеленые конгломераты в растворе, если таковых нет
, то объект можно пошевелить препаровальной иглой. Зарисовать найденные протопласты.
Оценить произошло ли разрушение клеточной стенки, качественно оценить соотношение
целых и разрушенных хлоропластов в растворе.
ЛИТЕРАТУРА к зачету:
Полевой В.В. «Физиология растений»: Учеб. для вузов. М.: "Высш. шк.", 1989.
Бутенко Р.Г Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе. М., ФБКПРЕСС, 1999.