DRG АКТГ EIA-3647 ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ

DRG АКТГ EIA-3647
ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ
ИФА набор АКТГ предназначен для количественного определения АКТГ (Адренокортикотропного гормона) в
плазме человека. Для диагностики in vitro.
ОБЗОР И РАЗЪЯСНЕНИЯ
АКТГ (адренокортикотропный гормон), или кортикотропин, является пептидным гормоном, состоящим из 39
аминокислот (ММ=4500), секретируется гипофизом, чтобы регулировать выработку стероидных гормонов коры
надпочечников. Секреция АКТГ из передней доли гипофиза управляется классически механизмом
отрицательной обратной связи и опосредованной стрессом ЦНС системой контроля.1 Различные типы стрессов
или боли, воспринятые в высших уровнях мозга, модулируют секрецию гипоталамического нейросекреторного
гормона, кортикотропин-релизинг-гормона (КРГ), пептида с 41 аминокислотой. КРГ стимулирует гипофизарную
секрецию АКТГ. Второй пептид, который модулирует секрецию АКТГ - это вазопрессином (АДГ). Секреция АДГ
также стимулируется стрессом и действует синергистически с КРГ, чтобы увеличить секрецию АКТГ в
гипофизарном портальном обращении. АКТГ увеличивает синтез и секрецию всех стероидов надпочечника,
альдостерона, кортизола и надпочечных андрогенов. Это основной модулятор кортизола, самого важного
глюкокортикоида у человека. С увеличением уровня кортизола в крови, секреция АКТГ ингибируется
непосредственно на гипофизарном уровне. Через этот же самый механизм уменьшающиеся уровни кортизола
приводят к поднятым уровням АКТГ.2,3,4,5 Биологически активный АКТГ получается из ферментативного раскола
большой молекулы предшественника, проопиомеланокортина (ПОМК). Эта молекула содержит в своей
структуре последовательности аминокислот АКТГ, про-АКТГ, ß-меланоцит-стимулирующий гормон, липотропин,
а так же эндорфин и энкефалины. Поскольку реакция в иммунологических исследованиях определена
антигенной структурой, а не биологической функцией, обычный АКТГ РИА реагирует с ПОМК, про-АКТГ, АКТГ и
некоторыми фрагментами АКТГ.5 Как и другие гипофизарные гормоны, АКТГ секретируется в пульсирующей
манере. Эти небольшие импульсы накладываются на характерное суточное колебание большей амплитуды. У
здоровых людей АКТГ достигает пика рано утром (6:00 - 8:00 часов). Затем уровни снижаются до конца дня, и
самыми низкими они становятся ближе ко сну. Из-за такого суточного ритма общепринято отбирать образцы
плазмы на АКТГ между 8:00 и 10:00 часами. Однако, дифференциация пациентов с болезнью Иценко-Кушинга
от нормальных людей может быть достигнута наилучшим образом, если образцы отобрать вечером (16:00 18:00 часов). При болезни Иценко-Кушинга, а также при синдроме эктопического АКТГ, палитра суточной
секреции АКТГ вообще отсутствует. Стресс может также подавить суточное изменение.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Тесты на АКТГ в плазме нужны при дифференциальной диагностике гипофизарной болезни Иценко-Кушинга,
болезни Аддисона, автономного производящих АКТГ гипофизарных опухолей (например, синдром Нельсона),
гипопитуитаризма с дефицитом АКТГ и синдромом эктопического АКТГ.5,6,7,8,9,10 Синдром Иценко-Кушинга вызван
эффектами лишних глюкокортикоидных влияний. Все причины синдрома Иценко-Кушинга, за исключением
глюкокортикоидного лечения, связаны с повышенным кортизолом в суточной моче. Самая частая причина
синдрома Иценко-Кушинга – двусторонняя гиперплазия надпочечника вследствие гипофизарной гиперсекреции
АКТГ (болезнь Иценко-Кушинга), вызванной гипофизарной аденомой или кортикотрофной гиперплазией.5,6,7,8,9,10
Лабораторный диагноз болезни Иценко-Кушинга поддержан следующим: (1) подавление плазменного АКТГ и
концентраций кортизола большей дозой (2.0 мг / 6 ч x 8) принимаемого дексаметазона, (2) отсутствие АКТГ и
подавления кортизола с низкой дозой (0.5 мг / 6 ч x 8 или 1 мг, данный в 23:30 час) дексаметазона, (3) большее,
чем нормальный ответ на метирапона (Метопирон), стимуляция и нормальные или поднятые плазменные
уровни АКТГ.4 Когда синдром Иценко-Кушинга вызван первичной надпочечной патологией (аденома или
карцинома), действия надпочечника независимы от АКТГ и подавлена гипофизарная секреция АКТГ.5,6,7,8,9,10
Следовательно, нет никакого ответа на подавление дексаметазоном или стимуляцию метапироном. Этот тип
синдрома Иценко-Кушинга характеризован очень низкими, или необнаруживаемыми уровнями АКТГ. Поэтому,
измерение плазменного АКТГ полезно при дифференциальной диагностике гипофизарного синдрома ИценкоКушинга. У пациентов с надпочечными опухолями уровни АКТГ низки. Высокие уровни АКТГ замечены у
пациентов с синдромом эктопического АКТГ. У пациентов с двусторонней гиперплазией надпочечников будут
неадкватно подняты уровни АКТГ для их степени Гиперкортизолизма, который должен подавить АКТГ. Однако, в
большинстве случаев концентрация АКТГ будет в пределах нормального диапазона. Недостаточность
надпочечников или неадекватная секреция кортизола могут быть вызваны разрушением надпочечной коры или к
отклонениям в гипофизе или гипоталамусе, которые приводят к неадекватной секреции АКТГ.5,6,7,8,9,10 Первичных
недостаточность надпочечников, Болезнь Аддисона, характеризована заметно поднятыми плазменными
уровнями АКТГ и отсутствием чувствительности надпочечников к стимуляции внешним АКТГ. Гипопитуитаризм с
дефицитом АКТГ, который является вторичной адренокортикальной недостаточностью, характеризован низкими
плазменными концентрациями АКТГ и кортизола, и неполноценным, но обычно отчетливым надпочечным
ответом на возбуждение с синтетическим АКТГ (Cortrosyn®). Если для диагноза требуются гипогликемический
стресс или стимуляция метиропоном, ответы АКТГ и кортизола менее чем нормальны. Агрессивная и
1
DRG АКТГ EIA-3647
инвазивная секреция АКТГ при гипофизарных опухолях, происходящая до или после двустороннего удаления
надпочечников при болезни Иценко-Кушинга (синдром Нельсона), характеризована развитием Аддисоновой
пигментации, часто встречающейся у пациентов после адреналектомии, которые находятся на заместительной
глюкокортикоидной терапии. У этих пациентов плазменные уровни АКТГ заметно подняты и не дают
значительного ответа на подавление дексаметазоном.
ПРИНЦИП АНАЛИЗА
DRG Intl АКТГ ELISA – это двухсайтовый ИФА [твердофазный иммуноферментный анализ] для измерения
биологически активного АКТГ (39 амонокислот). Овечьи поликлональные антитела к АКТГ человека, очищенные
методом аффинной хроматографии, и мышиные моноклональные антитела к АКТГ человека являются
специфичными к хорошо определяемым участкам молекулы АКТГ. Одно антитело связывается только с С –
концевой частью АКТГ 34-39, оно биотинилировано. Другое антитело связывается только со средними
участками и N- концевой частью АКТГ 1-24, оно имеет ферментную метку пероксидазы хрена.
Лунки со стрептавидином - биотинилированное антитело к АКТГ (34-39) - АКТГ - Антитело к АКТГ (1-24) с меткой ПХ
В ходе анализа калибраторы, контроли и образцы пациента одновременно инкубируются с антителом с
ферментной меткой и биотинилированным антителом в лунках покрытых стрептавидином. После инкубации
микролунки промываются для удаления несвязанных компонентов и фермент, связанный с твердой фазой,
инкубируется с субстратом ТМБ. Реакция останавливается добавлением стоп-раствора на основе кислоты и
окраска содержимого лунок меняется. Интенсивность желтого окрашивания прямо пропорциональна
концентрации АКТГ в образце. Строится кривая зависимости концентрации от единиц абсорбции по
результатам, полученным при измерении калибраторов. Концентрации АКТГ в контролях и образцах пациентов
определяются по этой кривой.
КОМПОНЕНТЫ
Компонент
набора
Реагент 1
реагент 2
Реагент А
Реагент B
Реагент С
микропланшет
калибраторы
A
B
C
D
E
F
контроли 1 & 2
Описание
Кол-во
Биотинилированное антитело к АКТГ (овечьи антитела к АКТГ
аффинной очистки)
Антитела к АКТГ с меткой пероксидазы хрена (мышиные
моноклональные антитела к АКТГ)
Промывочный концентрат (солевой раствор с ПАВ)
Субстрат ТМБ (тетраметилбензидин)
Стоп-раствор (1н серная кислота)
Один держатель со стрипами, покрытыми стрептавидином
1 × 2,7 мл
лиофилизированный (кроме нулевого калибратора) синтетический
h-АКТГ. Нулевой калибратор (БСА/раствор лошадиной сыворотки) в
жидкой форме, готов к использованию. Все другие калибраторы состоят
из синтетического АКТГ (1-39) в растворе БСА/лошадиной сыворотки
Прим.: точные концентрации указаны на этикетках флаконов
Лиофилизированные, 2 уровня, синтетический h-АКТГ (1-39) в растворе
БСА/лошадиной сыворотки
Прим.: точный диапазон указан на этикетках флаконов
1 × 2,7 мл
1 × 30 мл
1 × 15 мл
1 × 20 мл
12 стрипов по 8
лунок
1 × 4 мл (нулевой)
1 × 2 мл
остальные
1 × 2 мл на
уровень
ДОПОЛНИТЕЛЬНО ТРЕБУЕМЫЕ КОМПОНЕНТЫ
• микропланшетный ридер
• автомат для промывки лунок (если нет в наличии, приемлема промывка вручную)
• прецизионные пипетки на 25, 100 и 150 мкл
• (не обязательно): многоканальная пипетка на 50, 100 и 150 мкл
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ДЛЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЕЙ
Реагенты набора не содержат компонентов человеческой крови. С образцами пациентов, которые могут иметь
положительную реакцию на поверхностный антиген гепатита В, HBcAg или антитела к ВИЧ, необходимо
обращаться как с потенциально биологически опасными. Необходимо соблюдать обычные меры
предосторожности при работе с нетестированными образцами.
2
DRG АКТГ EIA-3647
Стоп-раствор состоит из 1N серной кислоты. Это сильная кислота. Обращаться с осторожностью во избежание
ожогов (использовать перчатки и защиту для глаз). В случае разливания немедленно смыть большим
количеством воды. Не вдыхать испарения!
ЗАБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ
Определение АКТГ должно выполняться с использованием ЭДТА плазмы. Для парного исследования проб
требуется 400 мкл ЭДТА плазмы. Отобрать цельную кровь в пробирку с ЭДТА. Необходимо надлежащим
образом отделить плазму, предпочтительно в охлаждаемой центрифуге. Хранить при -20°C или ниже. Образцы
сыворотки могут храниться до 8 часов при 2-8°C. Образцы плазмы ЭДТА при -20°C стабильны до 4 мес.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ И ИХ ХРАНЕНИЕ
1. Хранить все компоненты набора при 2-8°C за исключением концентрата для промывки и стоп-раствора после
вскрытия перед использованием.
Все реагенты кроме ненулевых калибраторов, контроли и промывочный концентрат готовы к использованию.
Хранить все реагенты при 2-8°C, кроме промывочного концентрата, который нужно хранить при комнатной
температуре до разведения во избежание появления осадка.
2. Для каждого ненулевого калибратора (калибраторы B-F) и контролей 1 и 2 требуется разведение 2 мл
дистиллированной и деионизированной воды для каждого флакона. Добавить воду, смешать и дать отстояться
10 минут, затем тщательно перемешать до полного растворения. Использовать калибраторы и контроли
немедленно после восстановления. Оставшиеся калибраторы и контроли заморозить (-20oC) как можно
скорее после использования. Стандарты и контроли стабильны при -20°C в течение 6 недель после
восстановления. Допускается до 3 размораживаний при условии обращения с реагентами согласно инструкции в
п. «Замечания по проведению анализа».
3. Реагент A (промывочный концентрат): тщательно перемешать содержимое флакона. При наличии осадка в
промывочном концентрате вследствие длительного хранения при низкой температуре, напр. 4°C, растворить
осадок на водяной бане при температуре 37°C или в сушильном шкафу при постоянном помешивании. Добавить
в промывочный концентрат (30 мл) – 570 мл дистиллированной или деионизированной воды и перемешать.
Разведенный рабочий промывочный раствор стабилен 90 дней при комнатной температуре.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
1. Поместить в держатель количество лунок со стрептавидином, необходимое для использования всех A – F
калибраторов АКТГ [точные концентрации указаны на этикетке флакона], контрольных плазм и образцов
пациентов.
2. Раскапать по 200 мкл проб в помеченные лунки. Заморозить (-20°C) оставшиеся калибраторы и контроли как
можно скорее после использования.
3. Добавить 25 мкл реагента 1 (биотинилированное антитело) в каждую лунку с пробой.
4. Добавить 25 мкл реагента 2 (антитело с ферментной меткой) в те же лунки. Накрыть планшету алюминиевой
фольгой или поддоном, чтобы предотвратить попадание света, поместить в орбитальный шейкер (170 +10
об/мин) на 4 часа + 30 минут при комнатной температуре(22°-28°C).
5. Сначала осушить жидкость, затем промыть каждую лунку 5 раз рабочим промывочным раствором,
приготовленным из реагента А, используя автомат для промывки лунок. Удалить остатки влаги, положив
планшету на впитывающий материал. Объем промывочного раствора должен быть достаточным для
использования 0,35 мл на каждую лунку.
6. Добавить 150 мкл реагента B (TMB субстрата) в каждую лунку.
7. Избегая попадания света, поместить планшеты в орбитальный шейкер при 170 + 10 об/мин на 30±5 минут
при комнатной температуре (22°-28°C).
8. Добавить 100 мкл стоп-раствора в каждую лунку. Осторожно перемешать.
9. Посчитать абсорбцию раствора в лунках в течение 10 минут, не более, с помощью микропланшетного
ридера, установленного на 450 нм против 250 мкл дистиллированной или деионизированной воды.
Считывать лунки снова при 405 нм против дистиллированной или деионизированной воды.
Примечание: второе считывание рассчитано на то, чтобы расширить калибровочную кривую до значения
максимального калибратора, прибл. 500 пг/мл. Следовательно, значения образцов пациентов с АКТГ >150 пг/мл
могут быть определены по калибровочной кривой построенной по результатам считываний вплоть до
концентрации, эквивалентной максимальному калибратору при считывании на 405 нм, без учета длины волны
максимальной абсорбции. Пробы и контроли необходимо считывать при 450 нм для концентраций АКТГ до 150
пг/мл. Концентрации АКТГ выше 150 пг/мл должны интерполироваться при считывании на 405 нм.
10. Используя итоговые значения абсорбции, полученные на предыдущем этапе, построить калибровочную
кривую по способу кубического сплайна -, 4- параметровой логистики, или поточечной интерполяции для
вычисления концентрации АКТГ.
3
DRG АКТГ EIA-3647
ЗАМЕЧАНИЯ ПО ПРОВЕДЕНИЮ АНАЛИЗА






АКТГ 1-39 - крайне нестабильная молекула. Проводить исследование необходимо сразу после
восстановления или оттаивания всех калибраторов, контролей, и образцов пациентов.
Все калибраторы, контроли и образцы пациентов рекомендуется исследовать попарно. Для редакции
данных и подсчета результатов используется среднее значение абсорбции.
Образцы необходимо пипетировать в лунки, не допуская появления пузырьков воздуха. Для этого нужно
использовать «обратную пипетку» согласно инструкции производителя пипеток.
Образцы пациентов со значениями, превышающими максимальный калибратор (F), прибл. 500 пг/мл (точная
концентрация указана на этикетке флакона), могут быть разведены калибратором А (нулевым) и
исследованы повторно. Результат умножить на коэффициент разведения.
Недопустимо использование реагентов из разных лотов.
При необходимости смешайте равные объемы, достаточные для проведения исследования, реагентов 1
(биотинилированное антитело) и 2 (антитело с ферментной меткой) в чистом желтом флаконе, затем
добавить 50 мкл смешанных антител в каждую лунку. Эти действия заменяют этап (3) и (4), затем следует
инкубация в орбитальном шейкере.
B1
C1
D1
E1
F1
G1
H1
A2
B2
C2
D2
E2
F2
250 мкл
200 мкл
25 мкл
25 мкл
350 мкл
150мкл
4 ± 1/2
часа
170 ± 10
об/мин
100
мкл
30 ± 5
мин
Промыть
5 раз
Осушить
Считать абсорбцию
при 450 и 405 нм
Реагент С
Стоп-Раствор
(кислота)
Инкубировать при
комнатной
температуре
Реагент В ТМБ
субстрат
Рабочий
промывочный
раствор
Инкубировать при
комнатной
температуре
Дистиллир.
вода
Калибратор
А
Калибратор
B
Калибратор
C
Калибратор
D
Калибратор
E
Калибратор
F
Контроль 1
Реагент 2
ферментный
конъюгат с
антителами
Образец
A1
Реагент 1 раствор
биотинилированных
антител
Лунка №
Калибратор,
контроль или
пациент
ГРАФИК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ОПЕРАЦИЙ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Считать по
дистиллир.
или
деиониз.
воде
170 ± 10
об/мин
Контроль 2
Пациент 1
Пациент 2
И т.д.
И т.д.
4
DRG АКТГ EIA-3647
ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Вручную
1. По результатам считывания при 450 нм, построить калибровочную кривую используя первые пять
калибраторов: A, B, C, D и E. По результатам считываний при 405 нм, построить вторую калибровочную кривую,
используя три калибратора с самыми высокими концентрациями, т.е. калибраторы D, E и F.
2. Приписать концентрацию, указанную на флаконе, каждому калибратору, в пг/мл. Нанести данные
калибровочной кривой на миллиметровую бумагу с концентрацией на оси X- и соответствующей абсорбции на
оси Y.
3. Соединить прямой две соседние точки. Этот математический алгоритм называется кусочно-линейным.
Концентрацию образца можно получить, отложив значение абсорбции на оси Y и найдя соответствующую
концентрацию на оси X. Образцы пациентов и контролей нужно считывать при длине волны 450 нм для
концентраций АКТГ до 200 пг/мл. Концентрации АКТГ более 150 пг/мл должны интерполироваться используя
данные считывания при 405 нм.
Автоматический метод
Также могут применяться компьютерные программы, использующие кубический сплайн или 4 PL [4 –
параметровая логистика].
Данные образцов пациента при 450 нм (считывания абсорбции в сравнении с дистиллированной или
деионизированной водой)
1 считывание
1 считывание
Среднее
АКТГ
АКТГ
Оптические
Оптические
Оптические
пг/мл – Результат
пг/мл
единицы
единицы
единицы
для доклада
Калибратор А
0,020
0,018
0,019
0
Калибратор B
0,077
0,074
0,076
5
Калибратор C
0,221
0,229
0,225
18
Калибратор D
0,624
0,692
0,685
55
Калибратор E
1,802
1,934
1,868
165
Контроль 1
0,417
0,398
0,408
33,5
33,5
Контроль 2
2,868
2,774
2,821
> 150
*
Пациент 1
0,072
0,078
0,075
4,9
4,9
Пациент 2
0,185
0,177
0,181
14,0
14,0
Пациент 3
0,495
0,491
0,493
40,8
40,8
Пациент 4
2,090
2,122
2,106
> 150
*
*Т.к. концентрация >150 пг/мл, рекомендуется использовать данные полученные при 405 нм, см. ниже в таблице.
Микролунка
плашки
«Данные образцов пациента при 405 нм».
1 считывание
1 считывание
Среднее
АКТГ
АКТГ
Оптические
Оптические
Оптические
пг/мл – Результат
пг/мл
единицы
единицы
единицы
для доклада
Калибратор А
0,011
0,008
0,0095
0
Калибратор D
0,032
0,032
0,032
55
Калибратор E
0,074
0,081
0,078
165
Калибратор F
1,838
1,817
1,828
500
Контроль 1
0,138
0,132
0,135
<150
*
Контроль 2
0,921
0,894
0,908
256
256
Пациент 1
0,030
0,032
0,031
<150
*
Пациент 2
0,068
0,062
0,065
<150
*
Пациент 3
0,165
0,159
0,162
<150
*
Пациент 4
0,663
0,677
0,670
188
188
*Для образцов с результатами <150 пг/мл рекомендуется использовать данные, полученные при длине волны
450 нм, см. графу Данные образцов пациента при 450 нм в таблице. Это обеспечит результаты при
оптимальной чувствительности набора.
Микролунка
плашки
ВНИМАНИЕ: Данные представлены только в качестве иллюстрации и не должны использоваться вместо
данных, полученных в ходе исследования.
5
DRG АКТГ EIA-3647
Оптическая плотность
Оптическая плотность
Не
использовать
для анализа
АКТГ (пг/мл)
Концентарция АКТГ (пг/мл)
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Контрольная плазма должна исследоваться при каждом исследовании калибраторов и образцов пациентов.
Результаты исследования контрольных образцов на приемлемость должны оцениваться с использованием
соответствующих статистических методов. Если при исследовании результаты контрольных образцов находятся
вне допустимого диапазона, результаты образцов пациентов могут быть недействительны.
ОГРАНИЧЕНИЯ ПРОЦЕДУРЫ
Набор АКТГ ELISA не показал “хук-эффекта” при исследовании образцов с концентрацией АКТГ 20 000 пг/мл.
Образцы с уровнями АКТГ выше максимального калибратора должны быть разведены и исследованы повторно.
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
У 83 пациентов (США) был измерен уровень АКТГ с использованием набора АКТГ ELISA. Полученные значения
находились в пределах от 7.9 до 66,1 пг/мл. Основываясь на статистке исследований по распределению и
эксцессу кривой распределения, население, если его представить логарифмически, следует нормальному
распределению Гаусса, как видно на гистограмме. Среднее геометрическое ± 2 стандартных отклонения
среднего = 8,3 – 57,8 пг/мл.
6
DRG АКТГ EIA-3647
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Точность
Были проанализированы 117 образцов пациентов с уровнями АКТГ в пределах от 1,5 до 1045 пг/мл с помощью
ДРГ ELISA и набора для радиоиммунного анализа Nichols IRMA АКТГ. Получена следующая статистика
(линейная регрессия):
Чувствительность
Чувствительность или минимальный определяемый уровень данного набора определяется по наименьшему
отдельному значению, не равному нулю, при доверительном пределе 95%. Чувствительность DRG АКТГ ELISA
= 0,46 пг/мл.
7
DRG АКТГ EIA-3647
Точность и воспроизводимость
Точность (вариации внутри постановки) набора DRG Intl АКТГ ELISA рассчитывалась по определениям 21
репликата каждого из двух образцов.
Образец
A
B
Вариации внутри постановки
Среднее
Число
Коэффициент
значение (пг/мл)
анализов
вариации (%)
35,7
21
3,1
255
21
4,2
Общая точность (вариация между постановками) набора DRG Intl АКТГ ELISA рассчитывалась по данным двух
образцов, полученным при 35 различных исследованиях, тремя специалистами с тремя различными лотами
реагентов за период 9 недель.
Образец
A
B
Вариации между постановками
Среднее
Число
Коэффициент
значение (пг/мл)
анализов
вариации (%)
35,2
35
5,8
230
35
6,2
Специфичность и кросс-реактивность
Кросс-реактивность АКТГ была изучена при добавлении различных веществ к стандарту АКТГ
Концентрация
перекресного
реагента
100000 пг/мл
10000 пг/мл
1000 пг/мл
200 пг/мл
АКТГ без
перекрестного
реагента
74,5
74,5
74,5
74,5
АКТГ с
перекрестным
реагентом
3,1
17,1
60,9
68
АКТГ (18-39)
5000 пг/мл
2000 пг/мл
500 пг/мл
67
67
67
-МСГ
100000 пг/мл
10000 пг/мл
1000 пг/мл
200 пг/мл
-Эндорфин
100000 пг/мл
50000 пг/мл
Перекрестный
реагент
АКТГ (1-24)
-71,4
-57,4
-13,6
-6,5
%
Перекрестная
реакция
-0,07%
-0,57%
-1,36%
-3,25%
19
26,8
43,3
-48
-40,2
-23,7
-0,96%
-2,01%
-4,74%
72,3
72,3
72,3
72,3
1,3
9,8
44,5
61
-71
-62,5
-27,8
-11,3
-0,07%
-0,63%
-2,78%
-5,65%
76,3
76,3
69,3
73,5
-7
-2,8
-0,01%
-0,01%
Изменения
АКТГ (пг/мл)
8
DRG АКТГ EIA-3647
Восстановление
Различные количества АКТГ были добавлены к плазме четырех пациентов
АКТГ
эндогенный
(пг/мл)
23,3
21,0
18,6
АКТГ
добавленный
(пг/мл)
-50,0
10,0
Ожидаемые
значения
(пг/мл)
-71,0
118,6
Полученные
значения
(пг/мл)
-75,0
126,0
B
28,1
25,3
22,5
-50,0
100,0
-75,3
122,5
-80,7
142,0
-107,2%
115,9%
C
21,8
19,6
17,4
-50,0
10,0
-69,6
117,4
-67,6
125,0
-97,1%
106,4%
D
9,8
8,8
7,8
-50,0
10,0
-58,8
107,8
-51,6
96,4
-87,7%
89,4%
Образец
сыворотки
A
Восстановление
(%)
-105,6%
106,2%
Кинетический эффект
Для того, чтобы определить, есть ли какой либо системный кинетический эффект между началом и концом
постановки, три усиленных пула пациентов с репрезентативными показателями концентрации АКТГ были
помещены в последовательности в течение всей постановки на одной плашке или 96 лунках (на 12-ти
восьмилуночных стрипах). В ходе исследования кинетического эффекта не было замечено значительного
сдвига данных:
9
DRG АКТГ EIA-3647
5 образцов плазмы пациентов были разведены калибратором A (нулевым). Результаты в пг/мл
A
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
Ожидаемое
пг/мл
118
59,0
29,5
Наблюдаемое
пг/мл
239
110
54,9
26,3
% ожидаемого к
наблюдаемому
93%
93%
89%
B
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
96,5
48,3
24,1
193
101
44,9
23,9
105%
93%
99%
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
1:16
Неразведенный
1:2
1:4
1:8
1:16
132
66,0
33,0
153
76,5
38,3
212
106
52,9
264
128
53,5
25,2
>1000
306
162
77,6
41,7
>1000
423
217
109
49,2
97%
81%
76%
106%
101%
109%
103%
103%
93%
Образец
Разбавитель
C
D
Е
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ryan, WG: Endocrine Disorders – A Pathophysiiologic Approach, 2nd Edition Year Book Medical Publishers, Inc.
1980.
2. Watts, N.B., J.H. Keffer: Practical Endocrine Diagnosis, Third Edition, Lea and Febioer, 1982.
3. Ganong, WF. L.D. Alber, TC Lee: ACTH and the Regulation of Adrenocorticol Secretion,N. Engl. J. Med. 290 :
1006, 1974.
4. Tepperman, J: Metabolic and Endocrine Physiology, 4th Edition, Year Book Medical Publishers, Inc.,1981.
5. Odell, W.D., R. Horton, M.R. Pandian, J. Wong: The Use of ACTH and Cortisol Assays in the Diagnosis of
Endocrine Disorders. Nichols Institute Publication, 1989.
6. Radioimmunoassay Manual, Edited by A.L. Nichols and J.C. Nelson, 4th Edition Nichols Institute,1977.
7. Gold, E.M.: The Cushing’s Syndromes: Changing Views of Diagnosis and Treatment. Ann Intern. Med. 90:829,
1979.
8. Plasma Cortisol, RIA for Physicians, Edited by J.C. Travis, 1:8, Scientific Newsletter, Inc. 1976.
9. Krieger, D.T.: Physiopathology of Cusihing’s Disease, Endocrine Review 4:22-43, 1983.
10. Krieger, D.T., A.S. Liotta, T. Suda, A Goodgold, and E. Condon: Human Plasma Immunoreactive Lipotropin and
Adrenocorticotropin in Normal Subjects and in Patients with Pituitary-Adrenal Disease,J. Clin. Endocrinol Metab.
48:566-571, 1979.
10