Приказ Минздрава РТ от 15 июля 2010 года № 908

№ ___908___
__15.07.2010__
г. Казань
Об установлении
региональных стандартов технологий
исследования функции органов и тканей
с использованием специальных процедур
В соответствий с п.З.1 Положения о Министерстве здравоохранения Республики Татарстан,
утвержденного постановлением Кабинета Министров Республики Татарстан от 28 декабря 2007 г.
N 747 и в целях повышения качества оказания медицинской помощи пациентам при выполнении
простой медицинской услуги «Проба на совместимость перед переливанием крови»,
«Определение основных групп крови АВО», «Определение резус – принадлежности»,
«Исследование антител к антигенам эритроцитов.» в учреждениях здравоохранения Республики
Татарстан п р и к а з ы в а ю:
1. Установить:
1.1 Региональные стандарты «Технология выполнения простой медицинской услуги
12.05.004 «Проба на совместимость перед переливанием крови» (приложение №1), «Технология
выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 «Определение основных групп крови АВО»
(приложение №2), «Технология выполнения простой медицинской услуги 12.05.006 «Определение
резус - принадлежности» (приложение №3), «Технология выполнения простой медицинской
услуги 12.06.027 «Исследование антител к антигенам эритроцитов» (приложение №4).
2. Руководителям государственных, учреждений здравоохранения Республики Татарстан,
органов управления здравоохранением исполнительных комитетов муниципальных образований
Республики Татарстан, главным врачам муниципальных учреждений здравоохранения обеспечить
выполнение регионального стандарта «Технология выполнения простой медицинской услуги
12.05.004 «Проба на совместимость перед переливанием крови» (приложение №1), «Технология
выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 «Определение основных групп крови АВО»
приложение №2), «Технология выполнения простои медицинской услуги 12.05.006 «Определение
резус - принадлежности» (приложение №3), «Технология выполнения простой медицинской
услуги 12.06.027 «Исследование антител к антигенам эритроцитов» (приложение №4).
3. Начальнику Управления контроля качества медицинской помощи и развития отраслевой
стандартизации Министерства здравоохранения Республики Татарстан Г.В.Лысенко, главному
внештатному специалисту трансфузиологу Министерства здравоохранения Республики Татарстан
Е.А.Сидоруку обеспечить плановое мониторирование и оценку эффективности выполнения
утверждённых стандартов.
4. Определить ГУЗ «Республиканская станция переливания крови» Министерства
здравоохранения Республики Татарстан ведущим учреждением по мониторингу выполнения
утверждённых стандартов.
5. Начальнику Управления по лицензированию и контролю за соответствием качества
оказываемой медицинской помощи установленным федеральным стандартам Министерства
здравоохранения Республики Татарстан Р.Ф.Батыршину при проведении лицензирования
медицинской деятельности руководствоваться данными стандартами.
6. Контроль исполнения настоящего приказа возложить на первого заместителя министра
здравоохранения Республики Татарстан А.Ю.Вафина.
Министр
А.В.Кочнев
231 79 74
А.З.Фаррахов
91500.09.12.05.004
Приложение № 1
к приказу МЗ РТ
от 15.07.2010 г. № 908
ТЕХНОЛОГИЯ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПРОСТОЙ МЕДИЦИНСКОЙ УСЛУГИ
12.05.004 «Проба на совместимость перед переливанием крови»
Казань, 2010
Основанием для разработки "Технологии выполнения простой медицинской
услуги 12.05.004 "Проба на совместимость перед переливанием крови" является
Отраслевой классификатор "Простые медицинские услуги" (ОК ПМУ N
91500.09.0001-2001), утвержденный Приказом Министерства здравоохранения
Российской Федерации от 10 апреля 2001 г. N 113.
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Сокращения
ГУЗ РСПК МЗ РТ – Государственное учреждение здравоохранения
«Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения
Республики Татарстан»
КЛД – клиническая лабораторная диагностика
ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение
МЗ РТ – Министерство здравоохранения Республики Татарстан
МЗ РФ – Министерство здравоохранения Российской Федерации
ПМУ – простая медицинская услуга
РПГА – реакция прямой гемагглютинации
ТВ ПМУ - технология выполнения простой медицинской услуги
ГБН – гемолитическая болезнь новорожденных
ОПК – отделение переливания крови
1.2. Определения
Индивидуальная совместимость – это благоприятное сочетание крови донора
и реципиента по основным клинически значимым антигенам.
Группа крови АВО - это набор групповых антигенов А и В и естественных
анти-А, анти-В антител, который наследственно детерминирован и не меняется в
течение жизни.
Система Резус – одна из наиболее полиморфных антигенных систем
эритроцитов человека. Она включает около 50 серологически различных антигенов,
не считая слабых, переходных и парциальных форм. На эритроцитах человека
имеются 5 основных антигенов системы Резус (D, C, c, E, e). Наибольшее
клиническое значение имеет антиген D. Обладая выраженными иммуногенными
свойствами, антиген D в 95% является причиной гемолитической болезни
новорожденного, а также причиной тяжёлых посттрансфузионных осложнений.
Лиц, имеющих антиген D, относят к Rh+, не имеющих антиген D относят к Rh-.
В настоящее время известно более 236 антигенов эритроцитов, которые
распределяются в 29 генетически независимых системах. Первостепенное
клиническое значение имеют антигены систем АВО и Резус. Эритроцитарные
системы Kell, MNS, Levis, Duffi, Kidd имеют меньшее практическое значение, так
как они сравнительно редко вызывают сенсибилизацию. Эти системы становятся
значимыми при многократных гемотрансфузиях эритроцитной массы, повторных
беременностях. Антитела ко всем этим антигенам могут образоваться у человека
любой группы крови системы АВО, Резус (независимо от резус–принадлежности).
Они образуются при тех же условиях, что и антитела анти-D (многократные
гемотрансфузии эритроцитной массы, повторные беременности) и могут служить
причиной
посттрансфузионных
осложнениях
гемолитического
типа
и
гемолитической болезни новорожденных. Если реципиенту, в крови которого
имеются антитела, перелить кровь донора, эритроциты которого содержат антигены,
против которых направлены антитела, такая кровь будет разрушаться в организме
реципиента, т.е. она является для него несовместимой.
Агглютинация – это реакция взаимодействия антигена со специфическим
антителом, проявляется в виде агрегации (склеивания) эритроцитов.
Аутоантитела - это антитела, имеющие специфичность к собственным антигенам
индивида.
Аллоантитела – это антитела, имеющие специфичность к антигенам
эритроцитов, отсутствующим у индивида. Аллоантитела содержатся в сыворотке
индивида, не взаимодействуют с собственными антигенами эритроцитов, но
взаимодействуют с антигенами эритроцитов других индивидов и могут быть
выявлены с панелью типированных эритроцитов.
Полиагглютинабельность – способность исследуемого образца крови давать
агглютинацию со всеми образцами стандартных изогемагглютинирующих
сывороток, независимо от их групповой принадлежности.
Неспецифическая агглютинация – это агглютинация, неожиданная, атипичная,
не свойственная конкретной групповой антигенной системе. Неспецифические аутои аллоантитела не взаимодействуют с антигенами эритроцитов, а направлены
против иных химических структур, представленных на эритроцитах. На появление
неспецифической агглютинации влияют: белковый состав среды, солевой состав
среды, состояние свёртывающей системы крови, гормонального фона.
Гелевая методика – это метод постановки проб на индивидуальную
совместимость, основанный на комбинации методов агглютинации и гельфильтрации. Проводится с помощью пластиковых диагностических карточек,
которые состоят из микропробирок, заполненных полиакриламидным гелем и
соответствующими реагентами (нейтральным гелем и сывороткой Кумбса).
Компоненты крови – это трансфузионные среды, полученные из цельной
крови путём разделения их на отдельные фракции и консервирования.
Переносчики газов крови – это компоненты крови, содержащие эритроциты.
Ассортимент переносчиков газов крови представлен в отраслевом классификаторе
«Консервированная кровь и её компоненты», утверждённый приказом МЗ РФ от
31.01.2002 № 25 «О введении в действие
«Консервированная кровь и её компоненты».
отраслевого
классификатора
Корректоры плазменно-коагуляционного гемостаза – это компоненты крови,
содержащие плазменные факторы свёртывания крови или тромбоциты.
Ассортимент корректоров гемостаза и фибринолиза представлен в отраслевом
классификаторе «Консервированная кровь и её компоненты», утверждённый
приказом МЗ РФ от 31.01.2002 № 25 «О введении в действие отраслевого
классификатора «Консервированная кровь и её компоненты».
Средства коррекции иммунитета – это компоненты крови, содержащие
специфические антибактериальные антитела. Ассортимент средств коррекции
иммунитета представлен в отраслевом классификаторе «Консервированная кровь и
её компоненты», утверждённый приказом МЗ РФ от 31.01.2002 № 25 «О введении в
действие отраслевого классификатора «Консервированная кровь и её компоненты».
1.3. Сведения о разработчиках
В разработке «Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.004
«Проба на совместимость перед переливанием крови» участвовали специалисты
Министерства здравоохранения Республики Татарстан и Государственного
учреждения здравоохранения «Республиканская станция переливания крови
Министерства здравоохранения Республики Татарстан » (см. таблицу 1).
Таблица 1
Сведения о разработчиках
«Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.004
«Проба на совместимость перед переливанием крови »
ФИО
разработчиков
Лысенко Галина
Викторовна
Бурыкин Игорь
Михайлович
Кочнев
Александр
Владимирович
Закирова
Ильмира
Нуриахметовна
Сидорук Евгений
Александрович
Место работы, занимаемая
должность, степень, звание
Начальник Управления
качества медицинской
помощи и отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Начальник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Адрес места
Рабочий телефон
работы
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-73
Островского, д.11/6
Ведущий советник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Ведущий консультант
отдела отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Главный врач ГУЗ РСПК МЗ
РТ, главный внештатный
специалист трансфузиолог
МЗ РТ, к.м.н.
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-76
Островского, д.11/6
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-28-03
Сибгатуллина
Лилия
Нагимзяновна
Хамидуллина
Эльмира
Рашитовна
Гадыльшина
Райса Сагитовна
Бельская Елена
Евгеньевна
Заместитель главного врача
по медицинской части ГУЗ
РСПК МЗ РТ.
Заведующая
организационнометодическим отделом ГУЗ
РСПК МЗ РТ
Заведующая
иммунологическим
отделением ГУЗ РСПК МЗ
РТ
Врач клинической
лабораторной диагностики
иммунологического
отделения ГУЗ РСПК МЗ РТ
420029, г. Казань,
ул.Сибирский тракт,
д. 33
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 273-43-72
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
(843) 273-78-23
Рецензенты:
Д.Т.Сиразитдинов – главный специалист эксперт МЗ РТ по клинической
лабораторной диагностике.
Н.Н.Аксенова – заведующая кабинетом гемотрансфузий Государственного
учреждения здравоохранения «Республиканский онкологический диспансер МЗ
РТ», врач-хирург высшей категории, к.м.н.;
Д.Р.Мухамедов – врач анестезиолог-реаниматолог Муниципального
бюджетного учреждения здравоохранения «Апастовская центральная районная
больница».
1.4 Цели и задачи
Определение совместимости крови является основным методом профилактики
осложнений, возникающих при переливании консервированной крови и её
компонентов пациенту. Иммунологическая несовместимость между компонентами
крови и иммунной системой пациента является основой для развития
иммунологических посттрансфузионных осложнений и реакций (немедленных и
отсроченных).
ТВ ПМУ "Проба на совместимость перед переливанием крови" разработана с
целью нормативного обеспечения и унификации процесса выполнения простой
медицинской услуги 12.05.004 "Проба на совместимость перед переливанием крови"
в медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан.
ТВ ПМУ "Проба на совместимость перед переливанием крови" разработана
для решения следующих задач:
- нормативного обеспечения внедрения стандарта ТВ ПМУ "Проба на
совместимость перед переливанием крови";
- установления единых требований к оказанию ТВ ПМУ "Проба на совместимость
перед переливанием крови";
- унификации расчетов трудозатрат на выполнение ТВ ПМУ «Проба на
совместимость перед переливанием крови» в медицинских учреждениях на
территории Республики Татарстан;
- контроля качества и безопасности оказанной пациенту ПМУ «Проба на
совместимость перед переливанием крови» в медицинских учреждениях на
территории Республики Татарстан;
- проверки на соответствие установленным требованиям при проведении процедуры
лицензирования;
- защиты прав пациента и врача при разрешении спорных и конфликтных вопросов.
ТВ ПМУ представляет собой систематизированный свод медицинских правил и
условий, технического обеспечения, определяющий порядок и последовательность
действий, выполняемых медицинским персоналом.
При разработке ТВ ПМУ «Проба на совместимость перед переливанием крови»
использовались нормативные документы (приказы, инструкции, методические
указания МЗ РФ и МЗ РТ), результаты научных исследований.
2.
ТРЕБОВАНИЯ
ОТРАСЛЕВЫХ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПМУ
СТАНДАРТОВ
ТЕХНОЛОГИЙ
2.1. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, включая
требования к обеспечению безопасности
Проведение проб на индивидуальную совместимость проводят специалисты,
имеющие подготовку по вопросам иммуногематологии на специализированных
циклах
усовершенствования
на
базе
учреждений
дополнительного
профессионального образования и на базе учреждений службы крови РТ (см.
таблицу 2).
Таблица 2
Требования к специалистам для выполнения ПМУ «Проба на совместимость
перед переливанием крови»
Медицинское
учреждение
Стационар, в том
числе дневной
стационар в
амбулаторнополиклинических
условиях
Выполнение ПМУ Медицинский
«Проба
на персонал
совместимость
перед переливанием
крови»
Врач,
Перед каждым
непосредственно
переливанием крови проводящий
и её компонентов
трансфузию
Дополнительные
требования
к
медицинскому персоналу
Должны иметь
специальную подготовку
по вопросам
иммуногематологии на
специализированных
циклах
усовершенствования на
базе учреждений
дополнительного
профессионального
образования и на базе
учреждений службы
крови РТ не реже одного
раза в 5 лет
Все манипуляции проводить в медицинской одежде с использованием
индивидуальных средств защиты (медицинские перчатки, защитные очки или
щитки). С любыми образцами крови пациента следует обращаться как с
потенциальными переносчиками инфекционных заболеваний.
2.2. Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Таблица 3
Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Наименование
Условия оказания
Функциональное
назначение
Профилактика осложнений
12.05.004
"Проба
на Амбулаторно-поликлинические
совместимость
перед
переливанием крови"
12.05.004
"Проба
на Помощь в условиях стационара, в Профилактика осложнений
совместимость
перед том числе дневного стационара
переливанием крови"
2.3. Материальные ресурсы.
Для выполнения ПМУ «Проба на совместимость перед переливанием крови»
должно быть оснащено отдельное место (или специальное помещение), которое
оборудуется согласно требованиям приказа МЗ РФ №2 от 09.01.1998 г. «Об
утверждении инструкций по иммуносерологии».
2.3.1. Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения
Таблица 4
Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения, необходимые для
выполнения проб на совместимость, а также альтернативные приборы и изделия
медицинской техники.
Количество приборов,
Альтернативный прибор,
Наименование прибора, изделия инструментов,
изделие
медицинской
медицинской техники и др.
изделий
техники
медицинской техники
Проба на совместимость по группам крови системы АВО (на плоскости)
Стол лабораторный
1 шт.
Стул
Настольная лампа
Планшеты для
иммуногематологических
исследований
Пипетка Пастера
1 шт.
1 шт.
1 шт. на 1
исследование
Стеклянные палочки
(лопаточки)
Песочные часы на 5 минут
От 1 до 10 шт.
Настенная лампа
Тарелка белого цвета
фарфоровая или
эмалированная
Автоматическая пипетка
переменного объёма (20200 мкл)
Палочка из пластмассы
1 шт.
Секундомер
1 шт.
Стол с покрытием из
пластика
Лупа с 4-6-кратным увеличением 1 шт.
Штатив лабораторный на 10
1 шт.
гнёзд
Стеклянные стаканы
2 шт.
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная ОПН- 1 шт.
3
Проба на совместимость по системе Резус
с применением 33% раствора полиглюкина (в пробирке)
Стол лабораторный
1 шт.
Стол с покрытием из
пластика
Стул
1 шт.
Настольная лампа
1 шт.
Настенная лампа
Пробирка центрифужная
1 шт.
Пробирка биологическая
Пипетка Пастера
1 шт.
Автоматическая пипетка
переменного объёма (20200 мкл)
Песочные часы на 5 минут
1 шт.
Секундомер
Лупа с 4-6-кратным увеличением 1 шт.
Штатив лабораторный на 10
1 шт.
гнёзд
Стеклянные стаканы
2 шт.
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная ОПН- 1 шт.
Центрифуга лабораторная
3
СМ-6 М, ELMI
Проба на совместимость по системе Резус
с применением 10% раствора желатина (в пробирке)
Стол лабораторный
1 шт.
Стол с покрытием из
пластика
Стул
1 шт.
Настольная лампа
1 шт.
Настенная лампа
Баня водяная на 46-48 0С
Пипетка Пастера
1 шт.
1 шт.
Термостат на 46-480С
Автоматическая пипетка
переменного объёма (20200 мкл)
Пробирка центрифужная
Пробирки
тонкостенные 1 шт.
(вместимостью не менее 10 мл)
Песочные часы на 15 минут
1 шт.
Секундомер
Лупа с 4-6-кратным увеличением 1 шт.
Штатив лабораторный на 10
1 шт.
гнёзд
Стеклянные стаканы
2 шт.
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная ОПН- 1 шт.
Центрифуга лабораторная
3
СМ-6 М, ELMI
Проба на совместимость по системе АВО и системе Резус
с использованием гелевых диагностических карт
Стол лабораторный
1 шт.
Стол с покрытием из
пластика
Стул
1 шт.
Настольная лампа
1 шт.
Настенная лампа
Автоматическая пипетка
переменного объёма
Штатив лабораторный на 10
гнёзд
Стеклянные стаканы
Центрифуга лабораторная ОПН3
Центрифуга для гелевых карт
Инкубатор на 370С
Пробирка центрифужная
5-40 мкл 1 шт.
100-1000 мкл 1 шт.
1 шт.
2 шт.
1 шт.
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная
СМ-6 М, ELMI
1 шт.
1 шт.
1 шт.
Термостат на 370С
Пробирка биологическая
2.3.2. Реактивы
Для выполнения проб на индивидуальную совместимость перед трансфузией
крови и её компонентов необходимы реактивы, которые представлены в таблице 5.
Таблица 5
Реагенты, необходимые для постановки проб на совместимость
Количество
реактива,
Документ,
необходимое
регламентиНаименовадля
рующий
ние реактива
выполнения
использование
1-го
реактива
исследования
Требования к
Особенности
Сроки
и
обеспечению
уничтожения и
особенности
безопасности
обеззараживани
хранения
персонала при
я реактива или
реактива,
работе с
продуктов
работы с ним*
реактивом
реакций*
Хранить при
t+15…+25 0С.
Работа в медицинской спецодежде, медицинских
перчатках, защитных очках (щитках)
1-2 капли
(50-100 мкл)
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез.
средств с содержанием активного хлора, дезинфекция
лабораторной посуды производится с применением
дезинфицирующих средств, не содержащих активного
хлора.
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 №363 «Об утверждении
Инструкции по применению компонентов крови»
Проба на совместимость по системе АВО
на плоскости при комнатной температуре
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
3-5 мл
Хранить при
t+15…+25 0С
Раствор
желатина
10,0%
2 капли
(100 мкл)
3-5 мл
Хранить при
t+2…+8 0С
Хранить при
t+15…+25 0С
Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках,
защитных очках (щитках)
Хранить при
t+18…+20 0С
Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках,
защитных очках (щитках)
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с
содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной
посуды производится с применением дезинфицирующих
средств, не содержащих активного хлора.
1 капля
(50 мкл)
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с
содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной
посуды производится с применением дезинфицирующих
средств, не содержащих активного хлора
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 №363 «Об утверждении
Инструкции по применению компонентов крови»
Раствор
полиглюкина
33,0%
Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 №363 «Об утверждении
Инструкции по применению компонентов крови»
Проба на совместимость
с использованием 33 % раствора полиглюкина.
Проба на совместимость
с использованием 10 % раствора желатина
Инструкции,
прилагаемые
к диагностическим
карточкам
От 1/4 до 1/3
шт. в
зависимости
Хранить при
от
t+15…+25 0С.
используемой
диагностичес
кой карты.
Раствор для
приготовления
суспензии
исследуемы Инструкция,
х
прилагаемая
эритроцитов к раствору
От 0,5 до 1,0
мл в
зависимости Хранить при
от
t+2…+8 0С.
производител
я
Работа в медицинской спецодежде,
медицинских перчатках, защитных очках
(щитках)
Диагностиче
ские
карточки
Coombs+
Neutral
Сгустки крови обеззараживаются с помощью
дез. средств с содержанием активного хлора,
дезинфекция лабораторной посуды
производится с применением
дезинфицирующих средств, не содержащих
активного хлора.
Проба на совместимость по системе АВО и системе Резус
с использованием гелевых диагностических карт
* - Температура внутри холодильной камеры, где хранятся реактивы, контролируется средним
медработником дважды в день. Показания термометра регистрируются в «Журнале регистрации
температурного режима хранения диагностических стандартов для иммуногематологических
исследований» (см. приложение 1).
2.3.3. Прочий расходуемый материал
Для выполнения ПМУ «Проба на совместимость перед переливанием крови»
используется прочий расходуемый материал (см. таблицу 6).
Таблица 6
Наименование
Количество
Примечание
Медицинские перчатки
одноразовые
На 1 тампон: вата - 3,0 гр.,
бинт - 30 см.
1 пара на каждые 3 часа
работы
Раствор натрия хлорида, 0,9%
0,5 л
Спирт этиловый
медицинский, 70,0%
Дезинфицирующий раствор
3,0 гр. на 1 обработку
Для подсушивания пипетки
и стеклянной палочки
Заменить немедленно при
нарушении целостности или
сильном загрязнении.
Для промывания пипеток и
палочек
Для обработки рук персонала после окончания работы
Для дезинфекции
биологического материала,
лабораторной посуды и
рабочего места.
Ватно-марлевый тампон
Наконечники для автоматических пипеток переменного
объема, одноразовые
В соответствии с методическими указаниями по применению дез. средств, разрешённых к использованию в
РФ и РТ
4 шт. на 1 исследование
2.4. Характеристика методики выполнения ПМУ "Проба на совместимость
перед переливанием крови"
2.4.1 Требования к образцам крови.
Перед процедурой забора крови на проведение проб на совместимость у
реципиента уточнить его фамилию, имя и отчество. Взять сухую чистую пробирку,
на которую нанести следующую информацию о пациенте: Ф.И.О., дата забора
крови, для стационарных больных - номер медицинской карты. Кровь пациента
забрать из вены в количестве 3-5 мл и перенести в подписанную пробирку. Для
получения сыворотки пробирку с образцом крови оставить при комнатной
температуре не менее чем на 1 час или центрифугировать в лабораторной
центрифуге при скорости 1500-2000 об/мин. в течение 5 минут в экстренных
случаях. Использовать образец крови реципиента не более двухдневного срока
хранения при t+20С…+80С.
Не использовать для исследований гемолизированную кровь. При наличии
гемолиза процедуру взятия крови повторить.
Предтрансфузионный образец крови реципиента хранить при температуре
0
t+2 С…+80С в течение 5 суток. Это необходимо для дальнейшего исследования
крови реципиента в специализированной лаборатории службы крови при
возникновении посттрансфузионного осложнения.
В
случае
возникновения
посттрансфузионного
осложнения
предтрансфузионный образец крови реципиента и остатки трансфузионной среды
направить в специализированную лабораторию службы крови для исследования.
2.4.2 Требования к помещению.
Иммуногематологические исследования проводить в
естественным освещением, температура воздуха в помещении
пределах +150С …+250С.
помещении с
должна быть в
2.4.3 Общие требования к проведению проб на совместимость.
Перед трансфузией компонентов крови проводят пробы на индивидуальную
совместимость по системам АВО и Резус и биологическую пробу.
При проведении проб на индивидуальную совместимость по системе АВО
выявляется и совместимость по системе MNS, а при проведении проб на
индивидуальную совместимость по системе Резус выявляется совместимость и по
другим клинически значимым системам групп крови (Kell, MNS, Levis, Duffi, Kidd).
Пробы на совместимость непосредственно перед каждой трансфузией
проводит врач, производящий трансфузию консервированной крови и её
компонентов после проведения контрольных исследований по переопределению
групповой принадлежности крови реципиента и донора и переопределение резус –
принадлежности крови реципиента. Экстренность трансфузии не освобождает от
проведения проб на совместимость.
2.4.4 Требования к объемам
трансфузионной среды
исследований
в
зависимости
от
вида
2.4.4.1 Переливание переносчиков газов крови
Перед переливанием переносчиков газов крови провести пробы на
индивидуальную совместимость крови реципиента и донора, в том числе
аутодонора, по системам АВО и Резус, а также биологическую пробу после
проведения контрольных исследований групповой и резус-принадлежности крови
пациента и групповой принадлежности эритроцитов донора (аутодонора).
Пробы на совместимость по группам крови АВО и Резус провести отдельно,
они не могут заменить друг друга, так как антитела разного характера требуют
разных методик для своего выявления.
Пробу на индивидуальную совместимость по системе АВО провести по одной
из следующих методик: проба на совместимость на плоскости при комнатной
температуре или в гелевом тесте.
Пробу на индивидуальную совместимость по системе Резус провести по одной
из следующих методик: проба с применением 33% раствора полиглюкина, проба с
применением 10% раствора желатина или в гелевом тесте.
2.4.4.2 Переливание корректоров гемостаза и фибринолиза, средств коррекции
иммунитета.
Перед переливанием корректоров гемостаза и фибринолиза, средств
коррекции иммунитета крови провести биологическую пробу.
2.4.5 Порядок проведения проб на совместимость.
Целью проб на совместимость является предотвращение трансфузии
консервированной крови и её компонентов несовместимых с кровью реципиента.
Для проб на совместимость использовать сыворотку крови реципиента и образец
крови донора.
Если больному переливается консервированная кровь и её компоненты из
нескольких контейнеров, пробы на совместимость провести с каждым контейнером,
даже если на них обозначено, что компоненты крови получены от одного и того же
донора.
2.4.5.1 Пробы на индивидуальную совместимость по системе АВО
2.4.5.1.1 Проба на совместимость по группам крови системы АВО (на
плоскости)
Порядок проведения исследования:
Проба производится на планшете со смачиваемой поверхностью.
1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. и группу крови реципиента,
Ф.И.О. и группу крови донора и номер контейнера с кровью.
2. Из пробирки с исследуемой кровью реципиента осторожно взять пипеткой
сыворотку и нанести на планшет 1 большую каплю (100 мкл).
3. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая
приготовлена для трансфузии именно этому больному, взять маленькую каплю (10
мкл) донорских эритроцитов и нанести рядом с сывороткой реципиента
(соотношение сыворотки и эритроцитов 10:1).
3. Капли перемешать стеклянной палочкой.
4. Наблюдать за реакцией 5 минут при постоянном покачивании планшета. По
истечении этого времени добавить 1-2 капли (50-100 мкл) раствора натрия хлорида,
0,9%.
Трактовка результатов реакции.
Реакция в капле может быть положительной или отрицательной.
а) Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов,
агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных
агрегатов. Кровь не совместима, переливать нельзя! (см. рисунок 1).
Рисунок 1. Кровь реципиента и донора несовместима
б) При отрицательном результате (-) капля остаётся гомогенно окрашенной в
красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Кровь донора совместима с
кровью реципиента (см. рисунок 2).
Рисунок 2. Кровь донора совместима с кровью реципиента
2.4.5.2 Пробы на индивидуальную совместимость по системе Резус
2.4.5.2.1 Проба на совместимость с использованием 33 %
полиглюкина.
Порядок проведения исследования:
раствора
1. Для исследования взять пробирку (центрифужную или любую другую
вместимостью не менее 10 мл). Промаркировать пробирку, для чего указать Ф.И.О.
и группу крови реципиента и Ф.И.О донора, номер контейнера с кровью.
2. Из пробирки с исследуемой кровью реципиента осторожно взять пипеткой
сыворотку и внести 2 капли (100 мкл) на дно пробирки.
3. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая
приготовлена для трансфузии именно этому больному, взять одну каплю (50 мкл)
донорских эритроцитов внести в эту же пробирку, добавить 1 каплю (50 мкл) 33%
раствора полиглюкина.
5. Содержимое пробирки перемешать путём встряхивания и затем медленно
поворачивать по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы
содержимое растекалось по ее стенкам. Эту процедуру выполнять в течение пяти
минут.
6. Через пять минут в пробирку добавить по 3-5 мл физ. раствора. Содержимое
пробирок перемешать 2-3-кратным перевертыванием пробирок (не встряхивая!)
Трактовка результатов реакции.
Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом
или через лупу.
Если в пробирке наблюдается агглютинация в виде взвеси мелких или
крупных красных комочков на фоне просветлённой или полностью обесцвеченной
жидкости значит, кровь донора не совместима с кровью реципиента. Переливать
нельзя!
Если в пробирке равномерно окрашенная слегка опалесцирующая жидкость без
признаков агглютинации эритроцитов – это значит, что кровь донора совместима с
кровью реципиента в отношении антигенов системы Резус и другим клинически
значимым системам (см. рисунок 3).
Агглютинация естькровь несовместима.
Агглютинации неткровь совместима.
Рисунок 3. Результаты исследования проб на совместимость по системе Резус (с
использованием 33% раствора полиглюкина и 10% раствора желатина).
2.4.5.2.2 Проба на совместимость с использованием 10 % раствора желатина.
Раствор желатина необходимо тщательно просмотреть перед употреблением.
При помутнении или появлении хлопьев, а также при потере свойств застудневать
при t+4 0С…+8 0С желатин непригоден.
Порядок проведения исследования:
1. Для исследования взять пробирку (ёмкость не менее 10 мл). Промаркировать
пробирку, для чего указать Ф.И.О., группу крови реципиента и донора, номер
контейнера с кровью.
2. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая
приготовлена для трансфузии именно этому больному, взять одну каплю (50 мкл)
донорских эритроцитов внести в пробирку, добавить 2 капли (100 мкл) 10%
раствора желатина, прогретого на водяной бане до разжижения при температуре
t+46 0С…+48 0С. Из пробирки с кровью реципиента осторожно взять пипеткой
сыворотку и внести 2 капли (100 мкл) на дно пробирки.
3. Содержимое пробирки встряхнуть для перемешивания и поместить на водяную
баню (t+46 0С…+48 0С) на 15 минут или в термостат (t+460С…+480С) на 45 минут.
4.После окончания инкубации пробирку извлечь, добавить 5-8 мл физ. раствора,
содержимое пробирки перемешать путём одно-двухкратного перевёртывания и
оценить результат исследования.
Трактовка результатов реакции.
Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом
или через лупу, а затем просмотреть путём микроскопирования. Для этого капля
содержимого пробирки поместить на предметное стекло и просмотреть под малым
увеличением.
Если в пробирке наблюдается агглютинация в виде взвеси мелких или крупных
красных комочков на фоне просветлённой или полностью обесцвеченной жидкости
- это значит, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна
быть ему перелита.
Если в пробирке равномерно окрашенная, слегка опалесцирующая жидкость
без признаков агглютинации эритроцитов - это значит, что кровь донора совместима
с кровью реципиента в отношении антигенов системы Резус и другим клинически
значимым системам (см. рисунок 3).
2.4.5.3 Проба на совместимость в гелевом тесте
При постановке в гелевом тесте пробы на совместимость проводятся сразу по
системе АВО (в микропробирке Neutral) и проба на совместимость по системе Резус
(в микропробирке Coombs).
Порядок проведения исследования:
1. Перед исследованием проверить диагностические карты. Не использовать
карты, если в геле имеются взвешенные пузырьки, микропробирка не содержит
надосадочной жидкости, наблюдается уменьшение объёма геля или его
растрескивание.
2. Микропробирки подписываются (фамилия реципиента и номер донорского
образца).
. Из сегмента трубки пластикового мешка с трансфузионной средой, которая
приготовлена для трансфузии именно этому больному, автоматической пипеткой
взять 10 мкл донорских эритроцитов поместить в центрифужную пробирку.
4. Добавить 1 мл разводящего раствора.
5. Вскрыть необходимое количество микропробирок (по одной микропробирке
Coombs и Neutral).
6. Автоматической пипеткой внести по 50 мкл разведенных донорских
эритроцитов в микропробирки Coombs и Neutral.
7. Добавить в обе микропробирки по 25 мкл сыворотки реципиента.
8. Инкубировать при t+370С 15 минут.
9. После инкубации карточку центрифугировать в центрифуге для гелевых карт
(время и скорость задаются автоматически).
Трактовка результатов:
Если осадок эритроцитов расположен на дне микропробирки, то проба
считается совместимой (см. рисунок 4 №1). Если агглютинаты задерживаются на
поверхности геля или в его толще, то проба несовместима (см. рисунок 4 №№2-6).
№1
№2
№3
№4
№5
№6
Рисунок 4. Результаты исследования проб на индивидуальную совместимость по
системе Резус гелевой методикой.
2.4.5.4 Биологическая проба
Для проведения биологической пробы используются подготовленные к
трансфузии кровь и её компоненты.
Биологическую пробу проводят независимо от объема гемотрансфузионной
среды и скорости ее введения. При необходимости переливания нескольких доз
крови и её компонентов биологическую пробу проводят перед началом переливания
каждой новой дозы.
Техника проведения
Однократно переливается 10 мл гемотрансфузионной среды со скоростью 2-3
мл (40-60 капель) в минуту, затем переливание прекращают и в течение 3 мин
наблюдают за реципиентом, контролируя у него пульс, дыхание, артериальное
давление, общее состояние, цвет кожи, измеряют температуру тела. Такую
процедуру повторяют еще дважды. Появление в этот период даже одного из таких
клинических симптомов, как озноб, боли в пояснице, чувство жара и стеснения в
груди, головной боли, тошноты или рвоты, требует немедленного прекращения
трансфузии и отказа от переливания данной трансфузионной среды. Образец крови
направить в специализированную лабораторию службы крови для проведения
индивидуального подбора эритроцитной массы.
Экстренность трансфузии компонентов крови не освобождает от выполнения
биологической пробы. Во время ее проведения возможно продолжение переливания
солевых растворов.
При переливании крови и её компонентов под наркозом о реакции или
начинающихся
осложнениях
судят
по
немотивированному
усилению
кровоточивости в операционной ране, снижению артериального давления и
учащению пульса, изменению цвета мочи при катетеризации мочевого пузыря, а
также по результатам пробы на выявление раннего гемолиза. В таких случаях
переливание данной гемотрансфузионной среды прекращается, врач-хирург и врач
анестезиолог-реаниматолог совместно с врачом-трансфузиологом обязаны выяснить
причину гемодинамических нарушений. Если ничто, кроме трансфузии, не могло их
вызвать, то данная гемотрансфузионная среда не переливается, вопрос дальнейшей
трансфузионной терапии решается ими в зависимости от клинических и
лабораторных данных.
Биологическая проба, также как и проба на индивидуальную совместимость,
обязательно проводится и в тех случаях, когда переливается индивидуально
подобранная в лаборатории или фенотипированная эритроцитная масса или взвесь.
После окончания переливания донорский контейнер с небольшим количеством
оставшейся гемотрансфузионной среды, использованная для проведения проб на
индивидуальную совместимость, подлежит обязательному сохранению в течение 48
часов при температуре t+20С…+80С.
Реципиент после переливания соблюдает в течение двух часов постельный
режим и наблюдается лечащим или дежурным врачом. Ежечасно ему измеряют
температуру тела, артериальное давление, фиксируя эти показатели в медицинской
карте больного. Контролируется наличие и почасовой объем мочеотделения и
сохранение нормального цвета мочи. Появление красной окраски мочи при
сохранении прозрачности свидетельствует об остром гемолизе. На следующий день
после переливания обязательно производят клинический анализ крови и мочи.
При амбулаторном проведении гемотрансфузии реципиент после окончания
переливания должен находиться под наблюдением врача не менее трех часов.
Только при отсутствии каких-либо реакций, наличии стабильных показателей
артериального давления и пульса, нормальном мочеотделении он может быть
отпущен из лечебного учреждения.
2.4.5.5 Регистрация результатов проб на совместимость
Результат контрольных исследований проб на совместимость (раздельно по
каждому виду) занести в трансфузионную карту медицинской карты больного (см.
приложение 2).
2.4.6 Индивидуальный подбор
Индивидуальный подбор переносчиков газов крови проводится в
учреждениях службы крови (СПК или ОПК) врачом клинической лабораторной
диагностики, имеющим специальную подготовку по иммуногематологии на
специализированных циклах и на базе учреждений службы крови РТ.
2.4.6.1 Показания к индивидуальному подбору
 отягощённый
трансфузионный
анамнез
(наличие
в
анамнезе
посттрансфузионных реакций или осложнений на предыдущие трансфузии,
многократные трансфузии)
 отягощённый акушерский анамнез (наличие в анамнезе рождения детей с
ГБН, мёртворождений, выкидышей на поздних сроках);
 гемолитическая болезнь новорожденных;
 затруднения при определении групповой и/или резус-принадлежности крови
пациента,
 положительный или сомнительный результат хотя бы одной из проб на
индивидуальную совместимость или биологической пробы;
 наличие изоиммунных антиэритроцитарных антител любой специфичности;
 многократные трансфузии.
2.4.6.2 Требования к образцам крови, направляемым на индивидуальный
подбор
Образец крови для проведения индивидуального подбора берётся в две
пробирки: 1 пробирка с консервантом (3 мл),
2 пробирка без консерванта (5 мл).
В качестве консерванта использовать раствор ЭДТА или раствор цитрата
натрия 5% Соотношение исследуемой крови и консерванта для цитрата натрия 10:1,
для ЭДТА 100:1.
При необходимости индивидуального подбора новорожденному ребёнку
необходимы две пробирки:
1 пробирка с образцом крови ребёнка (не менее 1,5 мл),
2 пробирка с образцом крови матери (5 мл).
Обе пробирки должны быть обязательно подписаны (Ф.И.О., дата забора, №
истории болезни),
Направление оформляется согласно приложению № 3.
Индивидуальный подбор переносчиков газов крови является предварительной
процедурой. Если эрироцитная масса или взвесь подобраны реципиенту
индивидуально в специализированной лаборатории врач, выполняющий
трансфузию, перед переливанием определяет группу крови и резус–
принадлежность реципиента, группу крови донора и проводит только одну пробу
на совместимость–на плоскости при комнатной температуре и в начале
трансфузии–биологическую пробу.
2.5. Дополнительные сведения об особенностях выполнения
Существуют категории реципиентов, у которых встречаются затруднения при
проведении проб на индивидуальную совместимость.
Таблица 7
Категории пациентов с затруднениями при проведении проб на
индивидуальную совместимость
Категория
Индивидуальные
Характер
пациентов
Новорожденные
особенности
Присутствие в крови
новорожденного
материнских
аллоантител
затруднения
Несовместимость
хотя бы по одной
из проб
Беременные
Способ решения
проблемы
При положительном результате
хотя бы одной из проб образец
крови новорожденного и матери
направить в
специализированную
лабораторию для
индивидуального подбора.
Наличие
Несовместимость Направить образец крови
изоиммунных анти- хотя бы по одной реципиента (беременной,
эритроцитарных
из проб
роженицы) в
антител.
специализированную
лабораторию для
индивидуального подбора.
Наличие
Несовместимость Провести индивидуальные
неспецифических
хотя бы по одной пробы на совместимость в
алло- и/или
из проб
гелевом тесте или направить
аутоантител
образец крови реципиента в
специализированную
лабораторию службы крови для
индивидуального подбора.
Больные с
гематологически
ми или
онкологическим
и заболеваниям,
а также
пациенты с
другими видами
патологий
(ожоги, цирроз
печени, сепсис и
др.)
У
различных Наличие анти-А1
категорий
антител (экстра
пациентов
агглютинина α1)
Массивная
гемотрансфузия или
трансфузия
несовместимых
переносчиков газов
крови по системе
АВО и (или) системе
Резус
Внутривенное
введение растворов
кровезаменителей.
Несовместимость
по системе АВО
Сомнительные
результаты проб
на совместимость
Сомнительные
результаты проб
на совместимость
Направить образец крови
реципиента в
специализированную
лабораторию службы крови для
индивидуального подбора.
Направить образец крови
реципиента в
специализированную
лабораторию службы крови для
индивидуального подбора.
Направить образец крови
реципиента в
специализированную
лабораторию службы крови для
индивидуального подбора.
2.6. Требования к режиму труда, отдыха, лечения, реабилитации, диетическим
назначениям и ограничениям, к подготовке пациента в процессе выполнения
Технологии
Дополнительные рекомендации, назначения и ограничения режима труда,
отдыха, лечения или реабилитации не предусмотрены.
Диетические назначения и ограничения не предусмотрены.
Для получения достоверных результатов выполнения ПМУ «Проба на
совместимость перед переливанием крови» забор образца крови пациента
производить до проведения инфузионной терапии растворами кровезаменителей.
приложение 1
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ ТЕМПЕРАТУРНОГО РЕЖИМА ХРАНЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ
ДЛЯ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
1. Журнал ведется отдельно для каждого холодильника,
предназначенного для хранения диагностических стандартов.
2. Показания термометра регистрируются ежедневно.
3. Страницы должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
Дата контроля
Показания термометра
Утро
Вечер
Подпись ответственного
лица
Принятые меры
приложение 2
ТРАНСФУЗИОННАЯ КАРТА № ________
Дата трансфузии ___________________
Реципиент:
Ф.И.О._____________________________________
АД____________Ps___________Т˚С_____________
Показана трансфузия _________________________
(указать наименование трансфузионной среды)
___________________________________________
Трансфузионный анамнез _____________________
___________________________________________
Акушерский анамнез _________________________
___________________________________________
с целью ____________________________________
Результат контрольной проверки группы крови
по АВО ____________ Резус __________________
Донор (ауто):
(нужное подчеркнуть)
Ф.И.О._____________________________________
Индивидуальный № __________________________
Группа крови по АВО________ Резус___________
(по данным этикетки)
Результат контрольной проверки группы крови
донора по АВО______________________________
Использованы диагностические стандарты:
1)Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО или цоликлоны (нужное подчеркнуть) следующих
серий:
__________/____________годен до______________
__________/____________годен до______________
__________/____________годен до______________
__________/____________годен до______________
2) Универсальный реагент антирезус Rh0(D) или цоликлон анти-D Супер (нужное подчеркнуть) следующих
серий: ________________годен до_______________
Паспорт трансфузионной среды
Результаты
проб
совместимость
Перелита трансфузионная среда
Наименование
Инд. подбор крови
Подготовка к
переливанию
Фильтрация
Ресуспендирование
Способ и скорость
трансфузии
Объем
Продолжительность
трансфузии
АВО
Изготовитель
на
Резус
Дата заготовки
Биол.
проба
с
до
Наблюдение за реципиентом
Ранний посттрансфузионный период
В течение
трансфузии
Жалобы
Через
1 час
Через
2 часа
Через
3 часа
(для
амбл.
б-ных)
Первые сутки после трансфузии
Общий
Анализ
анализ
крови
от Суточный
мочи
от ________
диурез
_________
Введено
Объективно
АД
Ps
T°C
Первая
порция мочи:
цвет
кол-во
Выделено
Врач _______________________________________
Verte!
Место для вклеивания
этикетки трансфузионной среды
Место для вклеивания результатов
индивидуального подбора крови
Согласие реципиента
на операцию переливания компонентов крови
Я, ________________________________________________________________________
получил разъяснения по поводу операции переливания крови. Мне объяснены лечащим врачом цель
переливания, его необходимость, характер и особенности процедуры, ее возможные последствия, в случае
развития которых я согласен на проведение всех нужных лечебных мероприятий. Я извещен о вероятном
течении заболевания при отказе от операции переливания компонентов крови.
Я также получил информацию об альтернативных методах лечения.
Беседу провел врач _______________ (подпись врача). «___»__________20
г.
Пациент согласился с предложенным планом лечения, в чем расписался собственноручно
______________________________________________ (подпись пациента)
или расписался ___________________________________________ (подпись, Ф.И.О.)
В случае, когда состояние гражданина не позволяет ему выразить свою волю, а медицинское
вмешательство неотложно,
Решение консилиума врачей
_________________________________
__________________________________
__________________________________
или подпись лечащего (дежурного) врача с последующим уведомлением должностных лиц
медицинского учреждения ______________________________________
Инструкция
по заполнению трансфузионной карты.
1. На каждое переливание реципиенту компонентов крови, в том числе аутокрови,
аутокомпонентов заполняется трансфузионная карта и вклеивается в
медицинскую карту стационарного (амбулаторного) больного в виде
трансфузионной карты.
2. На оборотной стороне трансфузионной карты регистрируется в установленной
форме согласие реципиента на проведение трансфузии.
3. Номер трансфузионной карты указывается в соответствии с порядковым числом
трансфузии реципиенту.
4. В раздел «Реципиент» вносится результат контрольной проверки перед
трансфузией группа крови реципиента по системам АВО и Резус.
5. В строке «Трансфузионный анамнез» необходимо отразить количество
трансфузий и реакций на них. В строке «Акушерский анамнез» – количество
беременностей, родов, абортов, наличие самопроизвольных выкидышей,
мертворождений, гемолитической болезни новорожденных.
6. В раздел «Донор» вносится результат контрольного переопределения группы
крови донора по системе АВО. В случае переливания корректоров гемостаза и
фибринолиза, а также средств коррекции иммунитета, переопределение группы
крови донора по системе АВО не требуется.
7. В раздел «Паспорт трансфузионной среды» данные об изготовителе, дате
заготовке переписываются с этикетки трансфузионной среды. После окончания
трансфузии этикетка открепляется от контейнера с компонентом крови и
вклеивается на оборотную сторону трансфузионной карты.
8. В раздел «Перелита трансфузионная среда»:
- в строке «Наименование» указывается наименование компонента крови в
соответствии с этикеткой;
- в строке «Индивидуальный подбор крови»
указывается лаборатория,
учреждение, специалистами которого выполнен индивидуальный подбор;
- в строке «Подготовка к переливанию» указывается способ, температура и
продолжительность подготовки трансфузионной среды к переливанию;
- в строке «Фильтрация» указывается тип фильтра, его изготовитель;
- строка «Ресуспендирование» заполнятся при добавлении перед трансфузией в
контейнер с компонентом крови 0,9% раствора натрия хлорида изотонического с
указанием его объема, № серии и изготовителя.
- в строке «Объем» указывается объем перелитой трансфузионной среды.
9. Наблюдение за реципиентом осуществляется во время трансфузии и в течение
двух часов после трансфузии. При проведении трансфузии в амбулаторных
условиях продолжительность наблюдения увеличивается до трех часов.
приложение 3
Направление на СПК (ОПК)
на определение групповой и резус – принадлежности,
индивидуальный подбор
(нужное подчеркнуть)
Наименование ЛПУ____________________________ отделение____________________
Ф.И.О. врача, направившего образец крови__________________________________
Контактный телефон______________________________________________________
Ф.И.О. пациента__________________________________________________________
Дата и год рождения_______________ № медицинской карты __________________
Диагноз: _________________________________________________________________
Трансфузионный анамнез (кол-во трансфузий и реакции на них) __________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
Акушерский
анамнез
(кол-во
беременностей,
кол-во
родов,
ГБН
детей,
выкидыши,
мертворождения, аборты) ____________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Результаты иммуногематологического исследования крови, полученные в ЛПУ:
Группа крови по АВО __________________________________
Резус – принадлежность ________________________________
Наличие антиэритроцитарных аллоантител________________
Наименование компонентов крови, необходимых для трансфузии___________________
____________________________________________________________________________
Дата_________________________________Подпись врача_________________________
Примечание: пробирка с образцом крови должна быть промаркирована (Ф.И.О. пациента,
дата взятия крови, № медицинской карты).
Если Hb пациента ниже 70 г/л, для определения групповой и резус – принадлежности,
проведения индивидуального подбора необходимо взять две пробирки:
1 пробирка с консервантом (3 мл),
2 пробирка без консерванта (5 мл).
Литература (нормативные документы)
1. Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 № 2 «Об утверждении инструкций по
иммуносерологии»
2. Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 № 363 «Об утверждении Инструкции по
применению компонентов крови»
3. Приказ МЗ РТ от 13.05.1999 № 367 «О мерах по предупреждению
осложнений при переливании компонентов, препаратов крови, кровезаменителей»
4. Приказ МЗ РТ от 05.08.2004 №1135 «О совершенствовании работы по
профилактике посттрансфузионных осложнений в учреждениях здравоохранения
Республики Татарстан»
5. Приказ МЗ СССР № 700 от 23.05.1985 г. «О мерах по дальнейшему
предупреждению осложнений при переливании крови, ее компонентов, препаратов
и кровезаменителей»
6. Приказ МЗ РТ от 27.04.2004 г. № 691 «О совершенствовании
преконцепционной,
пренатальной
и
постнатальной
профилактики
иммуноконфликтной беременности в Республике Татарстан»
7. Приказ МЗ РФ от 25.12.1997 г. №380 «О состоянии и мерах по
совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в
учреждениях здравоохранения Российской Федерации».
8. Приказ МЗ РТ от 16.07.2004 г. № 1047 «О порядке получения, учета и
хранения компонентов крови»
9. Методические указания № 52001-109 МЗРФ, РНИИ гематологии и
трансфузиологии
«Требования
к
проведению
иммуногематологических
исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ», Санкт- Петербург, 2002 г.
10. Методические рекомендации МЗ РФ «Алгоритмы исследования антигенов
эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях»,
Санкт- Петербург, 2000 г.
11. Методическое письмо Минздравсоцразвития № 15-4/3118-09 от 10.10.2008 «О
порядке проведения иммуногематологических исследований у беременных,
рожениц, плодов и новорожденных».
12. Методические указания «Организация иммуносерологических исследований
(определение группы крови и резус фактора) больным в лабораториях лечебнопрофилактических учреждений г. Самары и Самарской области».
13. Инструкция о порядке проведения иммуногематологических исследований
пациентов в учреждениях здравоохранения Санкт-Петербурга, 2005 г.
14. Инструкции по использованию гелевой диагностической системы
15. «Групповые антигены эритроцитов. Концепция совместимости» С.И.Донсков,
В.А.Мороков, И.В.Дубинин, Москва, 2008 г.
16. «Группы крови человека. Основы иммуногематологии» Н.В.Минеева, СанктПетербург, 2004 г.
17. Пособие для врачей «Посттрансфузионные гемолитические осложнения
(причины, изосерологическая диагностика и профилактика)» утверждённое МЗ РФ.
Санкт-Петербург, 1997 г.
91500.09.12.05.005
Приложение № 2
к приказу МЗ РТ
от 15.07.2010 г. № 908
ТЕХНОЛОГИЯ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПРОСТОЙ МЕДИЦИНСКОЙ УСЛУГИ
12.05.005 «Определение основных групп крови АВ0»
Казань, 2010
Основанием для разработки "Технологии выполнения простой медицинской
услуги 12.05.005 «Определение основных групп крови АВ0», является Отраслевой
классификатор "Простые медицинские услуги" (ОК ПМУ N 91500.09.0001-2001),
утвержденный Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от
10 апреля 2001 г. N 113.
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1 Сокращения
ГУЗ РСПК МЗ РТ – Государственное учреждение здравоохранения
«Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения
Республики Татарстан»
КЛД – клиническая лабораторная диагностика
ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение
МЗ РТ – Министерство здравоохранения Республики Татарстан
МЗ РФ – Министерство здравоохранения Российской Федерации
ПМУ – простая медицинская услуга
РПГА – реакция прямой гемагглютинации
ТВ ПМУ - технология выполнения простой медицинской услуги
1.2 Определения
Простая медицинская услуга - неделимая услуга, выполняемая по формуле
«пациент» + «специалист» = «один элемент профилактики, диагностики или
лечения».
Иммуногематология – наука о групповых свойствах крови.
Группа крови АВО – это набор групповых антигенов А и В и естественных
анти-А, анти-В антител, который наследственно детерминирован и не меняется в
течение жизни.
Групповые антигены (агглютиногены) А и В – это структурные образования,
расположенные на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающие
способностью взаимодействовать с соответствующими антителами и образовывать
комплекс антиген-антитело. Групповые антигены А и В обладают высокой
иммуногенностью, что и определяет их клиническое значение в развитии
немедленных посттрансфузионных осложнений гемолитического типа и
гемолитической болезни новорожденных. Антиген А может быть представлен
слабыми вариантами, в связи с чем в группах крови А(II) и АВ(IV) выделяют
подгруппы А1(II), А2(II), А1В(IV), А2В(IV) соответственно. Эритроциты подгруппы
А2 обладают пониженными агглютинабельными свойствами. Слабо выраженная
агглютинация может остаться незамеченной, и лица подгруппы А2 могут быть
ошибочно отнесены к группе О(I), а лица с подгруппой А2В (IV) могут быть
причислены к группе В(III).
Естественные
анти-А,
анти-В
антитела
(агглютинины)
–
это
иммуноглобулины классов IgM, IgG, IgА, которые постоянно находятся в сыворотке
крови человека без всякого иммунного стимула. Они являются врожденными
(регулярными) и не меняются в течение жизни. В сыворотке крови примерно 1%
лиц, имеющих подгруппу А2(II), и почти 25% лиц, имеющих подгруппу А2В(IV),
содержатся
экстраагглютинины
α1
(анти-А1
антитело),
специфически
взаимодействующее с эритроцитами А1(II), А1В(IV). Они не активны при 370С и
клинического значения не имеют, однако вызывают агглютинацию эритроцитов при
проведении проб на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента.
Иммунные групповые анти-А, анти-В антитела - это антитела,
вырабатываемые индивидуумом в ответ на внедрение отсутствующих групповых
антигенов А, или В, или А и В.
Определение группы крови АВО – это идентификация антигенов и антител с
помощью иммунологических стандартов (стандартных изогемагглютинирующих
сывороток, стандартных эритроцитов АВО или цоликлонов анти-А, анти-В, антиАВ).
Прямой метод – это метод определения группы крови АВО по групповым
антигенам А и В, основанный на РПГА. Прямой метод выполняется при помощи
стандартных изогемагглютинирующих сывороток или цоликлонов анти-А, анти-В,
анти-АВ.
Перекрёстный метод – это метод определения группы крови АВО по
одновременному выявлению групповых антигенов А и В и естественных анти-А,
анти-В антител, основанный на РПГА.
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки - это поликлональные
иммунологические стандарты, приготовленные из крови нескольких человек, и
содержащие естественные анти-А, анти-В антитела. Предназначены для выявления
групповых антигенов А и В. Представляют собой прозрачную жидкость,
окрашенную в соответствии с групповой принадлежностью и расфасованную в
ампулы или флаконы.
Стандартные эритроциты АВО - это иммунологические стандарты,
приготовленные из эритроцитной массы специально отобранных доноров.
Предназначены для выявления естественных анти-А, анти-В антител перекрёстным
методом.
Цоликлоны
анти-А,
анти-В,
анти-АВ
это
моноклональные
иммунологические стандарты, приготовленные из концентрата асцитной жидкости
мышей – носителей анти-А, анти-В гибридом. Предназначены для выявления
групповых антигенов А и В. Представляют собой прозрачную жидкость,
окрашенную в соответствии с групповой принадлежностью и расфасованную во
флаконы.
Агглютинация – это реакция взаимодействия антигена со специфическим
антителом, проявляется в виде агрегации (склеивания) эритроцитов.
Аутоантитела – это антитела, имеющие специфичность к собственным
антигенам индивида.
Гелевая методика – это метод определения группы крови АВО, основанный на
комбинации методов агглютинации и гель-фильтрации. Проводится с помощью
пластиковых диагностических карточек, которые состоят из микропробирок,
заполненных полиакриламидным гелем и соответствующими реагентами.
Иммуногенность – способность антигена вызвать иммунный ответ.
Неспецифическая агглютинация – это агглютинация неожиданная, атипичная,
не свойственная конкретной групповой антигенной системе. В основе
неспецифической агглютинации лежат определённые специфические механизмы.
На появление неспецифической агглютинации влияют белковый состав среды,
солевой состав среды, состояние свёртывающей системы крови гормональный фон.
Полиагглютинабельность – способность исследуемого образца крови давать
агглютинацию со всеми образцами стандартных изогемагглютинирующих
сывороток, независимо от их групповой принадлежности.
1.3 Номенклатура системы групп крови АВО
Принято буквенно-цифровое обозначение групп крови АВО, которое
включает в себя буквенное обозначение антигена (О, А, В или АВ), цифровое
обозначение (римскими цифрами I, II, III, IV), а также буквенное обозначение
антител. По современной классификации антитела обозначают как анти-А и анти-В,
взамен α- и β-изогемагглютининов (см. таблицу 1).
Таблица 1
Буквенно-цифровое обозначение групп крови АВО
Группа крови АВО
Первая
Вторая
Третья
Четвертая
Ранее принятое обозначение
Оαβ(I)
Аβ(II)
Вα (III)
АВ0 (IV)
Современное обозначение
О (I) анти-АВ
А (II) анти-В
В (III) анти-А
АВ0 (IV)
В настоящее время для обозначения групп крови возможно использование
ранее принятого и современного обозначения групп крови по системе АВО.
На этикетках стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО,
выпускаемых учреждениями службы крови МЗ РТ, используется как ранее
принятое, так и современное обозначения групп крови АВО.
1.4 Сведения о разработчиках
В разработке «Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.005
«Определение основных групп крови АВ0» участвовали специалисты Министерства
здравоохранения Республики Татарстан и Государственного учреждения
здравоохранения «Республиканская станция переливания крови Министерства
здравоохранения Республики Татарстан» (см. таблицу 2).
Таблица 2
Сведения о разработчиках
«Технологии выполнения простой медицинской услуги
12.05.005 «Определение основных групп крови АВ0»
ФИО
разработчиков
Лысенко Галина
Викторовна
Бурыкин Игорь
Михайлович
Кочнев
Александр
Владимирович
Закирова
Ильмира
Нуриахметовна
Сидорук Евгений
Александрович
Сибгатуллина
Лилия
Нагимзяновна
Хамидуллина
Эльмира
Рашитовна
Гадыльшина
Райса Сагитовна
Бельская Елена
Евгеньевна
Место работы, занимаемая
должность, степень, звание
Начальник Управления
качества медицинской
помощи и отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Начальник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Адрес места
Рабочий телефон
работы
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-73
Островского, д.11/6
Ведущий советник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Ведущий консультант
отдела отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Главный врач ГУЗ РСПК
МЗ РТ, главный внештатный
специалист трансфузиолог
МЗ РТ, к.м.н.
Заместитель главного врача
по медицинской части ГУЗ
РСПК МЗ РТ.
Заведующая
организационнометодическим отделом ГУЗ
РСПК МЗ РТ
Заведующая
иммунологическим
отделением ГУЗ РСПК МЗ
РТ
Врач клинической
лабораторной диагностики
иммунологического
отделения ГУЗ РСПК МЗ РТ
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-76
Островского, д.11/6
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-28-03
420029, г. Казань,
ул.Сибирский тракт,
д. 33
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 273-43-72
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
(843) 273-78-23
Рецензенты:
Д.Т.Сиразитдинов – главный специалист эксперт МЗ РТ по клинической
лабораторной диагностике.
Н.Н.Аксенова – заведующая кабинетом гемотрансфузий Государственного
учреждения здравоохранения «Республиканский онкологический диспансер МЗ
РТ», врач-хирург высшей категории, к.м.н.;
Д.Р.Мухамедов Д.Р. – врач анестезиолог-реаниматолог Муниципального
бюджетного учреждения здравоохранения «Апастовская центральная районная
больница».
1.5 Цели и задачи
ТВ ПМУ разработана с целью нормативного обеспечения и унификации
процесса выполнения простой медицинской услуги 12.05.005 «Определение
основных групп крови АВ0» в медицинских учреждениях на территории
Республики Татарстан.
ТВ ПМУ «Определение основных групп крови АВ0» разработана для решения
следующих задач:
- нормативного обеспечения внедрения стандарта ТВ ПМУ «Определение
основных групп крови АВ0»;
- установления единых требований к оказанию ПМУ «Определение основных
групп крови АВ0»;
- унификации расчетов трудозатрат на выполнение ТВ ПМУ «Определение
основных групп крови АВ0»
в медицинских учреждениях на территории
Республики Татарстан;
- контроля качества и безопасности, оказанной пациенту ПМУ «Определение
основных групп крови АВ0» в медицинских учреждениях на территории
Республики Татарстан;
- проверки на соответствие установленным требованиям при проведении
процедуры лицензирования;
- защиты прав пациента и врача при разрешении спорных и конфликтных
вопросов.
ТВ ПМУ представляет собой систематизированный свод медицинских правил
и условий, технического обеспечения, определяющий порядок и последовательность
действий, выполняемых медицинским персоналом.
При разработке ТВ ПМУ «Определение основных групп крови АВ0»
использовались нормативные документы (приказы, инструкции, методические
указания МЗ РФ и МЗ РТ), учитывались результаты научных исследований.
2. ТРЕБОВАНИЯ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПМУ
ОТРАСЛЕВЫХ
СТАНДАРТОВ
ТЕХНОЛОГИЙ
2.1 Требования к специалистам, включая требования к обеспечению
безопасности
Определение группы крови АВО должны проводить специалисты, имеющие
подготовку по вопросам иммуногематологии на специализированных циклах
усовершенствования на базе учреждений дополнительного профессионального
образования и/или на базе учреждений службы крови РТ (см. таблицу 3).
Таблица 3
Требования к специалистам,
выполняющим ПМУ «Определение основных групп крови АВ0»
Медицинское
учреждение
Стационар, в том
числе дневной в
амбулаторнополиклинических
условиях
Другие ЛПУ
Выполнение ПМУ
«Определение
основных групп крови
АВ0»
Дополнительные
Медицинский
требования к
персонал
медицинскому
персоналу
Лечащий или
Должны иметь
Первично и перед
дежурный врач
специальную
каждым переливанием
подготовку по вопросам
крови и её
Врачиммуногематологии на
компонентов
трансфузиолог
специализированных
Централизованное
Врач КЛД или циклах
усовершенствования на
переопределение
биолог КЛД
базе учреждений
дополнительного
профессионального
Для амбулаторных
Врач КЛД или
образования и/или на
пациентов
биолог КЛД
базе учреждений
службы крови РТ не
реже одного раза в 5 лет
Все манипуляции проводить в медицинской одежде с использованием
индивидуальных средств защиты (медицинские перчатки, защитные очки или
щитки). С любыми образцами крови пациента следует обращаться как с
потенциальными переносчиками инфекционных заболеваний.
2.2 Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Таблица 4
Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Наименование ПМУ
12.05.005 «Определение
основных групп крови АВ0»
12.05.005 «Определение
основных групп крови АВ0»
Условия оказания
Функциональное
назначение
Амбулаторно-поликлинические
Диагностика
Помощь в условиях стационара, в
том числе дневного стационара
Диагностика
2.3 Материальные ресурсы
Для выполнения ПМУ «Определение основных групп крови АВ0» должно
быть оснащено отдельное место (или специальное помещение), которое оборудуется
согласно требованиям приказа МЗ РФ от 09.01.1998 №2 «Об утверждении
инструкций по иммуносерологии».
2.3.1 Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения
Таблица 5
Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения, необходимые для
определения групп крови АВО, а также альтернативные приборы и изделия
медицинской техники
Количество приборов,
Альтернативный прибор,
инструментов, изделий
изделие медицинской
медицинской техники
техники
Определение основных групп крови АВО
прямым и перекрёстным методами
Стол лабораторный
1 шт.
Стол с покрытием из
пластика
Стул
1 шт.
Настольная лампа
1 шт.
Настенная лампа
Планшеты для
1 шт. на 1 исследование
Тарелка белого цвета
иммуногематологических
фарфоровая или
исследований
эмалированная
Пипетка Пастера
1 шт.
Автоматическая пипетка
переменного объёма 20200 мкл
Стеклянные палочки
От 1 до 10 шт.
Палочка из пластмассы
(лопаточки)
Песочные часы на 3 и 5 минут
По 1 шт.
Секундомер
Лупа с 8-кратным увеличением
1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнёзд
1 шт.
Стеклянные баночки
2 шт.
Стеклянные стаканы
Центрифуга лабораторная ОПН-3
1 шт.
Центрифуга лабораторная
СМ-6 М, ELMI
Наименование прибора, изделия
медицинской техники и др.
Определение основных групп крови АВО гелевой методикой
Стол лабораторный
1 шт.
Стул
Штатив лабораторный на 10 гнёзд
Стеклянные стаканы
Центрифуга лабораторная ОПН-3
1 шт.
1 шт.
2 шт.
1 шт.
Центрифуга
для
гелевых
пластиковых карт
Автоматическая
пипетка
переменного объёма
Штатив для автоматических пипеток
переменного объема
Пробирки центрифужные
1 шт.
5-40 мкл 1 шт.
100-1000 мкл 1 шт.
1 шт.
1 шт.
Стол с покрытием
пластика
из
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная
СМ-6 М,, ELMI
2.3.2 Реактивы
Для
выполнения ПМУ «Определение основных групп крови АВ0»
используются иммунологические стандарты различной специфичности (см. таблицу
6).
Таблица 6.
Иммунологические стандарты, используемые для определения
группы крови АВО
Наименование
реактива
Документ,
регламентиру
ющий
использование
реактива
Количество реактива,
необходимое для
выполнения 1-го
исследования
Особенности
уничтожени
Сроки и особенности
яи
хранения реактива, работы обеззаражив
с ним*
ания
реактива или
продуктов
реакций
Требования к
обеспечен
ию
безопасно
сти
персонала
при работе
с
реактивом
Цоликлоны
анти-А, антиВ, анти-АВ
Цоликлон
анти-А1
(лектин)
(для КДЛ и
специализиро
ванных
лабораторий)
Раствор
натрия
хлорида, 0,9%
Хранить при t+2…+8
0
С.
Срок годности - 6
месяцев с даты
изготовления.
После вскрытия годен
в течение 2 недель.
Хранить при t+2…+8
0
С.
По одной маленькой Срок годности - 2
капле (10 мкл)
месяца с даты
каждой группы
изготовления.
После вскрытия годен
в течение 5-7 дней.
Хранить при t+2…+8
0
По одной большой
С.
капле (100 мкл)
Срок годности - 2 года
каждой группы
с даты изготовления.
После вскрытия годен
в течение 1 месяца.
Хранить при t+2…+8
0
С.
Одна большая капля Срок годности - 2 года
(100 мкл)
с даты изготовления.
После вскрытия годен
в течение 1 месяца.
По 50 мкл в каждую
лунку
Хранить при
t+15…+25 0С.
Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках, защитных очках (щитках)
Стандартные
эритроциты
АВО
По одной большой
капле (100 мкл)
реактивов
О(I) (анти -АВ), А(II)
(анти-В) и В(III)
(анти-А) двух серий;
100 мкл, АВ(IV)0одной серии
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с содержанием активного
хлора, дезинфекция лабораторной посуды производится с применением
дезинфицирующих средств, не содержащих активного хлора.
Стандартные
изогемагглютинирующие
сыворотки
АВО
Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 №2 «Об утверждении инструкций по иммуносерологии»
Определение основных групп крови АВО прямым и перекрёстным методами
От 0,5 до 1 шт. в
зависимости от
используемой
диагностической
карты.
Хранить при
t+15…+25 0С.
Раствор для
приготовлени Инструкция,
я суспензии
прилагаемая к
исследуемых раствору
эритроцитов
От 0,5 до 1,0 мл в
зависимости от
производителя
Набор
стандартных
эритроцитов
А1 и В
По 50 мкл каждого Хранить при t+2…+8
0
реактива
С.
Инструкция,
прилагаемая к
набору
Хранить при t+2…+8
0
С.
Произвести дезинфекцию как биологических
отходов (класс отходов Б)
Инструкции,
прилагаемые
Диагностичес
к
кие карточки
соответствую
для
щим
определения
диагностичес
группы крови
ким
карточкам
Работа в медицинской спецодежде, медицинских
перчатках, защитных очках (щитках)
Определение основных групп крови АВО гелевой методикой
* - Температура внутри холодильной камеры, где хранятся реактивы, контролируется средним
медработником дважды в день. Показания термометра регистрируются в «Журнале регистрации
температурного режима хранения диагностических стандартов для иммуногематологических
исследований» (см. приложение 1).
2.3.3 Прочий расходуемый материал
Для выполнения ПМУ «Определение основных групп
используются прочий расходуемый материал (см. таблицу 7).
крови
АВ0»
Таблица 7
Прочий расходуемый материал,
используемый для определения группы крови АВО
Наименование
Количество
Примечание
Определение основных групп крови АВО
прямым и перекрёстным методами
Ватно-марлевый тампон На 1 тампон:
Для подсушивания пипетки и
вата - 3,0 гр.,
стеклянной палочки
бинт - 30 см.
Медицинские перчатки
1 пара на каждые 3 часа Заменить немедленно при нарушении
одноразовые
работы
целостности или сильном
загрязнении.
Раствор натрия хлорида, 0,5 л
Для промывания пипеток и палочек
0,9%
Спирт
этиловый 3,0 гр. на 1 обработку
Для обработки рук персона после
медицинский, 70,0%
окончания работы
Дезинфицирующий
В соответствии с
Для дезинфекции биологического
раствор
методическими указаниями по материала, лабораторной посуды и
применению дез. средств,
рабочего места.
разрешённых к
использованию в РФ и РТ
Определение основных групп крови АВО гелевой методикой
Медицинские перчатки
1 пара на каждые 3 часа
Заменить немедленно при нарушении
одноразовые
работы
целостности или сильном
загрязнении.
3,0 гр. на 1 обработку
Для обработки рук персона после
окончания работы
Спирт этиловый
медицинский, 70,0%
7–10 гр. на 1 центрифугу в Для обработки центрифуги
конце рабочего дня
Наконечники
для 3 шт. на 1 исследование
автоматических пипеток
переменного
объема,
одноразовые
Дезинфицирующий
В соответствии с
Для дезинфекции биологического
раствор
методическими указаниями по материала, лабораторной посуды и
применению дез. средств,
рабочего места.
разрешённых к
использованию в РФ и РТ
2.4 Характеристика методики выполнения ПМУ «Определение основных
групп крови АВ0»
2.4.1 Требования к образцам крови
Перед процедурой забора крови на исследование у пациента уточнить его
фамилию, имя и отчество. Взять сухую чистую пробирку, на которую нанести
следующую информацию о пациенте: Ф.И.О., дату забора крови, для стационарных
больных - номер медицинской карты. Кровь пациента забрать из вены в количестве
3-5 мл и перенести в подписанную пробирку. Для исследования используют
цельную кровь, отмытые эритроциты, эритроциты в плазме, сыворотке, консерванте
или физиологическом растворе.
При наличии у пациента анемии (содержание гемоглобина крови менее 70 г/л)
для получения достаточного количества эритроцитов использовать для
исследования образец крови пациента, с консервантом (цитрат натрия, ЭДТА).
Соотношение исследуемой крови и консерванта для цитрата натрия 10:1, для ЭДТА
100:1.
Использовать для исследования кровь пациента не более двухдневного срока
хранения при t+2ºС…+8ºС.
Не использовать для исследований гемолизированную кровь. При наличии
гемолиза процедуру взятия крови повторить.
2.4.2 Требования к помещению
Иммуногематологические исследования проводить в
естественным освещением, температура воздуха в помещении
пределах +15ºС …+25ºС.
помещении с
должна быть в
2.4.3 Требования к объемам исследований в зависимости от медицинского
учреждения
2.4.3.1 Стационар, в том числе дневной стационар в амбулаторнополиклинических условиях
При поступлении в стационар группу крови АВО пациенту определяет
дежурный или лечащий врач прямым методом.
Во избежание ошибки процедуру взятия крови и определения группы крови
АВО повторяют. Повторное определение групповой принадлежности крови
осуществляется централизованно в лаборатории ЛПУ, кабинете переливания крови
или в отделении переливания крови перекрестным методом или гелевой методикой.
При направлении на централизованное переопределение образец крови пациента
сопровождается направлением (см. приложение 2).
Для первичного определения при поступлении пациента и централизованного
переопределения группы крови АВО перекрестным методом используются
диагностические стандарты различных наименований или различных серий.
Результат переопределения вклеивается в медицинскую карту (см. приложение
2). При совпадении результатов первичного и централизованного переопределения
групповая принадлежность крови пациента выносится на титульный лист
медицинской карты, скрепляется подписью врача, проводившего первичное
определение.
Категорически запрещается переносить сведения о групповой
принадлежности крови пациента с любого другого документа!
Перед переливанием крови и её компонентов крови определение групповой
принадлежности крови реципиента (из пробирки) и донора (из сегмента трубки
контейнера) проводится прямым методом с использованием стандартных
изогемагглютинирующих сывороток АВО или цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ.
Предтрансфузионный образец крови реципиента хранить при температуре
0
t+2 С…+80С в течение 5 суток. Остатки трансфузионной среды хранить при
температуре t+20С…+80С в течение 48 часов.
Предтрансфузионный образец крови реципиента и остатки трансфузионной
среды предназначены для исследования в специализированной лаборатории службы
крови при возникновении посттрансфузионного осложнения.
2.4.3.2 Женская консультация
При постановке на учет по беременности женщинам группу крови АВО
определяют перекрёстным методом. Повторное определение группы крови АВО
произвести в 28-30 недель беременности перекрестным методом или гелевой
методикой.
Результат определения групп крови АВО, полученный в лаборатории
женской консультации заносятся в «Журнал регистрации результатов определения
групповой и резус - принадлежности» (см. приложение 3).
Категорически запрещается переносить сведения о групповой
принадлежности крови пациента с любого другого документа.
При несовпадении результатов первичного и повторного исследования образец
крови беременной женщины направить в специализированную лабораторию СПК
или ОПК для дальнейшего исследования.
2.4.3.3 Поликлиника
Для амбулаторно-поликлинических пациентов определение группы крови
АВО производится перекрестным методом или гелевой методикой.
Результат определения групп крови АВО, полученный в лаборатории
поликлиники заносятся в «Журнал регистрации результатов определения групповой
и резус - принадлежности» (см. приложение 3).
Категорически запрещается переносить сведения о групповой
принадлежности крови пациента с любого другого документа.
2.4.4 Методы определения группы крови по системе АВ0
Прежде чем приступить к исследованию, необходимо произвести
макроскопическую оценку диагностических стандартов: реактивы должны быть
прозрачными, без осадка и других признаков загрязнения; вскрытые ампулы
(флаконы) должны быть закрытыми для предотвращения подсыхания содержимого.
Проверить срок годности реактивов с даты изготовления, указанной на этикетке, и
со дня вскрытия реактива (срок годности флакона (ампулы) см. таблица 6).
Ампулы (флаконы) расположить в штативе в определенном порядке:
1 ряд слева направо - одна серия стандартных изогемагглютинирующих сывороток
Оαβ(I) (анти –АВ), Аβ(II) (анти-В) и Вα(III) (анти-А); 2 ряд слева направо - вторая
серия стандартных изогемагглютинирующих сывороток Оαβ(I) (анти –АВ), Аβ(II)
(анти-В) и Вα(III) (анти-А), а также сыворотка АВ0(IV); 3 ряд слева направо стандартные эритроциты О(I), А(II) и В(III).
При работе с цоликлонами порядок расположения реактивов в штативе
следующий: слева направо – анти-А, анти-В, анти-АВ. При определении группы
крови перекрёстным методом с использованием цоликлонов (для удобства при
чтении результатов) расположение цоликлонов следующее: анти-АВ, анти-В, антиА.
Перед работой иммунологические стандарты выдержать при комнатной
температуре не менее 1 часа.
2.4.4.1 Определение основных групп крови АВО прямым методом при
помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО
Порядок проведения исследования:
Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой
поверхностью.
1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь которого
исследуют, а также надписать специфичность изогемагглютинирующих сывороток
АВО в порядке их нанесения.
2. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО раскапать в два
ряда: в первом ряду сыворотки одной серии Оαβ(I) (анти-АВ), Aβ(II) (анти-В), Bα(III)
(анти-А), во втором ряду сыворотки другой серии Oαβ(I) (анти-АВ), Aβ(II) (анти-В),
Bα(III) (анти-А) по одной большой капле (по 100 мкл) под соответствующими
надписями.
3. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой эритроциты и
нанести маленькую каплю (10 мкл) рядом со стандартными сыворотками.
Соотношение эритроцитов и сыворотки - 1:10 (см. рисунок 1).
Рисунок 1. Порядок расположения стандартных изогемагглютинирующих
сывороток АВО и их соотношение с исследуемой кровью.
4. Каждую каплю стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО
перемешать с каплей эритроцитов стеклянной палочкой (см. рисунок 2).
Рисунок 2. Перемешивание изогемагглютинирующих сывороток с исследуемыми
эритроцитами.
Наблюдать за реакцией 5 минут при постоянном покачивании планшета.
После окончания экспозиции в те капли, где имеется агглютинация, добавить по
одной капле (50 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%, покачивая планшет.
5. Трактовка результатов реакции.
Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов,
агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных
агрегатов.
При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в
красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.
Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.
а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О(I), если со всеми стандартными
изогемагглютинирующими сыворотками АВО получены отрицательные результаты
(см. рисунок 3).
Рисунок 3. Исследуемая кровь группы О(I)
б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции со
стандартными изогемагглютинирующими сыворотками Оαβ(I) (анти-АВ) и Bα(III)
(анти-А)
получен
положительный
результат,
а
со
стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой Aβ(II) (анти-В) получен отрицательный
результат (см. рисунок 4).
Рисунок 4. Исследуемая кровь группы А(II)
в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции со
стандартными изогемагглютинирующими сывороткам Оαβ(I) (анти-АВ) и Аβ(II)
(анти-В)
получен
положительный
результат,
а
со
стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой Вα(III) (анти-А) получен отрицательный
результат (см. рисунок 5).
Рисунок 5. Исследуемая кровь группы В(III)
г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми
стандартными сыворотками, для исключения неспецифической агглютинации
провести
дополнительное
контрольное
исследование
со
стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой АВ0(IV) группы. Для этого на планшет
нанести большую каплю (100 мкл) стандартной изогемагглютинирующей сыворотки
АВ0(IV), рядом маленькую каплю (10 мкл) исследуемых эритроцитов. Капли
перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 5 минут.
Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ0(IV), если со стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой АВ0(IV) получен отрицательный результат
(см. рисунок 6).
Рисунок 6. Исследуемая кровь группы АВ0(IV)
2.4.4.2. Определение основных групп крови АВО прямым методом при помощи
цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ
Порядок проведения исследования:
Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой
поверхностью.
1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь
которого исследуют, а также надписать специфичность цоликлонов анти-А, анти-В,
анти-АВ в порядке их нанесения.
2. Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ раскапать в один ряд по одной
большой капле (по 100 мкл) под соответствующими надписями.
3. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой эритроциты
и нанести по одной маленькой капле (10-30 мкл) рядом с цоликлонами,
соотношение эритроцитов и цоликлонов - 1:10 или 3:10 (см. рисунок 7).
Рисунок 7. Порядок расположения цоликлонов и
соотношение с исследуемыми эритроцитами
4. Перемешать эритроциты с реагентами стеклянной палочкой. Наблюдать за
реакцией 3 минуты при постоянном покачивании.
5. Трактовка результатов реакции.
Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов,
агглютинаты видны невооруженным глазом в виде крупных красных агрегатов,
быстро сливающихся в крупные хлопья.
При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в
красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.
Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.
а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О(I), если со всеми цоликлонами
получены отрицательные результаты (см. рисунок 8).
Рисунок 8. Исследуемая кровь группы О(I)
б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции с
цоликлонами анти-А и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном
анти-В получен отрицательный результат (см. рисунок 9).
Рисунок 9. Исследуемая кровь группы А (II)
в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции с
цоликлонами анти-В и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном
анти-А получен отрицательный результат (см. рисунок 10).
Рисунок 10. Исследуемая кровь группы В (III)
г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми
цоликлонами, для исключения неспецифической агглютинации произвести
дополнительное контрольное исследование с раствором натрия хлорида, 0,9%. Для
этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%,
рядом добавить 10-30 мкл исследуемых эритроцитов. Капли перемешать стеклянной
палочкой. Наблюдать за реакцией 3 минуты, покачивая планшет.
Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ (IV) если в реакции с раствором
натрия хлорида, 0,9% получен отрицательный результат (см. рисунок 11).
Рисунок 11. Исследуемая кровь группы АВ(IV)
2.4.4.3 Определение основных групп группы крови АВО перекрёстным
методом при помощи стандартных сывороток АВО и стандартных
эритроцитов АВО
Порядок проведения исследования:
Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой
поверхностью.
1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь
которого исследуют, а также надписать специфичность изогемагглютинирующих
сывороток АВО и стандартных эритроцитов АВО в порядке их нанесения.
2. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО раскапать в два
ряда: в первом ряду сыворотки одной серии Оαβ(I) (анти-АВ), Aβ(II) (анти-В), Bα(III)
(анти-А), во втором ряду сыворотки другой серии Oαβ(I) (анти-АВ), Aβ(II) (анти-В),
Bα(III) (анти-А) по одной большой капле (по 100 мкл) под соответствующими
надписями.
3. В третий ряд раскапать по одной маленькой капле (10 мкл) стандартных
эритроцитов O(I), A(II), B(III) под соответствующими надписями.
4. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой сыворотку
крови пациента (100 мкл) и поместить рядом со стандартными эритроцитами АВО,
соотношение стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки - 1:10. Этой же
пипеткой из пробирки взять исследуемые эритроциты (10 мкл) и поместить рядом со
стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО, соотношение
исследуемых эритроцитов и стандартных сывороток - 1:10 (см. рисунок 12).
Рисунок 12. Порядок расположения стандартных изогемагглютинирующих
сывороток АВО, стандартных эритроцитов АВО
и соотношение с исследуемой кровью
5. Каждую каплю исследуемого материала перемешать стеклянной палочкой с
соответствующим диагностическим стандартом. Наблюдать за реакцией 5 минут,
при постоянном покачивании планшета. После окончания экспозиции в те капли,
где имеется агглютинация, добавить по одной капле (50 мкл) раствора натрия
хлорида, 0,9%.
6. Трактовка результатов реакции.
Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов,
агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных
агрегатов.
При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в
красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.
Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.
а) Исследуемая кровь принадлежит к группе Оαβ(I) (анти-АВ), если в реакции
со всеми стандартными изогемагглютинирующими сыворотками АВО и
стандартными эритроцитами О(I) получены отрицательные результаты, а
положительные результаты получены в реакции со стандартными эритроцитами A
(II) и B(III) (см. рисунок 13).
Рисунок 13. Исследуемая кровь группы Оαβ(I) анти-АВ
б) Исследуемая кровь принадлежит к группе Аβ(II) (анти-В), если в реакциях
со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками Оαβ(I) (анти-АВ), Bα (III)
(анти-А) и со стандартными эритроцитами B(III) получены положительные
результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях со стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой Aβ(II) (анти-В) и стандартными эритроцитами
О(I), A(II) (см. рисунок 14).
Рисунок 14. Исследуемая кровь группы Аβ(II) анти-В
в) Исследуемая кровь принадлежит к группе Bα(III) анти-А, если в реакциях
со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками Оαβ(I) (анти-АВ), Аβ(II)
(анти-В) и со стандартными эритроцитами А(II) получены положительные
результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях со стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой Вα(III) (анти-А) и стандартными
эритроцитами О (I), В(III) (см. рисунок 15).
Рисунок 15. Исследуемая кровь группы Вα(III) анти-А
г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми
стандартными сыворотками, а со всеми стандартными эритроцитами получен
отрицательный результат, для исключения неспецифической агглютинации
провести
дополнительное
контрольное
исследование
со
стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой АВ0(IV) группы. Для этого на планшет
нанести большую каплю (100 мкл) стандартной изогемагглютинирующей сыворотки
АВ0(IV), рядом маленькую каплю (10 мкл) исследуемых эритроцитов. Капли
перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 5 минут при покачивании
планшета.
Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ0(IV), если со стандартной
изогемагглютинирующей сывороткой АВ0(IV) получен отрицательный результат
(см. рисунок 16).
Рисунок 16. Исследуемая кровь группы АВ0 (IV)
2.4.4.4 Определение основных групп группы крови АВО перекрёстным
методом при помощи цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ и стандартных
эритроцитов АВО
Порядок проведения исследования:
Определение группы крови АВО производить на планшете со смачиваемой
поверхностью.
1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь
которого исследуют, а также надписать специфичность цоликлонов анти-АВ, антиВ, анти-А и стандартных эритроцитов АВО в порядке их нанесения.
2. Цоликлоны анти-АВ, анти-В, анти-А раскапать в один ряд по одной
большой капле (по 100 мкл) под соответствующими надписями.
3. Во второй ряд раскапать по одной маленькой капле (10-30 мкл)
стандартных эритроцитов. O(I), A(II), B(III) групп.
4. Из пробирки с исследуемой кровью осторожно взять пипеткой сыворотку
крови пациента (100 мкл) и поместить рядом со стандартными эритроцитами АВО,
соотношение стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки - 1:10. Этой же
пипеткой из пробирки взять исследуемые эритроциты (10-30 мкл) и поместить
рядом с цоликлонами анти-АВ, анти-В, анти-А, соотношение исследуемых
эритроцитов и цоликлонов - 1:10 или 3:10 (см. рисунок 17)
Рисунок 17. Порядок расположения цоликлонов и
стандартных эритроцитов АВО и
соотношение с исследуемыми эритроцитами
5. Каждую каплю исследуемого материала перемешать стеклянной палочкой с
соответствующим диагностическим стандартом. Наблюдать за реакцией 3 минуты,
при постоянном покачивании планшета.
6. Трактовка результатов реакции.
Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов,
агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких или крупных красных
агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья.
При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в
красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается.
Результаты могут быть выражены в 4-х различных комбинациях.
а) Исследуемая кровь принадлежит к группе О(I) анти-АВ, если в реакции
если со всеми цоликлонами и стандартными эритроцитами О(I) получены
отрицательные результаты, а положительные результаты получены в реакции со
стандартными эритроцитами A(II) и B(III) (см. рисунок 18).
Рисунок 18. Исследуемая кровь группы О(I) анти-АВ
б) Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II) анти-В, если в реакции с
цоликлонами анти-А и анти-АВ и со стандартными эритроцитами B(III) получены
положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях с
цоликлоном анти-В и стандартными эритроцитами О(I), A(II) (см. рисунок 19).
Рисунок 19. Исследуемая кровь группы А(II) анти-В
в) Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции с
цоликлонами анти-В и анти-АВ и со стандартными эритроцитами А(II) получены
положительные результаты, а отрицательные результаты получены в реакциях с
цоликлоном анти-А и стандартными эритроцитами О(I), В(III) (см. рисунок 20).
Рисунок 20. Исследуемая кровь группы В(III) анти-А
г) В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми
цоликлонами, а со всеми стандартными эритроцитами получен отрицательный
результат,
для
исключения
неспецифической
агглютинации
провести
дополнительное контрольное исследование с раствором натрия хлорида, 0,9%. Для
этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%,
рядом добавить маленькую каплю (10-30 мкл) исследуемых эритроцитов. Капли
перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 3 минуты.
Исследуемая кровь принадлежит к группе АВ0(IV), если с раствором натрия
хлорида, 0,9% получен отрицательный результат (см. рисунок 21).
Рисунок 21. Исследуемая кровь группы АВ0(IV)
2.4.4.5 Определение основных групп крови АВО при помощи гелевой
методики
2.4.4.5.1. Определение основных групп крови АВО при помощи
идентификации групповых антигенов А и В в геле.
Для определения группы крови АВО использовать диагностическую карту,
содержащую микропробирки для идентификации групповых антигенов А и В.
Микропробирки для идентификации групповых антигенов А и В имеют цветную и
соответствующую буквенную (А, В, АВ) маркировку.
Перед исследованием провести макроскопическую оценку диагностической
карты. Не использовать карту, если в микропробирках наблюдается изменение
цвета, в геле имеются взвешенные пузырьки, наблюдается уменьшение объёма геля
или его растрескивание. Микропробирки должны содержать надосадочную
жидкость. Если наблюдается рассредоточенное каплеобразование в верхней части
микропробирки, рекомендуется центрифугировать карты перед использованием.
Если капли не оседают, карту не использовать.
В настоящее время существует множество модификаций карт для определения
групп крови. К каждой карте прилагается инструкция по использованию. Перед
работой необходимо внимательно ознакомиться с прилагаемой инструкцией.
2.4.4.5.2. Определение основных групп крови АВО при помощи
идентификации групповых антигенов А, В и естественных анти-А, анти-В
антител в геле.
Для определения группы крови АВО использовать диагностическую карту,
содержащую микропробирки для идентификации групповых антигенов А, В и
естественных анти-А, анти-В антител. Микропробирки для идентификации
групповых антигенов А и В имеют цветную и соответствующую буквенную (А, В,
АВ) маркировку. Микропробирки для идентификации естественных анти-А, анти-В
антител имеют белую и соответствующую буквенную (А1, В) маркировку.
Перед исследованием провести макроскопическую оценку диагностической
карты. Не использовать карту, если в микропробирках наблюдается изменение
цвета, в геле имеются взвешенные пузырьки, наблюдается уменьшение объёма геля
или его растрескивание. Микропробирки должны содержать надосадочную
жидкость. Если наблюдается рассредоточенное каплеобразование в верхней части
микропробирки, рекомендуется центрифугировать карты перед использованием.
Если капли не оседают карту не использовать.
В настоящее время существует множество модификаций карт для определения
групп крови перекрёстным способом гелевой методикой. К каждой карте
прилагается инструкция по использованию. Перед работой необходимо
внимательно ознакомится с прилагаемой инструкцией.
2.5 Дополнительные сведения об особенностях выполнения ПМУ
«Определение основных групп крови АВО»
У некоторых категорий пациентов встречаются затруднения при определении
групповой принадлежности. Индивидуальные особенности, характер затруднений и
способы решения проблемы представлены в таблице 8.
Таблица 8
Категории пациентов, у которых встречаются затруднения
при определении основных групп крови АВО
№
п/п
1.
Категория
пациентов
Новорожденные
Индивидуальные
особенности
Слабо выражена
активность
групповых
антигенов А и В
Отсутствие в
сыворотке
естественных
групповых антиА, анти-В антител
2.
3.
Ослабление
активности
Беременные
групповых
антигенов А и В
Ослабление
активности или
полная утрата
групповых
антигенов А и В
Больные с
вследствие приема
гематологицитостатиков,
ческими или
больших доз
онкологигормональных
ческими
заболеваниями препаратов,
радиотерапия,
и другими
химиотерапия
видами
патологических
состояний
(ожоги, цирроз
печени, сепсис
и др.)
Наличие
неспецифических
алло- и/или
аутоантител
Характер
затруднения
Способ решения
проблемы
Слабо выраженная
агглютинация,
Использовать
вероятность пропустить
прямой метод с
реакцию агглютинации
цоликлонами антиА, анти-В, анти-АВ
или гелевую
Отсутствие
методику.
агглютинации во всех
лунках со
стандартными
эритроцитами АВО при
исследовании
перекрестным методом
Слабо выраженная
Использовать
агглютинация,
различные реактивы
вероятность пропустить в перекрёстном
реакцию агглютинации методе
Слабо выраженная
агглютинация или ее
отсутствие.
Использовать
Несовпадение
различные реактивы
результатов
в перекрёстном
исследования,
методе. При
полученных со
затруднении
стандартными
направить кровь
изогемагглютинирующ больного в
ими сыворотками АВО специализированную
(цоликлонами анти-А,
лабораторию
анти-В, анти-АВ) и
службы крови.
стандартными
эритроцитами АВО.
Использовать
перекрёстный метод
или гелевую
методику. При
Ложно-положительные затруднении
реакции агглютинации направить кровь
больного в
специализированную
лабораторию
службы крови.
Полиагглютинабе
льность
исследуемого
образца
Положительные
результаты контроля
Использование
гелевой методики.
При затруднении
направить кровь
больного в
специализированную
лабораторию
службы крови.
Слабые варианты
антигена А
Несовпадение
результатов
исследования,
полученных со
стандартными
изогемагглютинирующ
ими сыворотками АВО
(цоликлонами анти-А,
анти-В, анти-АВ) и
стандартными
эритроцитами АВО.
Использовать
цоликлон анти-А1
(лектин) или
гелевую методику.
При затруднении
направить кровь
больного в
специализированную
лабораторию
службы крови.
4.
У различных
категорий
пациентов
Массивная
гемотрансфузия
или трансфузия
несовместимых
переночсиков
газов крови по
АВО
Сомнительный
результат исследования
Гиперлипидемия
Возможна
неспецифическая
агглютинация
Внутривенное
введение
растворов
декстранов или
желатина.
Ложноположительные
реакции агглютинации
и(или) положительный
результат контроля (в
т.ч. аутоконтроля)
Использовать
гелевую методику.
При затруднении
направить кровь
больного в
специализированную
лабораторию
службы крови.
Исследуемые
эритроциты отмыть.
При затруднении
направить кровь
больного в
специализированную
лабораторию
службы крови.
Исследуемые
эритроциты отмыть.
При затруднении
направить кровь
больного в
специализированную
лабораторию.
Образец крови больного направляется в специализированную лабораторию (в
учреждения службы крови) в сопровождении направления (см. приложение 4).
2.6 Достигаемые результаты и их оценка
Выполнение требований ПМУ «Определение основных групп крови АВО»
является профилактикой посттрансфузионных осложнений гемолитического типа и
адекватному ведению АВО-конфликтной беременности.
За период 2006-2008 гг. специалистами ГУЗ РСПК МЗ РТ было проверено 72
медицинские учреждения РТ. Из них:
ЛПУ (городские и центральные районные больницы) – 36,
Женские консультации – 14,
Поликлиники г. Казани – 22.
По результатам проверок выявлены следующие нарушения действующих
нормативных документов:
- к проведению иммуногематологических исследований допускаются
специалисты, не имеющие специальной подготовки по иммуногематологии на базе
учреждений службы крови РТ или на специализированных циклах
усовершенствования,
- при проведении иммуногематологических исследований специалисты не
соблюдают требований соответствующих методик, имеют место неверное
определение групповой принадлежности, невыявление слабых вариантов антигена
А.
- в отдельных ЛПУ стационарного типа не проводится централизованное
переопределение групповой и резус принадлежности крови пациентов. Повторное
переопределение могло бы выявить ошибки при первичном исследовании и, как
следствие, предотвратить несовместимые трансфузии.
За период 2006-2008 годы зарегистрирован один случай посттрансфузионного
осложнения по причине переливания переносчиков газов крови несовместимых по
системе АВ0.
2.7 Требования к режиму труда, отдыха, лечения, реабилитации,
диетическим назначениям и ограничениям, к подготовке пациента в процессе
выполнения Технологии
Дополнительные рекомендации, назначения и ограничения режима труда,
отдыха, лечения или реабилитации не предусмотрены.
Диетические назначения и ограничения не предусмотрены.
Для получения достоверных результатов выполнения ПМУ «Определение
основных групп крови АВО» забор образца крови пациента производить до
проведения инфузионной терапии растворами декстранов и желатины.
3. ГРАФИЧЕСКОЕ, СХЕМАТИЧЕСКИЕ И ТАБЛИЧНОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ ТЕХНОЛОГИЙ ВЫПОЛНЕНИЯ ПМУ
3.1. Выполнение ПМУ «Определение основных групп крови АВО».
Таблица 9
Краткие инструкции по проведению исследования группы крови АВО прямым методом
при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток АВО
Вид
Диагностические Кровь
Метод
исследования стандарты для
определения
проведения
пациента
исследования
Определение
группы
крови АВО
Стандартные
изогемагглютинирующие
сыворотки АВО
Из вены
На
плоскости
РПГА
Соотношение
Экспозиция Добавление
диагностический
раствора
стандарт/
NaCl 0,9%
исследуемая
кровь
По 1-2 капли в
каждую лунку
10:1
5 минут
с
агглютинацией
стандартные сыворотки
О(I)αβ А(II)β В(III)α
стандартные сыворотки
О(I)αβ А(II)β В(III)α
стандартные сыворотки
О(I)αβ А(II)β В(III)α
анти-А+В анти-В анти-А
анти-А+В
анти-А+В
анти-В анти-А
анти-В
анти-А
Контроль
Чтение
результатов
Для подтверждения
четвертой
группы крови
См.
использовать
рисунок 22
стандартную
изогемагглютинирующую
сыворотку АВ0 (IV)
группы
стандартные сыворотки
О(I)αβ А(II)β В(III)α
анти-А+В анти-В анти-А
контроль
О(I)
А(II)
Исследуемая кровь группы
В(III)
АВ(IV)
Рисунок 22 Определение основных групп крови АВО прямым методом при помощи стандартных
изогемагглютинирующих сывороток АВО
Таблица 10
Краткие инструкции по проведению исследования группы крови АВО прямым методом
при помощи цоликлонов а-А, а-В, а-АВ
Вид
исследования
Диагностические Кровь
стандарты для
пациента
проведения
исследования
Определение Цоликлоны
группы крови а-А, а-В, а-АВ
АВО
Из вены
или
капиллярная
Метод
определения
На
плоскости
РПГА
цоликлоны
цоликлоны
анти-А анти-В анти-АВ анти-А анти-В анти-АВ
О(I)
А(II)
Соотношение
Экспозиция Добавление Контроль
диагностический
раствора
стандарт/
NaCl 0,9%
исследуемая
кровь
Для
подтверждения
От 10:1 до 10:3
3 минуты
Не
четвертой
добавлять
группы
крови
АВ(IV)
использовать
раствор
NaCl 0,9%
цоликлоны
анти-А анти-В анти-АВ
Исследуемая кровь группы
В(III)
Чтение
результатов
См.
рисунок 23
цоликоны
анти-А анти-В анти-АВ контроль
АВ(IV)
Рисунок 23 Определение основных групп крови АВО прямым методом при помощи цоликлонов анти-А, анти-В,
анти-АВ
Таблица 11
Краткие инструкции по проведению исследования группы крови АВО перекрёстным методом
при помощи стандартных изогеамгглютинирующих сывороток АВО и стандартных эритроцитов АВО
Вид
Диагностические Кровь
Метод
исследования стандарты для
определения
проведения
пациента
исследования
Определение
группы
крови АВО
Стандартные
изогемагглютинирующие
сыворотки АВО
Стандартные
эритроциты
АВО
Соотношение
Экспозиция Добавление
диагностический
раствора
стандарт/
NaCl 0,9%
исследуемая
кровь
10:1
Из вены
На
плоскости
РПГА
5 минут
1:10
О(I)αβ А(II)β В(III)α
стандартные сыворотки
О(I)αβ А(II)β В(III)α
О(I)αβ А(II)β В(III)α
анти-А+В
анти-А+В
анти-В
анти-А
анти-В
анти-А
анти-А+В
анти-В
анти-А
Контроль
Чтение
результатов
Для подтверждения
четвертой
По 1-2 капли в группы крови
См.
каждую лунку использовать
рисунок 24
с
стандартную
агглютинацией изогемагглютинирующую
сыворотку АВ0 (IV)
группы
О(I)αβ А(II)β В(III)α
анти-А+В
анти-В
анти-А
контроль
О(I)
А(II) В(III)
О(I)
А(II)
стандартные эритроциты
В(III)
О(I) А(II)
В(III)
О(I)
А(II)
В(III)
Исследуемая кровь группы
Оαβ(I) анти-АВ
Аβ(II) анти-В
Вα(III) анти-А
АВ0(IV)
Рис. 24 Определение основных групп крови АВО перекрестным методом при помощи стандартных
изогемагглютинирующих сывороток АВО и стандартных эритроцитов АВО
Таблица 12
Краткие инструкции по проведению исследования группы крови АВО перекрёстным методом
при помощи цоликлонов а-А, а-В, а-АВ и стандартных эритроцитов АВО
Вид
исследования
Диагностические
стандарты для
проведения
исследования
Цоликлоны
Определение а-А, а-В, а-АВ
группы крови Стандартные
АВО
эритроциты АВО
цоликлоны
анти-АВ анти-В анти-А
О(I) А(II) В(III)
Оαβ(I) анти-АВ
Кровь
Метод
определения
пациента
Из вены
На
плоскости
РПГА
цоликлоны
анти-АВ анти-В анти-А
Соотношение
Экспозиция Добавление
Контроль
диагностический
раствора
стандарт/
NaCl 0,9%
исследуемая
кровь
От 10:1 до 10:3
3 минуты
Не добавлять Для
подтверждения
1:10
По 1-2 капли четвертой
крови
5 минут
в
каждую группы
АВ(IV)
лунку
использовать
раствор
NaCl 0,9%
цоликлоны
анти-АВ анти-В анти-А
стандартные эритроциты
О(I) А(II) В(III)
О(I) А(II) В(III)
Исследуемая кровь группы
Аβ(II) анти-В
Вα(III) анти-А
цоликоны
анти-АВ анти-В анти-А
О(I) А(II) В(III)
АВ0(IV)
Рис. 25 Определение основных групп крови АВО перекрестным методом при помощи цоликлонов
анти-А, анти-В, анти-АВ и стандартных эритроцитов АВО
Чтение
результатов
См.
рисунок 25
контроль
приложение 1
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ ТЕМПЕРАТУРНОГО РЕЖИМА ХРАНЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ
ДЛЯ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
1.
2.
3.
Журнал ведется отдельно для каждого холодильника,
предназначенного для хранения диагностических стандартов.
Показания термометра регистрируются ежедневно.
Страницы должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
29
Дата контроля
Показания термометра
Утро
Вечер
Подпись ответственного
лица
Принятые меры
30
приложение 2
Направление в КДЛ ЛПУ (ОПК, КТТ)
на иммуногематологическое исследование крови
(определение групповой и резус – принадлежности)
Ф.И.О. пациента____________________________________________________
Дата рождения____________________№ медицинской карты_______________
___________________________________________________________________
(отделение)
Результат первичного определения, полученный в отделении ЛПУ:
Группа крови АВО
Резус – принадлежность
Использованы диагностические стандарты:
1)Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО или цоликлоны
(нужное подчеркнуть) следующих серий:
__________/____________годен до_________________
__________/____________годен до_________________
__________/____________годен до_________________
__________годен до_________________
2) Универсальный реагент антирезус Rh0(D) или цоликлон анти-D Супер
(нужное подчеркнуть)
следующих серий: ________________годен до_______________
Дата исследования_____________ Подпись врача_____________________
Результат централизованного переопределения:
Группа крови АВО
Резус – принадлежность
Антитела
Дата __________________ Подпись врача ____________________
Примечание: пробирка с образцом
пациента,
дата
взятия
крови должна быть промаркирована (Ф.И.О.
крови,
№
медицинской
карты)
31
Приложение 3
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППОВОЙ И РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
Страницы журнала должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
32
Дата
централизованного
исследова-ния
Результат
первичного
исследования
№
п/п
Ф.И.О.пациента
группа
крови
АВО
Резуспринадлежн
ость
Результат
централизованного
переопределения
группа
крови
АВО
Резуспринадлеж
ность
Результат
скринингового
исследования
на антиэритроцитарные антитела
Диагностические
стандарты,
использованные для
централизованного
исследования
(наименование,
изготовитель,
№
серии, срок годности)
Отделение,
направившее
образец крови на
исследование
33
приложение 4
Направление на СПК (ОПК)
на определение групповой и резус–принадлежности,
индивидуальный подбор
(нужное подчеркнуть)
Наименование ЛПУ___________________________отделение_________________________
Ф.И.О. врача, направившего образец крови__________________________________________
Контактный телефон_____________________________________________________________
Ф.И.О. пациента________________________________________________________________
Дата и год рождения_______________ № медицинской карты ________________________
Диагноз: ______________________________________________________________________
Трансфузионный анамнез (кол-во трансфузий и реакции на них) _______________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Акушерский
анамнез
(кол-во
беременностей,
кол-во
родов,
ГБН
детей,
выкидыши,
мертворождения, аборты _________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Результаты иммуногематологического исследования крови, полученные в ЛПУ:
Группа крови по АВО __________________________________
Резус – принадлежность ________________________________
Наличие антиэритроцитарных аллоантител________________
Наименование компонентов крови необходимых для трансфузии________________________
_______________________________________________________________________________
Дата________________________________ Подпись врача____________________________
Примечание: пробирка с образцом крови должна быть промаркирована (Ф.И.О. пациента,
дата взятия крови, № медицинской карты).
Если Hb пациента ниже 70 г/л, для определения групповой и резус – принадлежности,
проведения индивидуального подбора необходимо взять две пробирки:
1 пробирка с консервантом (3 мл),
2 пробирка без консерванта (5 мл).
Литература (нормативные документы)
1. Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 № 2 «Об утверждении инструкций по
иммуносерологии»
2. Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 № 363 «Об утверждении Инструкции по
применению компонентов крови»
3. Приказ МЗ РТ от 13.05.1999 № 367 «О мерах по предупреждению
осложнений при переливании компонентов, препаратов крови, кровезаменителей»
4. Приказ МЗ РТ от 05.08.2004 №1135 «О совершенствовании работы по
профилактике посттрансфузионных осложнений в учреждениях здравоохранения
Республики Татарстан»
5. Приказ МЗ СССР № 700 от 23.05.1985 «О мерах по дальнейшему
предупреждению осложнений при переливании крови, ее компонентов, препаратов
и кровезаменителей»
6. Приказ МЗ РТ от 27.04.2004 № 691 «О совершенствовании
преконцепционной,
пренатальной
и
постнатальной
профилактики
иммуноконфликтной беременности в Республике Татарстан»
7. Приказ МЗ РФ от 25.12.1997 №380 «О состоянии и мерах по
совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в
учреждениях здравоохранения Российской Федерации».
8. Приказ МЗ РТ от 16.07.2004 № 1047 «О порядке получения, учета и хранения
компонентов крови»
9. Методические указания № 52001-109 МЗРФ, РНИИ гематологии и
трансфузиологии
«Требования
к
проведению
иммуногематологических
исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ», Санкт- Петербург, 2002 г.
10.Методические рекомендации МЗ РФ «Алгоритмы исследования антигенов
эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях»,
Санкт- Петербург, 2000 г.
11.Методическое письмо Минздравсоцразвития № 15-4/3118-09 от 10.10.2008 «О
порядке проведения иммуногематологических исследований у беременных,
рожениц, плодов и новорожденных».
12.Методические указания «Организация иммуносерологических исследований
(определение группы крови и резус фактора) больным в лабораториях лечебнопрофилактических учреждений г. Самары и Самарской области».
13.Инструкция о порядке проведения иммуногематологических исследований
пациентов в учреждениях здравоохранения Санкт-Петербурга, 2005 г.
14.Инструкции по использованию гелевой диагностической системы.
15.«Групповые антигены эритроцитов. Концепция совместимости» С.И.Донсков,
В.А.Мороков, И.В.Дубинин, Москва, 2008 г.
16.«Группы крови человека. Основы иммуногематологии» Н.В.Минеева, СанктПетербург, 2004 г.
17.Пособие для врачей «Посттрансфузионные гемолитические осложнения
(причины, изосерологическая диагностика и профилактика)» утверждённые МЗ РФ.
Санкт-Петербург, 1997 г.
91500.09.12.05.006
Приложение № 3
к приказу МЗ РТ
от 15.07.2010 г. № 908
ТЕХНОЛОГИЯ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПРОСТОЙ МЕДИЦИНСКОЙ УСЛУГИ
12.05.006 «Определение резус-принадлежности»
Казань, 2010
Основанием для разработки "Технологии выполнения простой медицинской
услуги 12.05.006 «Определение резус - принадлежности», является Отраслевой
классификатор "Простые медицинские услуги" (ОК ПМУ N 91500.09.0001-2001),
утвержденный приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от
10 апреля 2001 г. N 113.
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1 Сокращения.
ГУЗ РСПК МЗ РТ – Государственное учреждение здравоохранения
«Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения
Республики Татарстан»
КЛД – клиническая лабораторная диагностика
ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение
МЗ РТ – Министерство здравоохранения Республики Татарстан
МЗ РФ – Министерство здравоохранения Российской Федерации
ПМУ – простая медицинская услуга
РПГА – реакция прямой гемагглютинации
ТВ ПМУ - технология выполнения простой медицинской услуги
1.2 Определения
Простая медицинская услуга - неделимая услуга, выполняемая по формуле
«пациент» + «специалист» = «один элемент профилактики, диагностики или
лечения».
Иммуногематология – наука о групповых свойствах крови.
Система Резус – одна из наиболее полиморфных антигенных систем
эритроцитов человека. Она включает около 50 серологически различных антигенов,
не считая слабых, переходных и парциальных форм. На эритроцитах человека
имеются 5 основных антигенов системы Резус (D, C, c, E, e). Наибольшее
клиническое значение имеет антиген D. Обладая выраженными иммуногенными
свойствами, антиген D в 95% является причиной гемолитической болезни
новорожденного, а также причиной тяжёлых посттрансфузионных осложнений.
Лиц, имеющих антиген D, относят к Rh+, не имеющих антиген D относят к Rh-.
Антиген D имеет слабые варианты, объединяемые в группу Du, частота
которой в популяции составляет около 1%. Эти эритроциты слабо или вообще не
агглютинируются полными анти-Rh-антителами (Ig М) в реакции прямой
агглютинации.
Реципиенты, содержащие антиген Du, должны быть отнесены к резусотрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так
как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Поэтому
кровь реципиентов необязательно тестировать на присутствие Du.
Иммуногенность других (минорных) антигенов системы Резус значительно
ниже и убывает в ряду: с>Е>С>е. Определение минорных антигенов системы Резус,
как правило, производится при необходимости многократных трансфузий, в тех
случаях, когда в сыворотке реципиента обнаружены иммунные антитела к
антигенам системы Резус, в том числе при индивидуальном подборе крови.
Универсальный реагент антирезус Rh0(D) – применяется для определения
резус – принадлежности крови, независимо от её групповой принадлежности по
системе АВО. Реагент готовят из сывороток человека, содержащие неполные резус –
антитела Ig G с добавлением 33% раствора полиглюкина.
Цоликлон анти-D Супер – это реагент, содержащий моноклональные анти-D
антитела, которые продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате
слияния человеческой лимфобластной линии с миеломной клеточной линией мыши.
Моноклональные антитела принадлежат к классу иммуноглобулинов Ig М, являются
полными антителами и вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих
D антиген.
Агглютинация – это реакция взаимодействия антигена со специфическим
антителом, проявляется в виде агрегации (склеивания) эритроцитов.
Аутоантитела - это антитела, имеющие специфичность к собственным
антигенам индивида.
Неспецифическая агглютинация - это агглютинация неожиданная, атипичная,
не свойственная конкретной групповой антигенной системе. В основе
неспецифической агглютинации лежат определённые специфические механизмы.
На появление неспецифической агглютинации влияют: белковый состав среды,
солевой состав среды, состояние свёртывающей системы крови, гормонального
фона.
Гелевая методика - это метод определения резус - принадлежности,
основанный на комбинации методов агглютинации и гель-фильтрации. Проводится
с помощью пластиковых диагностических карточек, которые состоят из
микропробирок, заполненных полиакриламидным гелем и соответствующими
реагентами.
1.3. Сведения о разработчиках
В разработке «Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.05.006
«Определение резус - принадлежности» участвовали специалисты Министерства
здравоохранения Республики Татарстан и Государственного учреждения
здравоохранения «Республиканская станция переливания крови Министерства
здравоохранения Республики Татарстан » (см. таблицу 1).
Таблица 1
Сведения о разработчиках «Технологии выполнения простой медицинской услуги
12.05.006 «Определение резус - принадлежности»
ФИО
разработчиков
Лысенко Галина
Викторовна
Бурыкин Игорь
Михайлович
Кочнев
Александр
Владимирович
Закирова
Ильмира
Нуриахметовна
Сидорук Евгений
Александрович
Сибгатуллина
Лилия
Нагимзяновна
Хамидуллина
Эльмира
Рашитовна
Гадыльшина
Райса Сагитовна
Бельская Елена
Евгеньевна
Место работы, занимаемая
должность, степень, звание
Начальник Управления
качества медицинской
помощи и отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Начальник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Адрес места
Рабочий телефон
работы
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-73
Островского, д.11/6
Ведущий советник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Ведущий консультант
отдела отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Главный врач ГУЗ РСПК
МЗ РТ, главный внештатный
специалист трансфузиолог
МЗ РТ, к.м.н.
Заместитель главного врача
по медицинской части ГУЗ
РСПК МЗ РТ.
Заведующая
организационнометодическим отделом ГУЗ
РСПК МЗ РТ
Заведующая
иммунологическим
отделением ГУЗ РСПК МЗ
РТ
Врач клинической
лабораторной диагностики
иммунологического
отделения ГУЗ РСПК МЗ РТ
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-76
Островского, д.11/6
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-28-03
420029, г. Казань,
ул.Сибирский тракт,
д. 33
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 273-43-72
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
(843) 273-78-23
Рецензенты:
Д.Т.Сиразитдинов – главный специалист эксперт МЗ РТ по клинической
лабораторной диагностике.
Н.Н.Аксенова – заведующая кабинетом гемотрансфузий Государственного
учреждения здравоохранения «Республиканский онкологический диспансер МЗ
РТ», врач-хирург высшей категории, к.м.н.;
Мухамедов Д.Р. – врач анестезиолог-реаниматолог Муниципального бюджетного
учреждения здравоохранения «Апастовская центральная районная больница».
1.4. Цели и задачи
ТВ ПМУ «Определение резус - принадлежности» разработана с целью
нормативного обеспечения и унификации процесса выполнения простой
медицинской услуги 12.05.006 «Определение резус - принадлежности» в
медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан.
ТВ ПМУ разработана для решения следующих задач:
- нормативного обеспечения внедрения стандарта ТВ ПМУ «Определение
резус - принадлежности»;
- установления единых требований к оказанию ПМУ «Определение резус принадлежности»;
- унификации расчетов трудозатрат на выполнение ТВ ПМУ «Определение
резус - принадлежности» в медицинских учреждениях на территории Республики
Татарстан;
- контроля качества и безопасности, оказанной пациенту ПМУ «Определение
резус - принадлежности» в медицинских учреждениях на территории Республики
Татарстан;
- проверки на соответствие установленным требованиям при проведении
процедуры лицензирования;
- защиты прав пациента и врача при разрешении спорных и конфликтных
вопросов.
ТВ ПМУ представляет собой систематизированный свод медицинских правил
и условий, технического обеспечения, определяющий порядок и последовательность
действий, выполняемых медицинским персоналом.
При разработке ТВ ПМУ «Определение резус - принадлежности» использовались
нормативные документы (приказы, инструкции, методические указания МЗ РФ и
МЗ РТ), учитывались результаты научных исследований.
2.
ТРЕБОВАНИЯ
ОТРАСЛЕВЫХ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПМУ
СТАНДАРТОВ
ТЕХНОЛОГИЙ
2.1. Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, включая
требования к обеспечению безопасности
Определение резус - принадлежности проводят специалисты, имеющие
подготовку по вопросам иммуногематологии на базе учреждений службы крови РТ
и/или на специализированных циклах усовершенствования на базе учреждений
дополнительного профессионального образования (см. таблицу 2).
Таблица 2
Требования к специалистам для выполнения ПМУ
«Определение резус–принадлежности».
Медицинское
учреждение
Выполнение ПМУ
«Определение резуспринадлежности»
Медицинский
персонал
Стационар, в том
числе дневной в
амбулаторнополиклинических
условиях
Лечащий или
Первично и перед
дежурный врач
каждым переливанием
крови и её
Врачкомпонентов
трансфузиолог
Централизованное
Врач КЛД или
переопределение
биолог КЛД
Другие ЛПУ
Для амбулаторных
пациентов
Врач КЛД или
биолог КЛД
Дополнительные
требования к
медицинскому
персоналу
Должны иметь
специальную
подготовку по вопросам
иммуногематологии на
специализированных
циклах
усовершенствования на
базе учреждений
дополнительного
профессионального
образования и/или на
базе учреждений
службы крови РТ не
реже одного раза в 5 лет
Все манипуляции проводятся в медицинской одежде с использованием
индивидуальных средств защиты (медицинские перчатки, защитные очки или
щитки). С любыми образцами крови пациента следует обращаться как с
потенциальными переносчиками инфекционных заболеваний.
2.2. Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Таблица 3
Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Наименование ПМУ
Условия оказания
12.05.006 «Определение резус Амбулаторно-поликлинические
принадлежности»
12.05.006 «Определение резус Помощь в условиях стационара, в
принадлежности»
том числе дневного стационара
Функциональное
назначение
Диагностика
Диагностика
2.3. Материальные ресурсы.
Для выполнения ПМУ «Определение резус–принадлежности» должно быть
оснащено отдельное место (или специальное помещение), которое оборудуется
согласно требованиям приказа МЗ РФ от 09.01.1998 №2 «Об утверждении
инструкций по иммуносерологии».
2.3.1. Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения
Таблица 4
Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения, необходимые для
определения резус - принадлежности, а также альтернативные приборы и изделия
медицинской техники.
Наименование прибора, изделия
медицинской техники и др.
Количество
приборов,
инструментов,
изделий
медицинской
техники
Альтернативный прибор, изделие
медицинской техники
Определение резус – принадлежности
при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D)
Стол лабораторный
Стул
Настольная лампа
Центрифужные пробирки
Пипетки Пастера
1 шт.
1 шт.
1 шт.
2 шт. на 1
исследование
1 шт.
Песочные часы на 3 минуты
Лупа с 4-8-х кратным увеличением
Штатив лабораторный на 10 гнёзд
Стеклянные стаканы
Центрифуга лабораторная ОПН-3
1 шт.
1 шт.
1 шт.
2 шт.
1 шт.
Стол с покрытием из пластика
Настенная лампа
Пробирки биологические
Автоматические пипетки
переменного объёма 20-200 мкл
Секундомер
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная СМ-6 М,
ELMI
Определение резус – принадлежности
при помощи моноклонального реагента анти-D Супер
Стол лабораторный
1 шт.
Стол с покрытием из пластика
Стул
1 шт.
Настольная лампа
1 шт.
Настенная лампа
Планшеты для иммуногематоло1 шт. на 1
Тарелки фарфоровые или
гических исследований
исследование
эмалированные
Пипетки Пастера
1 шт.
Автоматические пипетки
переменного объёма 20-200 мкл
Песочные часы на 3 минуты
1 шт.
Секундомер
Лупа с 4-8-хкратным увеличением
1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнёзд
1 шт.
Центрифуга лабораторная
1 шт.
Центрифуга лабораторная
ОПН-3
СМ-6 М, ELMI
Стеклянные стаканы
2 шт.
Стеклянные баночки
Определение резус – принадлежности гелевой методикой
Стол лабораторный
1 шт.
Стол с покрытием из пластика
Стул
1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнёзд
1 шт.
Стеклянные стаканы
2 шт.
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная
1 шт.
Центрифуга лабораторная
ОПН-3
СМ-6 М, ELMI
Центрифуга для гелевых пластиковых
карт
Автоматическая пипетка переменного
объёма
Штатив для автоматических пипеток
переменного объема
Пробирки центрифужные
1 шт.
5-40 мкл 1 шт.
100-1000 мкл 1 шт.
1 шт.
1 шт.
2.3.2. Реактивы
Для выполнения ПМУ «Определение резус - принадлежности» используются
различные иммунологические стандарты (см. таблицу 5).
Таблица 5
Иммунологические стандарты, используемые для определения
резус – принадлежности.
Документ,
регламентирующий
использование
реактива
Количество
реактива,
необходимое
для выполнения
1-го
исследования
Сроки и
особенности
хранения
реактива,
работы с
ним*
Особен-ности
уничтожения
и обеззараживания
реактива или
продуктов
реакций
Раствор
полиглюкина
33%
Раствор натрия
хлорида, 0,9%
2 капли
(100 мкл)
Срок годности 6 месяцев с даты
изготовления.
После вскрытия
годен в течение 2
недель.
Хранить при
t+18…+20 0С .
1 капля (50
мкл)
Срок годности -6
месяцев с даты
изготовления.
После вскрытия
годен в течение
срока годности.
По 3-5 мл в
каждую
пробирку
Хранить при
t+15…+25 0С.
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с
содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной
посуды производится с применением дезинфицирующих
средств, не содержащих активного хлора.
Универсальный
реагент
антирезус
Rh0(D)
Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 №2 «Об утверждении
инструкций по иммуносерологии»
Определение резус – принадлежности
при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D)
Хранить при
t+2…+8 0С.
Требования
к
обеспечению
безопасност
и персонала
при работе с
реактивом
Работа в медицинской спец. одежде, медицинских перчатках,
защитных очках (щитках)
Наименование
реактива
2 капли
(100 мкл)
Срок годности –
1 год с даты
изготовления.
После вскрытия
годен в течение 1
месяца.
Работа в медицинской спец. одежде, медицинских
перчатках, защитных очках (щитках)
Хранить при
t+2…+8 0С.
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез.
средств с содержанием активного хлора,
дезинфекция лабораторной посуды производится
с применением дезинфицирующих средств, не
содержащих активного хлора.
Цоликлон
анти-D Супер
Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 №2 «Об
утверждении инструкций по иммуносерологии»
Определение резус – принадлежности при помощи цоликлона анти-D Супер
Инструкции,
прилагаемые
к
соответствую
щим
диагностическим
картам
Раствор для
приготовлени Инструкция,
я суспензии прилагаемая к
исследуемых раствору
эритроцитов
От 1/4 до 1 шт.
в зависимости
от
Хранить при
используемой
t+15…+25 0С.
диагностическо
й карты.
От 0,5 до 1,0
мл в
Хранить при
зависимости от t+2…+8 0С.
производителя
Работа в медицинской спецодежде,
медицинских перчатках, защитных
очках (щитках)
Диагностические карты
для
определения
резуспринадлежности
Произвести дезинфекцию как
биологических отходов
(класс отходов Б)
Определение резус – принадлежности гелевой методикой
* - Температура внутри холодильной камеры, где хранятся реактивы,
контролируется средним медработником дважды в день. Показания термометра
регистрируются в «Журнале регистрации температурного режима хранения
диагностических стандартов для иммуногематологических исследований» (см.
приложение 1).
2.3.3. Прочий расходуемый материал
Для выполнения ПМУ «Определение резус - принадлежности» используются
прочий расходуемый материал (см. таблицу 6).
Таблица 6
Прочий расходуемый материал,
необходимый для определения резус - принадлежности
Наименование
Количество
Примечание
Определение резус – принадлежности
при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона анти-D Супер
Ватно-марлевый тампон
На 1 тампон: вата - 3,0 гр.,
Для подсушивания пипетки и
бинт - 30 см.
стеклянной палочки
Медицинские перчатки
1 пара на каждые 3 часа Заменить немедленно при
одноразовые
работы
нарушении целостности или
сильном загрязнении.
Раствор натрия хлорида, 0,9% 0,5 л
Для промывания пипеток и
палочек
Спирт
этиловый 3,0 гр. на 1 обработку
Для обработки рук персонала
медицинский, 70,0%
после окончания работы
Дезинфицирующий раствор
В
соответствии
с Для
дезинфекции
методическими указаниями биологического материала,
по применению дез. средств, лабораторной
посуды
и
разрешённых
к рабочего места.
использованию в РФ и РТ
Определение резус – принадлежности гелевой методикой
Медицинские перчатки
1 пара на каждые 3 часа Заменить немедленно при
одноразовые
работы
нарушении целостности или
сильном загрязнении.
3,0 гр. на 1 обработку
Для обработки рук персонала
Спирт этиловый
после окончания работы
медицинский, 70,0%
10 гр. на 1 обработку
Для обработки центрифуги
Наконечники
для 3 шт. на 1 исследование
автоматических
пипеток
переменного
объема,
одноразовые
Дезинфицирующий раствор
В
соответствии
с Для
дезинфекции
методическими указаниями биологического материала,
по применению дез. средств, лабораторной
посуды
и
разрешённых
к рабочего места.
использованию в РФ
2.4. Характеристика методики выполнения ПМУ «Определение резус –
принадлежности»
2.4.1 Требования к образцам крови.
Перед процедурой забора крови на исследование у пациента уточняются его
фамилия, имя и отчество. Берется сухая чистая пробирка, на которую наносится
следующая информация о пациенте: Ф.И.О., дата забора крови, для стационарных
больных - № медицинской карты. Кровь пациента забирается из вены в количестве
3-5 мл и переносится в подписанную пробирку. Для исследования используют
цельную кровь, отмытые эритроциты, эритроциты в плазме, сыворотке, консерванте
или физиологическом растворе.
При наличии у пациента анемии (содержание гемоглобина крови менее 70 г/л)
для получения достаточного количества эритроцитов использовать для
исследования образец крови пациента, с консервантом (цитрат натрия, ЭДТА).
Соотношение исследуемой крови и цитрата натрия 10:1, исследуемой крови и ЭДТА
100:1.
Использовать для исследования кровь пациента не более двухдневного срока
хранения при t+20С…+80С.
Не использовать для исследований гемолизированную кровь. При наличии гемолиза
процедуру взятия крови повторить.
2.4.2. Требования к помещению.
Иммуногематологические исследования проводятся в помещении с естественным
освещением, температура воздуха в помещении должна быть в пределах +15 0С
…+250С.
2.4.3. Требования к объемам исследований в зависимости от медицинского
учреждения.
2.4.3.1. Стационар, в том числе дневной стационар в амбулаторнополиклинических условиях.
При поступлении в стационар резус – принадлежность пациенту определяет
дежурный или лечащий врач универсальным реагентом антирезус Rh0(D) или
цоликлоном анти-D Супер. Во избежание ошибки процедуру взятия крови и
определения резус–принадлежности повторяют. Повторное определение резус –
принадлежности крови осуществляется централизованно универсальным реагентом
антирезус Rh0(D), цоликлоном анти-D Супер или гелевой методикой в лаборатории
ЛПУ, кабинете переливания крови или в отделении переливания крови. При
направлении на централизованное переопределение образец крови пациента
сопровождается направлением (см. приложение 2).
Для первичного определения при поступлении пациента и переопределения
резус–принадлежности используются диагностические стандарты различных серий.
Результат переопределения вклеивается в медицинскую карту (см. приложение
2). При совпадении результатов первичного и централизованного переопределения
резус–принадлежность крови пациента выносится на титульный лист медицинской
карты, скрепляется подписью врача, проводившего первичное определение.
Категорически
запрещается
переносить
сведения
о
резус
принадлежности крови пациента с любого другого документа!
Перед переливанием крови и её компонентов определение резус принадлежности крови реципиента проводится с использованием универсального
реагента антирезус Rh0(D) или цоликлона анти-D Супер. Предтрансфузионный
образец крови реципиента хранить при температуре t+20С…+80С в течение 5 суток
для дальнейшего исследования крови реципиента в специализированной
лаборатории службы крови при возникновении посттрансфузионного осложнения.
Определение резус - принадлежности донорской крови из сегмента трубки
контейнера перед трансфузией не проводится.
2.4.3.2. Женская консультация.
При постановке на учет по беременности резус–принадлежность определяют
универсальным реагентом антирезус Rh0(D) или цоликлоном анти-D Супер.
Повторное определение резус–принадлежности производят в 28-30 недель
беременности при помощи универсального реагента антирезус Rh0(D) или
цоликлона анти-D Супер другой серии, или гелевой методикой.
Результат определения резус–принадлежности, полученный в лаборатории
женской консультации заносится в «Журнал регистрации результатов определения
групповой и резус–принадлежности» (см. приложение 3).
Категорически запрещается переносить сведения о резус-принадлежности
крови пациента с любого другого документа!
При несовпадении результатов первичного и повторного исследования образец
крови беременной женщины направить в специализированную лабораторию СПК
или ОПК для дальнейшего исследования.
2.4.3.2. Поликлиника.
Для
амбулаторно-поликлинических
пациентов
определение
резус–
принадлежности производится универсальным реагентом антирезус Rh0(D),
цоликлоном анти-D Супер или гелевой методикой в клинико-диагностической
лаборатории.
Результат определения резус–принадлежности, полученный в лаборатории
поликлиники заносится в «Журнал регистрации результатов определения групповой
и резус - принадлежности» (см. приложение 3).
Категорически запрещается переносить сведения о резус-принадлежности
крови пациента с любого другого документа!
2.4.4. Методы определения резус–принадлежности.
Резус-принадлежность определяется в реакции агглютинации с помощью
моноклональных реагентов или изоиммунных антирезусных сывороток,
предназначенных для выявления Rh(D) - aнтигена в реакции прямой агглютинации
(на плоскости и в пробирочном тесте; в солевой среде; в присутствии
высокомолекулярных
усилителей;
с
эритроцитами,
обработанными
протеолитическими ферментами) или в непрямом антиглобулиновом тесте
(непрямая проба Кумбса). Метод определения зависит от класса антител в реагенте:
если в нем присутствуют полные антитела (класса IgM), то реагент используется для
определения резус-фактора методом прямой агглютинации в солевой среде или на
плоскости; если в нем содержатся неполные антитела (класса IgG), то он
используется в реакции агглютинации в присутствии высокомолекулярных
усилителей (альбумина, 10 % раствора желатина, 33 % раствора полиглюкина и др.),
с эритроцитами, обработанными протеолитическими ферментами, в непрямом
антиглобулиновом тесте .
Прежде чем приступить к исследованию, необходимо произвести
макроскопическую оценку реагентов: реагенты должны быть прозрачными, без
осадка и других признаков загрязнения; ампулы (флаконы) после вскрытия должны
быть закрытыми для предотвращения подсыхания реагентов. Проверить срок
годности реагентов (сроки годности реагентов см. таблица 5).
Перед работой иммунологические стандарты выдержать при комнатной
температуре около 1 часа.
2.4.4.1. Определение резус–принадлежности при помощи универсального
реагента антирезус Rh0(D) для экспресс - метода в пробирках без подогрева.
Порядок проведения исследования:
1. Взять две пробирки, подписать.
2. В первую пробирку (опыт) добавить две капли универсального реагента
антирезус (100 мкл). Во вторую (контрольная пробирка)- две капли раствора натрия
хлорида 0,9% (100 мкл) и одну каплю (50 мкл) 33% раствора полиглюкина.
3. В обе пробирки добавить по одной капле (50 мкл) исследуемых эритроцитов
(см. рисунок 1).
Рисунок 1. Внесение исследуемых эритроцитов.
4. Содержимое пробирок перемешать встряхиванием и затем медленно
поворачивать по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы
содержимое растекалось по ее стенкам (см. рисунок 2). Эту процедуру выполнять в
течение трех минут.
Рисунок 2. Перемешивание содержимого пробирок.
5. Через три минуты в обе пробирки добавить по 3-5 мл физ. раствора.
Содержимое пробирок перемешать 2-3-кратным перевертыванием пробирок, не
встряхивая.
Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом
или через лупу.
При наличии агглютинации в виде взвеси мелких или крупных красных
комочков на фоне просветлённой или полностью обесцвеченной жидкости
исследуемую кровь считают резус–положительной Rh0 (D)+(полож.) (см. рисунок 3)
Рисунок 3. Исследуемая кровь Rh(D)+ (положительная)
При отсутствии агглютинации (в пробирке наблюдается равномерно
окрашенная слегка опалесцирующая жидкость без признаков агглютинации
эритроцитов) исследуемую кровь следует считать резус–отрицательной Rh0(D)(отр.) (см. рисунок 4).
Рисунок 4. Исследуемая кровь Rh0(D)-(отрицательная)
Результат исследования учитывается как истинный только при отрицательном
результате в контрольной пробирке. При наличии агглютинации в контрольной
пробирке исследование повторить после процедуры отмывания эритроцитов. Для
этого в центрифужную пробирку внести исследуемые эритроциты (0,5 – 1 мл),
добавить раствор натрия хлорида 0,9% до верха пробирки. Пробирку закрыть
пробкой. Содержимое пробирки перемешать путём 1-2-хкратного перевёртывания
пробирки. Центрифугировать при 1500-200об/мин. в течение 5 минут. Осторожно
удалить надосадочную жидкость. Процедуру повторить 3-4 раза. После процедуры
отмывания исследование повторить.
2.4.4.2. Определение резус–принадлежности при помощи цоликлона анти-D
Супер
Техника определения:
1. Промаркировать планшет, для чего указать Ф.И.О. пациента, кровь
которого исследуют. На планшет нанести одну большую каплю (100 мкл) цоликлона
анти-D Супер.
2. Радом нанести одну маленькую каплю (10 мкл) исследуемых эритроцитов.
3. Перемешать стеклянной палочкой. Через 10-20 секунд пластину мягко
покачать. Наблюдать за реакцией три минуты. Через три минуты считать результат
реакции.
Трактовка результатов производится по наличию или отсутствию
агглютинации эритроцитов.
Положительный результат (+) выражается в агглютинации эритроцитов,
агглютинаты видны невооруженным глазом в виде или крупных агрегатов. Кровь
относится к Rh0(D)+(полож.) (см. рисунок 5)
Рисунок 5. Исследуемая кровь Rh0(D)+ (положительная)
При отрицательном результате (-) капля остаётся равномерно окрашенной в
красный цвет, агглютинации в ней не обнаруживается. Кровь Rh0(D)-(отр.) (см.
рисунок 6)
Рисунок 6. Исследуемая кровь Rh0(D)-(отрицательная)
2.4.4.3. Определение резус–принадлежности при помощи гелевой методики.
Для определения резус–принадлежности использовать диагностическую
карту, содержащую микропробирки для идентификации антигена D системы Резус.
Микропробирки имеют цветную (серую) и соответствующую буквенную
маркировку (D).
В настоящее время существует множество модификаций карт для определения
резус-принадлежности крови. К каждой карте прилагается инструкция по
использованию. Перед работой необходимо внимательно ознакомиться с
прилагаемой инструкцией.
Перед исследованием провести макроскопическую оценку диагностической
карты. Не использовать карту, если в микропробирках наблюдается изменение
цвета, в геле имеются взвешенные пузырьки, наблюдается уменьшение объёма геля
или его растрескивание. Микропробирки должны содержать надосадочную
жидкость. Если наблюдается рассредоточенное каплеобразование в верхней части
микропробирки, рекомендуется центрифугировать карты перед использованием.
Если капли не оседают, карту не использовать.
2.5. Дополнительные сведения об
«Определение резус–принадлежности».
особенностях
выполнения
ПМУ
У некоторых категорий пациентов встречаются затруднения при определении
резус–принадлежности. Индивидуальные особенности, характер затруднений и
способы решения проблемы представлены в таблице 8.
Таблица 8
Категории пациентов, у которых встречаются затруднения
при определении резус–принадлежности.
№
п/п
Категория
Индивидуальные
Характер
пациентов
особенности
затруднения
Слабо выраженная
агглютинация, почти
не различимая глазом.
Вероятность
пропустить реакцию
1.
Беременные
Слабо выражена
активность
антигена D
Способ решения
проблемы
Использовать различные
типы реагентов.
При затруднении
направить кровь больного
агглютинации
2.
Больные с
гематологичес
кими или
онкологически
ми
заболеваниями
и другие
Ослабление
активности или
полная утрата
антигена D
Слабо выраженная
агглютинация или ее
отсутствие.
Наличие
неспецифических
алло- и/или
аутоантител
Положительные
результаты контроля
Слабые варианты
антигена D
Несовпадение
результатов
исследования,
полученных при
исследовании и
произведённых ранее
Гиперлипидемия
Возможна
неспецифическая
агглютинация
Массивная
гемотрансфузия
или трансфузия
несовместимых
переносчиков
газов крови по
системе Резус
Сомнительный
результат
исследования
Внутривенное
введение
растворов
декстранов или
желатина.
Ложноположительны
е реакции
агглютинации и (или)
положительный
результат контроля (в
т.ч. аутоконтроля)
4.
У различных
категорий
пациентов
в специализированную
лабораторию службы
крови
Использовать различные
типы реагентов.
При затруднении
направить кровь больного
в специализированную
лабораторию службы
крови.
Использовать гелевую
методику.
При затруднении
направить кровь больного
в специализированную
лабораторию службы
крови.
Использовать различные
типы реагентов или
гелевую методику.
При затруднении
направить кровь больного
в специализированную
лабораторию службы
крови.
Исследуемые эритроциты
отмыть.
При затруднении
направить кровь больного
в специализированную
лабораторию службы
крови.
Использовать гелевую
методику.
При затруднении
направить кровь больного
в специализированную
лабораторию службы
крови.
Исследуемые эритроциты
отмыть.
При затруднении
направить кровь больного
в специализированную
лабораторию службы
крови.
Образец крови больного направляется в специализированную лабораторию (в
учреждения службы крови) в сопровождении направления (приложение № 4).
2.6. Достигаемые результаты и их оценка
Выполнение требований ПМУ «Определение резус–принадлежности»
является профилактикой посттрансфузионных осложнений гемолитического типа и
адекватному ведению несовместимой по резус–принадлежности беременности.
За период 2006-2008 гг. специалистами ГУЗ РСПК МЗ РТ было проверено 72
медицинских учреждения РТ. Из них:
ЛПУ (городские и центральные районные больницы) – 36,
Женские консультации – 14,
Поликлиники г. Казани – 22.
По результатам проверок выявлены следующие нарушения действующих
нормативных документов:
- к проведению иммуногематологических исследований допускаются
специалисты, не имеющие специальной подготовки по иммуногематологии на базе
учреждений службы крови РТ или на специализированных циклах
усовершенствования,
- при проведении иммуногематологических исследований специалисты не
соблюдают требования соответствующих методик, имеют место неверное
определение резус–принадлежности, невыявление слабых вариантов антигена D.
- не проводится централизованное переопределение резус–принадлежности в
лабораториях ЛПУ. Повторное переопределение могло бы выявить ошибки при
первичном исследовании и, как следствие, предотвратить несовместимые
трансфузии. Необходимость
централизованного
переопределения
резус–
принадлежности регламентируется приказами МЗ РФ и МЗ РТ.
За период 2006-2008 годы зарегистрированы 6 случаев трансфузии
переносчиков газов крови несовместимых по резус–принадлежности, причиной
которых стали ошибки при исследовании на резус–принадлежность крови
пациентов. Из них в одном случае трансфузия была прекращена при проведении
биологической пробы из-за развившейся реакции, в двух случаях несовместимые
трансфузии привели к выработке антител к антигенам системы Резус, в трёх случаях
перелиты переносчики газов крови несовместимые по системе Резус в результате
чего могла произойти сенсибилизация реципиентов антигенами системы Резус.
Неверное определение резус–принадлежности у беременной женщины
привело к неправильному ведению беременности и, как следствие, к развитию
гемолитической болезни новорожденного с летальным исходом.
2.7. Требования к режиму труда, отдыха, лечения, реабилитации, диетическим
назначениям и ограничениям, к подготовке пациента в процессе выполнения
Технологии
Дополнительные рекомендации, назначения и ограничения режима труда,
отдыха, лечения или реабилитации не предусмотрены.
Диетические назначения и ограничения не предусмотрены.
Для получения достоверных результатов выполнения ПМУ «Определение
резус–принадлежности» забор образца крови пациента производить до проведения
инфузионной терапии растворами кровезаменителей (декстраны).
3. ГРАФИЧЕСКОЕ,
ВЫПОЛНЕНИЯ ПМУ
Вид
исследования
Определение
Rh0(D) принадл
ежности
крови
Диагностические
стандарты
для
проведения
исследован
ия
Универсальный
реагент
антирезус
Rh0(D)
Цоликлон
анти-D
Супер
реактив
СХЕМАТИЧЕСКИЕ
Кровь
пациента
Из вены
Метод
определени
я
В
пробирке
без
подогрева
Из вены
На
или
плоскости
капилРПГА
лярная
контроль
Исследуемая кровь
Rh0(D)+(положительная)
И
ТАБЛИЧНОЕ
Соотношение
диагностичес
кий стандарт/
исследуемая
кровь
ПРЕДСТАВЛЕНИЕ
ТЕХНОЛОГИЙ
Экспозиция
Добавление
Раствора
натрия
хлорида 0,9%
2:1
3 минуты
С
раствором
натрия
По 3-5 мл в
хлорида
каждую
0,9%
и
пробирку
33% р-ром
полиглюк
ина
10:1
3 минуты
Не
добавлять
реактив
Контроль
нет
контроль
Исследуемая кровь
Rh0(D)-(отрицательная )
Рисунок 7. Определение Rh0(D)–принадлежности крови при помощи универсального реагента
антирезус Rh0(D) в пробирках без подогрева
Исследуемая кровь
Rh0(D)+(положительная)
Исследуемая кровь
Rh0(D)–(отрицательная)
Рисунок 8. Определение Rh0(D)–принадлежности крови
при помощи моноклонального реагента «Цоликлон анти-D Супер»
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ ТЕМПЕРАТУРНОГО РЕЖИМА ХРАНЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ
ДЛЯ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
1.Журнал ведется отдельно для каждого холодильника,
предназначенного для хранения диагностических стандартов.
2.Показания термометра регистрируются ежедневно.
3.Страницы должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
Дата контроля
Показания термометра
Утро
Вечер
Подпись ответственного
лица
Принятые меры
Направление в КДЛ ЛПУ (ОПК, КТТ)
на иммуногематологическое исследование крови
(определение групповой и резус–принадлежности)
Ф.И.О. пациента____________________________________________________
Дата рождения___________________ № медицинской карты________________
___________________________________________________________________
(отделение)
Результат первичного определения, полученное в отделении ЛПУ:
Группа крови АВО
Резус–принадлежность
Использованы диагностические стандарты:
1)Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО или цоликлоны
(нужное подчеркнуть) следующих серий:
__________/____________годен до_________________
__________/____________годен до_________________
__________/____________годен до_________________
__________годен до_________________
2) Универсальный реагент антирезус Rh0(D) или цоликлон анти-D Супер
(нужное подчеркнуть)
следующих серий: ________________годен до_______________
Дата исследования____________ Подпись врача___________________
Результат централизованного переопределения:
Группа крови АВО
Резус–принадлежность
Антитела
Дата __________________ Подпись врача ____________________
Примечание: пробирка с образцом крови должна быть промаркирована (Ф.И.О.
пациента,
дата
взятия
крови,
№
медицинской
карты)
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППОВОЙ И РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
Страницы журнала должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
Дата
централизованного
исследова-ния
Результат
первичного
исследования
№
п/п
Ф.И.О.
пациента
Группа
крови
АВО
Резуспринадле
жность
Результат
централизованного
переопределения
группа
крови АВО
Резуспринадле
жность
Результат
скринингового
исследования
на антиэритроцитарные антитела
Диагностические
стандарты,
использованные для
централизован-ного
исследования
(наименование,
изготовитель,
№
серии, срок годности)
Отделение,
направившее
образец крови на
исследование
Направление на СПК (ОПК)
на определение групповой и резус–принадлежности,
индивидуальный подбор
(нужное подчеркнуть)
Наименование ЛПУ___________________________отделение___________________________
Ф.И.О. врача, направившего образец крови ________________________________________
Контактный телефон_____________________________________________________________
Ф.И.О. пациента__________________________________________________________________
Дата и год рождения_______________ № медицинской карты _________________________
Диагноз: ________________________________________________________________________
Трансфузионный анамнез (кол-во трансфузий и реакции на них) __________________________
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Акушерский
анамнез
(кол-во
беременностей,
кол-во
родов,
ГБН
детей,
выкидыши,
мертворождения, аборты ______________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
Результаты иммуногематологического исследования крови, полученные в ЛПУ:
Группа крови по АВО __________________________________
Резус – принадлежность ________________________________
Наличие антиэритроцитарных аллоантител________________
Наименование компонентов крови необходимых для трансфузии________________________
_________________________________________________________________________________
Дата________________________________ Подпись врача____________________________
Примечание: пробирка с образцом крови должна быть промаркирована (Ф.И.О. пациента,
дата взятия крови, № медицинской карты).
Если Hb пациента ниже 70 г/л, для определения групповой и резус – принадлежности,
проведения индивидуального подбора необходимо взять две пробирки:
1 пробирка с консервантом (3 мл),
2 пробиркака без консерванта (5 мл).
Литература (нормативные документы).
1. Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 № 2 «Об утверждении инструкций по
иммуносерологии»
2. Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 № 363 «Об утверждении Инструкции по
применению компонентов крови»
3. Приказ МЗ РТ от 13.05.1999 № 367 «О мерах по предупреждению
осложнений при переливании компонентов, препаратов крови, кровезаменителей»
4. Приказ МЗ РТ от 05.08.2004 №1135 «О совершенствовании работы по
профилактике посттрансфузионных осложнений в учреждениях здравоохранения
Республики Татарстан»
5. Приказ МЗ СССР № 700 от 23.05.1985 г. «О мерах по дальнейшему
предупреждению осложнений при переливании крови, ее компонентов, препаратов
и кровезаменителей»
6. Приказ МЗ РТ от 27.04.2004 г. № 691 «О совершенствовании
преконцепционной,
пренатальной
и
постнатальной
профилактики
иммуноконфликтной беременности в Республике Татарстан»
7. Приказ МЗ РФ от 25.12.1997 г. №380 «О состоянии и мерах по
совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в
учреждениях здравоохранения Российской Федерации».
8. Приказ МЗ РТ от 16.07.2004 г. № 1047 «О порядке получения, учета и
хранения компонентов крови»
9. Методические указания № 52001-109 МЗРФ, РНИИ гематологии и
трансфузиологии
«Требования
к
проведению
иммуногематологических
исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ», Санкт- Петербург, 2002 г.
10.Методические рекомендации МЗ РФ «Алгоритмы исследования антигенов
эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях»,
Санкт- Петербург, 2000 г.
11.Методическое письмо Минздравсоцразвития № 15-4/3118-09 от 10.10.2008 «О
порядке проведения иммуногематологических исследований у беременных,
рожениц, плодов и новорожденных».
12.Методические указания «Организация иммуносерологических исследований
(определение группы крови и резус фактора) больным в лабораториях лечебнопрофилактических учреждений г. Самары и Самарской области».
13.Инструкция о порядке проведения иммуногематологических исследований
пациентов в учреждениях здравоохранения Санкт-Петербурга, 2005 г.
14.Инструкции по использованию гелевой диагностической системы
15.«Групповые антигены эритроцитов. Концепция совместимости» С.И.Донсков,
В.А.Мороков, И.В.Дубинин, Москва, 2008 г.
16.«Группы крови человека. Основы иммуногематологии» Н.В.Минеева, СанктПетербург, 2004 г.
17.Пособие для врачей «Посттрансфузионные гемолитические осложнения
(причины, изосерологическая диагностика и профилактика)» утверждённые МЗ РФ.
Санкт-Петербург, 1997 г.
91500.09.12.05.027
Приложение № 4
к приказу МЗ РТ
от 15.07.2010 г. № 908
ТЕХНОЛОГИЯ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПРОСТОЙ МЕДИЦИНСКОЙ УСЛУГИ
12.06.027 "Исследование антител к антигенам эритроцитов"
Казань, 2010
Основанием для разработки "Технологии выполнения простой медицинской
услуги 12.06.027 "Исследование антител к антигенам эритроцитов" является
Отраслевой классификатор "Простые медицинские услуги" (ОК ПМУ N
91500.09.0001-2001), утвержденный Приказом Министерства здравоохранения
Российской Федерации от 10 апреля 2001 г. N 113.
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1 Сокращения
ГУЗ РСПК МЗ РТ – Государственное учреждение здравоохранения
«Республиканская станция переливания крови Министерства здравоохранения
Республики Татарстан»
КЛД – клиническая лабораторная диагностика
ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение
МЗ РТ – Министерство здравоохранения Республики Татарстан
МЗ РФ – Министерство здравоохранения Российской Федерации
ПМУ – простая медицинская услуга
РПГА – реакция прямой гемагглютинации
ТВ ПМУ – технология выполнения простой медицинской услуги
1.2 Определения
Агглютинация – это реакция взаимодействия антигена со специфическим
антителом, проявляется в виде агрегации (склеивания) эритроцитов.
Аллоантитела (антиэритроцитарные) – это антитела, имеющие специфичность
к антигенам эритроцитов, отсутствующим у индивида. Аллоантитела содержатся в
сыворотке индивида, не взаимодействуют с собственными антигенами эритроцитов,
но взаимодействуют с антигенами эритроцитов других индивидов и могут быть
выявлены с панелью типированных эритроцитов. По своей структуре они могут
быть полными и неполными.
Аллосенсибилизация - выработка антител на антигены, отсутствующие у
данного индивида. Синтез антител может наблюдаться в ответ на гемотрансфузии
или беременность. При последующих гемотрансфузиях может произойти
взаимодействие антигенов эритроцитов донора и антител реципиента in vivo, что
приводит к посттрансфузионному осложнению.
Антигены эритроцитов человека - это структурные образования,
расположенные на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающие
способностью взаимодействовать с соответствующими антителами и образовывать
комплекс антиген-антитело. В настоящее время известно более 236 антигенов
эритроцитов, которые распределяются в 29 генетически независимых системах.
Первостепенное клиническое значение имеют антигены систем АВО и Резус.
Эритроцитарные системы Kell, MNS, Levis, Duffi, Kidd имеют меньшее
практическое значение, так как они сравнительно редко вызывают сенсибилизацию.
Эти системы становятся значимыми при многократных гемотрансфузиях
эритроцитной массы, повторных беременностях.
Аутоантитела - это антитела, имеющие специфичность к собственным антигенам
индивида.
Естественные
анти-А,
анти-В
антитела
(агглютинины)
–
это
иммуноглобулины классов IgM, IgG, IgА, которые постоянно находятся в сыворотке
крови человека без всякого иммунного стимула. Они являются врожденными
(регулярными) и не меняются в течение жизни.
Иммунные групповые анти-А, анти-В антитела - это антитела,
вырабатываемые индивидуумом в ответ на внедрение отсутствующих групповых
антигенов А, или В, или А и В.
Идентификация антител – это установление специфичности антител,
выявленных в скрининговом исследовании.
Неполные антитела – это иммуноглобулины класса Ig G, активны только в
присутствие высокомолекулярных добавок (33 % раствора полиглюкина или 10 %
раствора желатина или антиглобулиновой сыворотки Кумбса). К неполным
антиэритроцитарным антителам относятся все виды иммунных антител.
Проба Кумбса – исследование крови пациента на наличие неполных антител с
использованием антиглобулиновой сыворотки Кумбса. Существуют две пробы
Кумбса – прямая и непрямая.
Непрямая проба Кумбса – это исследование сыворотки на наличие неполных
антител. Проводится для диагностики гемолитической болезни новорожденных
(исследуется сыворотка матери), гемотрансфузионных осложнениях.
Прямая проба Кумбса – это исследование эритроцитов на наличие
фиксированных на них антител. Проводится при гемолитической болезни
новорожденных (у ребёнка), аутоиммунной гемолитической анемии и
гемотрансфузионных осложнениях.
Неспецифическая агглютинация – это агглютинация, неожиданная, атипичная,
не свойственная конкретной групповой антигенной системе. В основе
неспецифической агглютинации лежат определённые специфические механизмы.
На появление неспецифической агглютинации влияют белковый состав среды,
солевой состав среды, состояние свёртывающей системы крови, гормонального
фона.
Полные антитела – это иммуноглобулины класса Ig M, которые начинают
вырабатываться на 3-5 сутки после иммунного стимула (первичный иммунный
ответ). Обладают высокой биологической активностью, активны в солевой среде
(растворе натрия хлорида 0,9 %)
Скрининг антител – это исследование сыворотки пациента на наличие
(отсутствие) антиэритроцитарных антител.
Гелевая методика - это метод выявления антиэритроцитарных антител,
основанный на комбинации методов агглютинации и гель-фильтрации. Проводится
с помощью
пластиковых диагностических карточек, которые состоят из
микропробирок, заполненных полиакриламидным гелем и соответствующими
реагентами (сывороткой Кумбса).
1.3 Сведения о разработчиках
В разработке «Технологии выполнения простой медицинской услуги 12.06.027
«Исследование антител к антигенам эритроцитов» участвовали специалисты
Министерства здравоохранения Республики Татарстан и Государственного
учреждения здравоохранения «Республиканская станция переливания крови
Министерства здравоохранения Республики Татарстан » (см. таблицу 1).
Таблица 1
Сведения о разработчиках «Технологии выполнения простой медицинской услуги
12.06.027 «Исследование антител к антигенам эритроцитов»
ФИО
разработчиков
Лысенко Галина
Викторовна
Бурыкин Игорь
Михайлович
Кочнев
Александр
Владимирович
Закирова
Ильмира
Нуриахметовна
Сидорук Евгений
Александрович
Сибгатуллина
Лилия
Нагимзяновна
Место работы, занимаемая
должность, степень, звание
Начальник Управления
качества медицинской
помощи и отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Начальник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Адрес места
Рабочий телефон
работы
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-73
Островского, д.11/6
Ведущий советник отдела
отраслевой стандартизации
МЗ РТ, к.м.н.
Ведущий консультант
отдела отраслевой
стандартизации МЗ РТ
Главный врач ГУЗ РСПК
МЗ РТ, главный внештатный
специалист трансфузиолог
МЗ РТ, к.м.н.
Заместитель главного врача
по медицинской части ГУЗ
РСПК МЗ РТ.
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-74
Островского, д.11/6
4200111, г. Казань, ул. (843) 231-79-76
Островского, д.11/6
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-28-03
420029, г. Казань,
ул.Сибирский тракт,
д. 33
(843) 273-43-72
Хамидуллина
Эльмира
Рашитовна
Гадыльшина
Райса Сагитовна
Бельская Елена
Евгеньевна
Заведующая
организационнометодическим отделом ГУЗ
РСПК МЗ РТ
Заведующая
иммунологическим
отделением ГУЗ РСПК МЗ
РТ
Врач клинической
лабораторной диагностики
иммунологического
отделения ГУЗ РСПК МЗ РТ
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 273-78-23
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
420088, г. Казань, ул.
Ново-Азинская, д. 33
(843) 272-26-61
Рецензенты:
Гильманов А.А. – заместитель министра здравоохранения Республики
Татарстан, заведующий кафедрой социальной гигиены и охраны общественного
здоровья КГМУ д.м.н., профессор;
Батыршин Р.Ф. - начальник Управления по лицензированию и контролю за
соответствием качества оказываемой медицинской помощи установленным
федеральным стандартам МЗ РТ, к.м.н.;
Малышева И.Ю. - начальник Управления лечебной и профилактической
помощи, начальник отдела лечебной помощи МЗ РТ;
Сиразитдинов Д.Т. – главный специалист эксперт МЗ РТ по клинической
лабораторной диагностике.
Аксенова Н.Н. – заведующая кабинетом гемотрансфузий Государственного
учреждения здравоохранения «Республиканский онкологический диспансер МЗ
РТ», врач-хирург высшей категории, к.м.н.;
Мухамедов Д.Р. – врач анестезиолог-реаниматолог Муниципального
бюджетного учреждения здравоохранения «Апастовская центральная районная
больница».
1.4 Цели и задачи
Основной целью определения антител к антигенам эритроцитов является
профилактика осложнений, возникающих у реципиентов при гемотрансфузиях, а
также определение тактики ведения беременных и раннее лечение гемолитической
болезни у новорожденных.
ТВ ПМУ "Исследование антител к антигенам эритроцитов" разработана с
целью нормативного обеспечения и унификации процесса выполнения простой
медицинской услуги 12.06.027 "Исследование антител к антигенам эритроцитов" в
медицинских учреждениях на территории Республики Татарстан.
ТВ ПМУ "Исследование антител к антигенам эритроцитов" разработана для
решения следующих задач:
- нормативного обеспечения внедрения стандарта ТВ ПМУ "Исследование
антител к антигенам эритроцитов";
- установления единых требований к оказанию ТВ ПМУ "Исследование
антител к антигенам эритроцитов";
- унификации расчетов трудозатрат на выполнение ТВ ПМУ" Исследование
антител к антигенам эритроцитов";
- контроля качества и безопасности оказанной пациенту ПМУ "Исследование
антител к антигенам эритроцитов" в медицинских учреждениях на территории
Республики Татарстан;
- проверки на соответствие установленным требованиям при проведении
процедуры лицензирования;
- защиты прав пациента и врача при разрешении спорных и конфликтных
вопросов.
ТВ ПМУ представляет собой систематизированный свод медицинских правил
и условий, технического обеспечения, определяющий порядок и последовательность
действий, выполняемых медицинским персоналом.
При разработке ТВ ПМУ "Исследование антител к антигенам эритроцитов"
использовались нормативные документы (приказы, инструкции, методические
указания МЗ РФ и МЗ РТ), учитывались результаты научных исследований.
2.
ТРЕБОВАНИЯ
ОТРАСЛЕВЫХ
ВЫПОЛНЕНИЯ ПМУ
СТАНДАРТОВ
ТЕХНОЛОГИЙ
2.1 Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, включая
требования к обеспечению безопасности
Исследование антител к антигенам эритроцитов
должны проводить
специалисты, имеющие подготовку по вопросам иммуногематологии на
специализированных циклах усовершенствования на базе учреждений
дополнительного профессионального образования или на базе ГУЗ РСПК МЗ РТ
(см. таблицу 2).
Таблица 2
Требования к специалистам для выполнения ПМУ
"Исследование антител к антигенам эритроцитов"
Медицинское
учреждение
Выполнение ПМУ
"Исследование
антител к антигенам
эритроцитов"
Медицинский
персонал
Стационар, в том
числе дневной
стационар в
амбулаторнополиклинических
условиях
Перед каждым
переливанием крови
и её компонентов
Врач КЛД или
биолог КЛД
Женская
консультация
В соответствии с
установленным
порядком (см.
приложение 1)
Врач КЛД или
биолог КЛД
Дополнительные требования к
медицинскому персоналу
Должны иметь специальную
подготовку по вопросам
иммуногематологии на
специализированных циклах
усовершенствования на базе
учреждений дополнительного
профессионального образования
и/или на базе ГУЗ РСПК МЗ РТ не
реже одного раза в 5 лет
Все манипуляции проводить в медицинской одежде с использованием
индивидуальных средств защиты (медицинские перчатки, защитные очки или
щитки). С любыми образцами крови пациента следует обращаться как с
потенциальными переносчиками инфекционных заболеваний.
2.2 Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Скрининг антител к антигенам эритроцитов (антиэритроцитарных
аллоантител)
проводить
реципиентам
перед
плановой
трансфузией
эритроцитсодержащих сред, а также беременным женщинам независимо от резуспринадлежности их крови. В экстренных случаях – после гемотрансфузии. Данный
вид исследования служит профилактикой посттрансфузионных осложнений
гемолитического типа и профилактикой гемолитической болезни новорожденных
при иммуноконфликтной беременности по системам АВО, Резус и другим
клинически значимым антигенным системам эритроцитов (см. таблицу 3).
Таблица 3
Условия выполнения ПМУ и функциональное назначение
Наименование
12.06.027 "Исследование
антител к антигенам
эритроцитов"
12.06.027 "Исследование
антител к антигенам
эритроцитов"
Условия оказания
Функциональное назначение
Амбулаторно-поликлинические Профилактика осложнений,
профилактика заболевания
Помощь в условиях стационара, Профилактика осложнений,
в том числе дневного
профилактика заболевания
стационара
2.3 Материальные ресурсы.
Для выполнения ПМУ "Исследование антител к антигенам эритроцитов"
должно быть оснащено отдельное место (или специальное помещение), которое
оборудуется согласно требованиям приказа МЗ РФ №2 от 09.01.1998 г. «Об
утверждении инструкций по иммуносерологии».
2.3.1 Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения
Таблица 4
Приборы, инструменты, изделия медицинского назначения, необходимые для
исследования антител к антигенам эритроцитов, а также альтернативные приборы и
изделия медицинской техники
Наименование прибора, изделия
медицинской техники и др.
Количество приборов,
инструментов, изделий
медицинской техники
Стол лабораторный
1 шт.
Стул
Настольная лампа
Микроскоп
Пипетка Пастера
1 шт.
1 шт.
1 шт.
1 шт.
Альтернативный прибор,
изделие медицинской
техники
Стол с покрытием из
пластика
Настенная лампа
Автоматическая пипетка
переменного объёма 20-200
мкл
Автоматическая пипетка
переменного объёма
Песочные часы на 5 и 10 минут
5-40 мкл 1 шт.
100-1000 мкл 1 шт.
По 1 шт.
Штатив лабораторный на 10 гнёзд
Стеклянные стаканы
Центрифуга лабораторная ОПН-3
1 шт.
2 шт.
1 шт.
Центрифуга для гелевых карт
Инкубатор на 370С
Баня водяная на 46-48 0С
Пробирки тонкостенные высотой не
менее 10 см
Иммунологический планшет с
лунками
1 шт.
1 шт.
Процедурные часы со
звуковым сигналом
Стеклянные баночки
Центрифуга лабораторная
СМ-6 М, ELMI
Термостат на 370С
Термостат на 46-480С
Пробирки центрифужные
3 шт.
1 шт.
2.3.2 Реактивы
Для выполнения ПМУ "Исследование антител к антигенам эритроцитов"
используются иммунологические стандарты различной специфичности (см. таблицу
5).
Таблица 5
Реактивы, необходимые для исследования антител
к антигенам эритроцитов
Наименование
реактива
Документ,
регламентиру
ющий
использование
реактива
Количество
реактива,
необходимое
для выполнения 1-го
исследования
Сроки и
особенности
хранения
реактива, работы
с ним*
Особенности
Требования
уничтожения и
к
обеззаражи-вания обеспечению
реактива или
безопасност
продуктов реакций и персонала
при работе с
реактивом
Работа в медицинской спецодежде,
медицинских перчатках, защитных
очках (щитках)
2 капли
(100 мкл)
Хранить при
t+2…+8 0С,
перед
использованием
прогреть до 4648 0С.
Срок годности
см. на упаковке
Сгустки крови обеззараживаются с
помощью дез. средств с содержанием
активного хлора, дезинфекция
лабораторной посуды производится с
применением дезинфицирующих
средств, не содержащих активного
хлора.
Раствор
желатина
10%
Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 №363 «Об
утверждении инструкций по
применению компонентов крови»
Исследование неполных антител к антигенам эритроцитов
с применением 10% раствора желатина
Стандартные
эритроциты
для скринингового исследования
антиэритроци
тарных
антител
Сыворотка с
низким
титром
антител для
контроля
1 капля
(50 мкл)
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
флакон годен в
течение 1
недели.
2 капли
(100 мкл)
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
флакон годен в
течение всего
срока годности
Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках, защитных очках
(щитках)
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с содержанием
активного хлора, дезинфекция лабораторной посуды производится с
применением дезинфицирующих средств, не содержащих активного хлора.
Раствор
натрия
Хранить при
3-5 мл
хлорида,
t+15…+25 0С
0,9%
Исследование антител к антигенам эритроцитов с использованием гелевых
диагностических карт (непрямая проба Кумбса)
От 1/3 (1/4)
до 1/2 карты
Инструкции, в
прилагаемые зависимости
Диагностичес
Хранить при
к
от иские карточки
t+15…+25 0С.
диагностичес пользуемой
Coombs
Срок годности
ким
диагноссм. на карте
карточкам
тической
панели
эритроцитов
Инструкции,
Диагностичес
прилагаемые
Хранить при
кая панель
По 50 мкл
к диагностиt+2…+8 0С.
для скрининкаждого вида
ческой
Срок годности
гового исэритроцитов
панели
см. на упаковке
следования
эритроцитов
Диагностичес
кая панель
Инструкции,
эритроцитов прилагаемые
Хранить при
По 50 мкл
для
к
t+2…+8 0С.
каждого вида
идентификац диагностичес
Срок годности
эритроцитов
ии
кой панели
см. на упаковке
выявленных эритроцитов
антител
От 0,5 до 1,0
Раствор для
мл в
Хранить при
приготовлени Инструкция,
зависимости t+2…+8 0С.
я суспензии прилагаемая
от
Срок годности
исследуемых к раствору
производител см. на упаковке
эритроцитов
я
Стандартные
эритроциты
АВО
А(II) и В(III)
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
1 мл
Хранить при
t+15…+25 0С
По одной
маленькой
капле (10
мкл)
эритроцитов
каждой
группы
46 мл
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
ампулы годны в
течение 1
недели.
Хранить при
t+15…+25 0С
Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках, защитных
очках (щитках)
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
ампулы годны в
течение 1
недели.
Работа в медицинской спецодежде, медицинских
перчатках, защитных очках (щитках)
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез.
средств с содержанием активного хлора,
дезинфекция лабораторной посуды производится с
применением дезинфицирующих средств, не
содержащих активного хлора.
По одной
маленькой
капле (10
мкл)
эритроцитов
каждой
группы
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с
содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной посуды
производится с применением дезинфицирующих средств, не
содержащих активного хлора.
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 г. №2 «Об
утверждении инструкций по иммуносерологии»
Стандартные
эритроциты
АВО
А(II) и В(III)
Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 г. №2 «Об утверждении инструкций по
иммуносерологии»
Исследование титра естественных групповых анти-А, анти-В антител
Исследование титра иммунных групповых анти-А, анти-В антител
в реакции солевой агглютинации
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
ампулы годны в
течение 1
недели.
3 капли
(150 мкл)
Хранить при
t+15…+25 0С.
Открытая
ампула годна в
течение 5 дней.
35 мл
Хранить при
t+15…+25 0С
Приказ МЗ
РФ от
09.01.1998 г.
Моноклональ
№2 «Об
ные анти-D
3 капли
утверждении
Супер Ig M
(150 мкл)
инструкций
антитела
по
иммуносерол
огии»
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
флакон годен в
течение 1
месяца.
Работа в медицинской спецодежде, медицинских перчатках, защитных
очках (щитках)
5% раствор
унитиола
По одной
маленькой
капле (всего
100 мкл)
каждого вида
эритроцитов
Сгустки крови обеззараживаются с помощью дез. средств с
содержанием активного хлора, дезинфекция лабораторной посуды
производится с применением дезинфицирующих средств, не
содержащих активного хлора.
Стандартные
эритроциты
АВО
А(II) и В(III)
Методическое письмо «Порядок проведения
иммуногематологических исследований у
беременных, рожениц, плодов и
новорождённых» утв. Минздравсоцразвития
России 10.10.2008 №15-4/3118-09
Исследование титра иммунных групповых анти-А, анти-В антител
в реакции с применением 5% раствора унитиола
Хранить при
t+15…+25 0С
50 мкл
Хранить при
t+2…+8 0С.
После вскрытия
флакон годен в
течение 1
месяца.
Работа в медицинской спецодежде,
медицинских перчатках, защитных очках
(щитках)
Сыворотка
Кумбса
(анти-Ig G)
45 мл
Сгустки крови обеззараживаются с помощью
дез. средств с содержанием активного хлора,
дезинфекция лабораторной посуды
производится с применением
дезинфицирующих средств, не содержащих
активного хлора.
Раствор
натрия
хлорида,
0,9%
Приказ МЗ СССР от 15.10.1974 №960 «Об
унификации клинических лабораторных
методов исследования»
Исследование на наличие фиксированных антиэритроцитарных антител
(прямая проба Кумбса)
Диагностичес
кие карточки Инструкции,
Coombs
прилагаемые
к
диагностичес
ким
карточкам
От 0,5 до 1,0
мл в
зависимости
от
производител
я
От 1/6 (1/8)
до 1/2 карты
в
зависимости
от
используемой
карты
Хранить при
t+2…+8 0С.
Срок годности
см. на упаковке
Хранить при
t+15…+25 0С.
Срок годности
см. на карте
Работа в медицинской спецодежде,
медицинских перчатках, защитных
очках (щитках)
Раствор для
приготовлени
я суспензии Инструкция,
исследуемых прилагаемая
эритроцитов к раствору
Сгустки крови обеззараживаются с
помощью дез. средств с содержанием
активного хлора, дезинфекция
лабораторной посуды производится с
применением дезинфицирующих
средств, не содержащих активного
хлора.
Исследование на наличие фиксированных антиэритроцитарных антител
(прямая проба Кумбса в гелевом тесте)
* - Температура внутри холодильной камеры, где хранятся реактивы, контролируется средним
медработником дважды в день. Показания термометра регистрируются в «Журнале регистрации
температурного режима хранения диагностических стандартов для иммуногематологических
исследований» (см. приложение 1).
2.3.3 Прочий расходуемый материал
Для выполнения ПМУ "Исследование антител к антигенам эритроцитов"
используются прочий расходуемый материал (см. таблицу 6).
Таблица 6
Прочий расходуемый материал,
необходимый для исследования антител к антигенам эритроцитов
Наименование
Количество
Примечание
Медицинские
перчатки одноразовые
1 пара на каждые 3 часа работы
Спирт этиловый
медицинский, 70,0%
Раствор натрия
хлорида, 0,9%
Дезинфицирующий
раствор
3,0 гр. на 1 обработку
Заменить немедленно при
нарушении целостности или
сильном загрязнении.
Для обработки рук персона после
окончания работы
Для промывания пипеток и
палочек
Для дезинфекции биологического
материала, лабораторной посуды
и рабочего места.
Наконечники для
автоматических
пипеток переменного
объема, одноразовые
0,5 л
В соответствии с методическими
указаниями по применению дез.
средств, разрешённых к
использованию в РФ и РТ
От 3 до 17 шт. на 1 исследование
(в зависимости от панели
эритроцитов и вида
исследования)
2.4 Характеристика методики выполнения "Исследование антител к антигенам
эритроцитов"
2.4.1 Требования к образцам крови.
Для исследования использовать сыворотку крови пациента. При
использовании для исследования плазмы существует вероятность не выявления
слабоактивных антиэритроцитарных антител за счёт разведения стабилизирующим
раствором.
Перед процедурой забора крови на проведение исследования на
антиэритроцитарные антитела у реципиента уточнить его фамилию, имя и отчество.
Взять сухую чистую пробирку, на которую нанести следующую информацию о
пациенте: Ф.И.О., дата забора крови, для стационарных больных - номер
медицинской карты.
Кровь пациента забрать из вены в количестве 3-5 мл и перенести в
подписанную пробирку. Использовать для исследования образец крови реципиента
не более двухдневного срока хранения при t+20С…+80С. Взятый без консерванта.
Кровь, направляемая на исследование антител должна быть без признаков
гемолиза, микробного роста, незамороженной. При наличии гемолиза процедуру
взятия крови повторить.
2.4.2 Требования к помещению.
Иммуногематологические исследования проводить в помещении с
естественным освещением, температура воздуха в помещении должна быть в
пределах +150С …+250С.
2.4.3 Общие требования к проведению исследования на антиэритроцитарные
антитела.
Прежде чем приступить к исследованию, необходимо произвести
макроскопическую оценку реагентов, стандартных эритроцитов для скринингового
исследования антител. Эритроциты не должны быть гемолизированы. Раствор
желатина необходимо тщательно просмотреть: при помутнении или появления
хлопьев, при потере свойств застудневать при температуре +4…80С желатин не
пригоден.
2.4.4 Требования к объемам исследований в зависимости от медицинского
учреждения.
2.4.4.1 Стационар, в том числе дневной стационар в амбулаторнополиклинических условиях.
При поступлении в стационар кровь пациента независимо от резус–
принадлежности исследовать на наличие изоиммунных антиэритроцитарных
антител перед плановой трансфузией переносчиков газов крови. Если реципиенту
часто проводят гемотрансфузии, не нужно запрашивать образцы крови на
исследование ежедневно, достаточно провести выявление антител каждые 72 часа.
В случае экстренной трансфузии исследование на антиэритроцитарные
антитела проводить после проведения гемотрансфузии на образце крови, взятом до
трансфузии.
При обнаружении в скрининговом исследовании антиэритроцитарных антител
и, при необходимости гемотрансфузии переносчиков газов крови, кровь пациента
направить в специализированную лабораторию службы крови для идентификации
антител и, при необходимости, проведения индивидуального подбора.
При
иммуногематологическом
обследовании
пациентов
с
гемотрансфузионными осложнениями по системам АВО, Резус и других клинически
значимых антигенных систем провести исследование на наличие (отсутствие)
антиэритроцитарных антител в учреждениях службы крови. Исследование крови
назначить на 3-5-ые сутки после несовместимой гемотрансфузии, далее на 15-25-ые
сутки и после 30-х суток.
При наличии гемолитической болезни новорожденных, связанных с
конфликтом по системе АВО, провести исследование сыворотки родильницы на
наличие иммунных групповых анти-А, анти-В антител, а также титр естественных
групповых анти-А, анти-В антител.
При наличии гемолитической болезни новорожденных, аутоиммунной
гемолитической анемии исследовать кровь пациентов прямой пробой Кумбса.
2.4.4.2 Женская консультация.
Исследование сыворотки крови на наличие антиэритроцитарных антител
провести несколько раз в течение беременности независимо от резус–
принадлежности в изосерологической лаборатории РКБ.
Беременным с группой крови О(I), А(II), В(III), имеющим супруга с иной
группой крови, провести исследование уровня естественных антител (Ig M) и титра
иммунных групповых анти-А, анти-В антител (Ig G).
Первое исследование провести при первичном обращении в женскую
консультацию. Последующие исследования приведены на схеме 1.
В случае обнаружения в скрининговом исследовании антиэритроцитарных
антител направить беременную на консультацию к врачу–изосерологу в
Республиканскую клиническую больницу для составления индивидуальной
программы ведения беременности.
2.4.5 Выявляемость. антиэритроцитарных антител к антигенам эритроцитов в
различных методиках
При выборе методики для определения антител к антигенам эритроцитов
следует помнить, что на выявляемость антител влияет титр антител в исследуемой
сыворотке, их специфичность и форма антител (полные или неполные антитела).
Сравнительная оценка методик определения антител представлена в таблице 7.
Таблица 7
Сравнительная оценка методик определения антител
Специфич-ность
антител
В солевой
среде
анти-А, анти-В
анти-DСЕ
да
маловероятно
Анти-Кell
маловероятно
анти-Fya, анти-Fyb
нет
(Даффи)
анти-Jka, анти-Jkb
нет
(Кидд)
анти-S
маловероятно
a
b
анти-Le , анти-Le
да
(Левис)
анти-Р1
да
анти-М, анти-N
да
Обозначения:
-да - антитела выявляются,
-нет – антитела не выявляются.
Методы выявления
Экспресс – метод с Конглютинации
33% раствором
с 10% раствором
полиглюкина
желатина
да/нет
да
да, если титр
да
высокий, при
низком титре - нет
да, если титр
да
высокий, при
низком титре - нет
нет
нет
Непрямая
проба Кумбса (в
т.ч. гелевый тест)
нет
да
да
да
нет
нет
да
нет
да
нет
да
да
да
маловероятно
маловероятно
да
да
маловероятно
маловероятно
2.4.6 Порядок проведения исследования
антиэритроцитарные антитела.
сыворотки
реципиента
на
2.4.6.1 Исследование неполных антител к антигенам эритроцитов с
применением 10% раствора желатина
Порядок проведения исследования:
1. В штатив установить 3 тонкостенные пробирки высотой не менее 10 см.
Пробирки промаркировать, для чего указать Ф.И.О. реципиента, кровь которого
исследуют.
2. В первые две пронумерованные пробирки внести по 1 капле (50 мкл)
стандартных эритроцитов для скринингового исследования, в последнюю – одну
каплю эритроцитов пациента.
3. Во все пробирки добавить по 2 капли (100 мкл) 10 % желатина, прогретого
на водяной бане при температуре t+46-48 0С до разжижения.
4. Из пробирки с исследуемой кровью реципиента осторожно взять пипеткой
сыворотку и внести по 2 капли (100 мкл) в первую и третью пробирки, во вторую 2
капли (100 мкл) сыворотки с низким титром антител для контроля.
5. Штатив с пробирками встряхнуть для перемешивания и поместить на
водяную баню (t+46-48 0С) на 15 минут или в термостат (t+46-48 0С) на 45 минут.
6. После окончания инкубации пробирки извлечь, добавить 5-8 мл 0,9%
раствора натрия хлорида, содержимое пробирок перемешать путём однодвухкратного перевёртывания и оценить результат исследования.
Трактовка результатов:
Результат учитывать, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом
или через лупу в виде наличия или отсутствия агглютинации (см. рисунок 1).
Если в первой и второй пробирках наблюдается агглютинация в виде взвеси
мелких или крупных красных комочков на фоне просветлённой или полностью
обесцвеченной жидкости, а в третьей пробирке агглютинации нет (аутоконтроль
отрицательный) значит, в исследуемой сыворотке обнаружены неполные
антиэритроцитарные антитела.
Если в первой и третьей пробирках агглютинации нет, во второй –
агглютинация, значит неполные антиэритроцитарные антитела не обнаружены. (см.
рисунок 1). При отрицательном результате исследования необходимо сделать
микропрепарат и микроскопировать его. Содержимое пробирок поместить на
предметное стекло, покрыть покровным стеклом и просмотреть под малым
увеличением.
При наличии агглютинации в третьей пробирке (аутоконтроль
положительный) образец крови пациента направить в специализированное
учреждение службы крови (СПК или ОПК) с соответствующим направлением (см.
приложение 2) для дальнейшего исследования.
Агглютинации нетантитела не обнаружены
Агглютинация естьантитела обнаружены
Рисунок 1. Результаты исследования сыворотки на антитела
к антигенам эритроцитов.
2.4.6.2 Исследование антител к антигенам эритроцитов с использованием
гелевых диагностических карт (непрямая проба Кумбса)
Исследование на изоиммунные антиэритроцитарные антитела проводить с
применением диагностических карт Coombs, содержащих сыворотку Кумбса.
Порядок проведения исследования:
1. Перед исследованием проверить диагностические карты. Не использовать
карты, если в геле имеются взвешенные пузырьки, микропробирка не содержит
надосадочной жидкости, наблюдается уменьшение объёма геля или его
растрескивание.
2. Микропробирки подписываются (фамилия реципиента).
3. Вскрыть необходимое количество микропробирок (по числу используемых
стандартных эритроцитов для скрининга).
6. Автоматической пипеткой внести по 50 мкл стандартных эритроцитов для
скринингового исследования.
7. Добавить во все микропробирки по 25 мкл сыворотки реципиента.
8. Инкубировать при t+370 С 15 минут.
9. После инкубации карточку центрифугировать в соответствующей
центрифуге (время и скорость задаются автоматически).
Трактовка результатов:
Если осадок эритроцитов расположен на дне микропробирки (рисунок 2, №1)
значит, в исследуемом образце сыворотки антиэритроцитарные антитела не
обнаружены. Если агглютинаты задерживаются на поверхности геля или в его
толще (рисунок 2, №№ 2-6) значит, в исследуемом образце обнаружены
антиэритроцитарные антитела.
№1
№2
№3
№4
№5
№6
Рисунок 2. Результаты исследования при определении антител к антигенам
эритроцитов гелевой методикой
2.4.6.3 Исследование титра естественных групповых анти-А, анти-В антител
Порядок проведения исследования:
1. Для определения титра естественных групповых анти-А, анти-В антител
приготовить ряд разведений с раствором натрия хлорида 0,9% на плоскости. Если
исследуют сыворотку О (I) группы сделать два ряда разведений, если A (II) или В
(III) по одному ряду разведений.
2. На планшет нанести по одной большой капле (100 мкл) раствора натрия
хлорида 0,9% в десять пронумерованных точек. Затем в первую точку добавить одну
большую каплю (100 мкл) исследуемой сыворотки. Перемешать. Из первой точки с
разведённой сывороткой перенести одну большую каплю (100 мкл) во вторую точку
с раствором натрия хлорида 0,9%. Каплю перемешать, перенести одну большую
каплю (100 мкл) разведения в третью точку и т.д. Из последней точки одну большую
каплю (100 мкл) разведённой сыворотки удалить. Получается ряд разведений 1:2,
1:4, 1:8,1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256 и т.д.
3. Рядом с каждой каплей разведённой сыворотки поместить по одной
маленькой капле (10 мкл) стандартных эритроцитов АВО (соотношение сыворотки
и эритроцитов 10:1). Для О (I) группы в первый ряд разведений - по капле
эритроцитов А (II), во второй ряд разведений- по капле эритроцитов В (III). Для
сыворотки А (II) - эритроциты В (III), для сыворотки В (III) - эритроциты А (II).
4. Капли перемешать стеклянной палочкой, начиная с наибольшего
разведения.
5. Наблюдать за реакцией 5 минут при периодическом покачивании планшета.
Трактовка результатов:
За титр естественных групповых антител принимается наибольшее разведение
сыворотки, в котором наступила агглютинация (см. рисунок 3).
Рисунок 3. Определение титра естественных групповых анти-А, анти-В антител
2.4.6.4 Исследование титра иммунных групповых анти-А, анти-В антител в
реакции солевой агглютинации
Порядок проведения исследования
А). Подготовительная работа:
1. Стандартные эритроциты А(II) и В(III) групп дважды отмыть раствором
натрия хлорида 0,9%. Для чего в подписанные центрифужные пробирки внести
стандартные эритроциты А(II) и В(III) соответственно. Добавить до 10 мл раствора
натрия хлорида 0,9%. Пробирки центрифугировать при 1500-2000 об/мин в течение
5 минут. После чего осторожно слить надосадочную жидкость. На дне пробирки
остаются эритроциты, из которых приготовить 2-3% взвесь эритроцитов в растворе
натрия хлорида 0,9% (1 капля эритроцитов + 49 капель раствора натрия хлорида
0,9% или 50 мкл эритроцитов и 3 мл раствора натрия хлорида 0,9%).
2. Исследуемую сыворотку в количестве 1 мл развести в четыре раза
раствором натрия хлорида 0,9% (3 мл) во избежание коагуляции при нагревании
(получилось разведение сыворотки 1:4), затем пробирку прогреть 10 минут при
t+700С.
Б). Техника определения:
1. Прогретую сыворотку раститровать на планшете с лунками: для сыворотки
О(I) группы сделать два ряда разведений, для А(II) и В(III)- по одному ряду
разведений. В десять точек нанести по 2 капли (100 мкл) раствора натрия хлорида
0,9%. Во вторую каплю добавить 2 капли (100 мкл) прогретой сыворотки.
Раститровать. Получился ряд разведений 1:4, 1:8, 1:16, 1:16 и т.д.
2. Во все лунки добавить по одной капле подготовленной 2-3 % взвеси
эритроцитов (при исследовании сыворотки А(II) группы добавить эритроциты
В(III), при исследовании В(III) - эритроциты А(II), при исследовании О(I) - в первый
ряд разведений- эритроциты А(II), во второй ряд разведений - эритроциты В(III)).
3. Осторожно перемешать.
4. Планшет поместить в термостат при t+37 0С на один час.
5. После окончания инкубации оценить результаты исследования.
Трактовка результатов:
Результат оценивают по форме осадка эритроцитов на дне пробирки. При
наличии агглютинации осадок располагается в виде комочков неравномерным слоем
с изогнутыми краями. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии
полных иммунных антител, а последнее разведение, в котором оно наблюдается об
их титре.
При отсутствии агглютинации осадок располагается равномерным слоем в
центре дна пробирки в виде правильно очерченного круга.
2.4.6.5 Исследование титра иммунных групповых анти-А, анти-В антител в
реакции с применением 5% раствора унитиола
Для определения в исследуемой сыворотке групповых иммунных анти-А,
анти-В антител используется готовая лекарственная форма 5% раствора унитиола.
Порядок проведения исследования
1. Для исследования взять две центрифужные пробирки (опыт и контроль).
Промаркировать, для чего указать Ф.И.О. реципиента, пробирка №1 – опыт,
пробирка №2 - контроль.
2. Из пробирки с исследуемой кровью пациента осторожно взять пипеткой
сыворотку и внести 150 мкл на дно центрифужной пробирки (пробирка № 1). В
пробирку № 2 внести 150 мкл моноклонального реагента анти-D Супер Ig M.
3. В обе пробирки добавить по 150 мкл 5% раствора унитиола (разведение
1:2).
4. Пробирки поместить в термостат при t+370С на два часа.
5. После инкубации исследуемую сыворотку раститровать на плоскости также
как при определении титра естественных анти-А, анти-В антител (см. рис.3). Если
исследуют сыворотку О(I) группы сделать два ряда разведений, если A(II) или В(III)
по одному ряду разведений. Получаются следующие разведения: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и
т.д. Исследовать в реакции прямой агглютинации на плоскости с эритроцитами А(II)
и /или В(III)
6. Добавить по одной маленькой капле (10 мкл) стандартных эритроцитов.
При исследовании сыворотки А(II) группы добавить эритроциты В(III), при
исследовании В(III) - эритроциты А(II), при исследовании О(I) - в первый ряд
разведений - эритроциты А(II), во второй ряд разведений - эритроциты В(III).
7. Все капли перемешать стеклянной палочкой, начиная с наибольшего
разведения. Наблюдать за реакцией 5 минут.
Содержимое контрольной пробирки исследуют также.
Трактовка результатов:
Контроль при определении иммунных групповых антител должен быть
отрицательным (отсутствие агглютинации). Это говорит о разрушении полных
антител (Ig М).
За титр иммунных групповых антител принимается наибольшее разведение
сыворотки, в котором наступила агглютинация.
2.4.6.6 Исследование на наличие фиксированных антиэритроцитарных антител
(прямая проба Кумбса)
Порядок проведения исследования:
1. Исследуемые эритроциты отмыть четыре раза в стерильном растворе натрия
хлорида 0,9%. Для этого в центрифужную пробирку поместить небольшое
количество исследуемых эритроцитов (0,25-0,5 мл). Добавить до 10 мл раствора
натрия хлорида 0,9%.
2. Центрифугировать при 1500-2000 об/мин. 3 минут.
3. Удалить надосадочную жидкость. Процедуру отмывания повторить
трижды.
4. Из отмытых эритроцитов приготовить 5% взвесь отмытых эритроцитов. Для
этого взять 1 каплю (50 мкл) отмытых эритроцитов и добавить 19 капель (1 мл)
раствора натрия хлорида 0,9%.
5. 0,05 мл (1 капля) 5% взвеси исследуемых эритроцитов перенести на
пластинку и покачивать в течение 3-х минут. Наступление агглютинации во взвеси
эритроцитов до добавления сыворотки для пробы Кумбса свидетельствует об аутоили панагглютинации исследуемой крови. В этом случае следует повторить все
этапы постановки пробы, начиная с отмывания эритроцитов, но при температуре
37С0. Если агглютинация не наступила, к взвеси исследуемых эритроцитов добавить
0,05 мл (1 капля) сыворотки для пробы Кумбса и тщательно перемешать сухой
стеклянной палочкой. Наблюдать в течение 10 минут при периодическом
покачивании пластинки.
Трактовка результатов:
При
наличии
на
исследуемых
эритроцитах
фиксированных
антиэритроцитарных антител – результат реакции будет положительным (наличие
агглютинации). При отсутствии на исследуемых эритроцитах фиксированных
антиэритроцитарных антител – результат реакции будет отрицательным (отсутствие
агглютинации).
2.4.6.7 Исследование на наличие фиксированных антиэритроцитарных антител
(прямая проба Кумбса в гелевом тесте)
Порядок проведения исследования:
1. Перед исследованием проверить диагностические карты. Не использовать
карты, если в геле имеются взвешенные пузырьки, микропробирка не содержит
надосадочной жидкости, наблюдается уменьшение объёма геля или его
растрескивание.
2. Приготовить суспензию эритроцитов. Для этого 10 мкл исследуемых
эритроцитов автоматической пипеткой поместить в центрифужную пробирку.
3. Добавить 1 мл разводящего раствора.
4. Микропробирку в диагностической карте Coombs подписать.
5. В микропробирку внести 50 мкл разведенных эритроцитов.
6. Карту центрифугировать в соответствующей центрифуге (время и скорость
задаются автоматически).
Трактовка результатов:
Если антитела присутствуют на исследуемых эритроцитах, то агглютинаты
будут задерживаться на поверхности геля или в его толще -результат
положительный (см. рисунок 2 №№ 2-6). Если антитела отсутствуют на
исследуемых эритроцитах, то эритроциты будут проходить через гель и осаждаться
на дне микропробирки - результат отрицательный (см. рисунок 2 № 1).
Положительная реакция (наличие агглютинации) оценить в крестах от (+) до
(++++) в зависимости от силы агглютинации (см. рисунок 2 №№ 2-6).
2.4.7 Регистрация результатов исследования
Результат исследования на антитела к антигенам эритроцитов вносится в
бланк исследования (см. приложение № 2) и в «Журнал регистрации результатов
определения групповой и резус принадлежности» (см. приложение 3).
При обнаружении антител к антигенам эритроцитов и при необходимости
проведения трансфузионной терапии переносчиков газов крови, образец крови
пациента направить в учреждение службы крови для проведения индивидуального
подбора с соответствующим направлением (см. приложение № 4).
При выписке из стационара пациенту выдается справка о наличии у него
антиэритроцитарных антител, которую необходимо предъявлять при каждой
госпитализации.
2.5 Дополнительные сведения об особенностях выполнения
Существуют категории реципиентов, у которых встречаются затруднения при
проведении исследования на наличие антиэритроцитарных антител.
Таблица 8
Категория пациентов
Больные с
гематологическими или
онкологическими
заболеваниям, а также
пациенты с другими
видами патологий
Индивидуальные
особенности
Наличие
неспецифических
алло- и/или
аутоантител
Характер
затруднения
Аутоконтроль
положительный
Способ решения проблемы
Направить образец крови
реципиента в
специализированную
лабораторию для дальнейшего
исследования и при
необходимости проведения
индивидуального подбора.
2.6 Достигаемые результаты и их оценка
Выполнение требований ПМУ «Исследование антител к антигенам
эритроцитов» является профилактикой посттрансфузионных осложнений и
гемолитической болезни новорожденного по системам Резус, АВО и других систем
эритроцитарных антигенов.
За 2007 год из лечебных учреждений РТ на индивидуальный подбор поступил
131 образец крови пациентов. При исследовании крови на антитела к антигенам
эритроцитов у 28 пациентов были обнаружены антитела. Из них:
аутоантитела обнаружены у 13 пациентов,
анти-D антитела у 2 родильниц (при диагностике ГБН).
За 2008 год на антитела к антигенам эритроцитов было исследовано 249
образцов крови реципиентов. Из них
аутоантитела обнаружено у 9 реципиентов,
анти – D антитела у 5 из них: 4 - у родильниц (при диагностике ГБН), 1 после
гемотрансфузии, проведённой несколько лет назад.
анти - Е – 5, из 1-у родильницы, 4-у реципиентов,
анти –Kell - 2, из них 1-у родильницы, 1-у реципиентов,
анти-е - 1,
анти-Jka - 1.
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ ТЕМПЕРАТУРНОГО РЕЖИМА ХРАНЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ
ДЛЯ ИММУНОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
1. Журнал ведется отдельно для каждого холодильника,
предназначенного для хранения диагностических стандартов.
2. Показания термометра регистрируются ежедневно.
3. Страницы должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
Дата контроля
Показания термометра
Утро
Вечер
Подпись ответственного
лица
Принятые меры
Направление в КДЛ ЛПУ (ОПК, КТТ)
на иммуногематологическое исследование крови
(определение групповой и резус – принадлежности)
Ф.И.О. пациента____________________________________________________
Дата рождения____________________№ медицинской карты_______________
____________________________________________________________________
(отделение)
Результат первичного определения, полученное в отделении ЛПУ:
Группа крови АВО
Резус – принадлежность
Использованы диагностические стандарты:
1)Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки АВО или цоликлоны
(нужное подчеркнуть) следующих серий:
__________/____________годен до_________________
__________/____________годен до_________________
__________/____________годен до_________________
__________годен до_________________
2) Универсальный реагент антирезус Rh0(D) или цоликлон анти-D Супер
(нужное подчеркнуть)
следующих серий: ________________годен до_______________
Дата исследования_____________ Подпись врача_____________________
Результат централизованного переопределения:
Группа крови АВО
Резус – принадлежность
Антитела
Дата __________________ Подпись врача ____________________
Примечание: пробирка с образцом крови должна быть промаркирована (Ф.И.О.
пациента, дата взятия крови, № медицинской карты)
_______________________________
(наименование медицинского учреждения)
ЖУРНАЛ РЕГИСТРАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППОВОЙ И РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ
Начат «____» ______________ 20___ г.
Окончен «____» ______________ 20___ г.
Страницы журнала должны быть пронумерованы, прошнурованы,
скреплены печатью учреждения и подписью руководителя
медицинского учреждения.
Дата
централизованного
исследования
№
п/п
Результат
первичного
исследования
Результат
централизованного
переопределения
группа
крови
АВО
группа
крови АВО
Ф.И.О.
пациента
резус
резус
Результат
скринингового
исследования
на антиэритроцитарные антитела
Диагностические
стандарты,
использованные для
централизован-ного
исследования
(наименование,
изготовитель,
№
серии,
срок
годности)
Отделение,
направившее
образец крови на
исследование
Направление на СПК (ОПК)
на определение групповой и резус–принадлежности,
индивидуальный подбор
(нужное подчеркнуть)
Наименование ЛПУ________________________ отделение__________________________
Ф.И.О. врача, направившего образец крови_______________________________________
Контактный телефон___________________________________________________________
Ф.И.О. пациента_______________________________________________________________
Дата и год рождения_______________ № медицинской карты _______________________
Диагноз: ______________________________________________________________________
Трансфузионный анамнез (кол-во трансфузий и реакции на них) _______________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Акушерский
анамнез
(кол-во
беременностей,
кол-во
родов,
ГБН
детей,
выкидыши,
мертворождения, аборты _________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
Результаты иммуногематологического исследования крови, полученные в ЛПУ:
Группа крови по АВО __________________________________
Резус – принадлежность ________________________________
Наличие антиэритроцитарных аллоантител________________
Наименование компонентов крови необходимых для трансфузии_______________________
_______________________________________________________________________________
Дата_________________________________Подпись врача____________________________
Примечание: пробирка с образцом крови должна быть промаркирована (Ф.И.О. пациента,
дата взятия крови, № медицинской карты).
Если Hb пациента ниже 70 г/л, для определения групповой и резус – принадлежности,
проведения индивидуального подбора необходимо взять две пробирки:
1 пробирка с консервантом (3 мл),
2 пробиркака без консерванта (5 мл).
схема 1
Иммуногематологические исследования у беременных
Определение группы
К антигенам
крови,
системы
Rh-принадлежности,
Резус и др. клиническискрининг
значимым антител
при первичном обращении и в 28-30 недель
Скрининг и идентификация антител в сыворотке беременных женщин
Сенсибилизированные
Несенсибилизированные
(антитела выявлены)
К антигенам
системы
Резус и др.
клинически
значимым
Фенотипи
рование
крови отца
ребёнка
(антитела не выявлены)
К антигенам
др. систем
клинически
значимых
К
антигенам
системы
АВО
Исследовани
е антител в
28-30 недель
Определение
группы
крови отца
ребёнка
До 32 недель
контроль титра
каждые 4
недели
После
32 недель
контроль титра
каждые 2
недели
Женщины
группы риска:
возможность
сенсибилизаци
и при
беременности
Контроль титра
антител в 36 недель
для выбора сроков
родоразрешения
Остальные
женщины
Женщины,
группа крови
которых не
совпадает с
группой
крови отца
ребёнка
Rh (D) –
(отр.)
женщины
имеющие
Rh(D)+(пол.)
отца ребёнка
Исследование
антител в 28
недель
Антител нет:
профилактика
иммуноглобулином
анти-D
Антитела
есть
Литература (нормативные документы)
1. Приказ МЗ РФ от 09.01.1998 № 2 «Об утверждении инструкций по
иммуносерологии»
2. Приказ МЗ РФ от 25.11.2002 № 363 «Об утверждении Инструкции по
применению компонентов крови»
3. Приказ МЗ РТ от 13.05.1999 № 367 «О мерах по предупреждению
осложнений при переливании компонентов, препаратов крови, кровезаменителей»
4. Приказ МЗ РТ от 05.08.2004 №1135 «О совершенствовании работы по
профилактике посттрансфузионных осложнений в учреждениях здравоохранения
Республики Татарстан»
5. Приказ МЗ СССР № 700 от 23.05.1985 г. «О мерах по дальнейшему
предупреждению осложнений при переливании крови, ее компонентов, препаратов
и кровезаменителей»
6. Приказ МЗ РТ от 27.04.2004 г. № 691 «О совершенствовании
преконцепционной,
пренатальной
и
постнатальной
профилактики
иммуноконфликтной беременности в Республике Татарстан»
7. Приказ МЗ РФ от 25.12.1997 г. №380 «О состоянии и мерах по
совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в
учреждениях здравоохранения Российской Федерации».
8. Приказ МЗ РТ от 16.07.2004 г. № 1047 «О порядке получения, учета и
хранения компонентов крови»
9. Методические указания № 52001-109 МЗРФ, РНИИ гематологии и
трансфузиологии
«Требования
к
проведению
иммуногематологических
исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ», Санкт- Петербург, 2002 г.
10.Методические рекомендации МЗ РФ «Алгоритмы исследования антигенов
эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях»,
Санкт- Петербург, 2000 г.
11.Методическое письмо Минздравсоцразвития № 15-4/3118-09 от 10.10.2008 «О
порядке проведения иммуногематологических исследований у беременных,
рожениц, плодов и новорожденных».
12.Методические указания «Организация иммуносерологических исследований
(определение группы крови и резус фактора) больным в лабораториях лечебнопрофилактических учреждений г. Самары и Самарской области».
13.Инструкция о порядке проведения иммуногематологических исследований
пациентов в учреждениях здравоохранения Санкт-Петербурга, 2005 г.
14.Инструкции по использованию гелевой диагностической системы
15.«Групповые антигены эритроцитов. Концепция совместимости» С.И.Донсков,
В.А.Мороков, И.В.Дубинин, Москва, 2008 г.
16.«Группы крови человека. Основы иммуногематологии» Н.В.Минеева, СанктПетербург, 2004 г.
17.Пособие для врачей «Посттрансфузионные гемолитические осложнения
(причины, изосерологическая диагностика и профилактика)» утверждённые МЗ РФ.
Санкт-Петербург, 1997 г.
36