Утверждаю Заместитель Главного государственного

Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
В.Е.КОВШИЛО
23 марта 1978 г. N 1829-78
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР И ПРОДУКТОВ
ИХ ПЕРЕРАБОТКИ, ПОРАЖЕННЫХ ГРИБАМИ РОДА ФУЗАРИУМ
СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA
Методические указания подготовлены Институтом питания АМН СССР и Оренбургским
медицинским институтом.
Методические указания рекомендуются для использования в работе лабораторий
санэпидстанций.
В зерновых культурах, убранных или произраставших в неблагоприятных метеорологических
условиях (обильные дожди, ранний снег), запоздалой уборки урожая, поздно осенью вывезенных с
поля, а также своевременно убранных, но недостаточно просушенных или хранившихся в условиях
повышенной влажности, может отмечаться повышенная их пораженность токсигенными
микроскопическими грибами из рода Фузариум и вследствие этого зерно приобретает ядовитые
свойства. Продукты жизнедеятельности этих грибов не теряют своих свойств при термической
обработке: выпечке хлеба, варке пищи и т.д. Поэтому употребление в пищу такого зерна и продуктов
его переработки может стать причиной в некоторых случаях протекающих очень тяжело заболеваний
людей (алиментарно-токсическая алейкия, расстройства функции кишечного тракта и др.).
В последние годы в урожае хлебов иногда обнаруживают зерна с розовым и красным
оттенками, особенно в зерне ржи, имеющие внешние признаки, характерные для зерна, пораженного
Фузариум. Однако следует иметь в виду, что окраска зерна не всегда связана с его токсичностью.
Такое зерно является лишь "подозрительным" на токсичность.
С целью профилактики зерновых пищевых микотоксикозов людей зерно, подозрительное по
вышеуказанным показателям, должно исследоваться на токсичность биологическими методами.
Обязательным является испытание зерна на голубях. Биопроба с культурой дрожжей желательна в
качестве подтверждающего теста.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
I. Материал для исследования
Исследованию подлежат:
1. Зерно нормальных сроков уборки, но имеющее окрашенные в розовый или красный цвет
зерна, что вызывает подозрение на обсеменение их микроскопическими грибами из рода Фузариум, а
также продукты переработки такого зерна.
2. Зерно нормальных сроков уборки, но хранившееся при неблагоприятных условиях, имеющее
следы плесневения (подозрительное при визуальном осмотре), а также продукты переработки такого
зерна.
II. Отбор зерна и его паспортизация
Пробы отбираются от каждой поступающей партии зерна, в соответствии с ГОСТом 3040-55.
Отобранные образцы должны быть паспортизованы. На этикетках указывается:
а) место отбора зерна (область, район,
колхоз
, совхоз и т.д.);
б) наименование зерновой культуры (пшеница, рожь, просо и др.);
в) количество зерна, от которого взята проба (или размер партии);
г) откуда взят образец (снят на корню, из валков, со склада);
д) дата отбора пробы;
е) вес взятого образца;
ж) фамилия ответственного за отбор проб.
Отобранные образцы направляют на исследование в ближайшую санитарноэпидемиологическую станцию.
III. Подготовка материала для исследования
и получение экстракта липидов
Из поступившего на исследование зерна отбирают среднюю пробу около 200 г, подсушивают ее
при температуре 40 - 50°, из них 100 г измельчают на лабораторной мельнице в течение двух минут и
экстрагируют диэтиловым эфиром в аппарате Соколета в течение 6 часов. Эфирный экстракт
высушивают безводным сернокислым натрием, отфильтровывают и эфир отгоняют на водной бане
при температуре не выше 40 - 50 °C. Полученный масляный остаток - свободные липиды используют для определения токсичности.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
В каждом случае при проведении анализа необходимо ставить контрольную пробу с
доброкачественным зерном.
IV. Биологическая проба на голубях
В качестве тест-объекта используют голубей породы "Сизарь" в количестве не менее трех птиц
на каждый образец зерна. Кормление голубей проводят испытуемым зерном натощак из расчета 5 г
зерна на 1 кг веса птицы в течение 14 дней (кормят из чайной ложки, насильственно открывая клюв).
После кормления ставят в клетку воду, а через 2 часа обязательно обычный корм <*>.
-------------------------------<*> Нормы питания голубей:
1. Вика
- 30%
2. Горох
- 20%
3. Ячмень
- 10%
4. Просо
- 20%
5. Пшеница - 15%
6. Конопля - 5%
----------------40 г
При отсутствии указанных ингредиентов можно использовать
следующие:
1. Пшено
- 20 г
2. Семечки - 10 г
3. Конопля - 5 г
4. Пшеница - 5 г
----------------40 г
Каждый голубь содержится в отдельной клетке, на дно которой стелится светлая бумага, чтобы
не пропустить выделения рвотных масс и наличия жидкого стула.
В течение опыта следят за общим состоянием и весом птицы. При отсутствии положительной
реакции голубей в течение опытного периода птиц забивают методом декапитации и производят
макро- и микроскопические изучения органов тканей (слизистых оболочек клюва, гортани, пищевода,
желудочно-кишечного тракта, обращая особое внимание на состояние печени, почек, селезенки).
При наличии симптомов заболевания голубей (рвота, понос) или гибели испытуемое зерно
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
оценивается как токсичное.
При отсутствии клинической картины заключение о зерне дают уже по патоморфологическим
данным, исключая интеркурентные заболевания.
V. Определение токсичности зерна при помощи чувствительного
к фузариотоксину штамма дрожжей Saccharomyces fragilis 25Д
(ориентировочный метод)
В качестве тест-организма для определения фузариотоксинов этот штамм дрожжей был
предложен Институтом микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного АН УССР.
Для анализа используют 24-часовую культуру дрожжей на сусловом агаре. В пробирку с
культурой дрожжей наливают 5 - 10 мл стерильной водопроводной воды. Пробирку взбалтывают до
образования суспензии. Суспензию готовят по эталону N 5, что соответствует 5 единицам мутности
(0,5 млрд./1 мл) стандарта мутности. 1 - 2 мл суспензии наливают в заранее приготовленные чашки
Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 60° сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и
тщательно перемешивают. На застывшую поверхность среды помещают стерильные диски,
вырезанные из фильтровальной бумаги, диаметром 5 мм, на которые наносят 0,01 мл липидов,
выделенных из исследуемого зерна.
Чашки Петри помещают в термостат при температуре 35 °C на сутки, после чего определяют
результаты опыта. Степень токсичности липидов определяют по диаметру стерильных зон: диаметр
стерильной зоны до 15 мм - зерно слаботоксичное; 15 - 25 мм - среднетоксичное; выше 25 мм резкотоксичное; контроль - отсутствие стерильных зон.
VI. Заключение по результатам исследования образца зерна
Заключение о пригодности исследуемого образца зерна в питании дается на основании
результатов биологических проб на голубях и дрожжевых грибах.
1. Отсутствие клинической картины заболевания у голубей и отсутствие зон задержки роста
дрожжей на чашках Петри - зерно нетоксичное.
2. Наличие симптомов заболевания у голубей и наличие задержки роста дрожжей - зерно
токсичное.
3. Наличие симптомов заболевания у голубей при отсутствии зон задержки роста дрожжей зерно токсичное.
4. Отсутствие симптомов заболевания у голубей, но наличие зон задержки роста дрожжей зерно сомнительное.
Необходимо повторить исследования с новой пробой зерна данного образца.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Настоящие методические указания издаются временно сроком на 2 года взамен "Методических
указаний по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки в связи с
поражением их токсигенными грибами Фузариум", утвержденных заместителем Главного
санитарного врача СССР от 12.01.1967 за N 661-67.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.