Камалтынова - аллергодиагностика
реклама
Алгоритм современной аллергодиагностики Камалтынова Е.М. 1 Распространенность аллергических заболеваний • Около 30% населения планеты страдает аллергическими заболеваниями Бронхиальная астма – от 7 до 10% Аллергический ринит – от 15 до 20% Атопический дерматит – 16% (у детей) • Россия – от 17,5% до 30% (данные Института Иммунологии) • Данные официальной статистики в России (Регистр) Распространенность АЗ – от 1 до 1,5% • 2 50-60% хронических «аллергических» проявлений являются результатом других заболеваний/нарушений (не аллергических) Из истории аллергодиагностики Характеристики IgE Провокацион ные тесты Получен первый аллеген Диагностическая панель рекомбинантных аллергенов Первый аллергочип RAST* 1880 1967 1988-91 1995-1999 2000-е…. Тесты In-vivo Тесты In-vitro Компонентная аллергодиагностика 3 • Атопия – индивидуальная или семейная предрасположенность вырабатывать IgE в ответ на низкие концентрации аллергенов, обычно белковой природы, проявляющаяся типичными симптомами астмы, риноконъюнктивита или экземы/дерматита • 4 EAACI 2001 Сенсибилизация (франц. sensibilisation ) приобретение организмом специфической повышенной чувствительности к чужеродным веществам - аллергенам 5 Доказательства сенсибилизации • Положительный анамнез !!! (клиническое значение) • Положительные кожные пробы с аллергеном • Наличие IgE-антител к аллергенному экстракту • Положительный провокационный тест 6 Алгоритм аллергодиагностики Клиническое обследование Кожные пробы с аллергенами Уровень общего IgE Phadiatop (ингаляционный) + Пищевой тест (FX5) IgE –антитела к основным аллергенам (панели) Определение уровня ECP Компонентная диагностика 7 Техника постановки прик-прик теста 8 Первая заповедь аллерголога: «Устрани контакт с аллергеном!»» • Раннее выявление аллергена, вызывающего реакцию • Быстрая элиминация, прекращение контакта пациента с аллергеном 9 Аллергия - факты Марш аллергии Назальные Желудочно-кишечные полипы симптомы Одышка Атопический Респираторные Постоянные нарушения атопические Отит дерматиты дерматит Астма Экзема IgE IgE IgE 10 IgE IgE Клинически значимые аллергены (ISAAC, ARIA) Пищевые продукты 2 % Лекарства 1 Шерсть и эпидермис животных 15 % Common Allergens Клещи 25 % Ингаляционные аллергены - 95 % 11 Плесени 5 % % Насекомые 2 % } Пыльца растений 50 % Скрининговое (базовое) обследование на атопию • Уровень общего иммуноглобулина Е • Phadiatop® screen • Уровень эозинофильного катионного протеина (ECP) 12 Результаты Обязательные условия для количественного определения специфического IgE •Избыточность аллергена •Параллельность •Калибровка согласно требованиям ВОЗ •Точность •Возможность улавливать низкие уровни IgE (высокая чувствительность) 113ovember 30, N • Качественные экстракты аллергенов • Максимальная связывающая способность • Высокая чувствительность • Отсутствие неспецифического связывания • Воспроизводимость • между лотами • между лабораториями • во времени ImmunoCAP- реакционная лунка, аналог лунки планшета ImmunoCAP™ объем образца 40µl активированная поверхность: вспененная CNBraктивированная целлюлоза (ковалентное связывание) 14 14 November 30, 2015 Дизайн Твёрдая фаза: ImmunoCAP ® •Чрезвычайно высокая связывающая активность •Площадь реакционной поверхности в 150 раз больше, чем в лунке планшета ImmunoCAP 15 15 1 50 Лунка планшета Активированный Активированная бумажный диск вспененная целлюлоза November 30, 2015 150 3-х мерный целлюлозный полимер Ковалентное связывание через CNBraктивацию АЛГОРИТМ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО ПОИСКА Анамнез Низкий риск аллергии Отсутствие аллергических симптомов Аллергию следует исключить Скрининг-тесты: PhadiatopFX5 InfantFx5 Infant Phadiatop Phadiatop Подозрение на аллергию Симптомы, схожие с аллергическими и/или положительные скрининг-тесты Аллергию следует подтвердить Симптоматический профиль Ярко выраженные аллергические симптомы Аллергию следует подтвердить Исследование специфических аллергенов Корреляция данных тестирования с врачебным обследованием 16 AK 081112 ImmunoCAP® Phadiatop • Первый шаг в тестировании на атопию, дифференциальная диагностика аллергии и неаллергических заболеваний • ImmunoCAP Phadiatop выявляет наличие сенсибилизации к общим ингаляционным аллергенам • (пыльца луговых и сорных трав, деревьев, клещ домашней пыли (d1), шерсть кошки (e1), собаки (e5), перхоть лошади (e3) • ВАРИАНТЫ: • Качественный тест на аллергию - Да/Нет • Полуколичественный – PAU/l, показывает степень сенсибилизации 17 ImmunoCAP® Phadiatop Infant • Первый шаг в тестировании на атопию у маленьких детей • ImmunoCAP Phadiatop Infant выявляет наличие сенсибилизации к общим пищевым и ингаляционным аллергенам • Качественный тест на аллергию - Да/Нет • Полуколичественный – PAU/l, показывает степень сенсибилизации 18 Дети 0-4 лет Белок яйца Mолоко Арахис Клещи домашней пыли Шерсть кошки Шерсть собаки Местные травы, пыльца деревьев, злаковые 19 Симптоматические профили Экзема f1 яичный белок f2 коровье молоко f3 рыба f4 пшеница f13 арахис f14 соя Одышка/Риниты Астма/Риниты дети взрослые g6 тимофеевка луговая g6 тимофеевка луговая t3 береза t3 береза t9 олива t9 олива w21 постенница w21 постенница e1 кошка e1 кошка e5 собака e5 собака d1 клещ домашней пыли d1 клещ домашней пыли f1 яичный белок w6 полынь f2 коровье молоко m2 Cladosporium f13 Арахис i6 таракан рыжий f17 лесной орех d1 клещ домашней пыли e1 кошка e5 собака Профили содержат аллергены, адаптированные к различным регионам и возрастам. 20 AK 081112 Эозинофильный катионный протеин (ЕСР) • Составляет 70% от всех белков, продуцируемых эозинофилами • Появляется в свободном состоянии при активации эозинофилов • Стимулирует секрецию слизи • Тормозит пролиферацию Т-клеток • Действует на свертываемость крови • Цитотоксичен 21 Эозинофил – ключевая клетка аллергического воспаления Эозинофильный катионный протеин (ECP) - это компонент секреторных гранул эозинофилов, маркер воспаления, обла-дающий выраженными провоспалительными свойствами 22 Клиническое значение уровня ECP • Выявление активности аллергического воспаления • Объективный маркер эффективности лечения • Подбор оптимальных терапевтических доз • Выявление пациентов, не выполняющих предписаний врача 23 ImmunoCAP® специфический IgE • In vitro sIgE тестирование имеет некоторые преимущества перед кожными prick-тестами • Нет зависимости от антигистаминов или присутствующего дермографизма • Множественные исследование с одним образцом крови • Новое поколение in vitro тестов имеют высокую чувствительность и специфичность • Тесты, такие как Phadiatop®, особенно полезны в сочетании с дальнейшим аллерген-специфическим исследованием 24 ImmunoCAP® специфический IgE • Измерение IgE антител к индивидуальным аллергенам • Диапазон измерений: 0 – 100 kЕ/л • • Предел чувствительности - 0,1 kЕ/л • Дает возможность мониторировать течение аллергии и атопический статус у маленьких детей • Более 660 aллергенов, более 70 аллергокомпонентов • Разработки сфокусированы в области компонентной диагностики (нативные очищенные и рекомбинантные аллергены) и пищевых аллергенов 25 Иммуноглобулин Е Единицы измерения Килоединицы на литр (WHO): 1 kU/L = 2,4 нг/л IgE 26 IgE-антитела у здоровых индивидуумов и пациентов с аллергией 27 Триптаза • Увеличение базового уровня Триптазы – фактор риска развития острых реакций • Пациенты зоны риска развития острых реакций при контакте с ядами насекомых и лекарственными средствами • Увеличение базового уровня Триптазы указывает на активацию тучных клеток и может служить фактором риска острых реакций при хирургических манипуляциях • Триптазу необходимо измерять перед началом иммунотерапии, а также трихкратно при подозрении на анафилаксию. • До 25% пациентов с острыми реакциями на яд насекомых имеют мастоцитоз • Уровень Триптазы соответствует остроте мастоцитоза • Триптаза – маркер рецидива острой миелоидной лейкемии 28 От Аллергии к Аутоиммунитету Общее Различие Инструмент Концепция Калибровки Твёрдая фаза Управление инструментом Реагенты системы 29 Методика процесса PHADIA 100 ImmunoCAP 100 • При потоке < 80 тестов в день • Максимальная гибкость для небольших лабораторий • Функционирует один или в сети аналогов в крупной лаборатории 30 30 November 30, 2015 PHADIA 100, 250 Аллерготесты • Скрининг Phadiatop • Специфические IgE • Общий IgE • Специфический IgG, IgA, IgG4* • ТГ IgG • ТПО IgG • Триптаза • ECP 31 31 November 30, 2015 Аутоиммунные тесты EliA™ • • • • • • • Целиакия® tTG IgA, IgG CCP IgG, фибриллярин Глиадин IgA, IgG СTD Screen IgG (СЗСТ) дсДНК IgG РФ, MPO, β2-гликопротеин Кардиолипин IgG, IgM, IgA (АФС) Компонентная аллергодиагностика. Молекулярные аллергены 32 Молекулярная аллергология CAP® : молекулярная аллергодиагностика • Изучает сенсибилизацию организма к единичным выделенным и очищенным рекомбинантным или нативным протеинам, так называемым аллергокомпонентам, для количественного определения sIgE (kUA/l) к ним (в тех же системах, где используют обычные аллергены Immulite) • Высокий уровень IgE не всегда сопровождается симптомами аллергии, и молекулярная аллергология способствует их выявлению 33 Allergon / Phadiaаллергенов Фд • Ведущий производитель аллегрен-содержащего материала • Отделение /дочернее предприятие Phadia • >25 лет практического опыта 34 Причинные агенты 35 35 Источник аллергенов… 36 …из которыхthousands только …contains некоторые являются of molecules… аллергенными Allergenic molecule = component 37 Молекулярные аллергены Биологические экстракты содержат аллергизирующие и неаллергизирующие составляющие, их трудно стандартизировать Индивидуальные аллергены маркеры подлинной сенсибилизации для источников аллергенов Перекрестно-реагирующие аллергены представлены в самых разных источниках аллергенов и обусловливают кросс-реактивность их экстрактов 38 От источника к компоненту 39 Специфические компоненты Арахис Указывают на истинную Ara h 2 сенсибилизацию Тимофеев ка Пчела медоносная Яйцо Api m 1 Gal d 1 Phl p 1 Береза Bet v 1 Gal d 1 = Gallus domesticus, allergen # 1 40 International Union of Immunological Societies Allergen Nomenclature Sub-Committee www.allergome.com Компоненты – это белки • • • • Специфичность Перекрестная реактивность Разная стабильность Разное количество Protein families based on homology 41 42 Клинические выводы Сенсибилизация к специфичным компонентам: • Рекомендации об избегании контакта с аллергеном • ПОКАЗАНИЕ К АСИТ Сенсибилизация к перекрестно-реагирующим компонентам только: • Обуславливает дальнейшие исследования первичной сенсибилизации 43 Использование аллергокомпонентов • Увеличение чувствительности теста • Предупреждение кросс-реактивности • Дифференциальная диагностика • Оценка риска тяжелой аллергической реакции / персистенции • Антиген-специфическая иммунотерапия (АСИТ) 44 Пыльца березы – ассоциированная пищевая аллергия Solanaceae Tomato Potato Paprica Betulaceae Alder Hazelpollen Hazelnuts Birke Umbelliferae Cellery Carrot Anise 45 Rosaceae Apple Peach Cherry Кросс-реактивность при пыльцевой аллергии (береза) • Bet v 1 - гомолог протеинов яблока и лесного ореха Birch [Betula verucosa] Bet v 1 Apple [Malus domestica] Mal d 1 Hazelnuts [Corylus avellana] Cor a 1 Обширные гомологичные последовательности в ботаническом семействе Quelle der Abb. : http://www.pdb.org/pdb / 46 Modified from Heiss S ….Valenta R. J Invest Dermatol. 1999 47 Что даёт Молекулярная Аллергология? • Разделение истинной и перекрестной реактивной чувствительности • ….и таким образом, выявление пациентов с истинной сенсибилизацией, которым полезна АСИТ с использованием экстракта из соответствующего источника 48 Молекулярная диагностика аллергии к яйцам • Важная пищевая аллергия у детей • Встречается в начале жизни • Часто проходит к дошкольному возрасту • Симптомы: • Атопический дерматит, кропивница, астма, анафилаксия • Может указывать на атопию в более позднем возрасте • Распространенность: 1-2% • Отварныеили жареные яйца могут употребляться пациентом 49 Главные аллерген компоненты яиц Gal d 2 • • • • Gal d 3 Овомукоид – Gal d 1 Овальбумин – Gal d 2 Овотрансферрин – Gal d 3 Лизоцим – Gal d 4 Gal d 4 Latin name: Gal d – Gallus domesticus 50 Gal d 1 Овомукоид - Gal d 1 • Доминирующий компонент яичного белка • 11 % состава яичного белка • Высокоаллергенный • Стабильный к нагреванию и ферментному перевареванию • Отварные яйца могут восприниматься, если уровень Овомукоид-IgE низкий Постоянная аллергия к яйцам наблюдается у пациентов с высоким уровнем Овомукоид-IgE 51 Gal d 1 52
