Набор для выявления вируса болезни Марека

Содержание
Компоненты набора................................................... 3
Область применения ................................................. 3
Гарантия ..................................................................... 3
Набор для
выявления вируса
болезни Марека
(Вир-5-50, на 50 реакций)
Описание .................................................................... 4
Меры предосторожности ......................................... 4
Необходимое оборудование .................................... 4
Важные замечания .................................................... 5
Необходимые контрольные образцы ...................... 5
Этап I. Постановка ПЦР ........................................... 5
Этап II. Анализ результатов ..................................... 7
Проблемы и рекомендации....................................... 8
Контроль качества ..................................................... 8
Хранение и стабильность ......................................... 9
Служба технической поддержки ............................. 9
Информация для заказов........................................... 9
1
2
обращаться в Службу технической поддержки (см. на
обороте).
Компоненты набора
Компоненты
2X Микс ПЦР
H-Taq полимераза
Контрольный образец
Вода
количество
700 мкл
27 мкл
270 мкл
2 мл
Описание
Процедура анализа состоит из двух этапов: 1) проведение
ПЦР с флуоресцентной детекцией в реальном времени, 2)
анализ результатов. Для детекции используется канал ROX
(макс. поглощения 580 нм, макс. флуоресценции 610 нм).
Область применения
Меры предосторожности
Набор предназначен для выявления геномной ДНК вируса
болезни Марека, выделенной из биологических образцов и
смывов, с помощью ПЦР в реальном времени.
Чувствительность набора до 103/мл геном эквивалентов в
исходной пробе. Набор рассчитан на проведение 50
реакций, включая контроли.
При приготовлении смесей используйте индивидуальные
средства защиты. Компоненты набора не обладают
токсическими и другими свойствами, за счёт которых
возможно негативное воздействие на человека.
Гарантия
Фрактал Био гарантирует изготовление всех продуктов
согласно описанию в руководстве. Покупатель должен
определить соответствие продукта для конкретного его
использования. Если продукт не дает заявленного
результата по любой причине, за исключением
неправильного использования, мы бесплатно произведем
замену продукта или вернем покупателю его полную
стоимость. Мы сохраняем за собой право изменять или
модифицировать любой продукт в целях улучшения его
качеств и дизайна. Если у Вас возникли вопросы по
применению продукта или оценке результата, вы можете
3
Необходимое оборудование
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Термостат
Амплификатор для ПЦР в реальном времени
Микроцентрифуга
Ламинарный и ПЦР-бокс
Набор дозаторов
Одноразовые наконечники с фильтрами для дозаторов
Одноразовые
полипропиленовые
микропробирки
объёмом 0,2 (0,5) мл
Штативы для наконечников и микропробирок
Халат и одноразовые перчатки
4
Важные замечания
Компонент
•
•
•
•
•
При работе с ДНК необходимо использовать только
одноразовые пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку “DNase-free”.
Для приготовления смесей и добавления нуклеиновых
кислот используйте только наконечники с фильтрами.
Работать только в одноразовых перчатках.
Всё лабораторное оборудование, в том числе дозаторы,
лабораторная посуда, а также все рабочие растворы,
должны быть строго стационарным.
Приготовление реакционных смесей для ПЦР
необходимо проводить в ПЦР-боксе.
Необходимые контрольные образцы
Этап постановки ПЦР:
•
Отрицательный контрольный образец (вода или
продукт выделения ДНК из воды)
•
Положительный контрольный образец (входит в
состав набора)
Положительный контрольный образец всегда добавляйте
последним, после закрытия пробирок с пробами.
Этап I. Постановка ПЦР.
1.
Смешайте компоненты, входящие в набор, в
указанных ниже пропорциях:
5
2Х Микс
H-Taq
полимераза
Вода
На 1
реакцию
(мкл)
12,5
0,5
На 5
реакций
(мкл)
62
2,5
7
35
На N реакций
12,5х(N+1) мкл
0,5х(N+1) мкл
7х(N+1) мкл
Важно! ПЦР смесь на несколько реакций (более пяти)
готовится на одну реакцию больше, чем нужно, чтобы
избежать недостатка смеси из-за погрешности пипеток и
потерь на наконечниках.
H-Taq полимеразу следует убрать на -20 °С сразу после
использования.
2.
Перемешайте подготовленную смесь на вортексе и
осадите капли кратковременным центрифугированием (2-3
сек).
3.
После приготовления смеси перенесите по 20 мкл в
каждую пробирку для ПЦР.
4.
Внесите в первую пробирку с ПЦР смесью 5 мкл
отрицательного контрольного образца (К-).
5.
Внесите по 5 мкл каждого образца ДНК в пробирки
с ПЦР смесью, кроме одной. Закройте крышки пробирок. В
последнюю пробирку добавьте 5 мкл контрольного образца
(КО).
ВАЖНО: Пробирку с контрольным образцом, входящую в
набор, открывайте только после раскапывания и закрытия
крышек пробирок всех исследуемых проб.
6
6.
Поместите пробирки в амплификатор и запустите
программу амплификации:
95°С - 3 минуты
50 циклов 60°С - 30 секунд
95°С - 20 секунд
рекомендуется повторить анализ с этапа выделения ДНК,
взяв в несколько раз больше материала.
Если хотя бы один из пунктов не выполняется,
воспользуйтесь разделом “Проблемы и рекомендации”.
Проблемы и рекомендации
Для приборов компании “BioRad”
установить на этапе 60 °С – 30 секунд.
съёмку
следует
Этап III. Анализ результатов.
По
каналу
ROX
регистрируется
сигнал,
свидетельствующий о накоплении продукта амплификации
ДНК проб.
Определите пороговые циклы (Ct) для каждой из проб. При
этом:
1) Сt для отрицательного контроля (К-) по каналу ROX
должно быть >50.
2) Сt для контрольного образца (КО) по каналу ROX
должно быть < 40
Геномная ДНК вируса болезни Марека обнаружена,
если для данной пробы в таблице результатов по
каналу ROX определено значение порогового цикла Сt
пробы < 40
Геномная ДНК вируса болезни Марека не
обнаружена, если для данной пробы в таблице
результатов по каналу ROX не определено значение
порогового цикла (Сt >50).
Сt для контрольного Убедитесь, что не вышел срок
образца не определено годности.
Обратитесь
к
(Сt >50).
производителю
Сt для проб меньше 17
Разведите ДНК в 10-1000 раз и
повторите анализ.
Сt для отрицательного Возможно,
установлены
контроля <40
некорректные параметры для
расчёта.
Контаминация.
Проведите мероприятия по
очистке
оборудования
и
помещения от контаминантов.
Смените
реактивы.
Не
открывайте
пробирку
с
контрольным образцом до
приготовления отрицательного
контроля и анализируемых
проб.
Контроль качества
Внимание: Сt в районе 36-40 циклов является
пограничным по чувствительности. В этом случае
Тестирование
набора
проводилось
на
плазмиде,
содержащей отрезок ДНК вируса болезни Марека, в
соответствии с протоколом, описанным выше.
7
8
Хранение и стабильность
Для заметок
Набор может храниться до 6 месяцев без изменения
качественных характеристик при температуре -20°С.
Служба технической поддержки
В случае появления вопросов обращайтесь в службу
технической поддержки: technic@fractalbio.com.
Информация для заказов
Наименование
Кат.номер
Набор для выявления вируса болезни
Марека (на 50 реакций)
Набор для выявления вируса болезни
Марека (на 100 реакций)
Набор «ФБиоНуклео» для выделения
нуклеиновых
кислот
из
биологического материала (на 4
выделения)
Набор «ФБиоНуклео» для выделения
нуклеиновых
кислот
из
биологического материала (на 50
выделений)
9
Вир-5-50
Вир-5-100
НК-1-4
НК-1-50
10
Для заметок
Произведено: ООО “Фрактал Био”, 190020, г. СанктПетербург, ул. Бумажная, д. 17
сайт: fractalbio.com
E-mail: info@fractalbio.com
Контактный телефон/факс: (812) 495-96-95
Дата изготовления:
11
12