Миозитные антигены – профиль EUROLINE (IgG) Myositis Profile
реклама
Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 1 ___________________________________________________________________________________________ Миозитные антигены – профиль EUROLINE (IgG) Myositis Profile EUROLINE (IgG) Набор для качественного определения in vitro аутоантител класса IgG к миозитным антигенам Mi-2, Ku, PMScl, Jo-1, PL-7, PL-12 и Ro-52 в сыворотке или плазме крови человека методом иммуноблотинга. Номер по каталогу: DL 1530-1601 G Набор рассчитан на 16 определений НАЗНАЧЕНИЕ Набор Myositis Profile EUROLINE (IgG) предназначен для качественного определения in vitro аутоантител класса IgG человека к 7 различным миозитным антигенам Mi-2, Ku, PM-Scl, Jo-1, PL-7, PL-12 и Ro-52 в сыворотке и плазме крови. ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ Дермато- и полимиозит, идиопатический миозит, антисинтетазный синдром. ПРИНЦИП МЕТОДА Тест Myositis Profile EUROLINE (IgG) основан на методе иммуноблотинга. Набор содержит тестовые стрипы, на которые нанесены параллельные полосы высокоочищенных антигенов. Тестовые стрипы инкубируют на первой стадии реакции с образцом разведенной сыворотки или плазмы крови пациента. В случае если образец положительный, специфические антитела класса IgG (а также классов IgA и IgM) будут связываться с соответствующими антигенами. Для обнаружения связанных антител проводится вторая инкубация с использованием ферментного конъюгата (антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой), который способен вызывать развитие цветной реакции. МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ Состав набора 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Компонент Тестовые стрипы, покрытые антигенами: Mi-2, Ku, PM-Scl, Jo-1, PL-7, PL-12 и Ro-52 Положительный контроль (IgG человека), 100× концентрат Ферментный конъюгат Козьи антитела к IgG человека, конъюгированные с щелочной фосфатазой; 10× концентрат Буфер для разведения образцов Готов к использованию Промывочный буфер 10× концентрат Раствор субстрата Нитроголубой тетразолий хлорид/5-бром-4-хлор-3индолил-фосфат (NBT/BCIP), готов к использованию Оценочный протокол Лоток для инкубации Пластиковая пленка Инструкция по применению набора Серия Для in vitro диагностики Количество Обозначение 16 × 1 1 × 0,02 мл STRIPS POS CONTROL 100× 1 × 3 мл CONJUGATE 10× 1 × 100 мл SAMPLE BUFFER 1 × 50 мл WASH BUFFER 10× 1 × 30 мл SUBSTRATE 1 шт. 2 × 8 каналов 1 шт. 1 экз. Температура хранения Невскрытый набор использовать до Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока годности набора. Утилизация отходов: Неразведенную сыворотку крови пациентов и тестовые стрипы после инкубации следует рассматривать как инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты следует утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями. ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ Примечание: Перед использованием температуру всех реагентов необходимо довести до комнатной (от +18 °С до +25 °С) в течение 30 минут. После первого использования реагенты сохраняют стабильность в ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 2 ___________________________________________________________________________________________ течение всего указанного срока годности при условии их хранения при температуре от +2 °С до +8 °С и отсутствия микробной контаминации. - Тестовые стрипы, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Во избежание конденсации влаги на стрипах, не вскрывайте пакет до тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Вынув необходимое количество стрипов, остальные неиспользованные стрипы немедленно плотно закройте в той же защитной упаковке и храните при температуре от +2 °С до +8 °С. - Положительный контроль: Поставляется в виде 100-кратного концентрата. Для приготовления готового к использованию контроля из флакона с концентратом следует отобрать необходимое количество жидкости с помощью пипетки с чистым наконечником и разведите 1:101 буфером для разведения образцов. Например: добавьте 15 мкл контроля к 1,5 мл буфера для разведения образцов и тщательно перемешайте. Готовый к использованию разведенный контроль следует использовать до конца рабочего дня. - Ферментный конъюгат: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Отберите необходимое количество жидкости из флакона с концентратом с помощью пипетки с чистым наконечником и разведите 1:10 буфером для разведения образцов. Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе, смешайте 0,15 мл концентрата ферментного конъюгата с 1,35 мл буфера для разведения образцов. Разведенный раствор ферментного конъюгата следует использовать до конца рабочего дня. - Буфер для разведения образцов: Готов к использованию. - Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Для приготовления готового к использованию промывочного буфера отберите необходимое количество жидкости из флакона с концентратом с помощью пипетки с чистым наконечником и разведите 1:10 дистиллированной водой. Например, для проведения анализа на 1 тестовом стрипе разведите 1 мл концентрата промывочного буфера в 9 мл дистиллированной воды. Разведенный буфер следует использовать до конца рабочего дня. - Раствор субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента из флакона немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету. Внимание! Использованный контроль был проверен на отсутствие антигена гепатита В, а также антител к вирусам ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и вирусу гепатита С методами иммуноферментного анализа или непрямой иммунофлуоресценции. Тем не менее, все используемые материалы следует считать потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры предосторожности. Некоторые реагенты являются ядовитыми (буфер, субстратный раствор). Избегайте контакта с кожей. ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека. Стабильность: Исследуемые образцы, предназначенные для анализа этим методом, можно хранить до 14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение одного рабочего дня. Разведение образцов: Исследуемые образцы разводят 1:101 буфером для разведения образцов. Например: разведите 15 мкл исследуемого образца в 1,5 мл буфера для разведения образцов и тщательно перемешайте на вортексе (пипетка для перемешивания не пригодна). ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ Блокировка стрипов Выньте из упаковки требуемое количество тестовых стрипов и поместите каждый стрип в отдельный канал. При этом должен быть виден номер стрипа, указанный в его нижней части. Заполните каналы пластикового лотка для инкубации буфером для разведения образцов (по 1,5 мл буфера на один канал). Инкубируйте 5 минут при комнатной температуре на шейкере-качалке. Затем удалите всю жидкость из каждого канала. Инкубация образцов (1-я стадия) Внесите в каждый канал по 1,5 мл разведенного образца сыворотки или плазмы крови и инкубируйте при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в течение 30 минут на шейкере-качалке. Промывка Удалите жидкость из каждого канала и затем промойте 3 раза по 5 минут на шейкере-качалке, внося каждый раз по 1,5 мл промывочного буфера на канал. Инкубация с конъюгатом (2-я стадия) Внесите в каждый канал по 1,5 мл разведенного ферментного конъюгата (меченные щелочной фосфатазой антитела к IgG человека). Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (от +18 ° до +25 °) на шейкере- ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 3 ___________________________________________________________________________________________ качалке. Промывка Удалите жидкость из каждого канала и затем промойте 3 раза по 5 минут на шейкере-качалке, внося каждый раз по 1,5 мл промывочного буфера на канал. Инкубация с субстратом (3-я стадия) Внесите в каждый канал по 1,5 мл раствора субстрата. Инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре (от +18 ° до +25 °С) на шейкере-качалке. Остановка реакции Удалите жидкость из каждого канала и затем промойте 3 раза по 1 минуте дистиллированной водой. Оценка результатов Поместите тестовый стрип на оценочный протокол, высушите на воздухе и проведите оценку результатов. ОЦЕНКА И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ТЕСТА Myositis Profile EUROLINE (IgG) Регистрация результатов реакции После остановки реакции поместите влажные проинкубированные блотовые стрипы на покрытый прозрачным пластиком оценочный протокол и совместите их с имеющейся разметкой. Затем осторожно прижмите стрипы листом фильтровальной бумаги для удаления влаги (после высыхания стрипы прочно закрепятся на пластике). Высохшие блотовые стрипы для дальнейшего хранения следует закрыть сверху прилагаемой к набору пластиковой пленкой. Если результаты оцениваются в цифровом виде с использованием сканера EUROLineScan, стрипы следует поместить на соответствующий лист рабочего протокола, как описано выше. После сканирования сухие блотовые стрипы для дальнейшего хранения следует закрыть сверху пластиковой пленкой. Для ввода теста (Test) в сканер EUROLineScan используйте код Myositis-EL. На стрипах имеется контрольная полоса. Инкубация проведена правильно, если контрольная полоса в результате реакции ярко окрашена. Антигены и их размещение на стрипах: Тестовые стрипы EUROLINE покрыты следующими антигенами: Mi-2: Рекомбинантный белок Mi-2. Соответствующая кДНК человека была экспрессирована с помощью системы бакуловируса в клетках насекомых. Ku: Рекомбинантный белок Ku. Соответствующая кДНК человека была экспрессирована с помощью системы бакуловируса в клетках насекомых. PM-Scl: Рекомбинантный белок PM-Scl. Соответствующая кДНК человека была экспрессирована с помощью системы бакуловируса в клетках насекомых. Jo-1: Нативный белок Jo-1 (гистидил-тРНК-синтетаза), очищенный аффинной хроматографией из тимуса теленка и кролика. PL-7: Рекомбинантный белок PL-7 (треонил-тРНКсинтетаза). Соответствующая кДНК человека была экспрессирована с помощью системы бакуловируса в клетках насекомых. PL-12: Рекомбинантный белок PL-12 (аланил-тРНКсинтетаза). Соответствующая кДНК человека была экспрессирована с помощью системы бакуловируса в клетках насекомых. Ro-52: Рекомбинантный белок Ro-52 (52 кДа). Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в клетках насекомых с использованием системы бакуловируса. Mi-2 Ku PM-Scl Jo-1 PL-7 PL-12 Ro-52 Контроль ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 4 ___________________________________________________________________________________________ По интенсивности сигнала все результаты можно разделить на отрицательные, промежуточные и положительные. Сигнал Нет сигнала Окраска полосы очень слабая Окраска полосы от умеренной до интенсивной Окраска полосы очень интенсивная, сравнимая с окраской контрольной полосы Результат Отрицательный Промежуточный Положительный Сильно-положительный Всегда параллельно с тестом Myositis EUROLINE следует использовать непрямой иммунофлюоресцентный тест (РНИФ). Результаты определения аутоантител с использованием набора EUROLINE следует сравнивать с результатами ANA скрининговых тестов (непрямой иммунофлуоресценции с использованием комбинации субстратов: клеток HЕp-2 и замороженных срезов ткани печени приматов. Кат. № FA 1510). Оценивать следует только результаты, совпавшие при исследовании скрининговым и подтверждающим тестами. Антитела к аминоацил-т-РНК-синтетазам (Jo-1, PL-7 и PL-12) иногда не очень четко определяются при скрининге методом РНИФ. Рекомендуется проводить параллельное тестирование, используя скрининговый и подтверждающий тесты. Результаты скринингового теста (непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) с использованием комбинированного субстрата HЕp-2/печень) ANA-положительный: Мелкогранулярная флуоресценция ядер клеток, часть ядрышек невидима. ANA-положительный “тип Ku”: Мелкогранулярная флуоресценция в ядрах клеток, ядрышки частично положительны. Печень приматов: мелкогранулярная, частично ретикулярная флуоресценция в ядрах клеток. ANA-положительный нуклеолярный: Гомогенная флуоресценция ядрышек, в то же время более слабая мелкогранулярная реакция в нуклеоплазме. Хромосомы митотических клеток исключены, мелкогранулярная флуоресценция за пределами хромосом. Печень приматов: гомогенная флуоресценция ядрышек. Часто от гранулярной до мелкогрупповой флуоресценции во всей цитоплазме, клеточные ядра иногда с мелкими гранулами, более слабо выраженными, чем в цитоплазме. Часто от мелкогранулярной до гомогенной флуоресценции в цитоплазме. Описание Результат Полоса антигена Mi-2 Анти-Mi-2положительный Полоса антигена Ku Анти-Kuположительный Полоса антигена PM-Scl Анти-PM-Sclположительный Полоса антигена Jo-1 Анти-Jo-1положительный Полоса антигена PL-7 Анти-PL-7положительный Анти-PL-12положительный Полоса антигена PL-12 ANA-положительный или -отрицательный. Полоса антигена Ro-52 Анти-Ro-52положительный Отдельные реакции с антигеном Ro-52 не следует расценивать как анти-SS-A-положительные или специфичные к системной красной волчанке (СКВ) или синдрому Шегрена, так как они могут иметь место при многих различных аутоиммунных заболеваниях. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Диапазон определения Метод EUROLINE является качественным, диапазон определения не дается. Принято, что предельный титр антител устанавливается при разведении образца 1:101. ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 5 ___________________________________________________________________________________________ Перекрестные реакции Качество используемых субстратов антигенов и источников антигенов гарантирует высокую специфичность наборов EUROLINE. Данный набор EUROLINE специфически определяет антитела класса IgG к Mi-2, Ku, PM-Scl, Jo-1, PL-7, PL-12 и Ro-52. Перекрестных реакций с другими аутоантителами не обнаружено. Интерференция: Не отмечено изменения аналитических характеристик при исследовании в данном наборе гемолизированных, липемических или желтушных образцов с концентрациями гемоглобина вплоть до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл. Воспроизводимость результатов между опытами и в пределах одного опыта Воспроизводимость результатов между опытами оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в течение нескольких дней, воспроизводимость в пределах одного опыта – многократным исследованием охарактеризованных образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROLINE показывает очень высокую воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками. Чувствительность и специфичность Mi-2: Для обнаружения аутоантител к Mi-2 чувствительность 100% (сравнительно с референтными методами Вестерн-блота и РНИФ с использованием замороженных срезов ткани печени приматов и/или подтверждающим тестом Myositis EUROLINE-WB) была определена при использовании 35 серологически охарактеризованных образцов сыворотки пациентов с миозитом (позитивных по Mi-2: n=6). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). Ku: Для обнаружения аутоантител к Kul чувствительность 100% (сравнительно с референтными методами Вестерн-блота и РНИФ с использованием замороженных срезов ткани печени приматов и/или подтверждающим тестом Myositis EUROLINE-WB) была определена при использовании 35 серологически охарактеризованных образцов сыворотки пациентов с миозитом (позитивных по Ku: n=7). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). PM-Scl: Для обнаружения аутоантител к PM-Scl чувствительность 100% (сравнительно с референтными методами Вестерн-блота и РНИФ с использованием замороженных срезов ткани печени приматов и/или подтверждающим тестом Myositis EUROLINE-WB) была определена при использовании 35 серологически охарактеризованных образцов сыворотки пациентов с миозитом (позитивных по PM-Scl: n=6). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). Jo-1: Для обнаружения аутоантител к Jo-1 чувствительность 100% (сравнительно с референтными методами Вестерн-блота и РНИФ с использованием замороженных срезов ткани печени приматов и/или подтверждающим тестом Myositis EUROLINE-WB) была определена при использовании 35 серологически охарактеризованных образцов сыворотки пациентов с миозитом (позитивных по Jo-1: n=7). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). PL-7: Для обнаружения аутоантител к PL-7 чувствительность 100% (сравнительно с референтными методами Вестерн-блота и РНИФ с использованием замороженных срезов ткани печени приматов и/или подтверждающим тестом Myositis EUROLINE-WB) была определена при использовании 35 серологически охарактеризованных образцов сыворотки пациентов с миозитом (позитивных по PL-7: n=3). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). PL-12: Для обнаружения аутоантител к PL-12 чувствительность 100% (сравнительно с референтными методами Вестерн-блота и РНИФ с использованием замороженных срезов ткани печени приматов и/или подтверждающим тестом Myositis EUROLINE-WB) была определена при использовании 35 серологически охарактеризованных образцов сыворотки пациентов с миозитом (позитивных по PL-12: n=6). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). Ro-52: Для обнаружения аутоантител к Ro-52 чувствительность 100% (сравнительно с методом Вестернблота) была определена при использовании 103 образцов сыворотки пациентов с СКВ и синдромом Шегрена (СКВ n=23, синдром Шегрена n=77, красная волчанка у новорожденных n=3). Специфичность составила 100% по образцам сыворотки от здоровых доноров крови (n=50). Антитела к Ro-52 не специфичны к какому-либо заболеванию и могут быть обнаружены в образцах от пациентов, страдающих миозитом, склеродермой и другими ревматическими заболеваниями (11-16), например, в 7 образцах из 20 (35%) от пациентов со склеродермой обнаруживались аутоантитела к Ro-52. ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 6 ___________________________________________________________________________________________ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ Миозит представляет собой воспалительное заболевание скелетных мышц. Он может наследственным или вызванным инфекциями, поражениями иммунной системы или токсинами [1, 2]. быть Полимиозит (ПМ) является воспалительным заболеванием скелетных мышц с периваскулярной инфильтрацией лимфоцитов. Его этиология неизвестна. В случае вовлечения в патологический процесс кожи оно носит название дерматомиозит (ДМ) [3]. Имеется пять различных форм полимиозита: первичный идиопатический полимиозит (33% случаев), первичный идиопатический дерматомиозит (33%), паранеопластические дерматомиозиты легких, яичников, молочной железы, желудочно-кишечного тракта и миелопролиферативные заболевания (8%), инфантильный дерматомиозит и сопровождающий его васкулит (от 5% до 10%), оверлап-синдром (синдром перекрывания) миозита с коллагенозом (20%). Дерматото-/полимиозит часто паранеопластического происхождения, особенно у пожилых пациентов. Симптомы дерматомиозита могут появляться до того, как будет выявлено наличие опухоли. Клинические симптомы полимиозита – мышечная слабость, неспецифическое воспаление, артралгия, возможен синдром Рейнольдса, затрудненное глотание и поражение внутренних органов. Дерматомиозиты характеризуются следующими кожными проявлениями: синевато-пурпурной экзантемой век, переносицы и щек, периорбитальным отеком, локальной эритемой и обширным экзематозным дерматитом [3]. Результаты лабораторных исследований показывают увеличенный уровень мышечных ферментов. Выявление ассоциированных с миозитом аутоантител с помощью специфических тестов помогает при диагностике дермато- / полимиозита, при наблюдении за течением болезни и успешностью применяемой терапии [6, 7, 8, 9]. Хотя уровень смертности в 4 раза выше обычной (из-за заболеваний сердца и легких, являющихся первопричиной смерти), половина пациентов полностью восстанавливается, при этом может остаться легкая мышечная слабость. В 30% случаев развитие заболевания может быть приостановлено. У 20% пациентов проявляются нарушения, несмотря на принятые терапевтические меры [5]. Антитела к антигену Mi-2 высокоспецифичны к дерматомиозиту [10, 11]. При дерматомиозите аутоантитела обнаруживаются у 15% - 30% пациентов. Антитела к Mi-2 могут обнаруживаться также у 8% - 12% пациентов, страдающих идиопатическим миозитом [6, 12, 13, 14, 15, 16]. Антитела к антигену Ku превалируют (составляя до 10%) при системной красной волчанке (SLE, СКВ), системном аутоиммунном заболевании, входящем в группу коллагенозов, проявляющемся преимущественно в виде симметричного шелушения на обеих щеках - так называемого симптома “кожной бабочки” [10, 17]. 40% симптомов у пациентов с антителами к антигену Ku относятся к миозиту или характерны для прогрессирующего системного склероза (SSc), хронического аутоиммунного заболевания с фиброзными изменениями кожи (склеродермия), суставов и внутренних органов, таких как эзофагус, легкие, сердце и почки [5, 8]. Антитела к антигену PM-Scl (РМ-1) найдены у 50% - 70% пациентов с оверлап-синдромом: заболевание проявляет себя в виде комбинации симптомов полимиозита, дерматомиозита и системного склероза [17, 18]. Антитела к антигену Jo-1 находят при полимиозите с превалированием от 25% до 55% [9, 10, 11, 16, 17, 19, 20]. Они часто ассоциированы с одновременно протекающими аутоиммунными заболеваниями, такими как СКВ, SSc или интерстициальный фиброз легких, воспалительный ответ легочной ткани с сопутствующим формированием соединительной ткани между альвеолами и окружающими их кровеносными сосудами [19, 21]. Антитела к антигену PL-7 распространены у пациентов с полимиозитом в 3% - 6% случаев, частично совпадая с СКВ, SSc или интерстициальным фиброзом легких [2, 8, 20, 22, 23]. Превалирование антител к PL-12 у пациентов с миозитом не более 3% [2, 8, 20, 21]. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке. Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см. внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо руководствуйтесь оригиналом инструкции. ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 7 ___________________________________________________________________________________________ Myositis_Profile_EUROLINE-DL 1530 G - rus.doc 27.08.2007 11:53 Оригинал DL_1530G_A_UK_C03 version: 22.051.2007 07:58 ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected] Myositis Profile EUROLINE (IgG), EUROIMMUN AG 8 ___________________________________________________________________________________________ EUROIMMUN Myositis Profile EUROLINE (IgG) Протокол инкубации Блокировка: Поместите блотовый стрип в канал лотка для инкубации, и внесите в лоток 1,5 мл буфера для разведения образцов 5 мин При встряхивании 1. Инкубация с образцом: Удалите жидкость, внесите в канал 1,5 мл разведенного образца сыворотки (1:101) 30 мин При встряхивании Промывка: Удалите жидкость, промойте 3 раза по 5 минут каждый канал 1,5 мл промывочного буфера 2. Инкубация с конъюгатом: Удалите жидкость, внесите в канал 1,5 мл ферментного конъюгата (1:10) 30 мин При встряхивании Промывка: Удалите жидкость, промойте 3 раза по 5 минут каждый канал 1,5 мл промывочного буфера 3. Инкубация с субстратом: Удалите жидкость, внесите в канал 1,5 мл раствора субстрата 10 мин При встряхивании Остановка реакции: Удалите жидкость, промойте 3 раза по 1,5 мл дистиллированной воды Визуальная оценка Зафиксируйте стрипы на оценочном протоколе, высушите на воздухе и проведите оценку ___________________________________________________________________________________________ Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2007 тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: [email protected]
