ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ИММУНОГЛОБУЛИНЫ В ЛИНИЯХ

2014
ÖÈÒÎËÎÃÈß
Ò î ì 56, ¹ 2
ÂÍÓÒÐÈÊËÅÒÎ×ÍÛÅ ÈÌÌÓÍÎÃËÎÁÓËÈÍÛ Â ËÈÍÈßÕ NAMALVA È U266
ÏÐÈ ÑÎÊÓËÜÒÈÂÈÐÎÂÀÍÈÈ Ñ ÌÅÇÅÍÕÈÌÍÛÌÈ ÑÒÐÎÌÀËÜÍÛÌÈ ÊËÅÒÊÀÌÈ
© À. À. Àéçåíøòàäò,1, 2 Í. À. Èâàíîâà,2 Â. Â. Áàãàåâà,2 À. Á. Ñìîëÿíèíîâ,1, 2
À. À. Ïèíåâè÷,3 Ì. Ï. Ñàìîéëîâè÷,3 Â. Á. Êëèìîâè÷3
Ñåâåðî-Çàïàäíûé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò èì. È. È. Ìå÷íèêîâà,
2 ÎÎÎ Ïîêðîâñêèé áàíê ñòâîëîâûõ êëåòîê
è 3 Ðîññèéñêèé íàó÷íûé öåíòð ðàäèîëîãèè è õèðóðãè÷åñêèõ òåõíîëîãèé, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã;
1ýëåêòðîííûé àäðåñ: [email protected]
1
À. À. Àéçåíøòàäò è äð.
Äàííûå î âëèÿíèè ìåçåíõèìíûõ ñòðîìàëüíûõ êëåòîê (ÌÑÊ) íà ñèíòåç èììóíîãëîáóëèíîâ ïðîòèâîðå÷èâû. Îíè áûëè ïîëó÷åíû â îñíîâíîì ñ èñïîëüçîâàíèåì ÌÑÊ, âûäåëåííûõ èç êîñòíîãî ìîçãà. Ñâîéñòâà ÌÑÊ èç äðóãèõ òêàíåé èçó÷åíû â ýòîì îòíîøåíèè íåäîñòàòî÷íî.  íàñòîÿùåé ðàáîòå êóëüòóðû
ÌÑÊ ïîëó÷àëè èç ïóïî÷íîãî êàíàòèêà, æèðîâîé òêàíè è êîñòíîãî ìîçãà çäîðîâûõ äîíîðîâ, à òàêæå èç
êîñòíîãî ìîçãà ïàöèåíòîâ ñ àóòîèììóííûìè çàáîëåâàíèÿìè. Âñå ÌÑÊ èç óêàçàííûõ èñòî÷íèêîâ îáëàäàëè ñõîäíûì íàáîðîì ïîâåðõíîñòíûõ ìàðêåðîâ. Ìåòîäîì ñîêóëüòèâèðîâàíèÿ èññëåäîâàëè âëèÿíèå
ÌÑÊ, íàõîäÿùèõñÿ â ýêñïîíåíöèàëüíîé èëè ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà, íà ñîäåðæàíèå èììóíîãëîáóëèíîâ Ì è Å â êëåòêàõ ëèíèé Namalva è U266 ñîîòâåòñòâåííî. ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà çäîðîâûõ äîíîðîâ
âíå çàâèñèìîñòè îò ôàçû ðîñòà êóëüòóðû íå âëèÿëè íà ñèíòåç èììóíîãëîáóëèíîâ. Ïðîëèôåðèðóþùèå
ÌÑÊ êîñòíîãî ìîçãà, ïîëó÷åííûå îò ïàöèåíòîâ ñ áîëåçíüþ Êðîíà èëè ñ ðàññåÿííûì ñêëåðîçîì, ñòèìóëèðîâàëè èõ ïðîäóêöèþ. ÌÑÊ æèðîâîé òêàíè è ïóïî÷íîãî êàíàòèêà â ýêñïîíåíöèàëüíîé ôàçå ðîñòà
òàêæå ñòèìóëèðîâàëè ñèíòåç èììóíîãëîáóëèíîâ. ÌÑÊ â ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà óñèëèâàëè ïðîäóêöèþ IgM â êëåòêàõ Namalva è ïîäàâëÿëè ñèíòåç IgE â êëåòêàõ U266. Òàêèì îáðàçîì, ÌÑÊ, ïîëó÷åííûå
èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ, íî èìåþùèå ñõîäíûé ôåíîòèï, ðàçëè÷àþòñÿ ïî ñïîñîáíîñòè ìîäóëèðîâàòü ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ â êëåòêàõ Â-ëèìôîèäíîãî ðÿäà. Äåéñòâèå ÌÑÊ îïðåäåëÿåòñÿ ôàçîé ðîñòà
êóëüòóðû è ìîæåò áûòü ðàçëè÷íûì â îòíîøåíèè ëèìôîáëàñòîèäíûõ è ìèåëîìíûõ êëåòîê.
Âíóòðèêëåòî÷íûå èììóíîãëîáóëèíû â ëèíèÿõ Namalva è U266
Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: ìåçåíõèìíûå ñòðîìàëüíûå êëåòêè, èììóíîìîäóëÿöèÿ, Namalva, U266, èììóíîãëîáóëèíû.
Ï ð è í ÿ ò û å ñ î ê ð à ù å í è ÿ: ÌÑÊ — ìåçåíõèìíûå ñòðîìàëüíûå êëåòêè, IgÌ è IgE — èììóíîãëîáóëèíû Ì è Å ñîîòâåòñòâåííî.
 2002—2003 ãã. áûëè îïóáëèêîâàíû ñîîáùåíèÿ î
íåèçâåñòíîé ðàíåå ñïîñîáíîñòè ÌÑÊ èíãèáèðîâàòü ïðîëèôåðàöèþ Ò-ëèìôîöèòîâ (Bartholomew et al., 2002; Di
Nicola et al., 2002; Le Blanc et al., 2003). Äàëüíåéøèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî âëèÿíèå ÌÑÊ ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ è íà äðóãèå êëåòêè èììóííîé ñèñòåìû (åñòåñòâåííûå
êèëëåðû, äåíäðèòíûå êëåòêè, ðåãóëÿòîðíûå Ò-ëèìôîöèòû è B-ëèìôîöèòû). Ñîãëàñíî ìíåíèþ ýêñïåðòîâ, ñïîñîáíîñòü ÌÑÊ âûñòóïàòü â ðîëè èììóíîìîäóëÿòîðîâ ìîæåò íàéòè ïðèìåíåíèå ïðè ïåðåñàäêå îðãàíîâ è òêàíåé,
ïðè ëå÷åíèè ïðîÿâëåíèé òêàíåâîé íåñîâìåñòèìîñòè,
àóòîèììóííûõ è àëëåðãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé (Tyndall
et al., 2007). Àíàëîãè÷íàÿ òî÷êà çðåíèÿ îòðàæåíà â îáçîðàõ, îáîáùàþùèõ èòîãè èññëåäîâàíèé â äàííîì íàïðàâëåíèè (Êðóãëÿêîâ è äð., 2006; Rasmusson, 2006; Uccelli
et al., 2006).
Ïðîÿâëåíèÿ è ìåõàíèçìû èììóíîìîäóëèðóþùåé àêòèâíîñòè ÌÑÊ èçó÷åíû íåäîñòàòî÷íî. Òàê, íå äîñòèãíóòà ÿñíîñòü îòíîñèòåëüíî âëèÿíèÿ ÌÑÊ íà ïðîëèôåðàöèþ,
äèôôåðåíöèðîâêó è ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü Â-ëèìôîöèòîâ è ïëàçìàòè÷åñêèõ êëåòîê-ïðîäóöåíòîâ àíòèòåë.
Îïèñàíî êàê ñóïðåññîðíîå (Corcione et al., 2006;
Ìåçåíõèìíûå ñòðîìàëüíûå (ñòâîëîâûå) êëåòêè
(ÌÑÊ) áûëè âïåðâûå îïèñàíû êàê íåäèôôåðåíöèðîâàííûå ôèáðîáëàñòîïîäîáíûå ýëåìåíòû êîñòíîãî ìîçãà
âçðîñëûõ îñîáåé, ñïîñîáíûå ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ïðèêðåïëÿòüñÿ ê ïîâåðõíîñòè ïëàñòèêà, ðàñòè ïðè íèçêîé
ïëîòíîñòè â âèäå îòäåëüíûõ êîëîíèé è äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â êëåòêè æèðîâîé, õðÿùåâîé è êîñòíîé òêàíåé (Friedenstein et al., 1968; Pittenger et al., 1999; Bianco, Gehron,
2000). ÌÑÊ ìîãóò òàêæå äàâàòü íà÷àëî êëåòêàì ýíäîòåëèÿ (Oswald et al., 2004), êàðäèîìèîöèòàì (Tomchuck
et al., 2008), íåéðîíàì è àñòðîöèòàì (Jori et al., 2005).
Îñíîâíûì èñòî÷íèêîì ìàòåðèàëà äëÿ èññëåäîâàíèé
ÌÑÊ äëèòåëüíîå âðåìÿ ñëóæèë êîñòíûé ìîçã ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ è ÷åëîâåêà.  ïîñëåäíèå ãîäû ïðèâëåêàþò
âíèìàíèå ÌÑÊ, âûäåëåííûå èç æèðîâîé òêàíè âçðîñëûõ
ëþäåé (Zimmerlin et al., 2010) è ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè ïóïî÷íîãî êàíàòèêà (Romanov et al., 2003; Sarugaser et al.,
2005), ïîñêîëüêó îíè îáëàäàþò ñõîæèì äèôôåðåíöèðîâî÷íûì ïîòåíöèàëîì è èììóíîôåíîòèïîì (CD105,
CD90, CD44, CD73, Stro-1 è CD166), íî áîëåå âûñîêîé
ïðîëèôåðàòèâíîé àêòèâíîñòüþ ïî ñðàâíåíèþ ñ ÌÑÊ êîñòíîãî ìîçãà (Kern et al., 2006).
117
À. À. Àéçåíøòàäò è äð.
118
Che et al., 2012), òàê è ñòèìóëèðóþùåå âëèÿíèå ÌÑÊ íà
ïðîëèôåðàöèþ B-ëèìôîöèòîâ è íà ñèíòåç àíòèòåë (Rasmusson åt al., 2007; Traggiai åt al., 2008). Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî ïðîòèâîðå÷èÿ îáóñëîâëåíû ðàçëè÷íûìè óñëîâèÿìè ïîñòàíîâêè ýêñïåðèìåíòîâ è ìîãóò áûòü óñòðàíåíû â õîäå äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèé (Franquesa et al.,
2012).  ðÿäå ðàáîò â êà÷åñòâå òåñò-îáúåêòîâ äåéñòâèÿ
ÌÑÊ èñïîëüçîâàëè ïîñòîÿííûå Â-êëåòî÷íûå ëèíèè
(Am*e-Thomas et al., 2007; Bocelli-Tyndall et al., 2007), ïðåèìóùåñòâà êîòîðûõ ñîñòîÿò â ñòàáèëüíîé ïðîëèôåðàöèè
è êîíñòèòóòèâíîé ïðîäóêöèè èììóíîãëîáóëèíîâ ðàçíûõ
êëàññîâ.
Öåëü íàñòîÿùåé ðàáîòû ñîñòîÿëà â èçó÷åíèè âëèÿíèÿ
êóëüòóð ÌÑÊ èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ, íàõîäÿùèõñÿ â ýêñïîíåíöèàëüíîé èëè ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà, íà ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ Ì è Å Â-êëåòî÷íûõ ëèíèé Namalva è U266 ñîîòâåòñòâåííî.
Ìàòåðèàë è ìåòîäèêà
Ï î ë ó ÷ å í è å è ê ó ë ü ò è â è ð î â à í è å Ì Ñ Ê. Îáðàçöû êîñòíîãî ìîçãà, æèðîâîé òêàíè è ïóïî÷íîãî êàíàòèêà ïîëó÷àëè ïðè íàëè÷èè èíôîðìèðîâàííîãî ñîãëàñèÿ
äîíîðîâ. Êîñòíûé ìîçã ïîëó÷àëè èç ïîäâçäîøíîé êîñòè
îò äâóõ çäîðîâûõ äîíîðîâ è äâóõ ïàöèåíòîâ ñ èììóíîïàòîëîãè÷åñêèìè ñîñòîÿíèÿìè â ñòàäèè îáîñòðåíèÿ (ñ áîëåçíüþ Êðîíà è ðàññåÿííûì ñêëåðîçîì). Àñïèðàò êîñòíîãî ìîçãà ðàçäåëÿëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì (400 g, 30 ìèí)
â ãðàäèåíòå ïëîòíîñòè ôèêîëëà. Ôðàêöèþ ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòîê íà ãðàíèöå ôàç ñîáèðàëè, ïðîìûâàëè ôîñôàòíî-ñîëåâûì áóôåðíûì ðàñòâîðîì (PBS), ïîñëå ÷åãî
âíîñèëè â ïîëíóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó Advanced Stem,
ñîäåðæàùóþ 20 % çàìåíèòåëÿ ñûâîðîòêè HyClone, è
âûñåâàëè âî ôëàêîíû (ïëîùàäü 75 ñì2) ïðè ïëîòíîñòè
100 òûñ. êë./ñì2. ×åðåç 3 ñóò ñðåäó ìåíÿëè äëÿ óäàëåíèÿ
íåïðèêðåïèâøèõñÿ êëåòîê.
Îáðàçöû ïîäêîæíîé æèðîâîé òêàíè ïîëó÷àëè îò
äâóõ çäîðîâûõ äîíîðîâ. Òêàíü ìåõàíè÷åñêè èçìåëü÷àëè, çàòåì èíêóáèðîâàëè ïðè 37 °Ñ â 0.2%-íîì ðàñòâîðå êîëëàãåíàçû I òèïà â PBS. Äèññîöèèðîâàííûå êëåòêè
îòìûâàëè îò ôåðìåíòà öåíòðèôóãèðîâàíèåì (400 g,
10 ìèí) è âûñåâàëè âî ôëàêîíû ïðè ïëîòíîñòè 100—
400 òûñ. êë./ñì2. Ñðåäó ìåíÿëè ÷åðåç 24 ÷.
Ðèñ. 1. Ðàñïðåäåëåíèå èíòåíñèâíîñòè ôëóîðåñöåíöèè (ÈÔ)
êëåòîê ëèíèè Namalva, ìå÷åííûõ àíòèòåëàìè ïðîòèâ IgM.
Êðèâûå: 1 — êëåòêè â ìîíîêóëüòóðå (Xmean = 19), 2 — ïðè êîíòàêòíîì
ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñ ÌÑÊ êîñòíîãî ìîçãà ïàöèåíòà ñ áîëåçíüþ Êðîíà
(Xmean = 44).
Ïóïî÷íûé êàíàòèê áûë ïîëó÷åí ïðè íåîñëîæíåííûõ
ðîäàõ. Ñîñóäû êàíàòèêà ïðîìûâàëè PBS, çàïîëíÿëè
0.2%-íûì ðàñòâîðîì êîëëàãåíàçû IV òèïà â òîì æå áóôåðå, ïðîìûâàëè è ïîâòîðíî çàïîëíÿëè ðàñòâîðîì êîëëàãåíàçû, çàòåì êëåììèðîâàëè ñ äâóõ ñòîðîí è èíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå 1 ÷ ïðè 37 °Ñ. Ïîëó÷åííóþ âçâåñü êëåòîê
îòìûâàëè îò ôåðìåíòà öåíòðèôóãèðîâàíèåì (400 g,
10 ìèí) è âûñåâàëè âî ôëàêîíû ïðè ïëîòíîñòè 100—
400 òûñ. êë./ñì2. Ñðåäó ìåíÿëè ÷åðåç 3 ñóò. Ïðè äîñòèæåíèè 70—80 % êîíôëþýíòíîñòè ìîíîñëîÿ ÌÑÊ ïåðåñåâàëè ïðè ïëîòíîñòè 5 òûñ. êë./ñì2 è êóëüòèâèðîâàëè â ïîëíîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, ñîäåðæàùåé 10 % çàìåíèòåëÿ ñûâîðîòêè.
 ýêñïåðèìåíòàõ èñïîëüçîâàëè êóëüòóðû ÌÑÊ
3—4 ïàññàæåé, íàõîäÿùèåñÿ â ôàçå ëîãàðèôìè÷åñêîãî
ðîñòà (30—60 % êîíôëþýíòíîñòè) èëè â ñòàöèîíàðíîé
ôàçå (100 % êîíôëþýíòíîñòè). Ïîâåðõíîñòíûå ìàðêåðû
ÌÑÊ âûÿâëÿëè ñ ïîìîùüþ ìå÷åííûõ ôëóîðîõðîìàìè àíòèòåë ïðîòèâ CD34, CD45, CD90, CD105 è CD73 íà ïðîòî÷íîì öèòîôëóîðèìåòðå FC500 (Beckman Coulter, ÑØÀ)
â ñîîòâåòñòâèè ñ èíñòðóêöèåé ôèðìû-ïðîèçâîäèòåëÿ.
Àíàëèç ïîëó÷åííûõ äàííûõ ïðîâîäèëè ñ ïîìîùüþ ïðîãðàììíîãî îáåñïå÷åíèÿ ÑÕÐ.
 - ê ë å ò î ÷ í û å ë è í è è Namalva è U266 áûëè ïîëó÷åíû èç Êîëëåêöèè êëåòî÷íûõ êóëüòóð Èíñòèòóòà öèòîëãèè ÐÀÍ (Ñàíêò-Ïåòåðáóðã). Êëåòêè âûðàùèâàëè â
ñðåäå IMDM, ñîäåðæàùåé 7 % ñûâîðîòêè ýìáðèîíîâ êîðîâ HyClone. Êëåòêè ñ÷èòàëè ñ ïîìîùüþ àâòîìàòè÷åñêîãî ñ÷åò÷èêà ÷àñòèö (Beckman Coulter, ÑØÀ).
Ñîêóëüòèâèðîâàíèå ÌÑÊ è êëåòîê ëèíèé
N a m a l v a è U 2 6 6. ÌÑÊ ðàññåâàëè â ÿ÷åéêè 6-ëóíî÷íîãî ïëàíøåòà ïî 10—60 òûñ. êë./ñì2 â çàâèñèìîñòè îò òðåáóåìîé ïëîòíîñòè êóëüòóðû. ×åðåç 1 ñóò c ïîìîùüþ èíâåðòèðîâàííîãî ìèêðîñêîïà îöåíèâàëè ñòåïåíü êîíôëþýíòíîñòè ìîíîñëîÿ ÌÑÊ è íà îñíîâàíèè ýòîé îöåíêè
îïðåäåëÿëè ôàçó ðîñòà êóëüòóðû (ýêñïîíåíöèàëüíàÿ èëè
ñòàöèîíàðíàÿ). Ëèìôîèäíûå êëåòêè ëèíèè Namalva èëè
U266 âíîñèëè ïî 50 òûñ. â ÿ÷åéêè, ñîäåðæàùèå ÌÑÊ â
ýêñïîíåíöèàëüíîé ôàçå ðîñòà, è ïî 70 òûñ. â ÿ÷åéêè ñî ñòàöèîíàðíûìè êóëüòóðàìè ÌÑÊ. Ñîêóëüòèâèðîâàíèå ïðîâîäèëè â òå÷åíèå 3 ñóò â ñðåäå IMDM, ñîäåðæàùåé 7 % ñûâîðîòêè ýìáðèîíîâ êîðîâ. Êîíòðîëåì ñëóæèëè êëåòêè ëèíèé Namalva è U266, êóëüòèâèðóåìûå â îòñóòñòâèå
ÌÑÊ. Âñå ýêñïåðèìåíòû ïðîâåäåíû â 2—4 ïîâòîðíîñòÿõ.
Âíóòðèêëåòî÷íûå èììóíîãëîáóëèíû âûÿâëÿëè ñ ïîìîùüþ ïðîòî÷íîé öèòîôëóîðèìåòðèè ñ èñïîëüçîâàíèåì
ìå÷åííûõ ôëóîðåñöåèíîì ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë, ïîëó÷åííûõ â ëàáîðàòîðèè ãèáðèäîìíîé òåõíîëîãèè Ðîññèéñêîãî íàó÷íîãî öåíòðà ðàäèîëîãèè è õèðóðãè÷åñêèõ
òåõíîëîãèé. Äëÿ äåòåêöèè IgM â êëåòêàõ ëèíèè Namalva
èñïîëüçîâàëè àíòèòåëà Ì-2Â9, äëÿ âûÿâëåíèÿ IgE â ëèíèè U266 — àíòèòåëà êëîíà E-5D4. Èç ëóíîê îòáèðàëè
êëåòî÷íóþ ñóñïåíçèþ, çàòåì ëóíêè ïðîìûâàëè ðàñòâîðîì âåðñåíà è ñîáèðàëè ëèìôîèäíûå êëåòêè, ïðèêðåïèâøèåñÿ ê ìîíîñëîþ ÌÑÊ. Êëåòêè îòìûâàëè, ôèêñèðîâàëè ëåäÿíûì àöåòîíîì, ïåðìåàáèëèçîâûâàëè 0.1%-íûì
ðàñòâîðîì Òðèòîíà Õ-100 íà PBS â òå÷åíèå 15 ìèí è èíêóáèðîâàëè ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè ìå÷åíûìè àíòèòåëàìè â
òå÷åíèå 10 ìèí â òåìíîòå ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå.
Èçìåðåíèÿ ïðîâîäèëè ñ ïîìîùüþ ïðîòî÷íîãî öèòîôëóîðèìåòðà FC500. Ïîêàçàòåëåì ñîäåðæàíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ ñëóæèëà èíòåíñèâíîñòü ôëóîðåñöåíöèè îòäåëüíûõ
êëåòîê. Íà îñíîâå ïîëó÷åííûõ äàííûõ ñòðîèëè ãðàôèêè
ðàñïðåäåëåíèÿ êëåòîê ïî èíòåíñèâíîñòè ôëóîðåñöåíöèè
è âû÷èñëÿëè åå ñðåäíèå çíà÷åíèÿ â îòí. åä. (Xmean). Ïðè-
Âíóòðèêëåòî÷íûå èììóíîãëîáóëèíû â ëèíèÿõ Namalva è U266
ìåð àíàëèçà ïîëó÷åííûõ äàííûõ ïðèâåäåí íà ðèñ. 1. Êàæäûé âàðèàíò ñîêóëüòèâèðîâàíèÿ ïîâòîðÿëè 4 ðàçà. Ïîëó÷åííûå äàííûå îáðàáàòûâàëè ñòàòèñòè÷åñêè ñ ïîìîùüþ
ïðîãðàììû Microsoft Excel. Äëÿ êàæäîé âûáîðêè îïðåäåëÿëè îøèáêó ñðåäíåãî M ïî ôîðìóëå Ì = s/vn, ãäå s —
ñðåäíåêâàäðàòè÷åñêîå îòêëîíåíèå, n — ÷èñëî íàáëþäåíèé.
 ðàáîòå èñïîëüçîâàëè ñðåäó Advanced Stem (Gibco,
Âåëèêîáðèòàíèÿ), ñûâîðîòêó ýìáðèîíîâ êîðîâ HyClone
(Thermo Scientific, Íîâàÿ Çåëàíäèÿ), çàìåíèòåëü ñûâîðîòêè HyClone (Thermo Scientific, Âåëèêîáðèòàíèÿ), ìå÷åííûå ôëóîðîõðîìàìè ìîíîêëîíàëüíûå àíòèòåëà ïðîòèâ
CD34, CD45, CD90, CD105 è CD73 (Beckman Coulter,
ÑØÀ), ìîíîêëîíàëüíûå àíòèòåëà M-2B9 ïðîòèâ ìþ-öåïè è E-5D4 ïðîòèâ ýïñèëîí-öåïè èììóíîãëîáóëèíà ÷åëîâåêà, ïîëó÷åííûå â ëàáîðàòîðèè ãèáðèäîìíîé òåõíîëîãèè ÐÍÖÐÕÒ, ôèêîëë (ÁèîëîÒ, Ðîññèÿ) è êîëëàãåíàçó I è
IV òèïîâ (Sigma-Aldrich, ÑØÀ).
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Âñå ÌÑÊ â êóëüòóðå áûëè îõàðàêòåðèçîâàíû ïî ýêñïðåññèè ïîâåðõíîñòíûõ ìàðêåðîâ (ñì. òàáëèöó). Ïðèâåäåííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ÌÑÊ èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ îáëàäàþò ñõîäíûì ôåíîòèïîì.
Ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê ëèíèè Namalva ñ
ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà çäîðîâûõ äîíîðîâ ñîäåðæàíèå
âíóòðèêëåòî÷íîãî IgM â êëåòêàõ Namalva îñòàâàëîñü íà
óðîâíå êîíòðîëüíûõ çíà÷åíèé âíå çàâèñèìîñòè îò ñòåïåíè êîíôëþýíòíîñòè ìîíîñëîÿ ÌÑÊ (ðèñ. 2). Óâåëè÷åíèå
ñîäåðæàíèÿ IgM íàáëþäàëè ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê Namalva ñ ÌÑÊ èç æèðîâîé òêàíè. ÌÑÊ, íàõîäÿùèåñÿ â ëîãàðèôìè÷åñêîé èëè â ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà,
ñòèìóëèðîâàëè ñèíòåç IgM îäèíàêîâî ýôôåêòèâíî. ÌÑÊ
èç ïóïî÷íîãî êàíàòèêà òàêæå âûçûâàëè óâåëè÷åíèå óðîâ-
119
Ôåíîòèï ïîâåðõíîñòíûõ àíòèãåíîâ êóëüòèâèðóåìûõ ÌÑÊ,
ïîëó÷åííûõ èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ
Äîëÿ êëåòîê (%), íåñóùèõ àíòèãåíû,
â êóëüòóðå, ïîëó÷åííîé èç
Ìàðêåðíûé
àíòèãåí
CD105
CD90
CD73
CD13
CD44
CD34
CD45
CD117
êîñòíîãî ìîçãà
ïàöèåíòà
ïàöèåíòà æèðîâîé ïóïî÷íîãî
çäîðîâûõ ñ ðàññåÿíòêàíè
êàíàòèêà
ñ áîëåçíüþ
íûì
äîíîðîâ
Êðîíà
ñêëåðîçîì
98 ) 1
99 ) 1
97.5 ) 2
98 ) 1
97 ) 3
0
0.2
0.3
98
98
98
99
98.5
0.1
0
0.2
99
97
98
99.5
97.5
0
0.1
0.1
98 ) 1
97.5 ) 2
99 ) 1
97 ) 2
99 ) 1
0
0
0
97.5 ) 1
98 ) 2
96.5 ) 2
99 ) 1
98 ) 1
0.1
0
0
íÿ IgM. Óñèëåíèå ïðîäóêöèè IgM êëåòêàìè Namalva ïðîèñõîäèëî è ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè èõ ñ ÌÑÊ èç
êîñòíîãî ìîçãà ïàöèåíòîâ ñ áîëåçíüþ Êðîíà è ðàññåÿííûì ñêëåðîçîì. Ïðè ýòîì ðàçëè÷èé ìåæäó âëèÿíèåì
ÌÑÊ, íàõîäÿùèõñÿ â ëîãàðèôìè÷åñêîé è â ñòàöèîíàðíîé
ôàçàõ ðîñòà êóëüòóðû, íå áûëî. Òàêèì îáðàçîì, ïðè êîíòàêòíîì ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñ êëåòêàìè Namalva ÌÑÊ èç
ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ ëèáî íå âëèÿëè íà ñîäåðæàíèå öèòîïëàçìàòè÷åñêîãî IgM, ëèáî âûçûâàëè åãî óâåëè÷åíèå.
Äåéñòâèå ïðîëèôåðèðóþùèõ è ïîêîÿùèõñÿ ÌÑÊ áûëî
îäèíàêîâûì.
Òàê æå êàê â ýêñïåðèìåíòàõ ñ êëåòêàìè Namalva,
ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà çäîðîâûõ äîíîðîâ íå âëèÿëè íà
Ðèñ. 2. Óðîâåíü âíóòðèêëåòî÷íîãî IgM â êëåòêàõ ëèíèè Namalva, ïîëó÷åííûõ èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ, ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñ
ÌÑÊ â ýêñïîíåíöèàëüíîé èëè ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà.
Ãðóïïû ñòîëáèêîâ: 1 — ÌÑÊ, ïîëó÷åííûå èç êîñòíîãî ìîçãà çäîðîâûõ äîíîðîâ, 2 — ÌÑÊ èç æèðîâîé òêàíè, 3 — ÌÑÊ èç ïóïî÷íîãî êàíàòèêà, 4 —
ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà ïàöèåíòîâ ñ áîëåçíüþ Êðîíà, 5 — ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà ïàöèåíòîâ ñ ðàññåÿííûì ñêëåðîçîì; áåëûå ñòîëáèêè — êîíòðîëü
(êëåòêè â îòñóòñòâèå ÌÑÊ), çàøòðèõîâàííûå — ÌÑÊ â ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà (100 % êîíôëþýíòíîñòè), ÷åðíûå — ÌÑÊ â ëîãàðèôìè÷åñêîé ôàçå
ðîñòà (30—60 % êîíôëþýíòíîñòè). Âåðòèêàëüíûå îòðåçêè — îøèáêè ñðåäíåãî. Çâåçäî÷êîé ïîêàçàíà äîñòîâåðíîñòü îòëè÷èÿ îò êîíòðîëÿ (P < 0.05).
120
À. À. Àéçåíøòàäò è äð.
Ðèñ. 3. Óðîâåíü âíóòðèêëåòî÷íîãî IgE â êëåòêàõ ëèíèè U266, ïîëó÷åííûõ èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ, ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñ ÌÑÊ
â ýêñïîíåíöèàëüíîé èëè ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà.
Îáîçíà÷åíèÿ òå æå, ÷òî è íà ðèñ. 2.
óðîâåíü ïðîäóêöèè IgE êëåòêàìè ëèíèè U266 (ðèñ. 3).
ÌÑÊ èç æèðîâîé òêàíè è ïóïî÷íîãî êàíàòèêà óñèëèâàëè
ïðîäóêöèþ IgE, åñëè íàõîäèëèñü â ôàçå ëîãàðèôìè÷åñêîãî ðîñòà. ÌÑÊ, ïðåêðàòèâøèå ïðîëèôåðàöèþ âñëåäñòâèå
äîñòèæåíèÿ êîíôëþýíòíîãî ìîíîñëîÿ, îêàçûâàëè ñëàáîå
òîðìîçÿùåå âëèÿíèå íà íàêîïëåíèå IgE. Íàèáîëüøåå
âëèÿíèå íà ïðîäóêöèþ IgE êëåòêàìè U266 íàáëþäàëè
ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñ ïðîëèôåðèðóþùèìè ÌÑÊ ïàöèåíòîâ, ñòðàäàþùèõ àóòîèììóííûìè çàáîëåâàíèÿìè.
Ïðèñóòñòâèå ïîêîÿùèõñÿ ÌÑÊ îêàçûâàëî íà ñèíòåç IgE
ñëàáûé òîðìîçÿùèé ýôôåêò. Òàêèì îáðàçîì, ïðè ñîêóëüòèâèðîâàíèè ñ ìèåëîìíûìè êëåòêàìè U266 ïðîëèôåðèðóþùèå ÌÑÊ îêàçûâàëè ñòèìóëèðóþùåå âëèÿíèå íà íàêîïëåíèå IgE, òîãäà êàê ÌÑÊ â ñòàöèîíàðíîé ôàçå ïðîÿâëÿëè èíãèáèðóþùèé ýôôåêò.
Ðåçóëüòàòû ðàáîòû ïîçâîëÿþò çàêëþ÷èòü, ÷òî ÌÑÊ,
âûäåëåííûå èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ, ðàçëè÷àþòñÿ ïî ñïîñîáíîñòè ìîäóëèðîâàòü ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ â
êëåòêàõ Â-ëèìôîèäíîãî ðÿäà. ÌÑÊ èç êîñòíîãî ìîçãà
çäîðîâûõ äîíîðîâ âíå çàâèñèìîñòè îò ôàçû ðîñòà êëåòîê
íå âëèÿëè íà ñèíòåç IgM è IgE. Ïðîëèôåðèðóþùèå ÌÑÊ
êîñòíîãî ìîçãà ïàöèåíòîâ ñ àóòîèììóííûìè çàáîëåâàíèÿìè â ñòàäèè îáîñòðåíèÿ îêàçûâàëè ñòèìóëèðóþùåå âëèÿíèå íà ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ â îáåèõ êëåòî÷íûõ ëèíèÿõ. ÌÑÊ æèðîâîé òêàíè è ïóïî÷íîãî êàíàòèêà
çäîðîâûõ äîíîðîâ ïðèíöèïèàëüíî íå ðàçëè÷àëèñü ìåæäó
ñîáîé ïî âëèÿíèþ íà ñèíòåç èììóíîãëîáóëèíîâ ëèìôîèäíûìè êëåòêàìè. Òàêèì îáðàçîì, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ÌÑÊ, âûäåëåííûå èç ðàçíûõ èñòî÷íèêîâ è èìåþùèå ñõîäíûé ôåíîòèï ïîâåðõíîñòíûõ àíòèãåíîâ, îáëàäàþò ðàçíûìè ôóíêöèîíàëüíûìè
ñâîéñòâàìè. Ýòî ñîãëàñóåòñÿ ñ ïðåäñòàâëåíèÿìè î íåðàâíîçíà÷íîñòè ÌÑÊ ðàçíûõ òêàíåé è íåîáõîäèìîñòè âûðàáîòàòü áîëåå øèðîêèé íàáîð áàçîâûõ êðèòåðèåâ äëÿ õàðàêòåðèñòèêè ýòèõ êëåòîê (Wagnera et al., 2005; Li et al.,
2009; Strioga et al., 2012).
Èñïîëüçîâàííûå â íàñòîÿùåé ðàáîòå â êà÷åñòâå
òåñò-îáúåêòîâ êëåòî÷íûå ëèíèè ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ïðîèçâîäíûå Â-ëèìôîöèòîâ, èììîðòàëèçîâàííûå íà ðàçíûõ
ñòàäèÿõ äèôôåðåíöèðîâêè. Ëèìôîáëàñòîèäíàÿ ëèíèÿ Namalva ïðîäóöèðóåò IgM, ÷òî óêàçûâàåò íà åå ïðîèñõîæäåíèå èç Â-êëåòîê ðàííèõ ñòàäèé ñîçðåâàíèÿ (Guy et al.,
1987). Ìèåëîìíàÿ ëèíèÿ U266 ÿâëÿåòñÿ ïîòîìêîì êëîíà
çðåëûõ ïëàçìàòè÷åñêèõ êëåòîê, òðàíñôîðìèðîâàííûõ íà
îäíîé èç ïîçäíèõ ôàç ðàçâèòèÿ, ïîñëå àêòèâàöèè ãåíà, êîäèðóþùåãî ñèíòåç ýïñèëîí-öåïè IgE (Nilsson, 1971; Hardy, Hayakawa, 2001). Èç ïðèâåäåííûõ äàííûõ ñëåäóåò,
÷òî ÌÑÊ ìîãóò ïî-ðàçíîìó âëèÿòü íà ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ â ëèìôîáëàñòîèäíûõ è ìèåëîìíûõ êëåòêàõ. Íà ëèìôîáëàñòîèäíûå êëåòêè ÌÑÊ îêàçûâàëè ëèáî
ñòèìóëèðóþùåå äåéñòâèå, ëèáî íå îêàçûâàëè ýôôåêòà.
Äåéñòâèå ÌÑÊ íà ìèåëîìíûå êëåòêè ìîãëî ïðîÿâëÿòüñÿ
êàê â óñèëåíèè, òàê è â ïîäàâëåíèè ïðîäóêöèè IgE. Ôàêòîðû, ñòèìóëèðóþùèå íàêîïëåíèå IgE ìèåëîìíûìè êëåòêàìè, ïðîäóöèðîâàëè òîëüêî ïðîëèôåðèðóþùèå ÌÑÊ.
Ïðåäñòàâëåííûå â ðàáîòå ðåçóëüòàòû ìîãóò îáúÿñíÿòü ðÿä
èìåþùèõñÿ â ëèòåðàòóðå ïðîòèâîðå÷èé, êàñàþùèõñÿ ñïîñîáíîñòè ÌÑÊ âëèÿòü íà ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ
êëåòêàìè B-ëèìôîèäíîãî ðÿäà.  ÷àñòíîñòè, ðàñõîæäåíèÿ
â îöåíêå âëèÿíèÿ ÌÑÊ æèðîâîé òêàíè íà ñîäåðæàíèå èììóíîãëîáóëèíîâ â êëåòêàõ Namalva è U266 ñ äàííûìè,
îïèñàííûìè ðàíåå (Ñàìîéëîâè÷ è äð., 2013), ìîãóò áûòü
ñâÿçàíû ñ ðàçíûìè ôàçàìè ðîñòà ÌÑÊ â êóëüòóðå, ñ ðàçíûì ÷èñëåííûì ñîîòíîøåíèåì ÌÑÊ è ëèìôîèäíûõ êëåòîê, à òàêæå ñ ðàçíûìè ñðîêàìè ñîêóëüòèâèðîâàíèÿ. Ïðè
îöåíêå âëèÿíèÿ ÌÑÊ íà ïðîäóêöèþ èììóíîãëîáóëèíîâ
íàäî òàêæå ïðèíèìàòü âî âíèìàíèå, ÷òî ëèìôîèäíûå
êëåòêè, ïðåäñòàâëÿþùèå ðàçíûå ñòàäèè äèôôåðåíöèðîâêè, ìîãóò ñòèìóëèðîâàòü ÌÑÊ ê âûðàáîòêå ðàçíûõ öèòîêèíîâ è ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ. Îäíàêî ýòà ñòîðîíà âçàèìîäåéñòâèÿ ÌÑÊ è B-ëèìôîèäíûõ êëåòîê îñòàåòñÿ íàèìåíåå èçó÷åííîé è òðåáóåò äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèé.
Âíóòðèêëåòî÷íûå èììóíîãëîáóëèíû â ëèíèÿõ Namalva è U266
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû
Êðóãëÿêîâ Ï. Â., Ëîõìàòîâà Å. Ë., Êëèìîâè÷ Â. Á., Çàðèöêèé À. Þ. 2006. Ìåçåíõèìíûå ñòâîëîâûå êëåòêè è èììóíîïàòîëîãè÷åñêèå ñîñòîÿíèÿ îðãàíèçìà. Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ. 3(5) : 36—41. (Kruglyakov P. V.,
Lokhmatova E. A., Klimovich V. B., Zaritsky A. Yu. 2006. Mesenchymal stem cells and immunopathologic conditions of a human
bodó. CTTE. 3(5) : 36—41.)
Ñàìîéëîâè÷ Ì. Ï., Ïèíåâè÷ À. À., Øàøêîâà Î. À., Âàðòàíÿí Í. Ë., Êèñåëåâà Ë. Í., Êëèìîâè÷ Â. Á. 2013. Âëèÿíèå ìåçåíõèìíûõ ñòðîìàëüíûõ êëåòîê íà ðîñò B-êëåòî÷íûõ ëèíèé è
ñèíòåç èìè èììóíîãëîáóëèíîâ. Öèòîëîãèÿ. 55(1) : 45—51. (Samoylovich M. P., Pinevich A. A., Shashkova O. A., Vartanian N. L.,
Kiseleva L. N., Klimovich V. B. 2013. The influence of mesenchymal stromal cells on B-cell line growth and immunoglobulin synthesis. Cell Tissue Biol. 7(3) : 227—234.)
Ame-Thomas P., Hajjami H. M.-E., Monvoisin C., Jean R.,
Monnier D., Caulet-Maugendre S., Guillaudeux T., Lamy T.,
Fest T., Tarte K. 2007. Human mesenchymal stem cells isolated
from bone marrow and lymphoid organs support tumor B-cell
growth: role of stromal cells in follicular lymphoma pathogenesis.
Blood. 109(2) : 693—702.
Bartholomew A., Sturgeon C., Siatskas M., Ferrer K., McIntosh K., Patil S., Hardy W., Devine S., Ucker D., Deans R., Moseley A., Hoffman R. 2002. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in
vivo. Exp. Hematol. 30 : 42—48.
Bianco P., Gehron R. P. 2000. Marrow stromal stem cells. J.
Clin. Invest. 105 : 1663—1668.
Bocelli-Tyndall C., Bracci L., Spagnoli G., Braccini A., Bouchenaki M., Ceredig R., Pistoia V., Martin I., Tyndall A. 2007.
Bone marrow mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) from healthy donors and auto-immune disease patients reduce the proliferation of autologous- and allogeneic-stimulated lymphocytes in vitro.
Rheumatology (Oxford). 46 : 403—408.
Che N., Li X., Zhou Z., Liu R., Shi D., Lu L., Sun L. 2012. Umbilical cord mesenchymal stem cells suppress B-cell proliferation
and differentiation. Cell. Immunol. 274 : 46—53.
Corcione A., Benvenuto F., Ferretti E., Giunti D., Cappiello V., Cazzanti F., Risso M., Gualandi F., Mancardi G. L., Pistoia V., Uccelli A. 2006. Human mesenchymal stem cells modulate
B-cell functions. Blood. 107 : 367—372.
Di Nicola M., Carlo-Stella C., Magni M., Milanesi M., Longoni P. D., Matteucci P., Grisanti S., Gianni A. M. 2002. Human bone
marrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced
by cellular or nonspecific mitogenic stimuli. Blood. 99(10) :
3838—3843.
Franquesa M., Hoogduijn M. J., Bestard O., Grinyó J. M.
2012. Immunomodulatory effects of mesenchymal stem cells on B
cells. Front. Immunol. 3 : 212.
Friedenstein A. J., Petrakova K. V., Kurolesova A. I., Frolova G. P. 1968. Heterotopic of bone marrow. Analysis of precursor
cells for osteogenic and hematopoietic tissues. Transplantation. 6 :
230—247.
Guy K., Middleton P. G., Steel C. M. 1987. Variant sublines of
the human B-lymphoma cells Namalwa are at different stages of
differentiation. Immunology. 61 : 383—386.
Hardy R. R., Hayakawa K. 2001. B cell development pathways.
Ann. Rev. Immunol. 19 : 595—621.
Jori F. P., Napolitano M. A., Melone M. A., Jori F. P., Napolitano M. A., Melone M. A., Cipollaro M., Cascino A., Altucci L., Peluso G., Giordano A., Galderisi U. 2005. Molecular pathways involved in neural in vitro differentiation of marrow stromal stem
cells. J. Cell. Biochem. 94 : 645—655.
Kern S., Eichler H., Stoeve J., Kluter H., Bieback K. 2006.
Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells. 24 :
1294—1301.
121
Le Blanc K., Tammik L., Sundberg B., Haynesworth S. E., Ringden O. 2003. Mesenchymal stem cells inhibit and stimulate mixed lymphocyte cultures and mitogenic responses independently
of the major histocompatibility complex. Scand J. Immunol. 57 :
11—20.
Li G., Zhang X. A., Wang H., Wang X., Meng C. L., Chan C. Y.,
Yew D. T. W., Tsang K. S., Li K., Tsai S. N., Ngai S. M., Han Z. C.,
Lin M. C. M., He M. L., Kung H. F. 2009. Comparative proteomic
analysis of mesenchymal stem cells derived from human bone marrow, umbilical cord, and placenta: implication in the migration.
Proteomics. 9 : 20—30.
Nilsson K. 1971. Synthesis and secretion of IgE by an established human myeloma cell line. Clin. Exp. Immunol. 9 : 785—
793.
Oswald J., Boxberger S., Jorgensen B., Feldmann S., Ehninger G., Bornhauser M., Werner C. 2004. Mesenchymal stem cells
can be differentiated into endothelial cells in vitro. Stem Cells. 22 :
377—384.
Pittenger M. F., Mackay A. M., Beck S. C., Jaiswal R. K., Douglas R., Mosca J. D., Moorman M. A., Simoneti D. W., Craig S.,
Marshak D. R. 1999. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 284 : 143—147.
Rasmusson I. 2006. Immune modulation by mesenchymal
stem cells. Exp. Cell Res. 312 : 2169—2179.
Rasmusson I., Le Blanc K., Sundberg B., Ringden O. 2007.
Mesenchymal stem cells stimulate antibody secretion in human B
cells. Scand. J. Immunol. 65 : 336—343.
Romanov Y. A., Svintsitskaya V. A., Smirnov V. N. 2003. Searching for alternative sources of postnatal human mesenchymal
stem cells: candidate MSC-like cells from umbilical cord. Stem
Cells. 21 : 105—110.
Sarugaser R., Lickorish D., Baksh D., Hosseini M. M., Davies J. E. 2005. Human umbilical cord perivascular (HUCPV) cells: a
source of mesenchymal progenitors. Stem Cells. 23 : 220—229.
Strioga M., Viswa N., Darinskas A., Slaby O., Michalek J.
2012. Same or not same? Comparison of adipose tissue-derived
versus bone-marrow-derived mesenchymal stem and stromal cells.
Stem Cells Develop. 21 : 2724—2752.
Tomchuck S. V. L., Zwezdaryk K. J., Coffelt S. B., Waterman R. S., Danka E. S., Scandurro A. B. 2008. Toll-like receptors
on human mesenchymal stem cells drive their migration and immunomodulating responses. Stem Cells. 26 : 99—107.
Traggiai E., Volpi S., Schena F., Gattorno M., Ferlito F., Moretta L., Martini A. 2008. Bone marrow-derived mesenchymal stem
cells induce both polyclonal expansion and differentiation of B
cells isolated from healthy donors and systemic lupus erythematosus patients. Stem Cells. 26 : 562—569.
Tyndall A., Walker U. A., Cope A., Dazzi F., De Bari C., Fibbe W., Guiducci S., Jones S., Jorgensen C., Le Blanc K., Luyten F.,
McGonagle D., Martin I., Bocelli-Tyndall C., Pennesi G., Pistoia V., Pitzalis C., Uccelli A., Wulffraat N., Feldmann M. 2007.
Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells: a review based on an interdisciplinary meeting held at the Kennedy Institute of Rheumatology Division, London, UK, 31 October 2005. Arthritis Res. Ther. 9 : 301—311.
Uccelli A., Moretta L., Pistoia V. 2006. Immunoregulatory
function of mesenchymal stem cells. Eur. J. Immunol. 36 : 2566—
2573.
Wagnera W., Weina F., Seckingera A., Frankhauserb M., Wirknerc U., Krausea U., Blakec J., Schwagerc C., Ecksteina V., Ansorgec W., Hoa A. D. 2005. Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow, adipose tissue, and
umbilical cord blood. Exp. Hematol. 33 : 1402—1416.
Zimmerlin L., Donnenberg S., Pfeifer M. E., Meyer E. M.,
Peault B., Rubin J. P., Donnenberg A. D. 2010. Stromal vascular
progenitors in adult human adipose tissue. Cytometry Part A. 77 :
22—30.
Ïîñòóïèëà 14 II 2013
À. À. Àéçåíøòàäò è äð.
122
INTRACELLULAR IMMUNOGLOBULINS IN NAMALVA AND U266 CELLS CO-CULTIVATED
WITH MESENCHYMAL STROMAL CELLS
A. A. Ayzenshtadt,1, 2 N. A. Ivanova,2 V. V. Bagaeva,2 A. B. Smolyaninov,1, 2 A. A. Pinevich,3
M. P. Samoylovich,3 V. B. Klimovich3
1 North-Western
State Medical University named after I. I. Mechnikov, 2 Stem Cell Bank Pokrovsky, Ltd., and
Research Center for Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg;
1e-mail: [email protected]
3 Russian
There are contradictory data concerning the influence of mesenchymal stromal cells (MSC) on immunoglobulin (Ig) production. Most of them were obtained using MSC from bone marrow. Properties of MSC from
other tissues are elusive. In the present work MSC cultures were derived from umbilical cord, adipose tissue,
and bone marrow of healthy donors, as well as from bone marrow of patients with autoimmune diseases. MSC
from all these sources had similar surface markers phenotype. The influence of co-cultivation with MSC at exponential or stationary phase on IgM and IgE content in Namalva and U266 cells was evaluated. MSC from bone marrow of healthy donors had no effect on IgM and IgE production. Proliferating MSC obtained from patients with Crohn’s disease and multiple sclerosis stimulated Ig production. Exponentially growing MSC derived
from umbilical cord and adipose tissue also stimulated Ig synthesis. MSC at stationary cultures amplified IgM
production in Namalva cells and suppressed IgE synthesis in U266. Thus, MSC with similar phenotype but derived from different sources differ in their capacity to modulate Ig production in B-lymphoid cells. The effect of
MSC depends on their growth stage and may differ for lymphoblastoid and myeloma cells.
K e y w o r d s: mesenchymal stromal cells, immunomodulation, Namalva, U266, immunoglobulins.