ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ» для выявления антигенов Listeria

28 Pierre Köenig St., Talpiot Industrial Area
P.O.B 53231 Jerusalem 91531 ISRAEL
Phone: 972-2-6781861; Fax : 972-2-6781852
e-mail: info@novamed.co.il
ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ
ЭКСПРЕСС-ТЕСТ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ОДНОЭТАПНОГО ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНA
Listeria monocytogenes В ФЕКАЛИЯХ ЧЕЛОВЕКА.
Кат. № R-6044 (20 oпределений)
Инструкция по применению
НАЗНАЧЕНИЕ
ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ производства компании Novamed Ltd., Израиль иммунохроматографическая тест-система для качественного выявления
антигена Listeria monocytogenes в фекалиях человека с целью ранней
диагностики листериозa.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
Листериоз - инфекционная болезнь из группы зоонозов. У человека
заболевание протекает либо в виде острого сепсиса (с поражением
центральной нервной системы, миндалин, лимфатических узлов, печени,
селезенки), либо в хронической форме (стертая). Возбудитель - подвижная
неспорообразующая грамположительная палочка Listeria monocytogenes типовой
вид
рода
Listeria.
Может
образовывать
капсулу,
трансформироваться в L-формы и паразитировать внутри клеток,
обусловливая медленное латентное развитие инфекции. Листерии имеют
набор соматических и жгутиковых антигенов, позволяющий выделить
среди них 7 основных сероваров, многие из которых подразделяются на
подтипы. Наиболее распространены листерии 1-4-го сероваров. Листерии
являются выраженными сапрофитами и высокоустойчивы во внешней
среде. Резервуар и источники инфекции - многие виды диких и
синантропных грызунов, а также различные объекты внешней среды.
Болезнь поражает домашних и сельскохозяйственных животных, а также
домашнюю и декоративную птицу. Механизм передачи разнообразный
(фекально-оральный,
контактный,
воздушно-капельный,
трансплацентарный), основной - фекально-оральный. Животные
заражаются через воду и корма, инфицированные листериями, от грызунов
или их трупов.Болезнь имеет все черты сапрозоонозной инфекции,
распространена повсеместно. Профессиональный характер заболеваемость
носит среди работников животноводческих и птицеводческих хозяйств, а
также цехов первичной переработки на мясо- и птицекомбинатах.
Заболеваемость чаще регистрируют в весенне-летний период. Заболевание
может приобретать острое, подострое, хроническое и абортивное течение,
обычно склонно к рецидивированию. Диагностика листериоза осложнена в
связи с клиническим полиморфизмом листериоза и отсутствием
патогномоничных клинических признаков.
ПРИНЦИП
ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ производства компании Novamed Ltd., Израиль
представляет собой помещенную в пластиковый футляр (кассету) полоску
нитроцеллюлозной мембраны с фиксированными на ней в области
добавления пробы моноклональными мышинными антителами к антигену
конъюгированными с окрашенными частичками латекса. В области
тестового окошка также зафиксированы моноклональные антитела к
антигену Listeria monocytogenes. Поликлональные антимышинные
антитела зафиксированы в контрольной зоне полоски. Aнтиген Listeria
monocytogenes, содержащийся в пробе, реагирует со специфическими
меченными моноклональными антителами, формируя комплекс антигенантитело, который мигрирует по мембране, образуя красную цветную
линию в тестовом окошке, что оценивается как положительный результат.
Непрореагировавший конъюгат мигрирует далее к контрольной зоне, где
захватывается поликлональными антимышинными антителами, формируя
зеленую линию в контрольной зоне тестового окошка. Kонтрольная
линия появляется всегда. Наличие контрольной линии подтверждает
корректность
результатов теста (правильный объем пробы, необходимый темп миграции,
требуемое качество реагентов).
КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА
В состав набора входит:
20 тестовых устройств (кассет) ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ упакованных в
индивидуальные алюминиевые пакетики;
20 одноразовых пластиковых пробирок-капельниц содержащих 1 мл
буферa для разведения пробы;
1 инструкция к применению.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Набор ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ предназначен только для использования in
vitro в целях лабораторной диагностики.
2. Не допускается использование набора и его компонентов после
истечения срока годности.
3. Не использовать тест из поврежденной упаковки.
4. При проведении исследования необходимо следовать правилам работы в
лаборатории, в частности, использовать специализированную одежду,
одноразовые перчатки, не принимать пищу и не курить на рабочем
месте.
5. Исследование проб фекалий регламентируется правилами работы с
инфекционными агентами.
6. После проведения исследования устройство должно быть утилизировано
в соответствующий контейнер для отходов.
7. Необходимо провести тест не позднее 2 ч после вскрытия упаковки.
ХРАНЕНИЕ
ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ необходимо хранить при температуре 2-30оС. Не
замораживать! Не допускается использование набора и его компонентов
после истечения срока годности. Срок годности набора указан на упаковке.
До использования тестовое устройство должно находиться в
неповрежденной индивидуальной упаковке.
ОТБОР, ХРАНЕНИЕ И ПОДГОТОВКА ПРОБ.
Фекалии собирают в чистый сухой контейнер без следов консервантов или
транспортных сред. Не рекомендуется обрабатывать пробу растворами,
содержащими формальдегид или его производные. Для проведения теста
необходима проба в количестве 1-2 г или 1-2 мл, в случае жидкого образца.
До исследования пробу хранят в холодильнике при температуре +2+4 °С в
течение 1-2 дней, если исследование в течение этого периода невозможно,
пробу необходимо поместить в морозильную камеру при температуре -20
о
С. Перед исследованием пробу размораживают и доводят до комнатной
температуры. Остатки проб утилизируют в соответствии с правилами,
принятыми в данном учреждении.
ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА
Подготовка образца к тестированию (см. Рис.1):
Для каждого образца фекалий следует использовать отдельную пробиркукапельницу с буфером для разведения. Открутить крышку емкости
пробоотборника с вмонтированным в нее аппликатором. Аппликатор
дважды погружают в фекальную массу, при этом на кончике аппликатора
должно остаться приблизительно 150 мг образца. В случае жидкого стула,
забрать в качестве образца 150 мкл испражнений пипеткой и перенести в
пробирку-капельницу с буфером.
Рисунок 1
Забрать образец
Развести образец
в буфере
Отломить кончик
Образец фекалий
Процедура выполнения теста (см. Рис.2):
Перед началом тестирования следует довести тестовую кассету и образец
до комнатной температуры (15-30ºC). Не вскрывать индивидуальную
упаковку теста до начала исследования.
1. Непосредственно перед проведением исследования вскрыть
индивидуальную упаковку теста.
2. Маркировать тестовую кассету инициалами или идентификационным
номером пациента.
3. Суспендировать пробу энергичным встряхиванием пробиркикапельницы.
4. Отломить кончик крышки-капельницы и через открывшееся отверстие
внести 4 капли (100 мкл) тестируемой суспензии в окошко для
внесения пробы (S).
5. Результат анализа учитывают через 10 мин после загрузки тестовой
кассеты пробой.
Рисунок 2
4 капли суспензии образца в буфере
S
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рисунок 3
NEGATIVE
C
T
C
T
C
T
POSITIVE
INVALID
Отрицательный результат: одна зеленая линия появляется в контрольной
зоне (С) тестового окошка кассеты;
Положительный результат: в дополнение к зеленой контрольной линии
появляется красная линия в тестовой зоне (Т) тестового окошка кассеты;
Недействительный результат: отсутствие зеленой контрольной линии (С)
вне зависимости от наличия или отсутствия красной линии в тестовой зоне
(Т). Неправильный объем пробы, несоблюдение процедуры тестирования или
качество реагентов – наиболее частые причины отсутствия контрольной
линии. Проанализируйте процедуру тестирования и повторите ее с
использованием новой тест-кассеты. Если проблема остается, следует
прекратить тестирование и связаться с местным дистрибьютором.
Замечания по интерпретации результатов
Интенсивность окраски красной линии в тестовой зоне кассеты
меняется в зависимости от концентрации антигенов в образце.
Однако ни количественное содержание антигенов, ни степень
их
возрастания не могут быть установлены с помощью данного качественного
теста.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
1. ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ предусматривает
внутренний контроль за
правильностью проведения процедуры. Зеленая линия появляющаяся в
контрольной зоне (C) тестового окошка кассеты, указывает на правильность
проведения процедуры теста.
2. Результаты теста не учитывают в случае если неясный фон мешает
интерпретировать результаты.
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ предназначен только для профессионального
использования в диагностике "in vitro".
2. ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ следует проводить в течение 2 часов после
извлечения кассеты из индивидуальной упаковки.
3. Избыточное количество образца может обусловить неправильный
результат ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ в виде коричневой линии в тестовом
окошке (Т). В подобном случае следует развести образец в буфере и
повторить процедуру тестирования.
4. Некоторые образцы фекалий могут уменьшать интенсивность окраски
контрольной линии.
5. Повторное замораживание и размораживание образца не
рекомендуется т.к. приводит к неправильным результатам.
6. Отрицательный результат ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ не исключает
возможность наличия инфекции в отдельных случаях по причине
низкой концентрации бактериальных антигенов. В таком случае
следует повторить тест используя пробу образца взятой из
обогатительной среды.
7. ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ является скрининговым тестом для качественного
определения присутствия антигенов Listeria monocytogenes в
исследуемом материале и применяется только для определения
антигенов Listeria monocytogenes в образцах фекалий человека. Ни
количественное содержание антигенов, ни степень
их
возрастания не могут быть установлены с помощью данного
качественного теста.
8. Для постановки корректного диагноза необходимо сопоставление
результатов ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ с прочей клинической информацией.
ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ дает лишь предполагаемый диагноз инфекции
обусловленной сальмонеллами. Только лечащий врач может оценивать
полученные результаты в свете других клинических данных, включая
результаты других лабораторных исследований.
9. Для проведения исследования необходимо использовать только
материалы, поставляемые в наборе ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ Использование
материалов, не поставляемых в наборе, может повлиять на качество
отбора пробы.
ХАРАКТЕРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕСТА
Порог чувствительности (Detection limit)
Уровень порога чувствительности ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ для Listeria
monocytogenes составляет 6.25x104 КОЕ/мл.
Чувствительность и специфичность.
В результате сравнительного исследования 32 клинических образцов
фекалий
человека
ЛИСТЕРИЯ
ТЕСТ
обнаружил
показатель
чувствительности >99% и показатель специфичности >96% по сравнению с
аналогичным коммерческим иммунохроматографическим экспресс-тестом
Singlepath® L’mono, производства фирмы Merck (Германия). Антитела
используемые в ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ с одинаковой точностью распознавали
эпитопы Listeria monocytogenes как в клинических образцах, так и в
разведениях культуры Listeria monocytogenes in vitro. Указанные показатели
прилагаются в качестве предварительных результатов до окончания более
основательного сравнительного исследования.
Перекрестное реагирование
ЛИСТЕРИЯ ТЕСТ не обнаружил неспецифических перекрестных реакций
с такими основными патогенами желудочно-кишечного тракта как H.
pylori, Escherichia coli O157:H7, Astrovirus, Rotavirus, Adenovirus,
Campylobacter и Salmonella spp.
ЛИТЕРАТУРА:
1.
2.
BOTTELDOORN N, et al. “Microbiological and molecular investigation of an increase
of human listeriosis in Belgium, 2006-2007”. Euro Surveill. 2010;15(6):pii=19482.
BORTOLUSSI, R. “Listeriosis: a primer”. CMAJ, October , 2008 Vol 179(8), pp 795797.
УТВЕРЖДАЮ
Генеральный директор ООО «ГЕМ»
________________С.А. Гольдберг
«23» июня 2010 г.
Представительство в РФ:
ООО «ГЕМ» 127083, г. Москва, ул. 8
Марта, д.1, стр.12, этаж 3, пом. XXV,
ком.11. Tел/факс: +7 (495) 612-43-12
www.hemltd.ru
IFU-Listeria-R-6044-HEM-russ- v.01-09.04.13