- Бурятская государственная сельскохозяйственная

На правах рукописи
ТОМИТОВА
ЕЛИЗАВЕТА АЛЕКСЕЕВНА
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ПОЛОВОЙ СИСТЕМЫ ПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ
ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ,
ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЭКЗОГЕННЫХ ПОЛОВЫХ
ГОРМОНОВ И ИХ ВЛИЯНИЕ
НА ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТЬ КОРОВ
06.02.01 – Диагностика болезней и терапия животных,
патология, онкология и морфология животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора ветеринарных наук
Улан-Удэ – 2012
1
Работа выполнена на кафедре «Анатомия, гистология и патоморфология» в ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова»
Научный консультант:
доктор ветеринарных наук, профессор
Попов Александр Петрович
Официальные оппоненты:доктор ветеринарных наук, профессор
Кухаренко Наталья Степановна
доктор биологических наук, профессор
Овчаренко Нина Дмитриевна
доктор ветеринарных наук, профессор
Донкова Наталья Владимировна
Ведущая организация:
ГНУ НИИВ Восточной Сибири СО
Россельхозакадемии 672010,
г. Чита, ул. Кирова, 49
Защита диссертации состоится «17» февраля 2012 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д.220.006.01 при ФГБОУ
ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия
имени В. Р. Филиппова» по адресу: 670034, Республика Бурятия, г.
Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8, тел./факс (3012) 442611, е-mail
[email protected]
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО
«Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р.
Филиппова», с авторефератом в сети Интернет на сайте vak.ed.gov.ru
Автореферат разослан « »
___________ 2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
Д220.006.01
Хибхенов Л.В.
2
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Воспроизводство – один из наиболее сложных и актуальных вопросов животноводства. Эта отрасль сельского
хозяйства стала предъявлять свои требования перед биологической
наукой – решение различных проблем воспроизводства и повышение
продуктивности стада животных. В этом аспекте изучение морфофункционального состояния органов размножения самок и самцов
сельскохозяйственных животных позволит использовать полученные
данные при решении вопросов коррекции и управления процессами
воспроизводительной функции (Завадовский М.М., 1939, 1963; Сысоев А.А., 1978; Левин К.Л., 1990; Шипилов В.С., 1994; Валюшкин К.Д.
и др., 1998; Попов А.П., 2004; Нежданов А.Г., 2007).
Бесплодие и яловость сельскохозяйственных животных является
одной из важнейших и основных проблем ветеринарии, поэтому всестороннее и глубокое изучение половых органов и биохимических
процессов, протекающих в них при различных физиологических состояниях и при патологии являются одним из важнейших моментов в
ускорении воспроизводства. Всякое новое исследование гистологов в
этой области должно облегчить изучение данной проблемы, дать новые материалы, достойные внимания клиницистов и практиков искусственного осеменения.
В литературе достаточно полно освещена анатомо-морфологическая характеристика половых органов самок жвачных животных
(Кононов Г.А.,1977; Студенцов А. П. и др., 1980; Васильев К. А.,1991;
Хибхенов Л.В., 2000). Гистологическая и гистохимическая структура
половой системы жвачных в онтогенезе, в динамике половой цикличности и при беременности хорошо освещена в работах В. Я. Суетина
(1971), Г. А. Игумнова (1969), Б. П. Савельева (1969), Н.А. Дериглазовой (1971), А. А. Збрицкого (1969) и др.
Некоторые участки половой трубки коров и особенно таких высокогорных животных, как ячихи (яйцеводы, яичники), при различных физиологических состояниях и под влиянием половых гормонов с гистологической и гистохимической точек зрения изучены недостаточно.
В скотоводстве используют ряд биотехнологических приемов,
направленных на повышение плодовитости. Среди этих приемов занимает место и использование биологических препаратов для регуляции и стимуляции репродуктивной функции жвачных животных.
Работы многих исследователей (Суетин В.Я., 1947; Буянов А.А.,
Агранов А.Е., 1969; Дегай В.Ф., 1973; Яновский И.И., 1975; Клинский
3
Ю.Д., 1981; Черемисинов Г.А., Карымов В.Н., 1983; Гордон А., 1988;
Мисайлов В.Д., 1994; Сиразиев Р.З., 1999; Никулин А.В., 2005; Дюльгер
Г.П., Нежданов А.Г. 2006; Чомаев А.М. и др., 2007; Лободин К.А., 2010)
посвящены изучению и применению гормонов в животноводстве.
Нормальное течение половых циклов и беременности в значительной мере зависит от содержания и взаимоотношения в организме животных гормонов гипофиза, половых желез и др. Нарушение динамического равновесия этих гормонов часто приводит к функциональным
расстройствам, вызывающим нарушение оплодотворяемости, эмбриональную смертность, аборты, кисты яичников и другие формы гинекологической патологии.
В настоящее время, благодаря разработке методов определения
гормонов в крови иммуноферментным способом существенно изменились взгляды на развитие органов размножения у самок, о гормональном контроле проявления эстрогенной и прогестероновой фаз полового цикла.
Несмотря на большие достижения в развитии ветеринарной медицины, в животноводческой практике наблюдаются нарушения воспроизводительной функции самок, обусловленные как внутренними, так и
внешними этиофакторами, связанными с расстройством нейрогуморальной регуляции, дисфункцией и заболеваниями яичников и других отделов половой трубки, условиями содержания, кормления и эксплуатации.
В этой связи, выявление морфофункциональных изменений в половых
органах в норме и индуцируемых экзогенным путем дает ценный материал для глубокого познания механизма регуляции репродуктивной функции, управления структурно-функциональными преобразованиями в
гениталиях, необходимых как для теории, так и для решения практических вопросов в области гистологии и акушерства.
Цель и задачи исследований. Работа является самостоятельным разделом комплексной научно-исследовательской темы кафедры анатомии, гистологии и патоморфологии ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» (номер государственной регистрации 01201156755).
Цель. Выявить закономерности структурно-функциональных изменений в половой системе крольчих, коров и ячих при различных
физиологических состояниях и под воздействием экзогенных половых гормонов. Влияние экзогенных фолликулина, фоллимага и прогестерона на оплодотворяемость и снижение эмбриональной смертности
у коров.
4
Для реализации поставленной цели были определены следующие
задачи:
1. Изучить особенности морфофункциональных изменений в половой системе крольчих, коров и ячих в половом цикле, под влиянием
фолликулина и прогестерона и при стельности.
2. Используя методы гистохимии, выявить динамику содержания углеводных и белковых компонентов в половой системе крольчих,
коров и ячих.
3. Выявить влияние экзогенных фолликулина, фоллимага и прогестерона на оплодотворяемость коров, снижение эмбриональной смертности и разработать рациональные методы для коррекции репродуктивной функции коров и телок.
4. Определить концентрацию прогестерона, эстрадиола, лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов в крови коров в
эструсе и на 4-5-й дни после осеменения и исследовать гормональный фон у коров иммуноферментным методом.
5. Оценить эффективность применения фолликулина, фоллимага и
прогестерона.
Научная новизна и ценность полученных результатов заключается в том, что с использованием комплекса методов классической гистологии, гистохимии, биометрического анализа, дифференциальной оценкой содержания углеводных и белковых компонентов,
нуклеиновых кислот выявлен ряд новых особенностей морфофункциональной организации и изменений, происходящих в тканях яйцеводов, яичников, матки, шейки матки и влагалища крольчих, коров и ячих
при различных физиологических состояниях и под влиянием половых
гормонов.
Проведены детальные морфометрические и стереометрические
исследования слизистых оболочек разных отделов гениталий, дана гистохимическая оценка нуклеарной активности клеток эпителиальных
покровов эндометрия и яйцеводов крольчих, коров и ячих. Тщательно
идентифицировано содержимое эпителиев и секретов, проведен анализ
возможной роли выявленных биологически активных веществ.
Проведена сравнительная гистологическая и гистохимическая
характеристика всех отделов половой трубки коров и ячих.
Изучено влияние половых гормонов (фолликулина, фоллимага и
прогестерона) на повышение оплодотворяемости, снижение эмбриональной смертности и устранение ановуляторных половых циклов.
Определено содержание фолликулостимулирующего, лютеинизи5
рующего гормонов, эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови коров и телок в половом цикле.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты гистологических, гистохимических и биометрических исследований влагалища, шейки матки, матки, яйцеводов, яичников крольчих,
коров и ячих при различных физиологических состояниях, а также
сведения, полученные при экспериментальном воздействии экзогенных половых гормонов на морфофункциональные преобразования в
гениталиях вышесказанных животных, представляют несомненный
научный интерес и необходимы:
- для сравнительной видовой, возрастной морфологии, ветеринарной гинекологии, гистохимии и патоморфологии тканей животных;
- для понимания общебиологических процессов, протекающих в
разных отделах гениталий и в целом в организме самки со сменой
физиологического состояния;
- при выяснении этиопатогенеза акушерско-гинекологических заболеваний;
- для проведения экспериментальных наблюдений с целью выяснения актуальных вопросов физиологии размножения, патогенеза, терапии функциональных нарушений в гениталиях;
- для обоснования применения экзогенных половых гормонов с
целью снижения эмбриональной смертности, повышения оплодотворяемости, сокращения сервис-периода, бесплодия и увеличения выхода молодняка;
- могут быть использованы при чтении лекций, написании соответствующих разделов по гистологии, гистохимии, акушерству и биотехнологии;
- разработаны и предложены производству рекомендации по применению гормональных препаратов.
Практические предложения внедрены в хозяйствах Республики
Бурятия.
Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются в сельхозпредприятиях и ветеринарных учреждениях Республики Бурятия при проведении ветеринарных акушерско-гинекологических мероприятий.
Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на
заседании НТС Министерства сельского хозяйства и продовольствия
Республики Бурятия (протокол № 1 от 23.03. 2011 г.), в рекомендации
«Влияние гормональных препаратов на морфофункциональное состо6
яние половых органов и оплодотворяемость коров» (утв. НТС Управления ветеринарии Республики Бурятия, протокол № 7 от 27.09.2011г.).
Значительная часть результатов исследований опубликована в
монографиях: «Гистоморфология и гистохимия половой системы крольчих и коров, оплодотворяемость и снижение эмбриональной смертности у коров под влиянием экзогенных фолликулина и прогестерона»
(Улан-Удэ, 2011); «Сравнительная морфофункциональная характеристика половой системы коров и ячих при различных физиологических
состояниях» (Улан-Удэ, 2011).
Основные материалы диссертационной работы используются в
учебном процессе на лекциях и лабораторно-практических занятиях
со студентами, а также слушателями ФПК по акушерству ФГБОУ
ВПО «Бурятская ГСХА им. В. Р. Филиппова», научной работе на кафедре анатомии, гистологии и патоморфологии в ФГБОУ ВПО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова».
Апробация результатов исследований. Основные положения
диссертации доложены, обсуждены и одобрены на III республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Задачи молодых ученых в повышении эффективности с.-х. прва» (Алма-Ата, 1991); на II региональной научной конференции морфологов Сибири и Дальнего Востока «Возрастная, видовая, адаптационная морфология животных» (Улан-Удэ, 1992); на научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Биология на пороге
XXI века» (Улан-Удэ, 1999); на международной научно- практической
конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Троицк, 2000); на межрегиональной научно-практической конференции «Теоретические и практические аспекты ветеринарии и медицины», посвящ. 60-летию образования кафедры гистологии и патанатомии и 75-летию со дня рождения
Г.Ш. Жанчипова (Улан-Удэ, 2001); на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «БГСХА им. В.Р. Филиппова» (20002010); на международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора В.Я. Суетина (Улан-Удэ, 2004); на VI
региональной конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Иркутск, 2006); на научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов, посвященной 75-летию ФГОУ
ВПО «БГСХА им. В.Р. Филиппова» (Улан-Удэ, 2006); на международной научно-производственной конференции «Актуальные пробле7
мы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвящ. 100летию со дня рождения проф. Авророва А.А. (Воронеж, 2006); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы повышения продуктивности и охраны здоровья животных (Ставрополь, 2006); на международной научно-практической конференции,
посвященной 45-летию ГНУ НИИ ветеринарии Восточной Сибири СО
Россельхозакадемии (Улан-Удэ, 2008); на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию кафедры паразитологии, эпизоотологии и организации ветеринарного дела ФГОУ ВПО
«БГСХА им. В. Р. Филиппова (Улан-Удэ, 2008).
Публикации результатов исследований. Основные результаты и положения диссертации отражены в 39 научных статьях, в том
числе 12 работ в журналах, рекомендованных ВАК РФ, а также в 2
монографиях: «Гистоморфология и гистохимия половой системы крольчих и коров, оплодотворяемость и снижение эмбриональной смертности у коров под влиянием экзогенных фолликулина и прогестерона»,
«Сравнительная морфофункциональная характеристика половой системы коров и ячих при различных физиологических состояниях» и 1
рекомендации «Влияние гормональных препаратов на морфофункциональное состояние половых органов и оплодотворяемость коров».
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Морфофункциональная характеристика влагалища, шейки матки
и матки крольчих в покое и под влиянием экзогенных половых гормонов.
2. Морфофункциональная характеристика влагалища, шейки матки, матки, яйцеводов и яичников коров под влиянием фолликулина,
фоллимага, прогестерона и при различных физиологических состояниях (половой цикл и стельность).
3. Морфофункциональная характеристика влагалища, шейки матки, матки, яйцеводов и яичников ячих при различных физиологических состояниях (половой цикл и стельность).
4. Влияние экзогенных гормональных препаратов (фолликулин, фоллимаг, прогестерон) на оплодотворяемость коров и снижение эмбриональной смертности; определение содержания половых гормонов в
сыворотке крови коров в половом цикле.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа
изложена на 341 страницах текста и состоит из следующих разделов:
введения, обзора литературы, материалов и методов исследований,
результатов собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов, практических предложений. Рабо8
та иллюстрирована 65 таблицами и 150 рисунками, 21 диаграммами.
Список использованной литературы включает 291 источник, в том
числе 120 иностранных авторов.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал и методики исследований
Работа выполнена в период с 1982 по 2010 г. на кафедре анатомии,
гистологии и патоморфологии ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова» и в условиях
молочно-товарных комплексов совхоза «Пригородный» Иволгинского
района, совхоза «Алтайский» Кяхтинского района, на молочно-товарной ферме ФГУП «Учебно-опытное хозяйство Байкал» ФГБОУ ВПО
«Бурятская ГСХА им. В. Р. Филиппова (отделение № 1 и отделение №
2 село Гурульба), СПК «Ульдурга» Еравнинского района Республики
Бурятия на коровах симментальской породы и на коровах черно-пестрой породы совхоза «Павлозаводское» АНИПТИЖа Алтайского края
и яках с. Боксон Окинского района РБ.
Объекты исследований (крольчихи, коровы, яки), возраст, количество животных в группе, методы исследований, количество проб
крови для радиоиммунологического исследования, количество кусочков и участков для гистологического и гистохимического исследования приведены в таблице 1.
Эксперименты на крольчихах (n=15) проводились в виварии
БГСХА. Было взято пять групп животных, в каждой группе по 3 крольчихи. 1группа – контрольная. Животным 2 группы вводили ежедневно
трехкратно 0,05% масляный раствор фолликулина в дозе 0,5 мл и производили убой на 4-й день. 3 группе крольчих вводили трехкратно фолликулин в той же дозе, три дня выдерживали и производили убой на 4й день. 4 группе животных вводили двукратно ежедневно 1 % масляный раствор прогестерона в дозе 0,5 мл и производили убой на 4-й
день. 5 группе крольчих вводили трехкратно 0,05% масляный раствор
фолликулина в дозе 0,5 мл и двукратно ежедневно 1 % масляный раствор прогестерона в дозе 0,5 мл. Убой производили на 7-й день.
Исследования по разработке рациональных способов профилактики эмбриональной смертности и повышения оплодотворяемости
коров с применением препаратов фолликулина, фоллимага и прогестерона проведены на 446 коровах.
Из коров, пришедших в охоту после отела и осемененных, сформировали четыре группы: 1 группа – контрольная. Вторая с введени9
ем 4 мл 0,05% масляного раствора фолликулина. Животным 3 группы
вводили 1% масляный раствор прогестерона в дозе 10 мл внутримышечно на 4-й день после осеменения. Животным 4-й группы в день
осеменения вводили фолликулин и прогестерон через 4 дня после осеменения в вышеуказанных дозах и концентрациях.
Для изучения влияния нового отечественного препарата «Фоллимаг» создали также 4 группы коров:
Животные 1 группы считались контрольными. Коровам 2 группы
вводили фоллимаг однократно внутримышечно в дозе 1000 М.Е. в
день осеменения. Коровам 3 группы инъецировали прогестерон 1%
масляный раствор в дозе 10 мл внутримышечно на 4-5-й день после
осеменения. Коровам 4 гр. – фоллимаг в день осеменения и прогестерон на 4-й день в вышеуказанных дозах и концентрациях.
Стельность устанавливали через два месяца после осеменения
ректальным исследованием.
Для изучения влияния фолликулина и прогестерона на половой тракт
материал для гистологического и гистохимического исследования влагалища, шейки матки, матки - карункулов и межкарункулярных участков, яйцеводов и яичников брался после убоя на 7-й день после осеменения и биопсии утеротомом. Биоптаты взяты от 30 коров.
Для гистоморфологической и гистохимической характеристики
полового тракта коров, находящихся в половом цикле и при стельности, материал взят от 15 коров путем убоя.
Для сравнительной гистоморфологической и гистохимической
характеристики половой системы коров и ячих материал для гистоисследования от 17 ячих был взят путем убоя животных. Кусочки были
взяты из влагалища, шейки матки, рогов-карункулов и межкарункулярных участков, яйцеводов и яичников.
У животных, находившихся в фолликулиновую фазу полового цикла на яичнике отмечался крупный фолликул размером 10-12 мм, в
прогестероновой фазе – на одном из яичников четко отмечалось желтое тело яркооранжевого цвета и фолликулы на разных стадиях развития. Беременность устанавливали по наличию плода в одном из рогов
матки. Срок беременности определяли в соответствии с данными
А.П.Студенцова (1961) и В.И. Канторовой (1960) и со слов ветеринарного врача и фермера. Для исследования из матки, шейки матки,
влагалища, яйцеводов вырезались кусочки размером 0,5 -1 см, из рогов матки – по два кусочка из области карункулов и межкарункулярных участков. В шейке матки вырезался участок из средней части,
10
во влагалище – из краниальной, средней и каудальной частей, в яйцеводах - из краниальной, средней и каудальной частей. Яичники разрезались по методике, предложенной Е.Ф. Поликарповой (1951).
Полученный материал от крольчих, коров и ячих фиксировался в
10 % растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, нейтральной фиксирующей смеси А.Л. Шабадаша (1947) и заключался в парафин. Для изучения гистоморфологии депарафинированные срезы окрашивались гематоксилином и эозином, по ван Гизон в оригинальной
прописи (Роскин Г.И., Левинсон А.Б.,1957).
Гликоген и другие ШИК-положительные вещества выявляли по
методу А.Л. Шабадаша. Для обнаружения нейтральных гликопротеинов учитывали ШИК-реакцию после предварительной обработки
срезов фенилгидразином в течение одного часа при комнатной температуре непосредственно перед окраской (Spiser S.S., 1961, 1963).
Кислые группы углеводных компонентов выявляли основным коричневым (Шубич М.Г..1961), альциановым синим при рН 2,7 (Mowry
R., 1956), рН 1,0 (Lev R., Spiser S., 1964), толуидиновым синим – рН
4,6 (Виноградов В.В., Потапова В.Б., 1964).
Для идентификации кислых гликопротеинов использовали контроли: мягкое и жесткое метилирование.
За гликоген принимали ШИК-позитивные вещества, ферментирующиеся амилазой слюны, устойчивые к ней ШИК-положительные
вещества и блокирующиеся фенилгидразином вещества считали нейтральными гликопротеинами.
ШИК-положительные вещества, окрашивающиеся основным коричневым, альциановым синим при рН 1,0 и неокрашивающиеся после
мягкого метилирования, относили к сульфатированным гликопротеинам.
Амилазоустойчивые ШИК-позитивные вещества, не блокирующиеся фенилгидразином, окрашивающиеся альциановым синим при рН 2,7,
характеризовали как сиалогликопротеины. ШИК-отрицательные компоненты, окрашивающиеся основным коричневым, альциановым синим,
при рН 1,0 относили к сульфатированным протеогликанам.
О наличии РНК судили по реакции Браше в модификации N.B.Kurnik
(1955). Контроли на РНК ставили рибонуклеазой фирмы «Reanal» в концентрации 1 мг /мл на физиологическом растворе НСI в течение 1 часа
при температуре 37 градусов. За РНК принимали вещества, проявляющие пиронинофилию, ферментирующиеся рибонуклеазой.
Для выявления общего белка использовали метод тетразониевого сочетания по Даниелли с применением прочного синего Б по Бер11
стону (Пирс Э.,1962). Вещества, реагирующие с прочным синим Б,
считали общим белком.
Функциональную активность клеточных ядер выявляли методом
А.Н. Яцковского (1987). Ядра, окрашивающиеся альциановым синим
при рН 4,8 и водным раствором сафранина с резорцином в синий или
сине-красный цвет, считали активными (содержат эухроматин). Неактивные ядра окрашивались в красный цвет (содержат гетерохроматин). За основу количественного подсчета, проводимого под иммерсией при увеличении 900х, принимались 200 ядер. Интенсивность
гистохимических реакций определяли визуально.
Числовой материал микрометрических измерений, функциональную активность клеточных ядер обрабатывали биометрическими
методами по Н.А. Плохинскому (1969) с использованием ЭВМ IBM
– PC AT по программе «Statgraf-87».
Микрофотографирование исследуемых объектов проводили с использованием микроскопа «CarlZeiss» при увеличении объектива 40,
окуляра 3. Высоту эпителиоцитов влагалища, шейки матки и матки
крольчих, высоту гландулоцитов и диаметр маточных желез у крольчих и толщину эпителия влагалища, шейки матки и матки коров, высоту гландулоцитов и диаметр желез у коров и ячих измеряли окулярмикрометром в 20 полях зрения с применением микроскопа МБИ-3.
Подсчет тканевых базофилов (ТБ) производили в 20 полях зрения при увеличении 40 с помощью программы Micromed images 1,0.
Для обнаружения ТБ использовали гистохимическую реакцию с основным коричневым при рН 1,0, ШИК-реакцию, реакцию Браше в
модификации N.B. Kurnick (1955).
Состояние эндокринного статуса коров оценивали по содержанию в
периферической крови половых стероидов (прогестерон, эстрадиол-17β,
лютеинизирующий гормон (ЛГ), фолликулостимулирующий гормон (ФСГ).
Кровь у коров брали из яремной вены в пробирки с гепарином во время эструса и на 7-е сутки после осеменения (n=63). Содержание в
сыворотке крови коров гормонов эстрадиола, прогестерона, фолликулостимулирующего и лютеинизирующего определяли иммуноферментным методом с использованием тест-системы фирм «Алкор БИО»
и DRJ (Германия) в лаборатории клинической иммунологии ГУЗ «Республиканская клиническая больницы имени Семашко Н.А.» (УланУдэ, 2008-2009).
Для установления бесплодия, сервис-периода и т.д. пользовались
тетрадями записей ветеринарного врача на комплексах и фермах хо12
Таблица 1 – Объекты исследований и количество
экспериментального материала (1982-2010 г.г.)
Вид животного
Возраст, порода
Количество
животных
в группе,
пробы крови
1.Кролики (виварий Шиншилла, 6 ме- 15
БСХИ-БГСХА)
сяцев
(3+3+3+3+3)
2.Коровы Кяхтинский район, учхоз
«Байкал»
3.Коровы
Алтайский
край,
(совхоз
«Павлозаводское»)
Коровы 3, 4, 5, 6, 7 30
лет, телки симментальской породы
Коровы 4,5 лет и 20 (5+5+5+5)
телки
чернопестрой породы
4.Коровы (Кяхтин- Коровы 4,5,6,7 лет
ский р-н, МТФ с симментализиро.Алтай)
ванной
породы
(стельность 1,3, 5,
8-9 мес., эструс и
прогестероновая
фазы)
5.Яки
(Окинский Коровы 3,4,5,6,7,8
район, с.Боксон)
лет
(стельность
1,3,5,8
месяцев,
прогестероновая
фаза и эструс)
6.Коровы Кяхтинский район, МТФ с.
Алтай, учхоз «Байкал», МТФ с. Гурульба, МТФ совхоза «Пригородный»
7.Учхоз «Байкал»
Всего
15
(3+3+3+3+3)
17
(3+3+3+3+3+
+2)
Коровы
симмен- 446
тальской
породы (35+22+389)
2,3,4,5,6.7,8
лет
(введение фолликулина и прогестерона)
Коровы и телки 63
симментальской
породы 2, 3, 4, 5, 6,
7, 8 лет (введение
гормонов прогестерона, фоллимага,
фолликулина)
606
Взятый материал
Методы
исследования
исследои количество
ваний
кусочков
и участков
Влагалище–15;
ГистолоШейка матки–15; гические
Матка – 15
Биопсия матки –
30
Влагалище–60;
Шейка матки–20;
Матка–40; Яйцеводы–120; Яичники –40
Влагалище–45;
Шейка матки 15;
Матка–30; Яйцеводы – 90; Яичники –30
Гистохимические
Морфометрические
Влагалище–51;
Шейка матки–17;
Матка–34; Яйцеводы– 51; Яични- Биометки –34
рические
Внутримышечные
и подкожные инъекции гормонов
Биохимические
Взятие крови на
гормоны РИА в
Республиканской Радиоимклинической
мунологибольнице
ческие
им. Семашко
752
зяйств, где проводились исследования и эксперименты.
Биохимические исследования крови у коров (концентрации неорганического фосфора, неорганического кальция, сахара, общего белка, резервной щелочности, каротина) проводили по общепринятым
методикам в Республиканской научно-производственной ветеринар13
ной лаборатории (РНПВЛ).
Микрофотографирование исследуемых объектов проводили с использованием микроскопа AXIOSTAR, видеокамеры для микроскопа
MICROCAM по программе Micromed images 1,0.
Для гистохимической идентификации различных групп углеводных и белковых компонентов использовали работы G.Quinterelli (1963),
Г.А. Игумнова (1969), В.В. Виноградова (1971), М.Г. Шубича в соав.
(1975), М.Г. Шубича и Г.М. Могильной (1979), Х. Луппа (1980), А.П.
Попова (2004).
Полученные данные подвергали статистической обработке на
персональном компьютере с помощью программы «Microsoft Excel97». Корреляционную связь между качественными признаками измеряли тетрахорическим показателем связи (Плохинский Н.А.,1970).
Достоверность полученных результатов определяли с помощью
критерия Стъюдента (Лакин Л.Ф., 1990) и считали достоверными при
Р<0,05.
2.2. Гистоморфология и гистохимия влагалища,
шейки матки и матки крольчих под влиянием фолликулина
и прогестерона
Сведения о морфологических и гистохимических изменениях в
половых органах сельскохозяйственных и лабораторных животных
имеют как теоретическое, так и практическое значение. Кролики как
лабораторные животные с провоцированной овуляцией являются удобными объектами для проведения различных экспериментов в области репродуктологии.
Слизистая оболочка влагалища контрольных крольчих образует
складки, в некоторых участках сложные. Поверхность слизистой покрыта простым столбчатым эпителием высотой 28,2 ±1,10 мкм, более высоким в глубине складок (диагр.1). В надъядерных участках
эпителиальных клеток обнаруживается гликоген. Также ШИК-положительная реакция выявлена в мышечном слое, в интиме кровеносных сосудов. Нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины выявляются по апикальному краю эпителиоцитов. РНК выявляется по апикальному краю клеток эпителия, в отдельных клетках
она отмечается по всей цитоплазме. Общий белок отмечается в апикальных участках эпителиоцитов в виде сплошной каймы в интиме
14
кровеносных сосудов, в миоцитах. Несколько слабее окрашиваются
клетки соединительной ткани.
Во второй группе крольчих, которым вводили фолликулин и убивали на 4-й день, cлизистая образует сложные складки. Эпителий,
выстилающий слизистую оболочку, становится, по сравнению с животными контрольной группы, почти в два раза выше – 42,7 ± 2,25
мкм (Р<0,01).
Значительные изменения происходят во влагалище и шейке матки крольчих, которым вводили прогестерон на фоне фолликулина. Поверхность слизистой оболочки влагалища покрыта однослойным высокостолбчатым эпителием ÷ 34,8±2,14 микрометра (Р<0,05; диагр.1).
Слизистая оболочка шейки матки образует извитые сложные складки. Высота покровного эпителия повышается до 42,2±2,46 мкм
(Р<0,001), т.е. становится однослойным высокостолбчатым (диагр.1).
Гликоген выявляется по всей цитоплазме эпителиальных клеток, в
секрете, который находится в просвете влагалища, отмечается сильная реакция.
Соединительная ткань и интима кровеносных сосудов содержат
также много гликогена. В надъядерных участках эпителиоцитов, в
секрете их, а в некоторых клетках эпителия по всей цитоплазме отмечаются кислые сульфатированные и сиалогликопротеины. Наибольшее содержание РНК и общего белка обнаружено в цитоплазме эпителиальных клеток, меньше ее в клетках соединительной ткани и в
миоцитах.
Введение экзогенных эстрогенов активизирует углеводный обмен,
в результате происходит накопление гликогена в клетках полового тракта животных (Бакшеев С.Н., Михайленко Е.Т., 1964). В клетках эпителия влагалища гликоген используется для синтеза гликопротеинов.
Об увеличении гликогена в клетках эпителия в период охоты сообщают Ю. Ай и Ч. Цзуэ (1985), Г.А. Игумнов (1968), Б.П. Савельев
(1969), М.И. Джоробеков (1975), S. Cheng (1981), H. W.G. Stroband et.
Al. (1986), В.Г. Черных (1983), Р.З. Сиразиев (1991), Л.М. Малакшинова (1998) у мышей, коров, ячих, коз, кобыл, свиней, кроликов.
Слизистая оболочка матки контрольных крольчих образует складки. Покровный эпителий эндометрия простой низкостолбчатый. Высота эпителия составляет 20,7±4,30 мкм (диагр.1). До 50,0± 3,32 %
ядер клеток покровного эпителия содержат эухроматин. В собствен15
но слизистой обнаруживаются маточные железы, выстланные простым низкостолбчатым эпителием (гландулоциты). В глубине слизистой желез больше, но их просвет и диаметр меньше, чем у находящихся ближе к поверхности. Диаметр желез составляет 37,4±1,24 мкм, а
высота гландулоцитов равна 16,9±1,13 микрометра. Ядра железистых
клеток округлоовальной формы лежат у базальной мембраны и 63,7±
5,34 % ядер содержат эухроматин. Гликоген в эпителиальной выстилке
выявляется, преимущественно, в апикальной части эпителиоцитов и
гландулоцитов, в секрете, в виде глыбок и зерен он обнаруживается в
стенках кровеносных сосудов, в гладкомышечных клетках. В покровном и железистом эпителии отмечаются нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины. Содержание РНК и общего белка отмечается в апикальных участках эпителиоцитов и гландулоцитов.
Применение прогестерона на фоне фолликулина приводит к резкому изменению гистоморфологии и гистохимии матки крольчих. Слизистая матки образует сложные складки, эпителиоциты становятся
высокостолбчатыми. Их высота достигает 41,7±1,14 мкм (Р<0,001;
r=±0,02), 76,8 ±2,34 % (Р<0,001) ядер являются активными в этой группе
крольчих. Железы выстланы однослойным столбчатым эпителием
высотой 25,5±0,93 мкм (Р<0,001; r= ±0,16; диагр. 1). Диаметр желез,
расположенных поверхностно и в глубине собственно слизистой, в
среднем, составляет 74,8±16,51 микрометра (Р<0,05; r= –0,24), 68,1±2,62
процента ядер становятся активными. Гликоген обнаруживается в
цитоплазме эпителиоцитов по всей клетке.
Нейтральные гликопротеины в значительном количестве выявляются в надъядерных участках покровного эпителия, гландулоцитах и
в клетках соединительной ткани.
Нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины являются защитным барьером на пути инфекции (Х.П. Линд, 1962, В.Г.
Черных, 2000).
Кислые сульфатированные гликопротеины отмечаются по апикальному краю эпителиоцитов. В покровном эпителии РНК содержится в
апикальных и базальных частях цитоплазмы. Общий белок обнаруживается в апикальных участках эпителиоцитов и гландулоцитов, в
секрете желез, в мышечном слое и в клетках соединительной ткани.
Повышение содержания общего белка обусловлено поступлением макромолекул – вителлогенинов, синтезирующихся в печени (Волкова О.В., 1970).
16
Диаграмма 1 - Высота покровного эпителия слизистой оболочки
влагалища, шейки матки, матки крольчих под влиянием половых гормонов
(мкм)
mkm
Влагалище
100
Шейка матки
50
Эпителий матки
Железы матки
0
1
2 группы
3
4
5
Диаметр желёз
матки
1 – контрольная; 2 – фолликулиновая; 3 – фолликулиновая с выдержкой;
4 – прогестероновая; 5 – фолликулин-прогестероновая
2.3. Гистоморфология и гистохимия яичников, яйцеводов,
матки, шейки матки, влагалища коров под влиянием
фолликулина и прогестерона при различных
физиологических состояниях
У контрольных коров слизистая оболочка влагалища коров образует продольные складки. Она выстлана многослойным эпителием,
состоящим из 5-6, иногда 10-12 слоев клеток, при толщине, в среднем,
43,8±3,20 микрометра. Среди клеточных элементов соединительной
ткани собственно слизистой встречается небольшое количество тканевых базофилов. Гликоген выявляется в небольшом количестве в 35 слоях клеток, нейтральные гликопротеины встречаются в 2-4 слоях
клеток по апикальному краю их.
Гликоген служит пластическим материалом для образования кератина, питательным веществом для сперматозоидов во время их
прохождения по влагалищу, может подвергаться ферментативному
превращению в молочную кислоту, создавая тем самым кислую среду для поддержания во влагалище подходящей бактериальной флоры
(Хэм А., Кормак Д.,1983).
Кислые сульфатированные гликопротеины отмечаются в 2-3 слоях клеток, особенно сильно в надъядерных участках клеток эпителия.
А.М. Кузин (1954), И.В. Цветкова (1963), Х.П. Линд (1962) указывают, что кислые сульфатированные и сиалогликопротеины являются защитным барьером на пути инфекции. Кислые гликопротеины
действуют как факторы биологической защиты (Шубич М.Г., Могиль17
ная Г.М.,1979).
В отдельных клетках 2-3 слоях клеток отмечаются сиаловые
кислоты. Столбчатые клетки, особенно, в складках содержат большое количество нейтральных и сиалогликопротеинов. Секрет, выделяющийся в просвет влагалища содержит те же компоненты, что и
столбчатые клетки.
У коров, которым вводили прогестерон на фоне фолликулина, эпителий слизистой оболочки образует сложные складки толщиной 58,5
± 2,35 микрометра (Р< 0,01; r= -0,74). Эпителий многослойный, состоит из 8-10 слоев клеток. Базальный слой состоит из столбчатых клеток. Нейтральные гликопротеины выявляются в незначительном количестве в 3-6 поверхностных слоях плоских клеток. В соединительной ткани их содержится мало, в интиме умеренное количество. Гликоген в виде глыбок и зерен находится в эпителии, в отдельных соединительнотканных клетках, в стенках кровеносных сосудов. Кислые
сульфатированные обнаруживаются в 1-3 поверхностных слоях плоских клеток. Небольшое количество их находится в соединительной
ткани и в интиме кровеносных сосудов.
Шейка матки коров. По нашим данным, эпителий, выстилающий слизистую оболочку шейки матки контрольных коров, однослойный низкостолбчатый, высотой 16,6±0,72 микрометра.
В группе у коров, которым вводили прогестерон на фоне фолликулина, эпителий, выстилающий слизистую оболочку шейки матки, однослойный высокостолбчатый, высотой 24,9±1,71 микрометра (Р<0,05
- 0,001; r= +0,56). Складчатость слизистой и количество секрета в
просвете шейки матки увеличивается. В цитоплазме эпителиоцитов и
в секрете шейки матки коров в большом количестве выявляются нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины.
И.М. Щетинский (1969) сообщает, что нейтральные гликопротеины создают подвижные адсорбционные поля, которые предохраняют
слизистую оболочку от самых разнообразных инфекционных начал,
физических и химических агентов.
Матка у коров. У коров контрольной группы слизистая оболочка карункула и межкарункулярных контрольных коров участков покрыта однослойным столбчатым эпителием высотой 18,3±1,21 мкм,
который на некоторых участках отсутствует.
Ядра клеток покровного эпителия до 63,3±2,41% содержат эухроматин и располагаются не на одном уровне. Они имеют округлую или
овальную форму, их хроматин собран в глыбки различной величины.
18
В эпителии встречаются единичные лейкоциты. Базальная мембрана
выражена хорошо.
В эндометрии находятся маточные железы, выстланные однослойным столбчатым эпителием. В глубоких слоях слизистой просветы желез узкие. Высота гландулоцитов в железах, лежащих ближе
к покровному эпителию составляет 21,3 ±1,21 мкм, а в глубинных
железах она равна 16,3±1,93 микрометра. До 81,0±1,96 процентов ядер
гландулоцитов поверхностных желез содержат эухроматин, а
50,3±2,49% ядер железистых клеток глубинных желез содержат активные ядра .
В глубине эндометрия желез больше, но их диаметр (45,1±4,64
мкм) меньше, чем у находящихся ближе к поверхности (58,8±5,71 мкм).
В покровном эпителии матки содержится большое количество
гликогена. Также гликоген обнаруживается в секрете желез, в глубоко расположенных железах гликогена мало. В апикальных участках
клеток покровного и железистого эпителия и в секрете их содержится
небольшое количество нейтральных и кислых сульфатированных гликопротеинов.
Значительные изменения происходят в 4-й группе коров, эпителий, выстилающий слизистую матки, однослойный высокостолбчатый
– 34,9±2,67 мкм (Р<0,001; r=-0,21), местами отсутствует. Ядра расположены на разных уровнях и до 92,6±2,15 (Р<0,001); содержат эухроматин. Активность ядер клеток железистого эпителия остается на
уровне клеток эпителия «прогестероновой» группы и составляет в
поверхностных железах 73,2±1,33 % (Р<0,01), а в глубинных железах
– 81,5±1,46 %. (Р<0,01). Высота гландулоцитов глубинных желез равна 21,3±1,24 микрометра (Р< 0,01).
Диаметр желез как поверхностно лежащих, так и глубинных составляет, соответственно, 75,7±4,52 мкм (Р<0,05; r=-0,26) и 58,2±2,14
мкм (Р<0,05; r=-0,21). В этой группе коров содержание гликогена повышается. Он выявляется в надъядерной зоне цитоплазмы покровных эпителиальных клеток. В этих же участках цитоплазмы содержится небольшое количество нейтральных и кислых сульфатированных гликопротеинов. Немного гликогена обнаруживается и в железистом эпителии. Кислые сульфатированные гликопротеины выявляются
по всей цитоплазме эпителиоцитов и гландулоцитов, также окрашивается и секрет желез.
По данным Р.З. Сиразиева (2000), увеличение ядерной активности эпителиоцитов и железистого эпителия связано с усилением синте19
тических процессов в клетках.
Слизистая оболочка яйцеводов коров образует продольные складки. Количество складок в воронке и ампуле значительно больше, чем
в перешейке. Просвет канала воронки и ампулы широкий, в перешейке суживается, а толщина стенок яйцевода, наоборот, в воронке и
ампуле суживается, а в перешейке увеличивается. Эпителий слизистой яйцевода во всех отделах однослойный столбчатый. Ядра клеток
овальные и вытянутые, лежат не на одном уровне.
В перешейке яйцевода контрольных коров высота эпителитоцитов составляет 12,44±0,17 мкм (Р<0,001), в апикальной части эпителиальных клеток, а в отдельных клетках и во всей цитоплазме содержатся нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины. Они
выявляются и в просвете яйцевода. В цитоплазме эпителиальных клеток обнаруживается немного гликогена.
В ампуле яйцевода высота эпителия равна 21,38±0,29 мкм
(Р<0,001), углеводные компоненты обнаруживаются в апикальных
участках эпителиоцитов, в некоторых клетках нейтральные и кислые
сульфатированные гликопротеины отмечаются в надъядерных участках. Содержание гликогена значительно увеличивается по сравнению с предыдущим отделом.
В воронке яйцевода высота эпителия составляет 15,0±0,35 мкм
(Р<0,001), накапливаются большие запасы гликогена, в то время как
нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины обнаруживаются лишь в небольшом количестве клеток.
Между воронкой и ампулой яйцевода в коррелятивном отношении
отмечается прямая и сильная связь – r=+0,94; между воронкой и перешейком – отрицательная, умеренная связь – r= –0,38; между ампулой и перешейком - отрицательная, умеренная связь – r= –0,34.
У коров 4-й группы происходит незначительное снижение нейтральных и кислых сульфатированных гликопротеинов, а содержание
гликогена уменьшается, особенно в перещейке яйцевода, но его становится больше в секрете эпителиоцитов. В перешейке яйцевода высота эпителиоцитов составляет 21,7±0,30 мкм (Р<0,001).
В ампуле яйцевода во многих клетках как нейтральные, так и кислые сульфатированные гликопротеины занимают всю цитоплазму, однако в отдельных клетках реакция на углеводы слабая, а иногда она
выражена в виде следов в апикальных участках клеток, высота эпителиоцитов составляет 32,14±0,33 мкм (Р<0,001).
20
Диаграмма 2 - Высота покровного эпителия слизистой оболочки
влагалища, шейки матки, матки, яйцеводов и яичников коров
под влиянием половых гормонов (мкм)
mkm
80
Влагалище
Шейка матки
Матка
Поверх. жел
Глубин жел.
Диаметр пов. жел.
Диаметр глубоких жел.
Яйцеводы
Воронка
Ампула
Перешеек
60
40
20
0
1
2
группы
3
4
1 – контрольная; 2 – фолликулиновая; 3 – прогестероновая;
4 – фолликулин-прогестероновая
В воронке во многих клетках содержание углеводов сохраняется
на уровне ампулы, но клеток с низким содержанием гликопротеинов
значительно больше, высота эпителиального слоя равна 30,3±0,21мкм
(Р<0,001). Между воронкой и ампулой яйцевода в коррелятивном отношении отмечается обратная и умеренная связь – r=-0,44; между
воронкой и перешейком –прямая и сильная связь – r=+0,95; между
ампулой и перешейком – обратная, умеренная связь – r=-0,32.
В собственно слизистой яйцеводов обнаруживаются единичные
клетки, содержащие значительное количество гликогена. В мышечной оболочке обнаруживается гликоген. Наибольшее количество его
содержится в циркулярном и наружном продольном слоях каудального отдела.
2.4. Гистоморфология и гистохимия влагалища, шейки
матки, матки, яйцеводов, яичников коров при различных
физиологических состояниях
Эструс. В каудальной и средней трети эпителиальный пласт состоит из 5-10 слоев клеток, ближе к шейке матки он несколько тоньше (5-8 слоев, а на отдельных участках доходит до трех слоев). В
среднем, высота покровного эпителия влагалища составила 43,8 ±0,70
микрометра.
В краниальной трети влагалища участков поверхности слизистой,
покрытой многослойным плоским эпителием, несколько меньше, чем
в каудальной и средней. Плоские клетки составляют 1-2 поверхност21
ных слоя клеток. Цитоплазма столбчатых клеток зернистая.
Большое количество гликогена обнаруживается в лейкоцитах, располагающихся как в эпителии, так и в собственно слизистой. Отмечается немного гликогена в единичных соединительнотканных клетках и
в межклеточном веществе, в мышечных клетках; однако отдельные
мышечные пучки содержат большое количество гликогена. Много гликогена и в стенках некоторых вен. Вокруг сосудов обнаружены тканевые базофилы в количестве 3,2±0,45 на единицу измерения.
Прогестероновая фаза. Эта фаза, в отличие от эструса, характеризуется значительным уменьшением толщины эпителиального пласта, особенно в краниальной части влагалища и составляет 39,46±0,51
микрометра (Р<0,001).
Стельность коровы в 8 ÷ 9 месяцев. В этот срок стельности высота эпителия влагалища уменьшается незначительно по сравнению
с предыдущим сроком и составляет 22,08 ±0,69 микрометра в среднем (Р<0,05 - Р<0,001).
Эпителий образован 2-4 слоями клеток, доходящий в отдельных
участках до одного слоя.
Гликоген и нейтральные гликопротеины отмечаются в одном-двух
поверхностных слоях клеток, а в надъядерных участках низкостолбчатых и столбчатых клетках всех частей влагалища выявляются нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины. Над эпителием и в складках слизистой секрет содержит нейтральные и сиалогликопротеины.
Эструс. Эпителий, покрывающий слизистую оболочку шейки матки, однослойный столбчатый высотой 16,58 ± 0,22 микрометра. В просвете шейки матки отмечаются нити секрета, выделяющиеся из клеток. Ядра клеток округло-овальной формы, содержат хроматин в виде
мелких зерен и глыбок и располагаются не на одном уровне.
В надъядерных участках и в отдельных клетках в апикальных
участках, в секрете эпителиальных клеток выявляется значительное
содержание нейтральных, кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов. Гликоген выявляется в стенках вен и лейкоцитах, несколько
меньше их обнаруживается в мышечных клетках.
Покровный эпителий шейки матки коров в прогестероновую фазу
однослойный столбчатый высотой 19,98 ± 0,34 микрометра, несколько выше, чем в эструсе (Р<0,001). Ядра покровных клеток сжаты с
боков, удлиненные, хорошо окрашивающиеся. Из эпителиальных клеток выделяются нити секрета, которые содержат нейтральные, кис22
лые сульфатированные и сиалогликопротеины. Апикальные участки
цитоплазмы эпителиоцитов содержат большое количество нейтральных, кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов. Гликоген отмечается в гладкомышечных клетках и в стенках вен.
Стельность коров в 3 месяца. Эпителий слизистой оболочки шейки матки в три месяца стельности однослойный столбчатый высотой
23,16 ± 0,35 микрометра (Р<0,001).
Стельность коров в 8-9 месяцев. Цервикальный эпителий однослойный столбчатый высотой 19,0±0,35 мкм (Р<0,001). В просвете
канала шейки матки отмечается секрет, который содержит нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины. В мышечной
оболочке выявляется гликоген. В шейке матки у коров количество
тканевых базофилов в эструсе составило 2,2±0,48; в прогестероновую
фазу – 1,5±0,7; при 1-3-месячной стельности у коров количество тканевых базофилов составило 1,5±0,22 (Р<0,01); при 8-9-месячной стельности у коров количество тканевых базофилов - 0,6±0,65 на единицу
измерения.
Эструс. Эпителий слизистой оболочки матки однослойный столбчатый высотой 18,26±0,31 микрометра (Р<0,001). Ядра клеток эпителия располагаются не на одном уровне. Активность ядер эпителиоцитов составляет 63,3 ± 2,41 процента. Эпителий желез однослойный
столбчатый высотой в поверхностно лежащих железах 21,3±0,5 мкм
(Р<0,001; r= -0,37) при диаметре желез - 58,8± 5,71 мкм, активность
ядер эпителиоцитов поверхностных желез - 81,16 ± 0,43 процента, в
глубинно расположенных железах, высота гландулоцитов составляет
-16,3±0,25 мкм, диаметр желез 45,1± 4,6 мкм (Р<0,001), активность
ядер эпителиоцитов составляет 50,5 ± 0,56 процентов. В эпителии матки
выявляется большое количество гликогена в надъядерных участках
эпителиоцитов. В эпителии поверхностно расположенных желез гликоген обнаруживается в апикальных участках клеток и немного его
обнаруживается в просвете концевых отделов.
В апикальных участках клеток покровного и железистого эпителия и в секрете желез содержится небольшое количество нейтральных и кислых сульфатированных гликопротеинов. В начальной стадии
фолликулиновой фазы эпителий невысокий и содержание в нем общего белка и сульфгидрильных групп незначительное. По мере созревания фолликулов повышается высота эпителиоцитов и содержание общего белка и SH-групп, последние сконцентрированы по апикальному
краю цитоплазмы. В цитоплазме гландулоцитов умеренное содержа23
ние общего белка и его тиоловых групп. В собственной пластинке
эндометрия более высоким уровнем общего белка и сульфгидрильных групп выделяются стенки кровеносных сосудов и тканевые базофилы (21,0± 0,6) на единицу измерения.
Эпителий, выстилающий слизистую оболочку матки в прогестероновую фазу однослойный столбчатый высотой 20,12± 0,41 микрометра (Р<0,001). Компактный слой хорошо выражен. Среди клеточных элементов собственно слизистой выявляется значительное количество тканевых базофилов.
Железистый эпителий однослойный столбчатый высотой 25,3±0,17
мкм при диаметре желез 47±0,71 мкм (Р<0,001; r=-0,26), активность
ядер - 68,42 ± 0,23 процентов в поверхностных железах, в глубинно
расположенных железах диаметр составляет 49±0,59 мкм (Р<0,001)
при высоте гландулоцитов 18,5±0,18 мкм (Р<0,001), а активность ядер
гландулоцитов составляет 50,8 ± 1,12 процентов. Ядра железистых
клеток лежат не на одном уровне.
В прогестероновую фазу содержание гликогена в эпителии матки
несколько снижается. Прогестероновая фаза полового цикла характеризуется некоторым снижением уровня общего белка, содержание SHгрупп сохраняется на уровне эструса.
В собственно слизистой встречаются тканевые базофилы в количестве 15,3±0,4. Их несколько меньше, чем в эструсе, и в прогестероновую фазу.
У коров 2-, 3- и 4-й групп изменения идентичны коровам, находящимся в эструсе и в прогестероновую фазы цикла.
В роге - плодовместилище покровный эпителий матки коров в 89 месяцев стельности выявляется на незначительных участках поверхности слизистой высотой 14,76±0,17 микрометра (Р<0,001). Ядра
овальной формы с крупными глыбками хроматина с активностью ядер
71,16 ±0,71 процента.
Высота гландулоцитов поверхностных желез составляет 19,7±0,09
мкм (Р<0,001; r=+0,73) при диаметре желез 70,2±1,77 мкм (Р<0,001),
активность ядер – 22,86±0,79 процентов в поверхностных железах, в
глубинно расположенных железах диаметр составляет 56,02±0,29 мкм
(Р<0,001) при высоте гландулоцитов 16,8±0,09 мкм (Р<0,001). Ядра
железистых клеток активны в 44,3 ± 0,80 процента округло-овальной
формы и располагаются не на одном уровне. Из цитоплазмы железистых клеток выделяются нити секрета.
Высота эпителия котиледонов в этот срок равна 16,4±0,35 мкм
24
(Р<0,001), а активными являются 72,7 ± 0,70 % (Р<0,05) ядер эпителиоцитов.
Эпителий крипт однослойный низкостолбчатый высотой 6,4±0,27
мкм (Р<0,01), на некоторых участках он отсутствует. Среди эпителиальных клеток, покрывающих ворсинки хориона, много одно-двухъядерных клеток.
Гликоген выявляется в базальных участках цитоплазмы покровных клеток и в единичных соединительнотканных клетках собственно слизистой.
В апикальных участках покровного эпителия, в гландулоцитах и
в секрете выявляются нейтральные гликопротеины.
В тканях плаценты содержатся те же углеводные компоненты,
что и в предыдущий срок. Гликогена содержится очень мало. Он выявляется в строме хориона и в стенках сосудов. В стенках сосудов и
мышечных клетках выявляются кислые сульфатированные гликопротеины в незначительном количестве.
Диаграмма 3 - Высота покровного эпителия слизистой оболочки
влагалища, шейки матки, матки, яйцеводов и яичников коров
при различных физиологических состояниях (мкм)
1 – эструс; 2 – прогестероновая фаза; 3 – стельность 1-1,5 мес.;
4 – стельность 3 мес.; 5 – стельность
В собственно слизистой встречаются единичные тканевые базофилы в количестве 3,9± 0,56. Их несколько меньше, чем в предыдущий срок.
Плацента коров считается эпителиохориальной и лишь на незначительных участках поверхностных отделов плацентом к концу беременности она становится десмохориальной.
25
Высота эпителия яйцеводов и яичников и содержание в них биологически активных веществ остается в пределах полового цикла.
Слизистая оболочка яйцеводов коров образует продольные складки.
Эпителий слизистой яйцевода во всех отделах однослойный столбчатый. Ядра клеток овальные и вытянутые, лежат не на одном уровне.
Высота эпителия яйцеводов в эструсе, в среднем, составляет 18,3 ±
0,21мкм, в прогестероновую фазу цикла - 26,4 ± 0,33мкм (Р<0,001; r= -0,35),
стельность 1 месяц - 25,8 ± 0,21мкм (Р<0,001; r= -0,20), в 3 месяца - 17,9 ±
0,27 мкм (r= -0,27), 8 месяцев -19,5±0,30 мкм (Р<0,05; r= +0,35).
Содержание углеводных компонентов больше отмечается в эструсе и в прогестероновую фазу.
Высота эпителия яичников в эструсе составляет 8,92±0,24 мкм, в
прогестероновую фазу -11,14±0,32 мкм (Р<0,001), стельность 1 месяц
-14±0,35 мкм (Р<0,001), стельность 3 месяца -16,96±0,34 мкм (Р<0,001),
стельность 8-9 месяцев -11,06±0,37 мкм (Р<0,01).
2.5. Гистоморфология и гистохимия влагалища, шейки
матки, матки, яйцеводов, яичников ячих при различных физиологических состояниях
Эпителиальный пласт влагалища ячих в эструсе высотой 45,1 ±
0,68 мкм (Р<0,001) за преддверием и в средней его части состоит из
5-20 слоев клеток. Как в прогестероновую фазу, он в виде сосочков
вдается в подлежащую соединительную ткань, в сосочках насчитывается наибольшее количество слоев.
Особенно сильная реакция отмечается в столбчатых клетках
краниальной части влагалища. В них, кроме того, обнаруживаются
сиалогликопротеины. В отдельных лейкоцитах отмечается гликоген.
В тканевых базофилах (2,8±0,48) содержится гепарин. В интиме кровеносных сосудов содержатся нейтральные, кислые сульфатированные гликопротеины, в мышечных клетках обнаруживается гликоген.
Слизистая оболочка влагалища в восемь месяцев стельности
покрыта эпителием высотой 21,0 ± 0,35 микрометра (Р<0,05; r=+0,05).
На всем протяжении влагалища количество клеточных слоев колеблется от двух до семи. Содержание биологически активных веществ
в 3, 5 и 8 месяцев остается на уровне полового цикла.
Слизистая оболочка шейки матки ячихи в эструсе образует сложные складки, которые подразделяются на первичные, вторичные и
третичные.
Эпителий, покрывающий слизистую оболочку шейки матки в эструсе однослойный столбчатый высотой 16,92±0,30 микрометра. Гли26
коген выявляется в надъядерной части цитоплазмы клеток эпителия.
В надъядерной части эпителиальных клеток, у некоторых клеток по
апикальному краю отмечаются нейтральные и кислые сульфатированные и сиалогликопротеины, особенно, сильная реакция выявлена в
эпителии глубоких отделов складок слизистой оболочки.
Эпителий, выстилающий слизистую оболочку шейки матки в прогестероновую фазу, однослойный столбчатый с ядрами округлой формы, находящимися у базальной мембраны высотой 21,1±0,27 мкм
(Р<0,001; r=+0,98). Клетки эпителия глубоких складок шейки матки
высокостолбчатые. В одних участках, в надъядерной зоне цитоплазмы покровных и железистых клеток, в других – по апикальному краю
отмечаются нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины. Эти же вещества отмечаются в секрете шейки матки.
Высота покровного эпителия шейки матки в 1 месяц стельности
составляет 21,94 ± 0,31мкм (Р<0,001; r=+0,95), в три месяца 20,16 ±
0,12мкм (Р<0,001; r=+0,84), в пять месяцев -18,06±0,28мкм (Р<0,001;
r=+0,90), в 8 месяцев - 18,8±0,17мкм (Р<0,05; r=+0,90).
Во все сроки исследования в однослойном столбчатом эпителии
в надъядерных участках обнаружены нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины.
Матка ячих относится к типу двурогих, стенка ее состоит из трех
оболочек: слизистой, мышечной и серозной. На слизистой оболочке
рогов матки выступают округлые образования величиной с горошину
– карункулы, которых насчитывается в каждом роге от 42 до 48 штук.
Слизистая оболочка матки (карункулы и межкарункулярные участки) покрыта однослойным столбчатым эпителием, их ядра имеют
округло-овальную форму и находятся на разных уровнях. Высота эпителия в эструсе составляет 11,94±0,15 микрометра, в прогестероновую фазу - 9,82±0,21мкм (Р<0,001; r=+0,89), в один месяц стельности
- 8,0±0,18мкм (Р<0,001; r=+0,99).
Железы матки в эструсе доходят до мышечной оболочки, покрыты однослойным столбчатым эпителием высотой 8,46 ± 0,17 микрометра, имеющим округло-овальные ядра, располагающиеся не на одном уровне. Высота гландулоцитов в прогестероновую фазу составляет 10,52±0,18мкм (Р<0,001; r=+0,84), в один месяц стельности 10,66±0,19 мкм (Р<0,001; r=+0,90).
В гистохимическом отношении в покровном эпителии матки отмечается незначительное количество гликогена и нейтральных гликопротеинов. Сиалогликопротеинов в стенках матки не обнаруживается.
27
Эпителий слизистой оболочки матки ячихи в три месяца стельности в межкарункулярных участках местами отсутствует, а сохранившийся эпителий слизистой рога-плодовместилища низкостолбчатый и
столбчатый с ядрами, которые находятся не на одном уровне высотой 12,6±0,17мкм (Р<0,001; r=+0,32).
В гистохимическом отношении в клетках покровного эпителия отмечаются гликоген и нейтральные гликопротеины. В тканевых базофилах выявляются кислые сульфатированные углеводно-белковые соединения. В мышечных клетках, в стенках вен выявляется гликоген. Кислые сульфатированные и нейтральные гликопротеины отмечаются в
стенках кровеносных сосудов. В эпителии септ и крипт нейтральные,
кислые сульфатированные и сиалогликопротеины не обнаруживаются.
Покровный эпителий межкарункулярных участков слизистой оболочки
матки ячихи в пять месяцев беременности имеется не по всей поверхности. Эпителий слизистой матки контактирует с хориальным эпителием.
Высота гландулоцитов составляет 15,92±0,19 мкм (Р<0,001; r=+0,44).
Септы и крипты карункулов выстланы однослойным низкостолбчатым эпителием высотой 15,0±0,18мкм (Р<0,001; r=+0,99), среди которых выявляются одноядерные гигантские клетки. В строме септ
отмечается много кровеносных сосудов. Ворсинки хориона покрыты
низкостолбчатым эпителием. В соединительной ткани ворсинок проходит много кровеносных сосудов, так же, как и в строме карункула.
В соединительной ткани карункула отмечаются тканевые базофилы.
Гликоген и нейтральные гликопротеины выявляются в цитоплазме
клеток покровного эпителия. В апикальных участках железистых клеток и в секрете их выявляются нейтральные гликопротеины.
В роге-плодовместилище и в свободном роге матки ячих в восемь месяцев стельности крипты карункулов выстланы однослойным
низкостолбчатым эпителием. Ворсинки хориона также покрыты однослойным низкостолбчатым эпителием, среди которых отмечаются
гигантские клетки. Плацента ячих считается эпителиохориальной и к
концу беременности она становится десмохориальной.
Высота эпителия яйцеводов в эструсе, в среднем составляет16,02±0,19 мкм, в прогестероновую фазу цикла - 19,04±0,21 мкм
(Р<0,001; r= +0,87),стельность 1 месяц - 18,14±0,24 мкм (Р<0,001; r=
-0,04), в 3 месяца -17,5±0,22 мкм (r= +0,42), 8 месяцев -15,5±0,16 мкм
(Р<0,05; r= +0,18).
Высота эпителия яичников в эструсе составляет 20,38±0,19 мкм,
в прогестероновую фазу - 25,1±0,22 мкм (Р<0,001), стельность 1 ме28
сяц -25,9±0,33 мкм (Р<0,001), стельность 3 месяца – 17,18±0,29 мкм
(Р<0,05), стельность 8-9 месяцев -15,08±0,17 мкм (Р<0,01).
Диаграмма 4 - Высота покровного эпителия слизистой оболочки
влагалища, шейки матки, матки, яйцеводов и яичников ячих
при различных физиологических состояниях (мкм)
mkm
50
Влагалище
40
Шейка матки
30
Матка
20
Гландулоциты
10
Яйцеводы
0
1
2
3
4
5
группы
6
Яичники
1 – эструс; 2 – прогестероновая фаза; 3 – стельность 1-1,5 мес.; 4 – стельность 3 мес.; 5 – стельность 5 мес.; 6 – стельность 8 мес.
2.6. Оплодотворяемость коров под влиянием экзогенных
фолликулина, фоллимага и прогестерона
В результате применения половых гормонов наибольший эффект
получен при совместном введении прогестерона на фоне фолликулина, фоллимага и прогестерона.
Данные таблицы 2 свидетельствуют, что достоверное повышение оплодотворяемости выявлено при применении фоллимага и прогестерона. Экзогенная инъекция половых гормонов обеспечивает
83,3% оплодотворяемости в первую половую охоту против 60,0% в
контрольной группе.
Таблица 2 – Влияние фоллимага и прогестерона на оплодотворяемость
коров и телок в учебно-опытном хозяйстве «Байкал» (п=22)
1 осеменение
3
Оплодотворяемость
Р% ± mр
60,0±21,9
Р
Фоллимаг
4
66,6±19,3
Р<0,05
Прогестероновая
Фоллимаг - прогестероновая
4
5
80,0±17,8
83,3±15,2
Р<0,05
Р<0,05
Группы
Контрольная
Анализ полученных данных сведенных в диаграмму, свидетельствует, что достоверное повышение оплодотворяемости выявлено при
сочетанном применении фолликулина и прогестерона. Экзогенная инъекция половых гормонов обеспечивает 77,7% оплодотворяемости в
первую половую охоту против 47,5% в контрольной группе. Существен29
ная разница, выявленная по эффективности осеменения во второй и
третьей группах, составила соответственно 60,0% и 69,75 при биометрическом прогнозировании оказалась также достоверной в сравнении с животными контрольной группы.
У коров, которым были введены экзогенные половые гормоны,
была взята кровь для определения содержания эстрадиола, прогестерона, фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов.
Продолжительность цикла составила 21,6±0,81 дней. Концентрация
эстрадиола составила в эструсе 16,2 пкг/мл, прогестерона – 5,6 нг/мл,
концентрация ФСГ в эструсе 1,7 нг/мл и на 4-5-й день после осеменения составила 0,3 нг/мл.
Полученные данные свидетельствуют, что при определении способа стимуляции коров, устранении ановуляторных половых циклов,
снижении эмбриональной смертности следует учитывать уровень концентрации эстрадиола и прогестерона.
Диаграмма 5 - Оплодотворяемость коров после первого осеменения в
учебно-опытном хозяйстве «Байкал» (отд. №2 с. Гурульба, n=389)
Группа контрольных коров (осеменилось 47,5%)
Группа коров с введением фолликулина
(осеменилось 60%)
40%
47,50%
52,50%
60%
Группа коров с сочетаннымвведением
фолликулина и прогестерона (осеменилось
77,7%)
Группа коров с введением прогестерона
(осеменилось 69,7%)
22,30%
30,30%
69,70%
77,70%
30
ВЫВОДЫ
1. Половой тракт крольчих, коров и ячих подвергается значительным гистоморфологическим и гистохимическим изменениям в течение полового цикла, при стельности и под влиянием половых гормонов.
2. Эпителий влагалища крольчих однослойный столбчатый, у коров – многослойный. Наибольшей высоты эпителиоциты у крольчих
достигают под влиянием фолликулина, у коров эпителиальный пласт
более толстый при сочетанном воздействии фолликулина и прогестерона, при этом увеличивается количество кубических и столбчатых
клеток в поверхностном слое. Одновременно происходит накопление
гликогена и других углевод-содержащих биополимеров.
3. Цервикальный эпителий крольчих и коров однослойный столбчатый. Под влиянием половых гормонов, особенно при их совместном применении, высота эпителиоцитов увеличивается, усиливаются
процессы секреции, сопровождающиеся накоплением нейтральных,
кислых сульфатированных и сиалогликопротеинов.
4. Покровный эпителий матки крольчих однослойный столбчатый.
Под воздействием фолликулина, прогестерона и особенно при их совместном применении высота эпителиоцитов достоверно увеличивается с нарастанием содержания гликогена. Покровный эпителий матки коров через семь дней после осеменения частично разрушается.
Сохранившиеся эпителиоциты в «фолликулин-прогестероновой» группе почти в два раза выше, чем в контрольной группе. В их цитоплазме
отмечается значительное накопление гликогена.
5. Маточные железы крольчих и коров выстланы однослойным
столбчатым эпителием. Диаметр желез и высота гландулоцитов у
крольчих значительно увеличиваются под действием прогестерона и
совместном применении фолликулина и прогестерона, у коров – при
сочетанном использовании половых гормонов. При этом нарастает
содержание гликогена в цитоплазме гландулоцитов.
6. Активность ядер покровного и железистого эпителия матки
крольчих повышается в «прогестероновой» и «фолликулин-прогестероновой» группах. У коров наибольшей активности ядра покровных
эпителиоцитов достигают под действием фолликулина, прогестерона
и их сочетанного применения.
7. Наибольшая толщина эпителия влагалища у коров и ячих отмечается в эстрогенную фазу, меньше слоев клеток выявлено в прогестероновую фазу и при стельности. В эстрогенную фазу цикла и при
ранней стельности поверхность слизистой покрыта многослойным
31
плоским эпителием, а в прогестероновую фазу и к концу стельности в
эпителии слизистой краниальной части влагалища обнаруживаются
низкостолбчатые и столбчатые клетки. В эпителии влагалища в поверхностных слоях многослойного плоского эпителия в половом цикле и при стельности содержатся гликоген, нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины. В низкостолбчатых и столбчатых клетках выявляются нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины и сиаловые кислоты.
8. Слизистая оболочка шейки матки коров и ячих покрыта однослойным столбчатым эпителием. Высота эпителиальных клеток увеличивается в стадию эструс, прогестероновую фазу и при стельности. Цитоплазма эпителиальных клеток шейки матки и секрет, находящийся в шейке матки содержат нейтральные, кислые сульфатированные и сиалогликопротеины.
9. Покровный эпителий матки коров и ячих однослойный столбчатый. На ранних стадиях стельности и у коров, и у ячих маточный
эпителий подвергается разрушению под действием ферментов хориального эпителия и восстанавливается во второй половине стельности. У коров и ячих в эстрогенную фазу цикла отмечается большое
количество гликогена и нейтральных гликопротеинов, в прогестероновую фазу выявлено снижение содержания гликогена, на ранних стадиях содержится много гликогена, а в более поздние сроки стельности
гликогена немного. К концу стельности в апикальных участках цитоплазмы клеток покровного эпителия выявляются как нейтральные, так
и кислые сульфатированные гликопротеины. Маточные железы у коров и ячих выстланы однослойным столбчатым эпителием, в цитоплазме которых отмечаются нейтральные и кислые сульфатированные гликопротеины. С нарастанием срока стельности увеличивается
диаметр желез. Сиалогликопротеины в матке коров и ячих как в половом цикле, так и при стельности не выявляются.
10. В собственно слизистой матки у коров и ячих отмечаются
тканевые базофилы. При стельности, особенно к ее концу, их количество резко снижается.
11. Плацента коров и ячих является эпителиохориальной и только
к концу стельности в ней появляются незначительные участки с десмо-хориальным типом строения.
12. В условиях сельхозпредприятий, молочно-товарных комплексов, ферм Республики Бурятия, независимо от форм собственности и
технологий содержания, кормления и эксплуатации, нарушения функ32
ции органов репродуктивной системы регистрируют, в среднем, у 20,2
– 30,0 % коров; в структуре репродуктивных нарушений преобладают
гипофункция яичников, эндометриты, задержание последа и другие
формы гинекологической патологии.
13. На воспроизводительные способности крупного рогатого скота большое влияние оказывают эмбриональные потери, протекающие
без особых патологических симптомов и составляют 34,2–39,8 процентов. Одним из основных факторов, снижающих репродуктивную
функцию коров, является нарушение динамического равновесия половых гормонов. Проведение биотехнологических мероприятий, активизирующих репродуктивную функцию (эструс и поддержание функции желтого тела) с применением различных экзогенных препаратов,
позволяет повысить показатели оплодотворяемости коров, в т.ч. за
счёт снижения эмбриональных потерь. Многочисленные варианты предовуляторного гормонального дисбаланса, приводящего к нарушению
процесса спонтанной и индуцированной овуляции, сводятся в конечном счёте к сдвигу пика ЛГ. Введение в режимы обработок с целью
регуляции репродуктивной функции фолликулина, фоллимага и прогестерона приводит к оптимизации параметров пика ЛГ.
14. Полученные данные обосновывают необходимость при определении способа регуляции функциональной активности яичников учитывать уровень концентрации прогестерона. Индуцирование охоты у
здоровых коров эффективно при концентрациях от 3,7 до 4,7 нг/мл.
Использование фоллимага при низкой функциональной активности яичников эффективно при значениях не ниже 0,5 нг/мл.
15. Исследованиями по стимуляции функции яичников установлено, что для этой цели наиболее эффективен комплекс препаратов прогестерона в сочетании с эстрогенными препаратами. Регламентировать режимы обработок следует таким образом, чтобы первая овуляция произошла не ранее 21 дня после отела. Скрытые морфофункциональные нарушения в эндометрии, способствующие нецелесообразному выбросу маточного простагландина, приводят к эмбриональной гибели. Введение прогестагенных препаратов коровам на 4-5-10й дни после осеменения повышает оплодотворяемость и снижает эмбриональные потери.
16. Оплодотворяемость коров после первого осеменения в фолликулиновой группе составила 60,6%, в прогестероновой группе – 69,7%, в
фолликулин-прогестероновой – группе 77,7% против 47,5% в контроле.
Результаты проведенных исследований показывают, что приме33
нение гормональных препаратов в животноводстве корректирует половой цикл, снижает эмбриональную смертность на ранних сроках
стельности, так называемые «критические периоды», когда эмбрион
особенно раним, устраняет ановуляторные половые циклы.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Внедрены в производство (хозяйства Республики Бурятия) научные исследования по диссертационной работе «Морфофункциональная характеристика половой системы продуктивных животных при
различных физиологических состояниях, под влиянием половых гормонов и их влияние на оплодотворяемость», утвержденные научнотехническим советом Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Бурятия (протокол № 1 от 23.03.2011г.).
2. По результатам исследований разработана и утверждена научно-техническим советом Управления Ветеринарии Республики Бурятия (протокол № 7 от 27.09.2011г.) рекомендация «Влияние гормональных препаратов на морфофункциональное состояние половых органов
и оплодотворяемость коров». – Улан-Удэ, 2011.
3. Коровам, многократно проявляющим половую цикличность, применять сочетанно 0,05 % масляный раствор фолликулина в день осеменения и 1 % масляный раствор прогестерона на 4-й и 10-й дни в
дозе 10 мл после осеменения с целью снижения эмбриональной смертности, профилактики ановуляторных половых циклов.
4. Для коррекции функциональной деятельности яичников и матки, повышения оплодотворяемости коровам вводить препарат фоллимаг в дозе 1000 И.Е. и 1 % масляный раствор прогестерона на 4-й
день после осеменения.
5. Материал диссертационной работы рекомендуем использовать
при написании учебников, справочников, изданий атласов по гистологии, в учебном процессе при проведении лекционных и практических
занятий по анатомии, гистологии и эмбриологии, акушерству и биотехнологии, при изучении курса скотоводства на технологическом
факультете в высших учебных заведениях, в экспериментальной морфологии при выявлении морфологических особенностей в органах репродуктивной системы кроликов, коров и яков.
34
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ
ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Работы, опубликованные в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ
1. Томитова, Е.А. Строение слизистой оболочки полового тракта
крольчих при введении им фолликулина и прогестерона /Е.А. Томитова // Морфология. – 1998. – №3. – С.120.
2. Томитова, Е.А. Изменения гистологических и некоторых гистохимических показателей в слизистой оболочке матки коров под
влиянием фолликулина и прогестерона /Е.А. Томитова, Г.А. Игумнов
// Морфология. – 2000. – № 3. – С.121.
3. Томитова, Е.А. Морфофункциональные изменения в гениталиях коров под воздействием половых гормонов / Е.А.Томитова // Вестник БГСХА, 2005. - Вып 3.- Серия «Ветеринарная медицина». – С.38.
4. Томитова, Е.А. Морфофункциональное состояние половых органов крольчих под влиянием фолликулина и прогестерона / Е.А.Томитова // Вестник БГСХА, 2005. – Вып. 3.- Серия «Ветеринарная
медицина». - С.51.
5. Томитова, Е.А. Коррекция полового цикла экзогенными половыми гормонами и их влияние на оплодотворяемость и морфофункциональное состояние матки коров / Е.А.Томитова // Молочное и мясное скотоводство. – 2008. – № 8. – С.26-28.
6. Томитова, Е.А. Сравнительная гистологическая структура и
гистохимические изменения в половой трубке коров и ячих в половом
цикле / Е.А.Томитова // Международный вестник ветеринарии.- 2009.
– № 1. – С.55-58.
7. Томитова, Е.А. Гистоморфологические и гистохимические изменения в слизистой оболочке матки ячих при различных физиологических состояниях / Е.А.Томитова // Международный вестник ветеринарии. – 2009. – № 3. – С.33-35.
8. Томитова, Е.А. Видовые и возрастные морфофункциональные
особенности тканевых базофилов в органах половой системы самцов
и самок домашних животных / Е.А. Томитова, А.П. Попов // Международный вестник ветеринарии. – 2010. – №2. – С.27-32.
9. Томитова, Е.А. Гистохимия общего белка и SH-групп в эндометрии коров / Е.А. Томитова, А.П. Попов // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. – 2010. – № 8. – С.68-72.
10. Томитова, Е.А. Влияние половых гормонов на морфофункциональное состояние слизистой оболочки матки крольчих / Е.А.Томито35
ва // Ветеринарный врач. – 2010. – №4. – С.46-49.
11. Томитова, Е.А. Гистохимическое выявление углеводных компонентов в слизистой влагалища крольчих и коров под влиянием половых гормонов / Е.А.Томитова, А.П.Попов // Аграрный вестник Урала. – 2010. – №.4. – С.100-102.
12. Томитова, Е.А. Видовые и возрастные морфофункциональные
особенности тканевых базофилов в органах половой системы самцов
и самок домашних животных / Е.А. Томитова, А.П. Попов, И.И. Силкин // Вестник БГСХА им. В.Р. Филиппова. – 2010. – №1. – С.16-22.
Монографии
13. Томитова, Е.А. Гистоморфология и гистохимия половой системы крольчих и коров, оплодотворяемость и снижение эмбриональной смертности у коров под влиянием экзогенных фолликулина и прогестерона / Е.А.Томитова, А.П. Попов // Монография. – Улан- Удэ,
2011. – 135 с.
14. Томитова, Е.А. Сравнительная морфофункциональная характеристика половой системы коров и ячих при различных физиологических состояниях / Е.А. Томитова // Монография. – Улан-Удэ, 2011.
– 140 с.
Рекомендации
15. Томитова, Е.А. Влияние гормональных препаратов на морфофункциональное состояние половых органов и оплодотворяемость коров / Е.А. Томитова // Улан-Удэ, 2011. – 34 с.
Публикации в других изданиях
16. Томитова, Е.А. Гистохимия общего белка в половом тракте
крольчих под влиянием половых гормонов / Е.А.Томитова // Молодые
ученые – сельскому хозяйству Сибири и Дальнего Востока: сб. науч.
докладов зональной науч.-практич. конф. – Улан-Удэ, 1985. – С.15-16.
17. Томитова, Е.А. Морфофункциональные изменения в эндометрии крольчих и свиней под влиянием половых гормонов /Е.А. Томитова, Г.А. Игумнов, Р.З. Сиразиев // Рекомендации для преподавателей
кафедры анатомии «Морфологи Украины – сельскому хозяйству». –
Киев, 1988. – С.54-55.
18. Томитова, Е.А. Гистоморфологические и гистохимические
показатели эндометрия коров под влиянием экзогенных половых гормонов / Е.А. Томитова // Мат-лы науч. конф. морфологов Сибири и
Дал. Востока, 8-9 июня. – Улан-Удэ, 1990. – Вып. 5. – С.74.
19. Томитова, Е.А. Морфологическая картина развития половых
органов у коров черно-пестрой породы в зависимости от сроков пер36
вого осеменения /Е.А. Томитова // Мат-лы докл. конф. проф.-преп.
коллектива, аспирантов, соискателей института и специалистов АПК.
– Барнаул. – 1990. – С.23-24.
20. Томитова, Е.А. Гистоморфология и гистохимия кислых сульфатированных гликопротеинов в эндометрии коров под влиянием экзогенных половых гормонов / Е.А.Томитова // Мат-лы итог. науч. конф.
за 1990 год: Семипалат. ЗВИ. – Семипалатинск, 1991. – С. 68.
21. Томитова, Е.А. Влияние экзогенных фолликулина и прогестерона на оплодотворяемость коров / Е.А. Томитова // Мат-лы III респ.
науч.-практ. конф. мол. учен. и спец. «Задачи молодых ученых в повышении эффективности с.-х. пр-ва». – Алма-Ата, 1991. – С.36-37.
22. Томитова, Е.А. Влияние экзогенных фолликулина и прогестерона на гистохимические и гистоморфологические показатели эндометрия и оплодотворяемость коров / Е.А.Томитова // Мат-лы II регион. науч. конф. морфологов Сибири и Дал. Востока «Возрастная, видовая, адаптационная морфология животных». –Улан-Удэ, 1992. – С.
97-98.
23. Томитова, Е.А. Гистоморфология и активность ядер эпителиоцитов в эндометрии крольчих /Е.А. Томитова // Мат-лы междунар.
науч.-практ. конф. «Актуал. пробл. биологии и вет. медицины мелких
домаш. животных». - Троицк, 2000. – Вып.3. – С.124-125.
24. Томитова, Е.А. Микрометрические показатели слизистой оболочки матки крольчих под действием половых гормонов /Е.А. Томитова // Мат-лы межрегион. науч.-практ. конф. «Теорет. и практ. аспекты ветеринарии и медицины», посвящ. 60-летию образования каф.
гистологии и патанатомиии и 75-летию со дня рождения Г.Ш. Жанчипова. – Улан-Удэ, 2001. – С. 101-102.
25. Томитова, Е.А. Активность ядер эпителиоцитов и гдандулоцитов в эндометрии коров под влиянием половых гормонов /Е.А. Томитова // Мат-лы межрегион. науч.-практ. конф. «Теорет. и практ. аспекты ветеринарии и медицины», посвящ. 60-летию образования кафедры гистологии и патанатомиии и 75-летию со дня рождения Г.Ш. Жанчипова. – Улан-Удэ, 2001. – С.102-103.
26. Томитова, Е.А. О гистологических и гистохимических изменениях в половом тракте крольчих и коров под действием экзогенных
фолликулина и прогестерона /Е.А. Томитова // Мат-лы науч.-практ.
конф., посвящ. 70-летию Бур. ГСХА им. В.Р. Филиппова «Высш. с.-х.
образование, аграр. наука и техника – развитию АПК Байкальского
региона». – Улан-Удэ, 2002. – С. 42-43.
37
27. Томитова, Е.А. Влияние гормональных препаратов на слизистую матки крупного рогатого скота / Е.А.Томитова // Мат-лы междунар. науч. конф. «Возрастная физиология и патология с.-х. животных»,
посвящ. 90-летию проф. В.Р. Филиппова (25-27 июня). – Улан-Удэ, 2003.
– Ч. 1. – С. 92-93.
28. Томитова, Е.А. Гистоструктура, гистохимические и морфологические показатели слизистой матки, шейки матки и влагалища крольчих в норме и под воздействием экзогенных половых гормонов / Е.А.Томитова // Мат-лы междунар. науч.-практ. конф. «Актуал. аспекты
экол., сравнит., видовой, возрастной и эксперим. морфологии», посвящ.
100-летию В.Я. Суетина. – Улан-Удэ, 2004. – С.186-191.
29. Томитова, Е.А. Гистоструктура яйцеводов ячих и коров /Е.А.Томитова // Мат-лы междунар. науч.-практ. конф. «Актуал. аспекты экол.,
сравнит., видовой, возрастной и эксперим. морфологии», посвящ. 100летию В.Я. Суетина. – Улан-Удэ, 2004. – С.192.
30. Томитова, Е.А. Экзогенные гормональные воздействия на
слизистые матки, шейки матки и влагалища и снижение эмбриональной смертности у коров / Е.А. Томитова // Мат-лы междун.науч.-практ.
конф. «Актуал. аспекты экол., сравнит. видовой, возрастной и эксперим. морфологии», посвященной 100-летию В.Я. Суетина. – Улан-Удэ,
2004.– С.311-316.
31. Томитова, Е.А. Гормональный метод как повышение оплодотворяемости и снижение эмбриональной смертности у коров /Е.А.Томитова // Мат-лы VI регион.конф. «Актуал.вопросы ветер.мед.» (2324марта 2006). – Иркутск, 2006. – С.75.
32. Томитова Е.А. Повышение оплодотворяемости коров гормонами яичника / Е.А.Томитова // Мат. науч.-практ. конф.преп.,сотруд.и
аспир., посвящ. 75-лет БГСХА им. В.Р. Филиппова. – Улан-Удэ, 2006.
– С.93.
33. Томитова Е.А. Гистоморфология влагалища ячих и коров /
Е.А.Томитова // Мат-лы междун. науч.-произ. конф. «Актуальные
проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвящ.
100-летию со дня рождения проф. А.А. Авророва (22-23 июня). - Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии. – Воронеж,
2006. – С.55-59.
34. Томитова, Е.А. Гистоморфологические и некоторые гистохимические показатели в слизистой матки ячих / Е.А.Томитова // Матлы межд. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы повышения продуктивности и охраны здоровья животных (19-21 октября) – Ставро38
поль, 2006. – С.97 -101.
35. Томитова, Е.А. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки шейки матки ячих при различных физиологических
состояниях / Е.А. Томитова // Мат-лы межд. науч.-практ. конф. «Состояние и перспективы обеспечения ветеринарного благополучия
Восточной Сибири», посвящ. 45-летию ГНУ НИИ ветеринарии Восточной Сибири СО Россельхозакадемии. – Улан-Удэ, 2008. – С.238.
36. Томитова, Е.А. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки шейки матки ячих в половом цикле и при беременности /Е.А. Томитова // Мат-лы науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы инвазионной и инфекционной патологии животных», посвящ. 70летию образования кафедры паразитологии, эпизоотологии и ОВД
факультета ветеринарной медицины БГСХА им. В.Р. Филиппова. –
Улан-Удэ, 2008. – С. 118-119.
37. Томитова, Е. А. Морфофункциональное состояние половых
органов крольчих под воздействием гонадальных гормонов /Е.А.Томитова // Мат-лы науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной науки и практики Сибири», посвящ. 85-летию РГУ ветеринарии БРНПВЛ. – Улан-Удэ, 2011. – С.111-113.
38. Томитова, Е. А. Морфофункциональное состояние половых
органов коров под влиянием фолликулина и прогестерона в эструсе и
на 5-й день после осеменения / Е.А. Томитов // Мат-лы науч.-практ.
конф. «Актуальные проблемы ветеринарной науки и практики Сибири», посвящ. 85-летию РГУ ветеринарии БРНПВЛ. – Улан-Удэ, 2011.
– С.113-119.
39. Томитова, Е. А. Морфофункциональное состояние половых
органов ячих при различных физиологических состояниях / Е.А. Томитова, Р.М. Шагдуров // Мат-лы науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной науки и практики Сибири», посвящ. 85-летию РГУ
ветеринарии БРНПВЛ. – Улан-Удэ, 2011. – С. 119–124.
39
Подписано в печать 16.01.2012. Бумага офс. №1. Формат 60х84 1/16.
Усл.печ.л. 2,0. Тираж 100. Заказ №
Цена договорная.
Издательство ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная
сельскохозяйственная академия им. В. Р. Филиппова»
670034, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8
e-mail: [email protected]
40