НЕЙРОМЕДИАТОРНЫЙ СОСТАВА КОРЫ МОЗЖЕЧКА НА РАЗНЫХ

НЕЙРОМЕДИАТОРНЫЙ СОСТАВА КОРЫ МОЗЖЕЧКА НА РАЗНЫХ
ПОСТМОРТАЛЬНЫХ СРОКАХ
А. И. Шептухина О.А. Ефремова, Л.А. Любовцева
ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова»
Чебоксары, Россия
THE NEUROTRANSMITTER COMPOSITION OF THE CEREBELLAR CORTEX AT
THE DIFFERENT POSTMORTEM TERMS
A.I. Sheptukhina, O.A. Efremova, L.A. Lyubovtseva
The Federal State Educational Establishment of Higher Professional Education «The Chuvash state
university named after I. N. Ulyanov»
Cheboksary, Russia
По данным литературы наиболее чувствительными клетками являются нервные клетки
головного мозга при любых стрессовых ситуациях, в том числе и после гибели человека [4].
Анализ экспериментального материала убеждает в том, что восстановление функций
центральной нервной системы у оживлённых животных происходит в следующей
последовательности: сначала восстанавливается функция продолговатого и спинного мозга,
затем среднего, промежуточного и, наконец, мозжечка и коры больших полушарий. В
процессах умирания организма и при его оживлении и возвращении всех его функций к
нормальному состоянию, главную, ведущую роль играет центральная нервная система [1].
Проблема оживления человека и животных после прекращения сердцебиения и дыхания
представляет большой теоретический и практический интерес [2,3]. Установлено, что после
наступления смерти организма как целого, отдельные ткани и органы в течение некоторого
времени остаются еще жизнеспособными.
Цель исследования - выявить постмортальные особенности локализации нейроаминов в
биоаминсодержащих клетках мозжечка.
Был исследован мозжечок 10 крыс-самцов. Мозжечок изымали под глубоким эфирным
наркозом через 5, 10, 15 мин после смерти животных. Время наступления смерти считалось с
момента остановки дыхания.
Свежезамороженные криостатные срезы органов толщиной 15 мкм исследовались
люминесцентно-гистохимическими методами:
1. Фалька-Хилларпа (1969) для выявления моноаминов: катехоламинов и серотонина.
2. Для идентификации гистаминсодержащих структур мозжечка ставили реакцию по Кроссу
и соавт. (1971).
3. С целью определения влияния вегетативной нервной системы в процессе умирания
определяли серотониновый индекс.
4. Метод спектрофлуориметрии использовался для идентификации количественного
содержания нейроаминов в тканевых структурах мозжечка.
5. Статистическую значимость данных оценивали по t-критерию Стьюдента.
При исследовании мозжечка на гистамин, изъятого через 5 мин после установления смерти
животного, клетки выявлялись в молекулярном, ганглионарном и зернистом слоях. В
молекулярном слое определялись единичные, тускло люминесцирующие клетки (табл. 2).
На уровне ганглионарного слоя чётко выявлялась цепочка клеток крупных размеров
различной формы, в том числе и вытянутой грушевидной. Клетки люминесцировали ярким
желтоватым
свечением.
В
некоторых
из
них
просматривались
по
2-3
крупные
разнокалиберные гранулы, которые мы отнесли к ГЛК (рис. 1). Средние числовые
показатели клеток этого слоя составили 6±0,26 на поле зрения.
Рис. 1. Локализация гистамина в структурах мозжечка. а. гранулярная люминесцирующая
клетка. Метод Кросса. ЛЮМАМ – 4. Об. 40. Гомаль 1,7.
Наряду с крупными клетками в этом слое встречались мелкие пылевидные гранулы,
люминесцирующие
тускло
желтоватым
свечением.
Мы
предполагаем,
что
это
дегранулированные нервные клетки. Нами выявлено, что содержание гистамина в клетках
этого слоя составило 2,3 у.е. (табл. 1). В зернистом слое выявлялись мелкие округлые клетки,
люминесцирующие желтоватым свечением. Их число составило 11±0,03 на поле зрения.
При исследовании мозжечка на гистамин, изъятого через 10 мин после смерти животного, на
препарате выявлялась цепочка клеток в основном округлой формы, люминесцирующих уже
тусклым желтоватым свечением. Нами установлено, что содержание гистамина в этих
клетках составило 1,2 у.е. и уменьшилось в 1,9 (p<0,05) раз по сравнению с цитоструктурами
мозжечка изъятого через 5 мин после смерти (табл. 1). Число люминесцирующих клеток
составило 4±0,11 и уменьшилось в 1,5 раза.
При исследовании мозжечка на гистамин изъятого через 15 мин после смерти животного
выявлялась едва различимая цепочка из мелких клеток, люминесцирующих очень тусклым
желтоватым свечением. Нами выявлено, что содержание гистамина в этих клетках составило
1,8 у.е. и имело тенденцию к увеличению в единичных клетках по сравнению с предыдущим
сроком (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 2±0,08 и уменьшилось в 2 раза
по сравнению с предыдущим сроком.
При исследовании мозжечка на гистамин изъятого через 20 мин после смерти животного
люминесцирующие структуры не определялись.
При исследовании мозжечка на КА и серотонин, изъятого через 5 мин после смерти клетки
также выявлялись в молекулярном, ганглионарном и зернистом слоях (табл. 2).
На препарате, на уровне ганглионарного слоя также выявлялась цепочка клеток округлой
формы, люминесцирующих ярким желтоватым свечением. В цитоплазме некоторых из них
просматривались по 2-4 крупные разнокалиберные гранулы. Мы также предполагаем, что
это ГЛК. Средние числовые показатели клеток этого слоя составили 8±0,56 на поле зрения.
В этом же слое выявлялись мелкие распавшиеся клетки, люминесцирующие тусклым
свечением. Содержание КА в клетках этого слоя составило 1,4 у.е., а содержание серотонина
- 1,3 у.е. (табл. 1). В зернистом слое также выявлялись мелкие округлые клетки,
люминесцирующие желтоватым свечением. Их число составило 8±0,29 на поле зрения.
При исследовании мозжечка на КА и серотонин, изъятого через 10 мин после смерти
животного выявлялись различной формы дегранулировавшие клетки, люминесцирующие
также ярким желтоватым свечением. Более мелкие клетки с пылевидными гранулами,
люминесцировали тусклым желтоватым свечением. Содержание КА в клетках этого слоя
составило 1,3 у.е., а содержание серотонина - 1,2 у.е. (табл. 1). Число люминесцирующих
клеток составило 6±0,34 и уменьшилось в 1,3 раза по сравнению с предыдущим сроком.
Таким образом, содержание КА и С по сравнению с цитоструктурами мозжечка изъятого
через 5 мин после смерти не изменилось (p<0,05).
При обработке препаратов на КА и серотонин через 15 мин после гибели крысы выявлялись
одиночные крупные клетки, некоторые из них имели хлопьевидную форму и тускло
люминесцировали. Число люминесцирующих клеток составило 3±0,53 и уменьшилось в 2
раза по сравнению с предыдущим сроком. Содержание КА в этих клетках соответствовало
3,8 у.е., увеличилось в 2,9 раза (p<0,05) по сравнению с цитоструктурами мозжечка изъятого
через 10 мин, а содержание серотонина – 3,5 и возросло в 2,7 раза (p<0,05) (табл. 1).
При исследовании мозжечка на КА и серотонин, изъятого через 20 мин после смерти
животного выявлялись едва различимые распавшиеся клетки, люминесцирующие очень
тусклым желтоватым свечением. Нами выявлено, что содержание КА в этих клетках
составило 3,9 у.е., а содержание серотонина 3,7 и осталось практически без изменений по
сравнению с предыдущим сроком (табл. 1).
Таблица 1.
Интенсивность люминесценции биогенных аминов в структурах
мозжечка (у.е.)
№ Структуры
Гистамин
Серотонин
Катехоламины
1
5 мин
2,3±0,5
1,3±0,01*
1,4±1,2*
2
10 мин
1,2±0,1
1,2±0,02*
1,3±0,03*
3
15 мин
1,8±0,02
3,5±1,0*
3,8±1,2*
4
20 мин
-
3,7±0,5
3,9±0,3
Примечание: Г – гистамин, СТ – серотонин, КА – катехоламины;
Р≤0,05* – по сравнению с контрольной группой.
Таблица 2.
Содержание люминесцирующих структур в мозжечке
Количество клеток, шт.
Структуры
Молекулярный слой
Ганглионарный слой
Зернистый слой
Метод
Метод
Метод
Метод
Метод
Метод
Кросса
Фалька
Кросса
Фалька
Кросса
Фалька
5 мин
2±0,17
10 мин
-
15 мин
-
20 мин
-
1±0,46
-
-
6±0,26
8±0,56
11±0,03
4±0,11
6±0,34
6±0,21
2±0,08
3±0,53
Тени клеток
-
8±0,29
-
-
-
Установлено, что серотониновый индекс в наблюдаемых структурах мозжечка на сроке
извлечения через 5, 10, 15, 20 мин после смерти составил 0,9. Таким образом, нами было
установлено, что на всех сроках в люминесцирующих клетках преобладали катехоламины
над серотонином, из чего следует, что вегетативная нервная система реагирует на умирание
организма, хотя в ней происходит истощение нейроаминов.
4. Выводы
1. Установлено, что содержание гистамина в цитоструктурах мозжечка постепенно
снижается, а к 20 мин после смерти животных не определяются люминесцирующие
структуры.
2. Выявлено, что содержание КА и СТ в отдельных клетках мозжечка со срока 15 мин
увеличивается в 3 раза после смерти.
3. В цитоструктурах мозжечка серотониновый индекс на всех сроках извлечения после
смерти был ниже 1.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Гурвич А.М. Стойкие вегетативные состояния и смерть мозга. - Биомедицинская этика /
Под ред. академика РАМН В.И. Покровского. - М.: Медицина, 1997. - С. 189-197.
[2] Попова Л.М. Смерть мозга при неврологических заболеваниях / Л.М. Попова, И.В.
Мусатова, Н.И. Левченко // Анестезиология и реаниматология. – 1980. - № 5.
[3] Уолкер А.Э. Смерть мозга / Пер. с английского. Под ред. проф. А.М. Гурвича. - М.:
Медицина, 1988.
[4] Kwon W.Y. Niacin Suppresses the Mitogen-Activated Protein Kinase Pathway and Attenuates
Brain Injury After Cardiac Arrest in Rats. / W.Y. Kwon, G.J. Suh, K.S. Kim, H.J. Lee, K.Y. Jeong,
Y.H. Kwak, K. Kim // Crit Care Med. – 2013. - May 2.