Шахрай C.В., Гаин Ю.М., Гаин М.Ю. Белорусская медицинская
advertisement
Шахрай C.В., Гаин Ю.М., Гаин М.Ю. Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск, Беларусь Первый опыт клинического применения мезенхимальных стволовых клеток в лечении свищей прямой кишки ВВЕДЕНИЕ Вопросам лечения свищей прямой кишки в зарубежной и отечественной литературе последние 20 лет посвящено большое количество публикаций. Это связано с отсутствием до сих пор в проктологической практике надежного, безрецидивного способа лечения данной патологии, несмотря на большое количество существующих вариантов оперативного лечения, а также с наличием осложнений в послеоперационном периоде, особенно функционального характера. Анальная инконтиненция в той или иной степени после операций по поводу транссфинктерных и экстрасфинктерных свищей, по данным ряда авторов, имеют место в 7–32% случаев. Сроки послеоперационной реабилитации достигают нескольких месяцев, что, несомненно, влияет на качество жизни пациентов и их социальную и профессиональную реабилитацию, а также несет значительную финансовую нагрузку на органы здравоохранения. Поэтому поиск и внедрение новых методик лечения свищей прямой кишки – актуальный вопрос современной хирургии аноректальной области. ЦЕЛЬ Изучение результатов лечения свищей прямой кишки с использованием аутологичных мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Первичный клинический опыт применения мезенхимальных стволовых клеток в лечении ректальных свищей основывается на результате четырех наблюдений. На первом этапе у пациента параумбиликально производился забор жировой ткани под местной анестезией. Для этого по кожной складке справа или слева от пупка делался дугообразный разрез кожи, острым путем иссекался участок подкожной клетчатки в объеме до 5 мл, который помещался в стерильную пробирку с транспортной средой. В лабораторных условиях жировая ткань дважды промывалась в фосфатном буферном растворе (ФБР), содержащем 100 U/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина. Затем ткань измельчалась острым путем и инкубировалась в течение 40–50 минут в 0,075% растворе коллагеназы I типа («Sigma», Германия) при 37 0С и постоянном помешивании. Нейтрализация активности фермента проводилась равным объемом среды DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС). Образовавшаяся пленка из адипоцитов и супернатанта удалялась, а клеточный осадок, содержащий мезенхимальные стволовые клетки, ресуспензировался и дважды отмывался центрифугированием в ФБР / 5% ФБС (1200 об./мин в течение 10 минут). Количественный выход жизнеспособных клеток определялся при их подсчете в камере Горяева. Осадок ресуспензировался в питательной среде DMEM («Sigma», США) с добавлением 10% ФБС, 2 mM L-глутамина, 100 U/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и засевался в культуральные чашки диаметром 60 мм в концентрации 4 × 104 ядросодержащих клеток на 1 см2 поверхности культурального пластика. Для удаления не прикрепившихся клеток через 24 часа проводилась замена питательной среды. Дальнейшая смена среды производилась каждые четвертые сутки до получения концентрации мезенхимальных стволовых клеток 105 в 1 мл культуры. Для отделения клеток от субстрата после образования в монослое (10–12 дней) использовался 0,25% раствор трипсина – ЭДТА. После разъединения клеток их переводили в суспензию добавлением ростовой среды. Затем клетки осаждали центрифугированием при 1200 об./мин в течение 10 минут. Количественный выход жизнеспособных клеток определялся при их окраске 0,5% раствором трипанового синего и подсчете в камере Горяева. Доза клеток для трансплантации доводилась до 500 тыс./мл. Процесс сепарации и подготовки клеточной массы для трансплантации занимал от 14 до 20 дней. В этот период производилась однократная санация свищевого хода лазерным излучением длиной волны 1560 нм. Процедура парафистулярной выполнялась анестезией следующим 1%-ным раствором образом: под лидокаина инфильтрационной под эхоскопическим трансректальным контролем в просвет свища до внутреннего его отверстия проводился стекловолоконный лазерный световод с дистанционно-радиальным излучением. Под контролем пилотного лазера с красной индикацией производилось наложение кисетного или П-образного шва на внутреннее отверстие свищевого хода. Затем излучением мощностью 8 Вт в постоянном режиме эмиссии обрабатывался просвет свищевого хода при извлечении световода со скоростью 2 мм/сек. При готовности клеточной культуры выполнялось иссечение наружного отверстия и части свища до мышечного слоя. Затем в просвет свища и парафистулярно инъекционно вводилась подготовленная суспензия аутологичных мезенхимальных стволовых клеток в физиологическом растворе хлорида натрия. На одни сутки накладывался провизорный шов, герметизирующий ход свища. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Методика применена у четырех пациентов, у двоих имел место транссфинктерный ход свища, у оставшихся – экстрасфинктерный, что подтверждалось до операции рентгенологически и эхоскопически. Заживление раны у всех пациентов проходило без осложнений. Раневой процесс завершился рубцеванием в сроки от 3 до 5 недель, что зависело от толщины подкожной клетчатки. Наблюдение за пациентами в течение шести месяцев не выявило рецидива процесса. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Первичные результаты применения мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани в лечении свищей прямой кишки позволяют говорить о перспективности применяемой методики и необходимости проведения дальнейших наблюдений и исследований.
