014433 B1 014433 014433 B1 B1

Евразийское
патентное
ведомство
(19)
(13)
B1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ
(45)
Дата публикации
и выдачи патента:
2010.12.30
(21)
Номер заявки:
200800963
(22)
Дата подачи:
2006.10.11
(54)
EGFR-ЗАВИСИМАЯ МОДУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ХЕМОКИНОВ, ВЛИЯНИЕ НА ТЕРАПИЮ И ДИАГНОСТИКУ ОПУХОЛЕЙ И ЕЁ ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ
Изобретатель:
Суттер Арне, Беренс Джойс (DE)
(74)
Представитель:
(57)
(56)
MASCIA, F. ET AL.: "Blockade of
the EGF receptor induces a deranged
chemokine expression in keratinocytes
leading to enhanced skin inflammation",
AMERICAN
JOURNAL
OF
PATHOLOGY, vol. 163, no. 1, July 2003
(2003-07), pages 303-312, XP002410413,
the whole document
CABIOGLU, N. ET AL.: "CCR7 and
CXCR4 as novel biomarkers predicting
axillary lymphnode metastasis in T1 breast
cancer", CLIN CANCER RES, vol. 11, no.
16, 15 August 2005 (2005-08-15), pages
5686-5693, XP002410414, page 5686
PASTORE, S. ET AL.: "ERK1/2 regulates epidermal chemokine expression and
skin inflammation", THE JOURNAL OF
IMMUNOLOGY, vol. 174, 2005, pages
5047-5056, XP002410415, the whole
document
Изобретение относится к диагнозу и терапии опухолей, использующих рецептор фактора роста
эпидермиса (рецептор EGF), с помощью химических ингибиторов или моноклональных антител.
Изобретение относится также к раздражениям кожи, предпочтительно к кожной сыпи, вызванным и связанным с воздействием противораковыми средствами на опухолевые клетки, использующие рецептор EGF. Изобретение направлено также на способы прогнозирования у пациента
эффективности противоопухолевой терапии/реакции опухоли, основанные на применении ингибиторов рецептора EGF, в особенности антител к рецептору EGF. Далее изобретение относится к
способу определения оптимальной дозы противоракового средства в терапии опухолей, связанных с рецепторами EGF.
B1
Липатова И.И., Рыбаков В.М., Новоселова
С.В., Дощечкина В.В., Хмара М.В. (RU)
(51) Int. Cl. G01N 33/50 (2006.01)
G01N 33/574 (2006.01)
014433
(72)
B1
014433
(12)
(31) 05022127.4
(32) 2005.10.11
(33) EP
(43) 2008.10.30
(86) PCT/EP2006/009837
(87) WO 2007/042286 2007.04.19
(71)(73) Заявитель и патентовладелец:
МЕРК ПАТЕНТ ГМБХ (DE)
014433
(11)
014433
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к диагностике и терапии опухолей, использующих рецептор фактора роста эпидермиса (epidermal growth factor, EGF), с помощью химических ингибиторов или моноклональных антител. Изобретение относится также к раздражениям кожи, предпочтительно к кожной
сыпи, сопутствующим и связанным с лечением опухолей, использующих рецептор EGF, противоопухолевыми средствами. Изобретение также направлено на способы прогнозирования эффективности для
пациента противоопухолевой терапии/реакции опухоли при лечении ингибиторами рецептора EGF, в
особенности антителами к рецептору EGF. Далее изобретение относится к способу определения оптимальной дозы противоопухолевого средства при лечении опухолей, связанных с рецептором EGF. Изобретение относится и к способам раннего мониторинга эффективности лечения рака, связанного с рецептором EGF, ингибиторами рецептора EGF и вероятности появления раздражений кожи как сопутствующего побочного заболевания, связанного с указанным лечением. Наконец, изобретение направлено на
использование хемокинов, которые регулируются со стимуляцией или с подавлением при лечении рака
противораковым средством, как диагностических маркеров или как средства идентификации новых мишеней для лечения опухолей.
Предшествующий уровень техники
Было выяснено, что рецептор EGF, кодируемый геном erbB1, вовлечен в причинно-следственную
связь в опухолевых процессах у человека. В частности, повышенная экспрессия рецептора EGF была
обнаружена при раке груди, мочевого пузыря, легких, головы, шеи и желудка, а также в глиобластомах.
Повышенная экспрессия рецептора EGF часто связана с повышенной продукцией теми же опухолевыми
клетками лиганда рецептора EGF (трансформирующего фактора роста альфа, TGF-α), что приводит к
активации рецептора по аутокринному пути стимуляции (Baselga and Mendelsohn//Pharmac. Ther. 1994. т.
64. с. 127).
Рецептор EGF - это трансмембранный гликопротеин с молекулярным весом 170000, обнаруженный
во многих типах клеток эпителия. В настоящее время известны 7 лигандов рецептора EGF, которые, связываясь с рецептором, защищают опухолевые клетки от апоптоза, стимулируют клеточную пролиферацию и инвазивность опухолевых клеток. Эти факторы роста не связываются с другими тремя представителями семейства рецепторов EGF (HER2, HER3 и HER4), которые вместе с рецептором EGF могут образовывать гетеродимеры (Riese and Stern//Bioassays. 1998. т. 20. с. 41-48; Kochupurakkal//J. Biol. Chem.
2005. т. 280. с. 8503-8512). Сеть рецепторов HER может интегрировать не только свою собственную информацию, но и также гетерологичные сигналы, в том числе гормоны, лимфокины, нейротрансмиттеры и
индукторы стресса.
Было разработано несколько мышиных и крысиных моноклональных антител к рецепторам EGF,
была испытана их способность ингибировать рост опухолевых клеток in vitro и in vivo (Modjtahedi and
Dean//J. Oncology. 1994. т. 4. с. 277). В клинических испытаниях была продемонстрирована эффективность "очеловеченных" моноклональных антител 425 (hMAb 425, патент США № 5558864; патент ЕР
0531472) и химерных моноклональных антител 225 (cMAb 225), оба они специфичны к рецептору EGF.
Было установлено, что антитела С225 (Cetuximab) ингибируют опосредованный EGF рост опухолевых
клеток in vitro и ингибируют образование человеческих опухолей у мышей "nude" in vivo. Эти антитела,
как и вообще все антитела к рецепторам EGF, действуют по большей части синергидно с определенными
химиотерапевтическими средствами (т.е. с доксорубицином, адриамицином, таксолом и цисплатином),
уничтожая опухоли человека in vivo в мышиных моделях с ксенотрансплантатами (см., например, ЕР
0667165). Ye и др. (//Oncogene. 1999. т. 18. с. 731) установили, что клетки рака яичника человека можно
успешно лечить комбинацией химерных антител MAb 225 и очеловеченных антител MAb 4D5, специфичных к рецептору HER2.
Кроме антител к рецепторам EGF имеется больше число небольших химических молекул, известных как эффективные ингибиторы молекул рецепторов EGF, по большей части блокирующие сайты связывания АТФ с рецепторами. Термин "антагонист/ингибитор тирозин-киназы" относится согласно настоящему изобретению к природным или синтетическим агентам, способным ингибировать или блокировать тирозин-киназы, в том числе через рецепторы тирозин-киназ. Таким образом, этот термин включает как таковые антагонисты/ингибиторы рецепторов EGF, как они определены выше. За исключением
указанных выше и далее антител к рецепторам EGF, наиболее предпочтительными агентамиантагонистами тирозин-киназ по этому определению являются химические соединения, проявляющие
эффективность в монолекарственной терапии, например, рака груди и простаты. Подходящими ингибиторами тирозин-киназ типа индолкарбазолов могут быть ингибиторы, полученные на основании информации, содержащейся в таких документах, как патенты США № 5516771, 5654427, 5461146, 5650407. Патенты США № 5475110, 5591855, 5594009 и документ WO 96/11933 раскрывают применение ингибиторов
тирозин-киназ типа пирролокарбазолов при раке простаты. В этом контексте одним из наиболее ранних
противораковых средств является гефитиниб (gefitinib, IRESSA®, Astra Zeneca), для которого отмечена
терапевтическая эффективность у пациентов с раком легких, не связанным с малыми клетками (non-small
cell lung cancer, NSCLC), а также при развитом раке головы и шеи.
-1-
014433
Термин "использование" или "использует" в связи с рецептором EGF имеет два значения:
(i) он отражает тот факт, что рецептор вовлечен в процесс передачи сигнала. Экспрессия рецептора
EGF является необходимым, но недостаточным предварительным условием того, что передача сигнала
произойдет. Здесь важны доступность и количество доступных лигандов. В соответствии с этим, степень
экспрессии рецептора часто не находится в прямой корреляции с использованием рецептора;
(ii) он отражает тот факт, что развитие опухоли решающим образом зависит от использования рецептора EGF.
Используются или разрабатываются несколько агентов, нацеленных на этот рецептор, в том числе
моноклональные антитела (такие, как cetuximab) и ингибиторы тирозин-киназ (такие, как erlotinib и gefitinib). Наиболее обычное побочное действие, общее для ингибиторов рецепторов EGF, состоит в появлении угревидной сыпи, обычно на лице и верхней части туловища. Кожная сыпь появляется у 45-100%
пациентов, у большинства пациентов быстро возникает, различима приблизительно после 7-10 дней лечения и достигает максимума через 2-3 недели (Robert и др.//Lancet Oncol. 2005. т. 6. с. 491). Для ряда
агентов (включая cetuximab и erlotinib) была установлена прямая зависимость между интенсивностью
сыпи и результатом лечения и/или выживаемостью, что делает сыпь потенциальным маркеромзаменителем для тестирования противоопухолевой активности (Perez-Soler and Saltz//J. Clin. Oncol. 2005.
т. 23. с. 5235).
Лежащие в основе появления кожной сыпи механизмы неясны. У взрослых рецептор EGF первоначально экспрессируется в пролиферирующих, недифференцированных кератиноцитах базального слоя
эпидермиса и внешнем слоя корней волосяных фолликул (Nanney и др.//J. Invest. Dermatol. 1984. т. 83. с.
385). Изменения в экспрессии и активности рецептора EGF связывали с ненормальными ростом и дифференцировкой эпидермиса (Murillas R. и др.//EMBO J. 1995; Sibilia М. и др.//Cell. 2000; King L.E. и
др.//J. Invest. Dermatol. 1990).
Кератиноциты - это слоистые, чешуйчатые клетки эпителия, которые составляют кожу и слизистую, в том числе эпителий ротовой полости, пищевода, роговицы, конъюнктивы и гениталий. Кератиноциты образуют барьер между организмом хозяина и окружающей средой. Они предотвращают проникновение токсических веществ из окружающей среды и потерю важных компонентов из организма.
Дифференцировка кератиноцитов происходит, как только они переходят из базального слоя в поверхностный слой кожи. Нормальное время оборота для кератиноцитов составляет около 30 дней, однако оборот эпидермиса может быть ускоренным при некоторых заболеваниях кожи, таких как псориаз.
Патологическими анализами биопсий кожи пациентов было установлено, что блокада рецептора
EGF приводит к истончению рогового слоя и способствует инфильтрации воспалительных клеток (в том
числе нейтрофилов и Т-лимфоцитов) в дермальную ткань, в особенности в волосяные фолликулы (Robert
и др.//Lancet Oncol. 2005. т. 6. с. 491; Van Doom и др.//Br. J. Dermatol. 2002. т. 147. с. 598). Кроме того,
пути передачи сигнала, связанные с рецептором EGF, подавлялись в коже, что позволяет предположить,
что направленная на подавление рецептора EGF терапия прямо воздействует на физиологию эпидермиса.
Например, gefitinib, небольшое химическое соединение (Iressa®) вызывает регуляцию со стимуляцией
маркера подавления роста и созревания в базальном слое эпидермиса. Поэтому возможно, что арест клеточного цикла и созревание кератиноцитов вызывают появление кожной сыпи, поскольку измененная
дифференцировка кератиноцитов может приводить к наблюдаемой у пациентов закупорке фолликул (Albanell и др.//J. Clin. Oncol. 2002. т. 20. с. 110). В качестве альтернативы, предполагается, что развитие
кожной сыпи может быть прямым следствием изменения путей экспрессии цитокинов в коже, что аналогично предположению о функциях рецептора EGF как регулятора с отрицательной обратной связью,
предотвращающего избыточное воспаление в хронически воспаленной коже in vivo (Mascia F. и др.//Am.
J. Pathol. 2003).
Хемокины представляют собой семейство структурно родственных гликопротеинов с высокой способностью к активации лейкоцитов и/или хемотаксической активностью. Они имеют длину от 70 до 90
аминокислот и молекулярный вес приблизительно от 8 до 10 кДа. Большинство из них попадают в два
подсемейства с четырьмя остатками цистеина. Разделение на эти подсемейства зависит от того, непосредственно ли прилегают друг к другу два концевых остатка цистеина или они разделены одной аминокислотой. Хемокины, известные также как хемокины СХС, содержат одну аминокислоту между первым
и вторым остатком цистеина; хемокины В или СС имеют прилегающие друг к другу остатки цистеина.
Большинство хемокинов СХС являются хемоаттрактантами для нейтрофилов, а хемокины СС в основном привлекают моноциты, лимфоциты, базофилы и эозинофилы. Имеются также 2 другие небольшие
подгруппы. Группа С состоит из одного представителя (лимфотактина). У него в четырех-цистеиновом
лейтмотиве утрачен один из цистеинов, но его карбоксильный конец гомологичен хемокинам С-С. Хемокин С, по-видимому, является специфичным к лимфоцитам. Четвертая подгруппа - это подгруппа СХ3-С. Хемокин С-Х3-С (фракталкин/нейротактин) содержит между двумя первыми цистеинами три аминокислотных остатка. Он прикреплен непосредственно к клеточной мембране длинным муциновым мостиком и индуцирует и адгезию, и миграцию лейкоцитов.
Изобретение основано на принципиальном обнаружении того, что воздействие на связанные с рецептором EGF опухоли противоопухолевыми средствами, предпочтительно ингибиторами рецептора
-2-
014433
EGF, вызывает специфические модуляции особенности экспрессии хемокинов в ткани кожи, а также в
ткани соответствующей опухоли или в сыворотке пациента. Хемокины в указанной ткани или сыворотке
могут регулироваться с подавлением или стимуляцией в зависимости от природы и количества использованного в терапии противоопухолевого средства.
К настоящему времени не имеется четких рекомендаций для эффективного устранения сыпи при
лечении связанных с рецепторами EGF опухолей, несмотря на то, что оптимальное устранение важно,
особенно если надлежит применять ингибиторы рецепторов EGF на ранней стадии заболевания, при более высоких дозах и/или в течение более длительных периодов времени. На основании имеющихся результатов было, во-первых, сделано предположение, что модулированные пути экспрессии цитокинов в
коже являются полезными маркерами для прогнозирования появления кожной сыпи у пациентов на ранних стадиях противоракового лечения, что позволит врачам нейтрализовать сыпь до ее появления.
Во-вторых, высказано предположение, что модулированные пути экспрессии цитокинов в коже являются более надежными, чем кожная сыпь, маркерами-заменителями для оценки эффективного угнетения мишени (и вследствие этого, по-видимому, и клинического эффекта), поскольку кроме модуляции
цитокинов кожная сыпь зависит от состояния индивидуальной иммунной системы пациента. Поэтому
пациентов можно обследовать в течение первой недели лечения, чтобы точно указать пациентов с малой
вероятностью успеха противоопухолевой терапии и позволить клиницистам перейти на альтернативные
способы лечения.
Далее, высказано предположение, что специфические агенты, такие как блокирующие рецепторы
хемокинов агенты, которые препятствуют опосредованной хемокинами хемоаттракции, индуцированной
блокированием рецепторов EGF, могут являться новыми терапевтическими средствами для нейтрализации побочных действий в виде заболеваний кожи, связанных с лечением зависящих от рецептора EGF
опухолей. Эти средства следует предпочтительно применять местно, поскольку их действие на кожу может отражаться на опухоли.
Сущность изобретения
В итоге согласно изобретению предложено следующее.
Способ прогнозирования появления и интенсивности раздражения кожи, предпочтительно кожной
сыпи, связанной или коррелирующей с противораковой терапией для пациента, причем способ включает:
(i) определение в первой пробе ткани кожи особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным
против опухолевых клеток, которые используют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор EGF);
(ii) определение во второй пробе кожи, полученной у указанного пациента (предпочтительно из того же участка кожи), особенностей экспрессии хемокинов, причем эту пробу берут в момент времени
после начала лечения указанным противораковым средством (предпочтительно через 1-10 дней, более
предпочтительно через 1-7 дней, наиболее предпочтительно через 5-7 дней);
(iii) по усмотрению определение в третьей и последующих пробах кожи особенностей экспрессии
хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответствующую предыдущую
пробу этапа (ii);
(iv) сопоставление соответствующих особенностей экспрессии хемокинов в пробах кожи из этапа
(ii) и, по усмотрению, из этапа (iii), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе кожи из этапа (i) и
определение того, для каких хемокинов изменились их качество и/или количество в пробах (ii) и (iii) по
сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (i) или в соответствующей предшествующей пробе;
(v) прогнозирование на основании изменений в особенностях экспрессии хемокинов интенсивности
и появления на более поздней стадии заболевания кожи, запускаемого лечением противораковым средством.
В том случае, когда изменений в особенностях экспрессии хемокинов нет или эти изменения незначительны в течение периода времени 5-10 дней, предпочтительно 7 дней, тогда, согласно находкам настоящего изобретения, вероятность появления кожных заболеваний, особенно кожной сыпи, вызванных
лечением противораковым средством, не очень высока.
Соответствующий способ прогнозирования реакции опухоли у пациента, имеющего рак, на лечение
противораковым средством, причем способ включает:
(i) определение в первой пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами,
причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против
опухолевых клеток, которые используют/сверхэкспрессируют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор EGF);
(ii) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым
средством;
(iii) по усмотрению определение в третьей и последующих пробах ткани особенностей экспрессии
хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответствующую предыдущую
пробу этапа (ii);
-3-
014433
(iv) сопоставление соответствующих особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа
(ii) и, по усмотрению, из этапа (iii), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе кожи из этапа (i) и
определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ii) и (iii) по
сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (i) или в соответствующей предшествующей пробе;
(v) прогнозирование на основании изменений в особенностях хемокинов в указанных пробах ткани
вероятности и интенсивности реакции опухоли у пациента на лечение указанным противораковым средством.
Согласно настоящему изобретению было неожиданно обнаружено, что тип экспрессии хемокинов
и, соответственно, его относительное изменение не только в ткани опухоли, но и в ткани кожи пациента
коррелирует с реакцией опухоли.
Способ определения оптимальной дозы противоракового средства для лечения рака у пациента,
причем способ включает:
(i) определение в первой пробе ткани кожи или ткани опухоли особенностей экспрессии хемокинов
стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством,
направленным против опухолевых клеток, которые используют/сверхэкспрессируют рецептор фактора
роста эпидермиса (рецептор EGF);
(ii) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым
средством;
(iii) по усмотрению определение в третьей и последующих пробах ткани особенностей экспрессии
хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответствующую предыдущую
пробу этапа (ii);
(iv) сопоставление соответствующих особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа
(ii) и, по усмотрению, из этапа (iii), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе ткани из этапа (i) и
определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ii) и (iii) по
сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (i) или в соответствующей предшествующей пробе;
(v) определение дозировки подлежащего введению пациенту противоракового средства в соответствии с изменениями в особенностях экспрессии хемокинов в указанных пробах ткани; и по усмотрению
(vi) повторение этапов с (i) по (v), чтобы оптимизировать дозировку подлежащего введению пациенту противоракового средства.
В том случае, когда нет модуляции или изменения в особенностях экспрессии хемокинов или эти
модуляция или изменения незначительны в пробах, полученных до начала лечения и после 1-10 дней,
предпочтительно после 7 дней, либо прекращают дальнейшее лечение противораковым средством, либо,
в качестве альтернативы, дозировка может увеличиваться, пока не будут наблюдаться изменения в особенностях экспрессии хемокинов.
Предлагаются также:
соответствующий способ, причем пробу в этапе (ii) отбирают в пределах 1-10 дней после начала
лечения указанным противораковым средством;
соответствующий способ, причем пробу в этапе (ii) отбирают в пределах 2-7 дней после начала лечения указанным противораковым средством;
соответствующий способ, где противораковым средством является ингибитор рецептора EGF;
соответствующий способ, где ингибитором рецептора EGF являются антитела к рецептору EGF;
соответствующий способ, где антителами к рецептору EGF являются антитела Mab c225 (cetuximab)
или Mab h425 (EMD72000, matuzumab);
соответствующий способ, где лечение противораковым средством вызывает по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению, повышенную экспрессию хемокинов, таких как RANTES;
соответствующий способ, где лечение противораковым средством вызывает по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению, сниженную экспрессию хемокинов, таких как IL-8;
соответствующий способ, где участвует по меньшей мере один из следующих хемокинов: IL-8,
МСР-1, RANTES и IP-10;
способ раннего мониторинга in vitro эффективности терапии у пациента рака, использующего/сверхэкспрессирующего рецептор EGF, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах
ткани кожи и/или ткани опухоли и/или в сыворотке пациента с опухолью, взятых перед началом лечения
и в течение первых 1-10 дней лечения противораковым средством;
способ раннего мониторинга in vitro возникновения раздражения кожи, предпочтительно кожной
сыпи, в связи с терапией у пациента рака, который использует/сверхэкспрессирует рецептор EGF, путем
определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи пациента с опухолью, взятых перед
началом лечения и в течение первых 1-7 дней лечения противораковым средством, предпочтительно ингибитором рецептора EGF, более предпочтительно антителами к рецептору EGF, такими как Mab с225
(cetuximab) или Mab h425 (EMD72000, matuzumab), причем предпочтительно используется по меньшей
-4-
014433
мере один из следующих хемокинов: IL-8, МСР-1, RANTES и IP-10;
использование хемокинов, которые регулируются in vivo со стимуляцией или ингибированием в
ходе лечения рака противораковым средством, в качестве диагностического маркера для определения
эффективности указанного лечения и/или вероятности появления раздражений кожи, предпочтительно
кожной сыпи, сопровождающих указанное лечение, где указанный рак использует/сверхэкспрессирует
рецептор EGF, а указанное противораковое средство представляет собой ингибитор рецептора EGF,
предпочтительно антитела к рецептору EGF, такие как Mab c225 (cetuximab) или Mab h425 (EMD72000,
matuzumab);
использование хемокинов, которые регулируются in vivo со стимуляцией или ингибированием в
ходе лечения рака противораковым средством, для идентификации мишени, предшествующей указанной
экспрессии хемокинов, пригодной для разработки и производства лекарства, нацеленного на указанную
мишень, для лечения у пациента рака, который использует/сверхэкспрессирует рецептор EGF, при использовании лекарства самого по себе или в комбинации с указанным противораковым средством, причем указанное противораковое средство представляет собой ингибитор рецептора EGF, предпочтительно
антитела к рецептору EGF, такие как Mab c225 (cetuximab) или Mab h425 (EMD72000, matuzumab).
Настоящее изобретение в ходе экспериментальной работы показало, что блокирование рецептора
EGF, например, моноклональными антителами, такими как Mab c225 (cetuximab) или Mab h425 (matuzumab), или ингибиторами тирозин-киназы (gefitinib, Iressa®) препятствует осуществлению в первичных
кератиноцитах зависящих от рецептора EGF сигнальных каскадов. В этих опытах кератиноциты обрабатывали различными концентрациями ингибиторов рецептора EGF с последующей обработкой, или без
нее, TGF-α или TNF-α в течение приблизительно 24 ч. Действие ингибиторов рецептора EGF оценивали
с помощью вестерн-блотирования.
Как показано на фиг. 1, обработка агентами против рецептора EGF препятствует фосфорилированию рецептора EGF и ERK1/2, измеряемому с помощью вестерн-блот анализа обработанных кератиноцитов. Как показано на фиг. 2, обработка агентами против рецептора EGF препятствует индукции белка
СОХ-2. Кроме того, после обработки агентами против рецептора EGF индуцировалось фосфорилирование STAT3.
В опытах было показано, что обработка первичных кератиноцитов модулирует экспрессию хемокинов in vitro. Секретируемые хемокины определяли в культуральной среде кератиноцитов, которые были
обработаны агентами против рецептора EGF в течение 24 ч. Измерения проводили с помощью технологии с гранулами Luminex. В этих опытах кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецептора EGF, а
затем обрабатывали или не обрабатывали TGF-α или TNF-α. Из нескольких хемокинов IL-8 неизменно
подавлялся в ответ на блокаду рецептора EGF (фиг. 3), тогда как экспрессия RANTES и IP-10 стимулировалась (фиг. 4 и 5).
IL-8 является фактором стимуляции ангиогенеза, это позволяет предположить, что ингибирование
его экспрессии препятствует образованию кровеносных сосудов в коже. Наоборот, RANTES и IP-10 были описаны как факторы хемоаттракции для лейкоцитов. Это позволяет предположить, что их усиленная
экспрессия (и, возможно, также и других хемокинов) индуцирует инфильтрацию лейкоцитов в кожу, что
вызывает воспаление и, в конечном итоге, кожную сыпь.
Согласно настоящему изобретению, модулированный характер экспрессии хемокинов в ответ на
блокаду рецептора EGF в кератиноцитах и ткани опухоли (с активной сигнальной функцией рецептора
EGF) приводит к миграции/хемоаттракции лейкоцитов, которую можно ингибировать агентами/лекарствами, препятствующими действию этих хемокинов. Опыты включают анализ хемотаксиса, в
котором культуральную среду кератиноцитов собирают после обработки в течение 24 ч ингибиторами
рецептора EGF и стимуляции (или отсутствия стимуляции) TGF-α или TNF-α. Культуральную среду помещают в нижний отсек камеры Бойдена (Boyden), а в верхний отсек камеры Бойдена помещают свежевыделенные клетки РВМС или гранулоциты. Затем определяют хемотаксис клеток крови, измеряя в определенные моменты времени количество клеток РВМС или гранулоцитов в нижнем отсеке. В некоторых опытах клетки РВМС или гранулоциты предварительно активируют in vitro, чтобы повысить миграционную активность клеток.
Согласно настоящему изобретению можно показать, что хемокины в культуральной среде вызывают хемотаксис клеток РВМС и гранулоцитов и что это является частью биологической реакции, наблюдаемой при кожной сыпи.
Чтобы продемонстрировать, что за явления хемотаксиса ответственны конкретные хемокины, в
культуральную среду в нижнем отсеке камеры Бойдена добавляют специфические ингибиторы рецепторов хемокинов и оценивают хемотаксис в сравнении с культуральной средой без добавок.
Более того, было установлено, что хемотаксис индуцируется взаимодействием хемокинов с рецепторами хемокинов и что блокирование этого взаимодействия антагонистами рецепторов хемокинов препятствует хемотаксису клеток крови.
Модуляция экспрессии хемокинов в ответ на блокаду рецепторов EGF приводит к миграции/хемоаттракции лейкоцитов в кожу мышей. Кроме того, может быть проанализирована инфильтрация
-5-
014433
лейкоцитов и установлена ее корреляция с экспрессией хемокинов. Согласно настоящему изобретению
было далее показано, что уровни экспрессии хемокинов в коже мышей модулируются после обработки
ингибиторами рецепторов EGF и что эта модуляция сопровождается инфильтрацией лейкоцитов. Было
установлено, что системное введение антагонистов рецепторов хемокинов препятствует инфильтрации
лейкоцитов в кожу животных, получавших терапию ингибиторами рецепторов EGF, и таким путем ослабляет или устраняет развитие кожной сыпи.
Согласно настоящему изобретению индивидуумам можно вводить агенты против рецепторов EGF,
пока не появятся первые признаки токсичности для кожи, и затем можно проводить местное лечение пораженной кожи агентами против рецепторов хемокинов, чтобы предотвратить инфильтрацию лейкоцитов и снизить токсичность для кожи.
Местное нанесение на кожу антагонистов рецепторов хемокинов снижает инфильтрацию лейкоцитов и токсичность для кожи. Предполагается, что эти средства могут применяться в клинической практике для лечения кожной сыпи у пациентов, получающих лечение ингибиторами рецепторов EGF.
Было установлено, что появление кожной сыпи коррелировало с восприимчивостью пациентов к
терапии ингибиторами рецепторов EGF, поэтому характер экспрессии хемокинов является более подходящим индикатором, чем сама по себе кожная токсичность, и может быть использован как диагностический показатель для оценки восприимчивости пациента к терапии ингибиторами рецепторов EGF. Это
может способствовать точному определению в течение первой недели лечения тех пациентов, для которых можно ожидать успеха в лечении ингибиторами рецепторов EGF.
Молекулярные изменения в уровнях экспрессии хемокинов в коже пациентов можно проанализировать в течение первой недели или первых 10 дней после начала лечения антагонистами рецепторов EGF,
чтобы определить, подверглась ли модуляции экспрессия хемокинов в ответ на блокаду рецепторов EGF.
Это можно сделать, анализируя биопсии кожи перед лечением и в ходе лечения. Уровни экспрессии хемокинов модулируются в ответ на терапию антагонистами рецепторов EGF, и степень модуляции может
служить диагностическим показателем для прогнозирования того, будет ли пациент восприимчив к лечению. Предполагается, что для пациентов, у которых не обнаруживается или обнаруживается в малой
степени модуляция экспрессии хемокинов, лечение проводится неоптимальными дозами антагонистов
рецепторов EGF и что дозы следует повышать до тех пор, пока не проявится модуляция. В качестве альтернативы, если такое решение не принято, пациентам без модуляции экспрессии хемокинов может быть
предоставлено другое лечение.
Открытая авторами модуляция играет в данном контексте важную роль в развитии кожной сыпи и
поэтому может быть использована как
диагностический маркер для прогнозирования на ранних стадиях появления кожной сыпи у пациентов с опухолями;
маркер-заменитель для оценки эффективности ингибирования мишени в опухолях (и поэтому, возможно, также и исхода лечения), особенно для точного отбора на ранних стадиях после начала лечения
тех пациентов, для которых маловероятен успех лечения антагонистами рецепторов EGF;
индикатор для разработки новых способов лечения кожной сыпи с использованием средств местного применения, которые препятствуют хемоаттракции хемокинов, индуцированной блокадой рецепторов
EGF;
средство модуляции хемокинов в окружении опухолей, подавления вызванного опухолями воспаления и роста опухоли ингибиторами рецепторов EGF (cetuximab = c225, matuzumab = EMD72000 =
h425) и другими средствами.
Не существует биомаркеров, предсказывающих реакцию пациентов с опухолями на терапию антителами cetuximab. Однако при трех симптомах (рак толстой и прямой кишки, рак поджелудочной железы
и карцинома чешуйчатых клеток головы) наблюдалась достоверная корреляция между интенсивностью
угревидной кожной сыпи, индуцированной лечением cetuximab, и реакцией опухоли. При стандартной
лечебной дозе у пациентов либо не наблюдалась сыпь, либо наблюдалась сыпь различной интенсивности
(градации I-III), это указывало на то, что интенсивность воспалительного процесса в коже, индуцированного антителами cetuximab, определяется иммунным статусом индивидуальных пациентов и, следовательно, указывает на то, что иммуномодулирующая активность антител cetuximab является фактором,
лежащим в основе наблюдаемых реакций опухолей. Передвижение и клеточный фенотип иммунных клеток регулируются хемокинами, причем определенные наборы хемокинов проявляют специфическую для
типов клеток активность.
В настоящем изобретении предполагается, что ингибирование в карциномах процесса передачи
сигнала рецепторами EGF вызывает изменения в окружающих карциному хемокинах и воздействует на
воспалительный статус опухоли, приводя вследствие этого к ингибированию роста опухоли. Согласно
настоящему изобретению регуляция экспрессии хемокинов в клетках опухоли и первичных кератиноцитах in vitro происходит одинаковым образом. Что касается кератиноцитов, были проведены опыты, которые показали, что блокирование рецепторов EGF моноклональными антителами, такими как cetuximab
или EMD72000, или ингибиторами тирозин-киназы (gefitinib, Iressa®) препятствует осуществлению связанных с рецепторами EGF сигнальных каскадов в различных линиях опухолевых клеток, таких как
-6-
014433
А431, представляющих различные опухолевые симптомы.
В ходе экспериментальной работы было показано, что обработка линий опухолевых клеток (таких,
как А431) модулирует экспрессию хемокинов in vitro. Опухолевые клетки обрабатывали агентами - антагонистами рецепторов EGF, после чего проводилась обработка (или не проводилась) TGF-α или TNF-α.
В культуральной среде опухолевых клеток, отбираемой через 24 ч, определяли секретируемые хемокины. Определения проводили по технологии с гранулами Luminex.
Подобно данным для первичных кератиноцитов, в ответ на блокаду рецепторов EGF в опухолевых
клетках наблюдалась модуляции экспрессии некоторых цитокинов. Неизменно наблюдалось ингибирование экспрессии IL-8 (фиг. 6), тогда как в опухолевых клетках, обработанных ингибиторами рецепторов
EGF, происходила стимуляция экспрессии RANTES и IP-10 (фиг. 7 и 8).
Взятые вместе, эти данные позволили предположить, что ингибиторы рецепторов EGF модулируют
в кератиноцитах и опухолевых клеток одинаковые пути передачи сигналов. Это подкрепляет идею о том,
что кожа, кератиноциты и, более точно, уровни экспрессии хемокинов могут быть использованы как индикаторы-заменители для прогнозирования эффективности терапии антагонистами рецепторов EGF у
раковых пациентов.
Модуляцию уровней экспрессии IL-8 оценивали в наборе различных линий опухолевых клеток. Было установлено, что экспрессия неизменно подавлялась в ответ на блокаду рецепторов EGF (фиг. 9). Это
позволяет предположить, что уровни экспрессии IL-8 являются биоиндикатором эффективности терапии
антагонистами рецепторов EGF. Предполагается оценивать уровни экспрессии IL-8 в крови пациентов,
получавших лечение антагонистами рецепторов EGF, и использовать снижение уровней экспрессии в
качестве диагностического показателя для мониторинга фармакодинамического действия агентов - антагонистов рецепторов EGF.
Как указано выше, модулированный характер экспрессии хемокинов в ответ на блокаду рецепторов
EGF в ткани опухоли (с активной сигнальной функцией рецепторов EGF) приводит к миграции/хемоаттракции лейкоцитов.
Опыты включали анализ хемотаксиса, где культуральную среду опухолевых клеток собирали после
обработки в течение 24 ч ингибиторами рецепторов EGF и стимуляции (или без стимуляции) TGF-α или
TNF-α. Культуральную среду помещают в нижний отсек камеры Бойдена, а в верхний отсек помещают
свежевыделенные клетки РВМС или гранулоциты. Затем определяют хемотаксис клеток крови, измеряя
в определенные моменты времени количество клеток РВМС или гранулоцитов в нижнем отсеке. В некоторых опытах клетки РВМС или гранулоциты предварительно активируют in vitro, чтобы повысить миграционную активность клеток. Эти опыты показывают, что хемокины в культуральной среде вызывают
хемотаксис клеток РВМС и гранулоцитов.
Как один из результатов изобретения, специфические хемокины, ответственные за явления хемотаксиса, специфические ингибиторы рецепторов хемокинов добавляют в культуральную среду в нижнем
отсеке камеры Бойдена и оценивают хемотаксис в сравнении с культуральной средой без добавок. Хемотаксис индуцируется взаимодействием хемокинов с рецепторами хемокинов и блокада этого взаимодействия антагонистами рецепторов хемокинов препятствует хемотаксису клеток крови.
Опыты включают исследования in vivo, в которых мышам с опухолями вводили агенты - антагонисты рецепторов EGF. Модуляцию уровней экспрессии хемокинов в опухолях анализировали в течение
первой недели лечения агентами - антагонистами рецепторов EGF. Уровни экспрессии хемокинов модулировались так же, как это наблюдалось in vitro. Кроме того, в опухолях анализировали инфильтрацию
лейкоцитов, и антагонисты рецепторов EGF индуцируют инфильтрацию лейкоцитов в опухоль, а также
их статус активности/дифференцировки. Мониторинг последнего можно осуществлять по IHC маркеров
клеточной активации/дифференцировки. На основании корреляции между кожной сыпью и реакцией на
лечение высказано предположение, что модуляция экспрессии хемокинов имеет место как в коже, так и в
опухоли и что это является частью механизма действия агентов - антагонистов рецепторов EGF.
Согласно настоящему изобретению предполагается, что широкий мониторинг изменений в профилях экспрессии хемокинов в опухолях после ингибирования и без ингибирования рецепторов EGF и сопоставление наблюдаемых изменений с известными специфическими клеточными действиями хемокинов в иммунной системе обеспечивают первые критерии, в соответствии с которыми можно определить,
какие внутриопухолевые хемокины и какие лейкоциты могут участвовать в иммунном контроле роста
опухоли. На основании этой информации можно идентифицировать другие более ранние терапевтические мишени в метаболических путях, контролирующих помимо рецепторов EGF экспрессию хемокинов, которые индуцируют опосредованные иммунной системой противоопухолевые эффекты, не зависящие от ингибирования рецепторов EGF, или же с целью усилить противоопухолевой действие терапии с
помощью антагонистов рецепторов EGF. Таким образом, становится возможным объяснить изменения в
характере экспрессии хемокинов в опухолях после ингибирования сигнальной функции рецепторов EGF.
Наблюдаемые при терапии антагонистами рецепторов EGF изменения характера экспрессии хемокинов
являются до определенной степени опухолеспецифичными.
-7-
014433
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Ингибирование зависящих от рецептора EGF путей передачи сигналов в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
клетки лизировали и анализировали методом вестерн-блотирования. Анализами было обнаружено, что
обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к нарушению направляемых рецепторами EGF сигнальных каскадов, и этот эффект зависит от дозы. Обработка ингибиторами рецепторов EGF предотвращает фосфорилирование рецептора EGF (Tyr 1068) и ERK1/2 (Thr 202/204).
Фиг. 2. Ингибирование зависящих от рецептора EGF путей передачи сигналов в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
клетки лизировали и анализировали методом вестерн-блотирования. Анализами было обнаружено, что
обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к нарушению направляемых рецепторами EGF сигнальных каскадов, и этот эффект зависит от дозы. Обработка ингибиторами рецепторов EGF индуцирует
экспрессию СОХ-2 и предотвращает фосфорилирование STAT3.
Фиг. 3. Модулирование уровней секреции IL-8 в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии IL-8
с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к подавлению экспрессии IL-8 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 4. Модулирование уровней секреции RANTES в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии
RANTES с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к подавлению экспрессии RANTES и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 5. Модулирование уровней секреции IP-10 в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии IP-10
с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к подавлению экспрессии IP-10 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 6. Модулирование уровней секреции IL-8 в клетках А431.
Клетки А431 обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии IL-8
с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к подавлению экспрессии IL-8 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 7. Модулирование уровней секреции RANTES в клетках А431.
Клетки А431 обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии
RANTES с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к подавлению экспрессии RANTES и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 8. Модулирование уровней секреции IP-10 в клетках А431.
Клетки А431 обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab, Matuzumab или Iressa) и
стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (TGF-α или TNF-α). Через 24 ч
собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии IP-10
с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов EGF приводит к подавлению экспрессии IP-10 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 9. Модулирование уровней секреции IL-8 в различных линиях опухолевых клеток.
Различные линии опухолевых клеток (DiFi, НТ29, А431, MCF-7, РС-3 и U87MG) обрабатывали ингибиторами рецепторов EGF (Cetuximab или Matuzumab) и стимулировали TGF-α. Через 24 ч собирали
клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии IL-8 с использованием технологии Luminex. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов
EGF приводит к подавлению экспрессии IL-8 с зависимостью от дозы во всех исследованных линиях
опухолевых клеток.
-8-
014433
Уровни экспрессии IL-8 в ответ на действие Cetuximab (Cmab) или Matuzumab (Mmab)
Клетки обрабатывали Cmab или Mmab (100 нг/мл) и стимулировали TGF-α (100 нг/мл).
Число опытов = 1.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ прогнозирования у пациента, имеющего раковое заболевание, реакции опухоли на лечение противораковым средством, причем способ включает:
(i) определение в первой пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами,
причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против
опухолевых клеток, которые используют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор EGF);
(ii) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым
средством;
(iii) по усмотрению определение в третьей и последующей пробе ткани особенностей экспрессии
хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответственную предыдущую
пробу этапа (ii);
(iv) сопоставление соответственных особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа
(ii) и, по усмотрению, из этапа (iii), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе ткани из этапа (i) и
определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ii) и (iii) по
сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе этапа (i) или в соответственной предшествующей пробе;
(v) прогнозирование на основании изменений в особенностях экспрессии хемокинов в указанных
пробах ткани вероятности и интенсивности реакции опухоли у пациента на лечение указанным противораковым средством.
2. Способ определения оптимальной дозы противоракового средства для лечения рака у пациента,
причем способ включает:
(i) определение в первой пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами,
причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против
опухолевых клеток, которые используют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор EGF);
(ii) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем эту пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым средством;
(iii) по усмотрению определение в третьей и последующей пробе ткани особенностей экспрессии
хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответственную предыдущую
пробу этапа (ii);
(iv) сопоставление соответственных особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа
(ii) и, по усмотрению, из этапа (iii), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе ткани из этапа (i) и
определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ii) и (iii) по
сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (i) или в соответственной предшествующей
пробе;
(v) определение дозировки подлежащего введению пациенту противоракового средства в соответствии с изменениями в особенностях экспрессии хемокинов в указанных пробах ткани; и по усмотрению,
(vi) повторение этапов с (i) по (v), чтобы оптимизировать дозировку подлежащего введению пациенту противоракового средства.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанную пробу получают из ткани опухоли.
4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанную пробу получают из ткани кожи.
5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что пробу в этапе (ii) берут в пределах
1-10 дней после начала лечения указанным противораковым средством.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что пробу в этапе (ii) берут в пределах 5-7 дней после начала
лечения указанным противораковым средством.
7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что противораковым средством является ингибитор рецептора EGF.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что ингибитором рецептора EGF является антитело к рецеп-9-
014433
тору EGF.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что антитело к рецептору EGF представляет собой Mab c225
(cetuximab) или Mab h425 (EMD72000, matuzumab).
10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает повышение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
11. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает снижение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что участвует по меньшей мере один из следующих хемокинов: IL-8, MCP-1, RANTES и IP-10.
13. Способ раннего мониторинга in vitro эффективности лечения у пациента рака, использующего
рецептор EGF, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи и/или ткани
опухоли, и/или в сыворотке пациента с опухолью до начала и в течение первых 1-10 дней лечения противораковым средством.
14. Способ раннего мониторинга in vitro появления раздражения кожи, связанного с лечением у пациента рака, использующего рецептор EGF, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи пациента с опухолью до начала и в течение первых 1-7 дней лечения противораковым
средством.
15. Способ по п.13 или 14, отличающийся тем, что противораковым средством является ингибитор
рецептора EGF.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что ингибитором рецептора EGF является антитело к рецептору EGF.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что антитело к рецептору EGF представляет собой Mab c225
(cetuximab) или Mab h425 (EMD72000, matuzumab).
18. Способ по любому из пп.13-17, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает повышение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
19. Способ по любому из пп.13-17, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает снижение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
20. Способ по любому из пп.13-19, отличающийся тем, что участвует по меньшей мере один из следующих хемокинов: IL-8, MCP-1, RANTES и IP-10.
21. Применение хемокинов, экспрессия которых при лечении рака противораковым средством регулируется in vivo со стимуляцией или с подавлением, в качестве диагностического маркера in vitro для
определения эффективности указанного лечения и/или вероятности появления раздражений кожи, связанных с указанным лечением, причем указанный тип рака использует рецептор EGF, а указанное противораковое средство - это ингибитор рецептора EGF.
22. Применение хемокинов, экспрессия которых при лечении рака противораковым средством регулируется in vivo со стимуляцией или с подавлением, для идентификации мишени, предшествующей
указанной экспрессии хемокинов, пригодной для разработки и производства лекарства, нацеленного на
указанную мишень, для лечения у пациента рака, использующего рецепторы EGF, с применением этого
лекарства самого по себе или в комбинации с указанным противораковым средством, где указанное противораковое средство - это ингибитор рецептора EGF.
23. Применение по п.21 или 22, где указанным противораковым средством является антитело Mab
c225 (cetuximab) или Mab h425 (EMD72000, matuzumab).
Фиг. 1
- 10 -
014433
Фиг. 2
Фиг. 3
Фиг. 4
- 11 -
014433
Фиг. 5
Фиг. 6
- 12 -
014433
Фиг. 7
Фиг. 8
Фиг. 9
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
- 13 -