ИЗУЧЕНИЕ УСЛОВИЙ ИЗОЛИРОВАНИЯ АФОБАЗОЛА ИЗ

ИЗУЧЕНИЕ УСЛОВИЙ ИЗОЛИРОВАНИЯ
АФОБАЗОЛА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ
В.А. Кнауб, Н.Н. Кнауб, Е.С. Козлова, В.Б. Русинович
г. Барнаул
Афобазол – производное 2-меркаптобензимидазола, селективный анксиолитик, не относящийся к классу агонистов бензодиазепиновых рецепторов. Препятствует развитию мембранозависимых изменений в ГАМК-рецепторе.
Препарат обладает анксиолитическим действием с активирующим компонентом, не сопровождающимся гипноседативными эффектами. Применяется при генерализованных
тревожных расстройствах, неврастениях, расстройствах
адаптации, у больных с различными соматическими заболеваниями. При передозировке и интоксикации возможно
развитие седативного эффекта и повышенной сонливости
без проявлений миорелаксации. Период полувыведения
препарата при приеме внутрь состав-ляет 0,82 часа.
По химической структуре афобазол является 5-этокси-2[2-(морфолино)-этилтио] бензимидазола дигидрохлоридом.
Представляет собой белый или белый с кремовым оттенком
кристаллический порошок, легко растворим в воде, растворим в спирте, мало растворим в хлороформе, практически
нерастворим в эфире.
Препарат разрешен к применению в качестве средства
безрецептурного отпуска. Несмотря на малую токсичность
199
афобазола (LD50 у крыс составляет 1,1 г при ED50 0,001)
(Милкина С.Е., Степаненко О.Б., Грушевская Л.Н. и др.,
2006), в практической деятельности токсикологических лабораторий наблюдались случаи отравлений данным препаратом.
Афобазол в химико-токсикологическом отношении не
изучен, поэтому целью нашего исследования явилась разработка условий экстракции его из биологических объектов.
Материалы и методы
Изучение процессов экстракции афобазола из водных
растворов проводили, используя универсальные буферные
растворы со значением рН среды от 3 до 12. Анализ препарата осуществляли методами УФ-спектрофотометрии
(Shimadzu UV Mini 1240) и высоко-эффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Условия хроматографического
анализа: жидкостный микроколоночный хроматограф
“Милихром–А–02”, колонка «Prontosil 120-5 C18 AQ» (2х75
мм). В качестве подвижной фазы использовали: элюент А
– раствор кислоты трифторуксусной (ТФУ) 0,1%, элюент
Б – ацетонитрил 100%. Хроматографирование проводили
при градиенте концентраций ацетонитрила от 0 до 100%,
при скорости потока 150 мкл/мин и температуре колонки 35
о
С, детектировали при 220, 230, 240, 250, 260, 280, 300 нм,
продолжительность анализа составила 25 мин. Обработку
данных осуществляли с помощью программы «Мультихром
Спектр». Для исследований использовали спиртовой раствор афобазола с концентрацией действующего вещества
1 мг/мл. Идентификацию афобазола проводили по времени
и объему удерживания, спектру абсорбции и спектральным
отношениям относительно базовой длины волны 200 нм.
Расчет количественного содержания препарата проводили
по калибровочному графику.
Результаты и обсуждение
С целью создания оптимальных условий изолирования
афобазола из биологических объектов изучали процессы
экстракции препарата из водных растворов в зависимости
200
Выход афобазола (%)
от рН среды и природы органического растворителя. Различные значения рН среды создавали с использованием
универсальной буферной смеси. В качестве экстрагентов
использовали диэтиловый эфир, хлороформ и н-гексан.
После экстракции органический растворитель отделяли,
испаряли досуха на водяной бане, сухой остаток растворяли в 95% этиловом спирте и исследовали методом УФспектрофотометрии при 302 нм. Зависимость степени
экстракции афобазола от природы органического растворителя и значения рН среды водной фазы представлена на
рис. 1.
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
3
3,9
5,1
6,3
Хлороформ
7,3
8,1
Эфир
9,2
10
10,9 12,3 рН
Гексан
Рис. 1. Зависимость степени экстракции афобазола от природы органического растворителя и значения рН среды
Результаты проведенных исследований свидетельствуют
о том, что оптимальное зна-чение рН среды водной фазы
для извлечения афобазола в хлороформ находится в пределах 4 – 11 (максимально 86,1% при рН 10,0). Максимальная
экстракция препарата в диэтиловый эфир достигается в ин201
тервале значений рН 6 – 10 (максимально 79,4% при рН 10).
Использо-вание н-гексана в качестве экстрагента нецелесообразно ввиду низкого выхода афобазола (менее 3%) вне
зависимости от значения рН среды. Учитывая полученные
результаты, в дальнейших экспериментах в качестве экстрагента использовали хлороформ, извлечение проводили
при рН=10.
Идентификацию и количественное определение афобазола проводили методом ВЭЖХ (рис. 2).
Рис. 2. Хроматограмма спиртового раствора афобазола (100 мкг/мл)
Как видно из приведенной хроматограммы, время удерживания афобазола составило 7’20” (рис.2). Анализ спектральной кривой показал, что афобазол имеет выраженный
максимум абсорбции при 302 нм (рис. 3).
202
Рис. 3. Спектр абсорбции афобазола
Объем удерживания, спектральные отношения афобазола представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Параметры удерживания и спектральные отношения
для афобазола
Время
Объем
удерживания удерживания
(мин)
(мкл)
7’20”
1093,14
220
Спектральные отношения
(относительно канала 210 нм)
230
240
250 260
280
300
0,762 0,410 0,375 0,333 0,201 0,276 0,708
Полученные данные использовали для изолирования
афобазола из ткани печени по методу А.А. Васильевой,
Карташова В.А. (Карташов В.А., Кнауб В.А., Чернова Л.В.,
1988) и экстракцией хлороформом из мочи при рН=10,0.
Эксперименты проводили на модельных образцах по методикам, описанным в литературе. Полученные извлечения
исследовали методом ВЭЖХ в условиях, описанных ранее.
На хроматограммах наблюдали пики с параметрами удер203
живания и спектральными отношениями соответствующими стандартному образцу афобазола. Расчет количественного содержания препарата проводили по калибровочному
графику.
В результате проведенных исследований было установлено, что метод изолирования по Карташову В.А. позволяет
извлечь 60,8±6,3% афобазола из ткани печени. Метод Васильевой А.А. дает меньший выход препарата - 44,5±9,6%.
Прямая экстракция афобазола из мочи хлороформом при
рН=10,0 обеспечивает выход 85,7±0,9%.
Заключение
1. Установлено, что оптимальными условиями извлечения афобазола из мочи является экстракция хлороформом при рН среды 10,0.
2. Проведена сравнительная оценка эффективности
изолирования афобазола из ткани пече-ни методами
Васильевой А.А. и Карташова В.А.. Доказано преимущество использования ацетонового метода для
изолирования афобазола.
Список литературы
1.Карташов В.А., Кнауб В.А., Чернова Л.В. Извлечение
азотсодежащих органических оснований из ткани печени //
Судебно-медицинская эпертиза, -1988. - №4. –С. 31-33.
2.Милкина С.Е., Степаненко О.Б., Грушевская Л.Н. и др.
Анализ и стандартизация нового отечественного анксиолитического средства афобазол // Химико-фармацевти-ческий
журнал. 2006. - Том 40, №7, С. 55-56.
3.Справочник Видаль [Электронный ресурс] // Лекарственные препараты в России. URL: http: www.vidal.ru/
afobazol.htm
4.Токсикологическая химия: учебник/Т.Х. Вергейчик;
под ред. Проф. Е.Н. Вергейчика.-3-е изд., -М.: МЕДпрессинформ, 2012-432 с.