FertiCult IVF/FIV Среда для культивирования эмбрионов человека

реклама
FertiCult IVF/FIV
Среда для культивирования эмбрионов человека «in vitro» в течение первых 48 часов.
Документ FP09I07R01B.1. Дата издания 21/03/2011
Общая информация
FertiCult IVF/FIV – готовая к использованию среда для культивирования «in vitro» ранних эмбрионов
человека. Специально разработана для кратковременного культивирования (до 48 часов) эмбрионов
человека. Среда полностью готова к употреблению и не требует каких-либо дополнительных
компонентов. По предпочтению, возможно добавление сыворотки пациентки до 10%. По желанию
заказчика производитель может добавить в среду краситель Red Fenol (фенол красный) и сульфат
гентамицина (10мг на 1 литр).
FertiCult IVF/FIV подходит для приготовления микрокапли под маслом или для культивирования в
чашках Фалькон 3037 (также 4-луночные Нунки). Как и все прочие культуральные среды, FertiCult IVF
/FIV должна быть пре-инкубирована (с открытой пробкой) в инкубаторе в течение 24 часов перед
использованием.
Материалы, включённые в набор:
Код продукта FECU020
9фл х20мл FertiCult IVF/FIV
Код продукта FECU050
5фл х50мл FertiCult IVF/FIV
Код продукта FECU100
3фл х100мл FertiCult IVF/FIV
Код продукта FECU020PHR
9фл х20мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным)
Код продукта FECU050 PHR
5фл х50мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным)
Код продукта FECU020PHR_G
9фл х20мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным и гентамицином)
Код продукта FECU050 PHR_G
5фл х50мл FertiCult IVF/FIV (c фенолом красным и гентамицином)
Материалы, не включенные в набор
• Инкубатор (5% СО2)
• Чашки Петри (или Фалькон 3037)
• Минеральное масло (FertiCult Mineral Oil)
• Ламинарный шкаф (класс чистоты ISO5)
• Микроскоп
• Пробирки
Спецификация продукта и контроль качества
Контроль качества:
Контроль рН
7.20 – 7.50 (37 ºС – 5%СО2)
Контроль осмолярности
270-290 mOsm/кг
Тест на уровень эндотоксинов (LAL)
< 0.25 EU/ml
Тест на стерильность
стерилен (SAL 10¯³)
Тест на эндотоксины
< 0.25 EU/ml
Эмбрионы мыши
(развитие до бластоцисты через 96 часов в среде) ≥ 80% (от стадии зиготы)
Сертификат анализов
по запросу
Предварительная подготовка
Не используйте среду при обесцвечивании (если среда содержит фенол красный), а также при
помутнении, что указывает на микробиологическую контаминацию.
Не используйте продукцию при повреждении целостности упаковки флаконов, во время
транспортировки.
Содержание и хранение.
• Храните от 2° до 25°С, после вскрытия при 2-8°С
• Не замораживайте перед использованием
• Берегите от солнечного света, в темном месте.
• Не используйте продукт дольше 7 дней после вскрытия.
• Не используйте после окончания срока хранения
Меры предосторожности
FertiCult IVF/FIV содержит человеческий сывороточный альбумин. Источники материалов, из которых
эти компоненты получены, показали отрицательный результат при тестировании на антитела HIV HBc
HCV HTLV 1/2 и отрицательную реакцию на HbsAg, HCV RNA и HIV-1 RNA и сифилис. Известные
на сегодняшний день методы подтверждают, что продукты, полученные из крови человека, не
переносят какие-либо инфекции. Тем не менее, работайте со всеми компонентами так, как если бы они
были опасны на ВИЧ или гепатит. Всегда надевайте защитную одежду.
Всегда работайте с соблюдением строгих гигиенических условий во избежание возможной
контаминации, даже если FertiCult IVF/FIV содержит гентамицин (ламинарный шкаф, ИСО 5 –
окружающая среда).
МЕТОД (предлагаемая процедура)
Подготовка для использования микрокапель.
Нанесите на стенки культуральной 60-мл чашки до 8 капель FertiCult IVF/FIV объемом 100-250 мкл,
затем добавьте 5 мл очищенного и пре-инкубированного минерального масла (нетоксичного и
предпочтительно эмбрио-тестированного – FertiCult Mineral Oil). Одна яйцеклетка обычно
помещается примерно вместе с 10000 сперматозоидов на 1 микро-каплю, поэтому если ожидается
получение 16 яйцеклеток, то следует подготовить две чашки на пациента. Затем чашки помещаются в
инкубатор на ночь при температуре 37°С и содержанием СО2 не более 5%. (Ночная балансировка
настоятельно рекомендована!!).
Подготовка для использования в открытых системах.
В открытых системах, таких как Фалькон или чашки Петри, около 1 мл среды помещается в каждую
лунку. Следующие 3 мл помещаются в окружение лунок для создания необходимой влажности, а
также обеспечения среды для промывания яйцеклеток и эмбрионов.
До пяти яйцеклеток на чашку (или лунку, при использовании Нунки) могут культивироваться вместе,
обычно до 100000 сперматозоидов на лунку. Поэтому, если ожидается получение 15 яйцеклеток при
заборе, то, по крайней мере, 6 лунок должно быть приготовлено на пациента (3 - для промывки и 3 для ночного инкубирования). При использовании Нунки, 2-х будет достаточно (т.к. в каждой – 4
лунки) и т.д.
Затем ёмкости помещаются в инкубатор на ночь при температуре 37°С и содержанием СО2 не более
5%. (Ночная балансировка настоятельно рекомендована!!).
В открытых системах парафиновое масло не требуется, но иногда 1 мл минерального масла может
добавляться на среду. При использовании таких открытых систем, инкубатор должен быть увлажнен.
Культивирование
По окончании ночного инкубирования, подготовленные чашки готовы к использованию. Во время
аспирации фолликулов и отбора яйцеклеток, они промываются и помещаются в лунки или же в капли.
Когда процедура окончена, яйцеклетки повторно проверяются и промываются для последующего
помещения их в капли/лунки и проведения ночного культивирования. Обычно, в течение 6-ти часов с
момента отбора, яйцеклетки должны быть инсеминированы подготовленной спермой, и затем
помещены на ночь в инкубатор.
Процедуры, описанные выше, - для культивирования в течение первых 24-х часов.
Затем эмбрионы идентифицируются на наличие 2-х пронуклеусов. После этого они помещаются в
свежие чашки, содержащие свежую среду.
Ранее, при использовании сыворотки пациента, первоначальная среда содержала 10% сыворотки и при
смене (оплодотворении) - 15%. При использовании FertiCult IVF/FIV дополнительный протеин не
требуется. Чашки готовятся описанным выше методом, после чего они готовы для помещения в них
эмбрионов.
При культивировании в пробирке (редко встречается), с использованием данного метода, поместите
в неё 1 мл FertiCult IVF/FIV и затем продолжите процедуру в соответствии с методикой,
предлагаемой для открытых систем.
Скачать