экспериментальное изучение влияния препарата энтеросгель на

P
СУЧАСНІ ПРЕПАРАТИ ТА ТЕХНОЛОГІЇ
МЛ №8 (74) 2010 р.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРЕПАРАТА
ЭНТЕРОСГЕЛЬ НА ПРОТЕКАНИЕ БЕРЕМЕННОСТИ У КРЫС
И НА ИХ ПОТОМСТВО
Н.А. Корнута, к. биол. н.1, Н.В. Кокшарева, д. биол. н.1, В.Г. Николаев, д. мед. н., профессор 2
/1Институт экогигиены и токсикологии имени Л.И. Медведя;
2
Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии НАН Украины, Киев/
Вступление
Беременность – специфическое состояние
в жизни женщины, которое требует к себе внимания, особенно в отношении клинико-фармакологических аспектов. Триаду мать-плацента-плод следует рассматривать как единый
биологический, фармакокинетический и фармакодинамический комплекс. Поэтому, заботясь
о здоровье матери, нельзя при проведении профилактических и терапевтических мероприятий
не учитывать их возможного влияния на организм матери и плода [1]. Основным объектом
при приеме лекарственных препаратов во время
беременности является материнский организм, а
плод, по существу, является невольным рецепиентом. Такая зависимость сохраняется в течение
всей беременности. Поэтому нельзя ограничиваться заботой только о состоянии здоровья
беременной женщины, следует одновременно
учитывать возможные последствия лечения для
развивающегося плода, так как эмбрион или
плод обладает уникальной специфической чувствительностью к лекарственным средствам.
И эта чувствительность несравнима с аналогичной чувствительностью взрослого организма.
Среди большого количества соединений, которые проявляют эмбриотоксические свойства
(химические канцерогены, тяжелые металлы,
хлор- и фторорганические соединения, углеводороды, соединения серы, амиды, амины),
значительное место занимают лекарственные
препараты: гормональные, снотворные, седативные, транквилизаторы, антибиотики и противоопухолевые препараты [2]. Общеизвестно, что
любой риск возможного повреждения эмбриона
или плода представляет собой слишком высокую
цену за применение лекарственных препаратов
во время беременности [3]. Поэтому одним из
важных требований, предъявляемых к каждому
новому препарату, является отсутствие отрицательного влияния на развитие [4]. Лекарственный
препарат Энтеросгель (гидрогель метилкремни-
74
евой кислоты) рекомендован для применения
беременным женщинам при токсикозах первой
половины беременности. Данные литературы в
отношении его влияния на развитие эмбриона
весьма ограничены. Имеются единичные сообщения об отсутствии у лекарственного препарата
Энтеросгеля фетотоксичности [6].
Цель работы: исследование по определению токсичности для беременных самок крыс,
эмбриотоксичности и тератогенной активности
препарата Энтеросгель
Материалы и методы исследования
Исследование проведено на 100 половозрелых белых самках крыс Wistar (масса тела
210–240 г), полученных из питомника ЧП «Биомодельсервис» и прошедших карантин в течение
2 недель.
Во время проведения эксперимента животные содержались в виварии в стандартных
пластиковых клетках, группами по 6 особей,
при температуре окружающей среды 20–22 оС,
влажности воздуха 50–60%, стандартном световом режиме «день–ночь». Животные получали
стандартный брикетированный корм с соблюдением установленного режима кормления и воды
ad libitum. Первым днем беременности считали
обнаружение сперматозоидов во влагалищных
мазках.
Исследования эмбриотоксических и тератогенных свойств лекарственного препарата
Энтеросгель проведены в соответствии с Методическими рекомендациями по доклиническому
исследованию лекарственных препаратов [7].
Введение Энтеросгеля подопытным животным
осуществляли внутрижелудочно. Оценку показателей токсичности для беременных самок крыс
препарата Энтеросгель проводили в сравнении
с показателями контрольных групп крыс, получавших воду, очищенную в аналогичной дозе.
Для проведения исследования взяты две дозы:
максимальная суточная терапевтическая доза
для человека – 45 г/кг и доза, превышающая ее
в 5 раз – 225 г/кг (в перерасчете на лабораторных
животных эти дозы составляют 643 мг/кг м.т. и
3,21 г/кг м.т. соответственно). Доза препарата
корректировалась в соответствии с изменением
массы тела беременных самок. Препарат вводили животным в утренние часы натощак без
использования растворителей: с 1-го по 6-й, с
6-го по 16-й, с 16-го по 20-й день беременности (соответственно 1, 2 и 3 группы). Животным
первой и третьей групп препарат вводился в
одной дозе (максимальной – 3,21 г/кг м.т.), второй
группе – в обоих дозах (643 мг/кг м.т. и 3,21 г/кг
м.т. – группы 2-А и 2-Б).
Наблюдение за состоянием беременных самок проводилось несколько раз до начала введения препарата (включая нулевой, 3-й и 5-й дни
предполагаемой беременности), несколько раз в
день в период введення препарата (непрерывно
в течение первого часа после введения; через
6 часов после введения препарата) и ежедневно
в утренние часы после прекращения введения
препарата на протяжении всего эксперимента.
Измерение массы тела животных в опытных и
контрольных группах проводили в динамике на
1-й, 6-й, 13-й и 21-й дни беременности. Кроме
того, в конце эксперимента оценивали влияние лекарственного препарата на абсолютную
и относительную массу внутренних органов, на
ферментативную систему печени (по активности
аланинаминотрансферазы и аспарагинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы), проводили
определение содержания белка и тимоловую
пробу в сыворотке крови подопытных крыс в
сравнении с животными контрольной группы.
На 21-й день беременности проводили
эвтаназию животных. При вскрытии беременных
самок регистрировали число и расположение
желтых тел в яичниках. Матка исследовалась
на число и расположение мест имплантаций,
ранних и поздних резорбций, а также на число
живых и мертвых плодов. Рассчитывали по-
P
казатели эмбриональной гибели: индексы
пред- и постимплантационной смертности по
стандартным формулам. Проводили оценку
жизнеспособности и взвешивание плодов и их
плацент, затем проводили осмотр плодов с целью выявления внешних аномалий развития.
Одну группу (2/3) плодов фиксировали в 96%
спирте и после просветления раствором щелочи,
промывания водой прокрашивали ализарином
до появлення светло-фиолетового окрашивания
для изучения костного скелета по методу Даусона [7]. Последовательно оценивали правильность закладки и оссификации всех отделов
скелета плода. Другую группу (1/3) фиксировали
в жидкости Буэна и использовали для изучения
внутренних органов на микроанатомических
срезах по методу Вильсона [8, 9].
Обобщенные таблицы составлены по метериалам 100 индивидуальных карт, в которых есть
информация по анализу 1160 плодов. Результаты
исследования обработаны с помощью t-критерия
Стьюдента в случае нормального распределения
признака и критерия Манна-Уитни в случае отличия закона распределения от нормального. База
данных сформирована в программе Microsoft
Excel. Расчеты произведены в программах Microsoft Excel и Biostat [10].
тальных животных. Так, влияние лекарственного препарата Энтеросгель на функциональное
состояние печени оценивалось по активности
ферментов аланинаминотрансферазы (АЛТ),
аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной
фосфатазы, а также по содержанию общего белка, холестерина в сыворотке крови. Введение подопытным животным лекарственного препарата
Энтеросгель в испытываемых дозах не вызывало
статистически значимых изменений активности
АЛТ. Однако, при воздействии лекарственного
препарата Энтеросгель в дозах 643 мг/кг м.т.
(с 6-го по 16-й дни беременности) и 3,21 г/кг м.т.
(с 16-го по 20-й дни беременности) имело место
статистически достоверное снижение активности АСТ (соответственно, 0,66 и 0,67 мМоль/л/
час; контроль – 0,86 мМоль/л/час).
Вместе с тем, известно, что снижение активности АСТ не имеет четкого диагностического
значения, тогда как важным показателем повреждения гепатоцитов является повышение
активности АЛТ и АСТ в сыворотке крови [11].
Определение активности щелочной фосфатазы
в сыворотке крови позволяет выявить патологию печени и костной ткани. Источником
фермента в плазме крови, главным образом,
являются остеобласты, гепатоциты и эпите-
Результаты и их обсуждение
Таблица. 1. Абсолютная и относительная масса органов беременных самок, которым
вводили лекарственный препарат Энтеросгель
Исследование состояния беременных крыс
не выявило наличия общетоксического действия лекарственного препарата Энтеросгель на
их организм при введении исследуемых доз в
различные сроки беременности. Лекарственный
препарат не влиял на потребление воды и пищи
животными. Внутрижелудочное введение препарата не оказывало влияния на динамику массы
тела и прироста массы тела (рисунок), абсолютную и относительную массу органов беременных
самок крыс (табл. 1).
Как видно из рисунка 1, на протяжении всего эксперимента не выявлено статистически
достоверных различий массы тела и прироста
массы тела беременных самок крыс подопытных
групп по сравнению с показателями контрольных животных.
Анализ данных, представленных в таблице 1,
показал, что после многократного воздействия
лекарственного препарата Энтеросгель, не наблюдалось статистически значимых изменений
относительной массы внутренних органов подопытных крыс по сравнению с контрольной
группой (р>0,05).
Проведенные биохимические исследования
включали анализ параметров, характеризующих
функциональное состояние печени эксперимен-
лиальные клетки кишечника [12]. В ходе проведенных исследований показано, что введение лекарственного препарата Энтеросгель в
исследованных дозах в различные сроки беременности, не влияло на активность щелочной
фосфатазы сыворотки крови. Значения активности щелочной фосфатазы сыворотки крови
беременных самок крыс экспериментальных
групп не имели статистически достоверных
различий по сравнению с показателями контрольных животных.
Определение общего количества белка в
сыворотке крови является показателем, отражающим роль печени в белковом обмене.
На концентрацию белка плазмы крови могут
влиять функциональное состояние печени
и почек, ряд заболеваний, метаболические
нарушения. Содержание белка в сыворотке
крови беременных самок крыс, получавших
лекарственный препарат Энтеросгель в терапевтической дозе (643 мг/кг м.т.) и в 5 раз ее
превышающую (3,21 г/кг м.т.) в различные сроки
беременности, достоверно не отличалось от
показателей контрольной группы животных.
Концентрация холестерина в сыворотке крови
зависит от его метаболизма, на который может
влиять ряд факторов, в частности – состояние
Дозы Энтеросгеля
Показатели
Кол-во бер. самок
Конечная масса тела, г
Контроль
3,21 г/кг
(1–6)
643 мг/кг
(61–16)
3,21 г/кг
(61–16)
3,21 г/кг
(161–20)
20
20
20
20
20
329,7
330,6
329,5
329,5
335,6
Печень, г
11,4
10,9
10,7
10,9
11,3
Относительная масса печени,
(г/100 г)
3, 46
3,30
3,25
3,31
3,37
1,52
1,43
1,46
1,43
1,46
0,46
0,43
0,44
0,43
0,44
0,06
0,06
0,06
0,07
0,06
Почки, г
Относительная масса почек,
(г/100 г)
Надпочечники, г
400
(г)
350
300
250
200
150
1-й
6-й
13-й
21-й
Дни беременности
Рисунок. Динамика массы тела беременных самок крыс (г) при внутрижелудочном
введении лекарственного препарата Энтеросгель
www.health-medix.com
75
P
СУЧАСНІ ПРЕПАРАТИ ТА ТЕХНОЛОГІЇ
эндокринных желез, печени, почек. Его обмен
тесно связан с обменом липидов. Как показали проведенные исследования, при действии
лекарственного препарата Энтеросгель в дозах
643 мг/кг м.т. и 3,21 г/кг м.т. не наблюдается
существенного изменения концентрации холестерина в сыворотке крови.
Не было зарегистрировано наличия беременных самок крыс с полной резорбцией эмбрионов. Количество желтых тел в яичниках опытных животных не отличалось от контрольных.
Препарат не вызывал гибель эмбрионов, о чем
свидетельствует отсутствие различий по индексу
пред- и постимплантационной гибели. Среднее
МЛ №8 (74) 2010 р.
количество жизнеспособных плодов на помет в
опытных и контрольной группах не различалось
(табл. 2).
Лекарственный препарат Энтеросгель при
его введении в разные сроки беременности не
влиял на массу плаценты, массу тела плода и
плодо-плацентарный индекс (табл. 3).
Представленные данные указывают на отсутствие у лекарственного препарата Энтеросгель
отрицательного влияния на рост и развитие потомства крыс.
Энтеросгель при курсовом введении не вызывал специфических врожденных аномалий
развития внутренних органов: головного мозга,
Выводы
Таблица 2. Показатели эмбриотоксической активности препарата Энтеросгель
в экспериментальных группах
Дозы Энтеросгеля
Показатели
Контроль
3,21 г/кг
(1–6)
643 мг/кг
(6–16)
3,21 г/кг
(6–16)
3,21 г/кг
(16–20)
6,5
12,6
11,4
общая эмбриональная
смертность, %
15,1
11,9
гибель до имплантации, %
12,9
10,4
3,3
7,9
8,3
гибель после имплантации, %
2,5
1,2
3,0
4,7
3,3
1,02
1,08
1,02
1,05
индекс перинатального
развития
Таблица 3. Результаты морфометрического исследования плодов после введения
препарата Энтеросгель
Дозы Энтеросгеля
Показатели
Контроль
3,21 г/кг
(1–6)
643 мг/кг
(6–16)
3,21 г/кг
(6–16)
3,21 г/кг
(16–20)
Масса плода, г
-самцы
-самки
3,80±0,20
3,82±0,20
3,80±0,20
3,87±0,20
3,88±0,20
3,85±0,20
3,88±0,20
3,88±0,30
3,86±0,20
3,90±0,20
3,91±0,20
3,90±0,30
3,91±0,20
3,93±0,20
3,87±0,20
Масса плаценты
0,57±0,07
0,57±0,03
0,57±0,03
0,59±0,04
0,57±0,02
0,15
0,15
0,15
0,15
0,15
Плодо-плацентарный индекс
Таблица 4. Суммарные данные по анализу костной системы у плодов
Дозы Энтеросгеля
Показатели
3,21 г/кг
(1–6)
643 мг/кг
(6–16)
3,21 г/кг
(6–16)
3,21 г/кг
(16–20)
Количество плодов
157
159
153
148
156
Задержка оссификации
костей черепа
13
6
2*
0
2*
Задержка оссификации
костей грудины/розрыв
62
30
29
22*
22*
73,4
87,4
87,4
90,1
90,1
Укорочение 13-й пары ребер
6
1*
1*
3
0*
Искривление ребер
0
0
0
0
0
Кол-во точек оссификации
метакарпальных костей (%)
метатарзальных костей (%)
91,1
91,3
95,0
94,7
97,4*
96,8*
98,2*
97,1*
97,0*
96,5*
Аномалии лицевого черепа
0
0
0
0
0
Кол-во точек оссификации
грудины, %
Примечание: *р<0,05.
76
Контроль
сердца, легких, печени, селезенки, почек. При
внешнем осмотре не отмечалось внешних аномалий лицевого отдела и конечностей.
Частота вариаций развития внутренних органов, таких как расширение почечных лоханок и
мочеточником у плодов контрольной и опытных
групп достоверно не различались и соответствовала показателям, описанным другими авторами [13, 14]. При исследовании костной системы
по методу Даусона во всех экспериментальных
группах отмечались нормальная оссификация и
отсутствие аномалий развития позвонков, ребер,
грудины, тазовых костей, костей конечностей и
других отделов скелета (табл. 4).
Лекарственный препарат Энтеросгель (паста
для перорального применения) не оказывает
отрицательного действия на организм беременных самок крыс, не проявляет эмбриотоксических свойств, а также не оказывает отрицательного влияния на развитие потомства.
Литература
1. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих. –
Л.: Наука, 1988. – 228 с.
2. Shepard T.H. Catalog Teratogenic Agents. 4th ed. –
Baltimore, 1983. – 710 p.
3. Принципы оценки риска для потомства в связи
с воздействием химических веществ в период
беременности: Совместное издание программы
ООН по окружающей среде Международной
организации труда и Всемирной организации
здравоохранения. – М.: Медицина, 1988. – 155 с.
4. Правила доклинической оценки безопасности
фармакологических средств () РД 64–126–91.
Москва, 1992.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических
веществ / под ред. Фисенко В.П. – М., ИИА «Ремедиум», 2000. – С. 25–33.
6. Медико-біологічні аспекти застосування
ентеросорбенту «Ентеросгель» для лікування
різних захворювань (Збірка вибраних наукових
статей). – Київ, 2006. – 107 с.
7. Експериментальне вивчення ембріотоксичної дії
лікарських засобів (методичні рекомендації) –
К. 2000. – 40 с.
8. Staples R.E. et Haseman I.K.Selection of appropriate
experimental units in teratology // Teratology. – 1974. –
9(3). – P. 255–259.
9. Wilson J.G. Teratology principles and Techniques.–
1965. – P. 251–277.
10. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учебное пособие для
биол.спец.вузов. – М.: Высш.шк., 1990. – 352 с.
11. Руководство по клинической лабораторной диагностике Ч.3. // под ред. проф. М.А. Базарновой. –
Киев, Вища шк., 1990. – С. 303–311.
12. Лабораторные методы исследования в клинике.
Справочник (под ред. Меньшикова В.В.). –
М.: Медицина. – 1987. – 350 с.
13. Hossaini A., Dalgard M., Marie A., et al. //
Reproductive Toxicology. – 2001, V. 15 (95). –
P. 537-543.
14. Kim J.C., Shin H.C., Cha S.W., et al. // Life Sciences. –
2001, V. 69. – P. 2611–2625.